Chiết xuất và đánh giá tác dụng của cao sâm ngọc linh trên mô hình gây suy nhược thần kinh ở động vật thực nghiệm

Header Page of 116 I HC QUC GIA H NI KHOA Y DC LNG TH HNG CHIT XUT V NH GI TC DNG CA CAO SM NGC LINH TRấN Mễ HèNH GY SUY NHC THN KINH NG VT THC NGHIM KHểA LUN TT NGHIP I HC NGNH DC S H Ni 2017 Footer Page of 116 Header Page of 116 I HC QUC GIA H NI KHOA Y DC NGI THC HIN: LNG TH HNG CHIT XUT V NH GI TC DNG CA CAO SM NGC LINH TRấN Mễ HèNH GY SUY NHC THN KINH NG VT THC NGHIM KHểA LUN TT NGHIP I HC NGNH DC S Khúa: QH2012.Y Ngi hng dn: Th.S PHAN MINH C PGS.TS NGUYN THANH HI H Ni 2017 Footer Page of 116 Header Page of 116 LI CM N Bng tt c s chõn thnh nht, tụi xin by t lũng bit n n nhng ngi ó úng gúp cụng sc vo s thnh cụng ca khúa lun ny! Tụi xin chõn thnh by t lũng kớnh trng v bit n sõu sc ti Bỏc s.Th.S.Phan Minh c ging viờn b mụn Liờn chuyờn khoa, PGS.TS.Nguyn Thanh Hi - ging viờn b mụn bo ch, PGS TS Dng Th Ly Hng- ging viờn b mụn Dc lý v TS Nguyn Hu Tựng ging viờn b mụn húa dc khoa Y Dc, HQGHN, ó hng dn tn tỡnh, ng viờn v giỳp tụi sut quỏ trỡnh thc hin khúa lun Tụi cng xin gi li cm n ti cỏc thy cụ, cỏc k thut viờn cỏc b mụn v khoa Y - Dc Trng i hc Quc gia H Ni ó giỳp tụi sut quỏ trỡnh lm thc nghim ti trng Xin cm n Ban giỏm hiu, Phũng o to, cỏc phũng ban ó to mi iu kin giỳp tụi hon thnh khúa lun Cỏm n cỏc thy cụ khoa Y - Dc Trng i hc Quc gia H Ni ó quan tõm dỡu dt v truyn kin thc cho tụi nm hc va qua Cui cựng, tụi xin gi li cm n ti gia ỡnh v bn bố ó luụn ng h, ng viờn v khớch l tụi quỏ trỡnh hc v lm khúa lun H Ni, thỏng nm 2017 Sinh viờn Lng Th Hng Footer Page of 116 Header Page of 116 DANH MC CC CH VIT TT KRGE: Sõm Hn quc EMP: elevated plus maze-mờ cung hỡnh ch thp treo cao FST: Swimming test Thớ nghim chut bi VG: Sõm Ngc Linh TKTW: Thn kinh trung ng DANH MC CC BNG Tờn bng Bng 1.1: Hm lng saponin ca Sõm Ngc Linh so sỏnh vi cỏc loi Panax spp Bng 1.2: Cỏc saponin dn cht ca 20(S)-protopanaxadiol Bng 1.3: Cỏc saponin dn cht ca 20(S)-protopanaxatriol Bng 1.4: Cỏc saponin cú cu trỳc ocotillol v dn cht ca axit oleanolic Bng 1.5: Axit oleanolic Bng 1.6: Cỏc cht bộo c tỡm thy Bng 1.7: Thnh phn axit amin ch yu Bng 1.8: Cỏc nguyờn t vi lng Bng 3.9: Tỏc dng ca sõm Ngc Linh lờn s ln lu ca chut tay kớn/tay h Bng 3.10: Tỏc dng ca sõm Ngc Linh lờn thi gian lu ca chut tay kớn/tay h Bng 3.11: Tỏc dng ca sõm Ngc Linh lờn thi gian bi ca chut Bng 3.12: Tỏc dng ca sõm Ngc Linh lờn s ln lu ca chut bung sỏng/bung ti Bng 3.13: Tỏc dng ca sõm