Tiểu luận công nghệ sinh học trong chọn tạo giống cây trồng

Tiểu luận CÔNG NGHỆ SINH HỌC TRONG CHỌN TẠO GIỐNG CÂY TRỒNG Đề tài: Detection of RAPD Polymorphisms in Gladiolus Cultivars With Differing Sensitivities to Fusarium oxysporum f sp Gladioli Đa hình RAPD giống Hoa Layơn cảm ứng khác với Fusarium oxysporum f sp Gladioli bai bao fusarium.pdf Sinh viên: Nông thị Quỳnh Anh Lớp: CNSH K52 Mục lục Abstract Introduction Materials and Methods Results and Discussion References Abstract • Fusarium oxysporum Schlecht.Cha F sp gladioli (FOG) tác nhân gây bệnh layơn quan trọng • Một phương pháp thân thiện môi trường để kiểm soát lây lan sử dụng giống trồng nhạy cảm với tác nhân gây bệnh • Tại vị trí mô nằm gốc thân nhiều giống kháng sinh lớp suberin ức chế tăng trưởng sợi nấm • Sử dụng thị phân tử RAPD phân tích gen từ layơn lựa chọn kháng nhạy cảm với FOG, tiến hành xác minh mức độ đa hình DNA • Nucleic acid tổng số khai thác thực với phương pháp sử dụng DNA chiết tách từ mô theo phương pháp chloroform-phenol giai đoạn sinh trưởng • thực thí nghiệm cách sử dụng 14 mồi với Taq polymerase nồng độ mồi khác Introduction • đoạn mồi thử nghiệm không cho đa hình, mồi cho đa hình Thông qua xac định đươc hoăc nhiều tính kháng Các test cho kết lặp lai giai đoan sinh trưởng • Nhân dòng đoạn DNA đa hình quan tâm cho thấy diện khác gen đặc trưng liên quan đến tính kháng FOG lay ơn Introduction • Cây lay ơn hoa kinh tế quan trọng, canh tác toàn giới trồng vườn cho sản xuất hoa cắt Các loại nấm soilborne, Fusarium oxysporum Schlecht: Fr F sp gladioli (Massey) Snyd Và Hans (FOG) (Massey, 1926; Nelson cộng sự, 1981), gây vàng thối thân củ, Nó làm giảm chất lượng cành hoa thương phẩm Nấm tìm thấy toàn giới lan truyền qua vật liệu nhân giống, (et al Garcia-Jimenez, 1986.) Introduction • Để kiểm soát lây lan loại nấm này, giống nhạy cảm với tác nhân gây bệnh, hóa chất đưa vào thí nghiệm • Điều quan trọng tìm giống phù hợp nhạy cảm hay kháng để xác định diện gen liên quan đến biểu tính kháng Introduction • Một loạt xét nghiệm kháng FOG, chủ yếu dựa vào xét nghiệm sinh học báo cáo (Palmer Pryor, 1958; Jones Jenkins, 1975; Dallavalle Zechini D'Aulerio năm 1994; Löffler cộng sự, 1997; Straathof et al, 1998) Tuy nhiên, chế kháng chưa hiểu rõ • (Remotti Loffler, 1996) quan sát chế xâm nhập sợi nấm FOG vào mô qua chu bì thân , chủ yếu gốc qua đốt thân, vết thương (Dallavalle Pisi, 1993) • Các mô nhiều mẫu đem thí nghiệm thể kháng qua việc phản ứng với suberization tế bào, tạo thành rào cản ngăn chặn tác nhân nấm Introduction • Dùng thị RAPD phân tích gen mẫu giống lay ơn với mức độ kháng, mẫn cảm khác với FOG thực để xác định khả áp dụng phương pháp sàng lọc ADN phân biệt mức độ nhạy cảm kháng lay ơn Materials and Methods • Sử dụng mô lay ơn đỉnh lấy mắt ngủ hay chồi khoảng cm, từ cao 30 cm • Cây mẹ trồng nhà kính chống côn trùng đất tiệt trùng Results and Discussion • Sau thí nghiệm trên, xét nghiệm thường xuyên thực với tất mồi cách sử dụng nồng độ thành phần khác (Bảng 1C) • phân