Ngc Linh thi gian ln lu ca chut bung sỏng/bung ti Footer Page of 116 Header Page of 116 MC CC TH V HèNH V Tờn hỡnh v, th Hỡnh 1.1: Sõm Ngc Linh ngoi thiờn nhiờn Hỡnh 1.2: Hỡnh thỏi sõm Ngc Linh Hỡnh 1.3: Cõy sõm Ngc Linh Hỡnh 1.4: Cõy sõm Ngc Linh sng trờn mt t v hỡnh dng c sõm Hỡnh 1.5: Mỏy cụ quay chõn khụng thu hi dung mụi Hỡnh 3.6: Dng c th nghim EMP Hỡnh 3.7: Tỏc dng ca sõm Ngc Linh lờn s ln lu ca chut tay kớn/tay h Hỡnh 3.8: Tỏc dng ca sõm Ngc Linh lờn thi gian lu ca chut tay kớn/tay h Hỡnh 3.9: Tỏc dng ca sõm Ngc Linh lờn thi gian bi ca chut Hỡnh 3.10: Tỏc dng ca sõm Ngc Linh lờn s ln lu ca chut bung sỏng/bung ti Hỡnh 3.11: Tỏc dng ca sõm Ngc Linh thi gian ln lu ca chut bung sỏng/bung ti Footer Page of 116 Header Page of 116 MC LC LI CM N DANH MC CC CH VIT TT DANH MC CC BNG MC CC TH V HèNH V T VN CHNG TNG QUAN 1.1 Gii thiu v cõy Sõm Ngc Linh .3 1.1.1 c im thc vt 1.1.2 Danh phỏp khoa hc .4 1.1.3 c im hỡnh thỏi 1.1.4 Sinh thỏi v phõn b .6 1.1.5 Bo tn v nhõn ging 1.1.6 Thnh phn húa hc .8 1.1.7 Tỏc dng dc lý 14 1.1.8 Cụng dng 15 1.2 Bnh suy nhc thn kinh 15 1.2.1 Khỏi nim 15 1.2.2 Dch t hc 15 1.2.3 Theo y hc hin i .15 1.3 Mt s mụ hỡnh nghiờn cu tỏc dng suy nhc thn kinh ca sõm ngc linh trờn thc nghim 18 1.3.1 Grip test .18 1.3.2 Th nghim EPM (Elevated Plus Maze) 19 1.3.3 Th nghim chut bi (swimming test) 19 1.3.4 Th nghim ỏnh giỏ hot ng t nhiờn ca chut (spontaneous activity test) 20 1.3.5 Th nghim Rota rod 20 1.3.6 Open field test 20 1.3.7 Light/dark test 21 CHNG : I TNG V PHNG PHP NGHIấN CU 22 Footer Page of 116 Header Page of 116 2.1 Nguyờn vt liu v thit b 22 2.1.1 Nguyờn liu 22 2.1.2 Húa cht 22 2.1.3 Dng c v thit b 22 2.2 Nguyờn cu chit xut 22 2.3.Nghiờn cu tỏc dng chng suy nhc thn kinh 22 2.3.1 i tng 22 2.3.2 Ni dung nghiờn cu 23 2.3.3 Phng phỏp nghiờn cu 23 2.3.4 X lý s liu .25 CHNG 3: KT QU THC NGHIM V BN LUN .26 3.1 Chit xut saponin ton phn 26 3.1.1 Chun b dc liu .26 3.1.2 La chn phng phỏp chit 26 3.1.3 La chn dung mụi .26 3.1.4 Chit xut saponin ton phn 26 3.2 Nghiờn cu tỏc dng chng suy nhc thn kinh .26 3.2.1 Th nghim EPM 26 3.2.2 Th nghim chut bi .30 3.2.3 Dark/light test 31 3.3 BN LUN: 33 3.3.1 V cỏc test nghiờn cu: 33 d Tỏc dng chng suy nhc thn kinh ca sõm ngc linh .38 CHNG 4: KT LUN V KIN NGH .39 4.1 Kt lun .39 4.2 Kin ngh 39 TI LIU THAM KHO 41 TI LIU TING VIT 41 Footer Page of 116 Header Page of 116 T VN Sõm Ngc Linh Panax vietnamensis Ha et Grush l mt loi Panax mi, cho n ch mi phỏt hin Vit Nam, c bit n trờn th