tích điện di gel agarose 2% với đệm X TBE (0.09 M Trisborat, 0,002 M EDTA, M EDTA [pH 8]), • Sau nhuộm gel với ethidium bromide chụp ảnh Results and Discussion • Các thí nghiệm so sánh Taq polymerase (Bảng A-B, Hình a-b) cho thấy băng DNA thu với mảnh Stoffel ngắn (hình 1b, mồi AL16) nhiều (hình 1b, mồi AL16 +) so với thu với mồi Polymed Taq (Hình 1a) • Đoạn Stoffel thường sản xuất lượng nhỏ đa hình đáng tin cậy • Bởi điều này, sử dụng Taq polymerase với mix A Kết thu nhóm vach băng ko phân biệt rõ ràng (hình 2a) Results and Discussion • Thí nghiệm thực vớiMix C sản xuất mẫu xác định với đa hình phân biệt rõ ràng (Hình 2b) • Sử dụng hỗn hợp C: mồi (C08, S05, AD18, AM19, AM14 +) cấu hình đa hình cho giống mẫu giai đoạn tăng trưởng khác • Bốn mồi (AL7, AF07, M18, AF13) sản xuất băng đa hình không tương quan với mức độ nhạy cảm FOG mẫu thử nghiệm Results and Discussion • Năm mồi cho cấu hình tiêu biểu cho nhiều giống mẫu kháng Đặc biệt, mồi AG12 không tạo đoạn 0,5kbp giống WP tạo dải chênh lệch mức kbp (hình 3) Results and Discussion • Các đa hình hiển thị khác không liên quan tới độ nhạy cảm giống thử nghiệm Primer AD14 (hình 4a) Results and Discussion Hình hình ảnh rapd với mồi thử ngiệm dài 10-mers thử nghiệm cách sử dụng Polymed Taqpolymerase với mix A (a) mix B (b) • Một mẫu (H2O),1 mẫu có (H2O) đại diện đối chứng âm • 1-kbp DNA ladder • Results and Discussion Hình Đa hình cấu hình thu từ giống lai ơn sau khuếch đại với mồi AL16, AL16 +, AM14 (a) Sử dụng mix B (b) Sử dụng mix C Results and Discussion RAPD với mồi AD14(4a) , DNA cvs WP NL Kết cho thấy nhóm 1.1 kb Nhóm thấy chạy rapd sử dụng DNA chiết tách từ giai đoạn sinh trưởng cv WP Trong giống NL hiển diện nhóm 0.9kbp Sử dụng mồi AL16 (hình 4b), mẫu WP thiếu đoạn 0,7-kbp diện tất giai đoạn mẫu khác Băng 0.5-kbp xuất tất giai đoạn mẫu WP thể không hoạt động mẫu NL Results and Discussion • Hình Đa hình liên quan đến tính kháng FOG thu từ cvs lai ơn sau khuếch đại với mồi AG12 mix C (Bảng 1) Một mẫu không (H2O) đối chứng âm Results and Discussion Hình hình ảnh RAPD với mồi AD14 (a) mồi AL16 (b) cho thấy kết giống hệt thể cho tất giai đoạn sinh trưởng điều kiện C.(bảng 1) Đa hình liên quan đến nhiều tính kháng WP NL Đối chúng âm H2O, lader Results and Discussion Đa hình quan sát tất giai đoạn sinh trưởng mẫu NL với mồi (AL16 + AM14) thấy nhóm khác biệt diện đoạn 0,7 kbp, tương ứng (Hình 2b ) Đối chứng mẫu có khuếch đại cấu hình khác biệt rõ ràng từ mẫu lay ơn với tất mồi sử dụng Results and Discussion • Đây báo cáo RAPD sử dụng lay ơn để phát đa hình liên quan đến tính kháng FOG • Các kết cho phép xác định cấu hình đa hình cụ thể với mẫu kháng số mẫu thử nghiệm với FOG (Dallavalle Zechini D'Aulerio, 1994) • RAPD đánh dấu liên quan đến nhạy cảm khác với FOG phát lily (al Straathof cộng sự, 1996.) Results and Discussion • Đánh dấu RAPD báo cáo để giải thích 85% số khả kháng (Jansen, 1996) • Để xác nhận mối quan hệ kết đề tạo tính kháng với FOG, nhân trình tự đoạn RAPD thể kháng tốt cần thiết để xác định trình tự DNA tương đồng với gen tham gia vào đường trao đổi chất phenol suberin References • • • • • • • • • Dallavalle E and Pisi A (1993) Fusariosi del gladiolo: penetrazione e colonizzazione del patogeno osservate al SEM Micologia italiana 3: 91-99 Dallavalle E and Zechini D’Aulerio A (1994) Resistenza varietale del gladiolo al Fusarium oxysporum f sp Gladioli Italus Hortus 4: 19-26 Garcia-Jimenez J, Piera VJ, and Alfaro A (1986) Mycological prospection of the gladiolus corm imports in Spain Acta Horticulturae 177: 537-540 Jansen RC (1996) A general Monte Carlo Method for mapping quantitative trait loci Genetics 142: 305-311 Jones RK and Jenkins JM Jr (1975) Evaluation of resistance in Gladiolus sp to Fusarium oxysporum f sp Gladioli Phytopathol 65: 481484 Löffler HJM, Straathof TP, Van Rijbroek, and Roebroek EJA (1997) Fusarium resistance in Gladiolus: The development of a screening Assay J Phytopathology 145: 465-468 Massey LM (1926) Fusarium rot of Gladiolus corms Phytopathol 52: 567-572 Nelson PE, Horst RK, and Woltz SS (1981) Fusarium disease of ornamental plants In: Nelson PE, Tousson TA and Cook RJ (eds), Fusarium: disease, biology and taxonomy, pp 121-128 Pennsylvania State University Press • • • • • • • • • • • Palmer JG and Pryor RL (1958) Evaluation of 160 varieties of Gladiolus for resistance to Fusarium yellow Plant Dis Reptr 42: 14051407 Prince JP, Davis RE, Wolf TK, Lee I-M, Mogen BD, Dally EL, Bertaccini A, Credi R, and Barba M (1993) Molecular detection of diverse mycoplasmalike organisms (MLOs) associated with grapevine yellows and their classification with aster yellows, X-disease, and elm yellows MLOs Phytopathol 83: 1130-1137 Remotti PC and Löffler HJM (1996) The involvement of Fusaric Acid in the Bulb-rot of Gladiolus J Phytopathology 144: 405-411 Schilirò E, Predieri S, and Bertaccini A (2001) Use of random amplified polymorphic DNA analysis to detect genetic variation in Pyrus spp Plant Mol Biol Rep 19: 271 a-h Straathof TP, van Tuyl JM, Dekker B, van Winden MJM, and Sandbrink JM (1996) Genetic analysis of inheritance of partial resistance to Fusarium oxysporum in Asiatic hybrid lily using RAPD markers Acta Horticulturae 414: 209-218 Straathof TP, Roebroek EJA, and Löffler HJM (1998) Studies on Fusarium-Gladiolus Interactions: The Development of a screening Assay J Phytopathology 146: 83-88 bai bao fusarium.pdf Thank you ! ... dụng giống trồng nhạy cảm với tác nhân gây bệnh • Tại vị trí mô nằm gốc thân nhiều giống kháng sinh lớp suberin ức chế tăng trưởng sợi nấm • Sử dụng thị phân tử RAPD phân tích gen từ layơn lựa chọn. .. nhiều giống mẫu kháng Đặc biệt, mồi AG12 không tạo đoạn 0,5kbp giống WP tạo dải chênh lệch mức kbp (hình 3) Results and Discussion • Các đa hình hiển thị khác không liên quan tới độ nhạy cảm giống. .. liệu nhân giống, (et al Garcia-Jimenez, 1986.) Introduction • Để kiểm soát lây lan loại nấm này, giống nhạy cảm với tác nhân gây bệnh, hóa chất đưa vào thí nghiệm • Điều quan trọng tìm giống phù