gii vi tờn gi Vietnamese ginseng L mt loi cõy thuc h Cam tựng (Araliaceae), cũn gi l sõm Vit Nam, sõm Khu Nm (sõm K5), sõm trỳc (sõm t trỳc, trỳc tit nhõn sõm) c ngi rm hay cõy thuc giu, l loi sõm quý c tỡm thy ti Trung Trung B Vit Nam, mc trung cỏc huyn nỳi Ngc Linh thuc huyn k Tụ tnh Kon Tum, huyn Nam Tr My tnh Qung Nam Nhng nghiờn cu liờn quan n saponin v tớnh dc lý ca sõm ngc linh Theo truyn thng, sõm ngc linh l mt cõy thuc cú nhiu cụng dng: chng stress vt lý, chng stress tõm lý v trm cm, chng oxi húa nóo húa, phũng chng ung th, bo v t bo gan Nghiờn cu dc lý lõm sng ca sõm Ngc Linh cng cho kt qu tt: bnh nhõn n ngon, ng tt, lờn cõn, tng th lc, hot ng trớ tu v th lc ci thin, gia tng sc khỏng, ci thin cỏc trng hp suy nhc thn kinh v suy nhc sinh dc, nõng cao huyt ỏp ngi b huyt ỏp thp.[1,3] Sõm Ngc Linh cng l loi nhõn sõm th 20 c tỡm thy trờn th gii Theo kt qu nghiờn cu t nm 1978 ca B Y t Vit Nam, phn thõn r ca cõy sõm Ngc Linh Vit Nam cha 26 hp cht saponin cú cu trỳc húa hc ó bit v 24 saponin cú cu trỳc mi khụng cú cỏc loi sõm khỏc, sõm Triu Tiờn cú khong 25 saponin Nhng kt qu nghiờn cu, phõn lp thnh phn húa hc mi nht c cụng b cũn kộo di danh sỏch saponin ca sõm Ngc Linh hn na, lờn tng cng 52 loi Nh vy, sõm Vit Nam l mt nhng loi sõm cú hm lng saponin nhiu nht, tng t mt s cõy sõm quý ó tng c nghiờn cu s dng t lõu trờn th gii Trong thnh phn saponin, majonosid - R2 (M-R2) l saponin chớnh thuc nhúm ocotillol, c trng cho sõm Vit Nam, khụng cú cỏc cõy sõm Panax cú giỏ tr khỏc nh: nhõn sõm, tam tht v sõm Hoa k M-R2 chim gn 50% saponin ton phn v cú nhiu tỏc dng dc lý quan trng Ngoi ra, nhõn sõm cũn cha rt nhiu thnh phn khỏc nh: cỏc cht chng oxi húa, peptitde, polysaccharide, acid bộo, vitamin, 18 axớt amin, 20 cht khoỏng vi lng v hm lng tinh du l 0,1% Vỡ vy ngy nay, nhng cụng ngh chit sut dc liu cng rt c quan tõm Trong chng trỡnh hp tỏc nghiờn cu vi Trng i hc Hiroshima- Nht Bn (1998 2001), vic nghiờn cu thnh phn hoỏ hc ca lỏ Sõm Vit Nam ó c thc hin ú l tin cho nhng nghiờn cu tip theo v dc lý c bn Bờn cnh vic nghiờn cu mt s tỏc dng dc lý in Footer Page of 116 Header Page of 116 hỡnh ca h Nhõn Sõm, cụng trỡnh ny c thc hin ch yu nh hng vo tỏc dng chng mt mi suy nhc c ca sõm Ngc Linh[6,7] Trong bi khúa lun ny ny chỳng tụi tin hnh nghiờn cu: Chit xut v ỏnh giỏ tỏc dng ca cao sõm Ngc Linh trờn mụ hỡnh gõy suy nhc thn kinh ng vt thc nghim 1- Chit xut cao sõm Ngc Linh 2- ỏnh giỏ hiu qu ca cao sõm Ngc Linh trờn mụ hỡnh gõy suy nhc thn kinh ng vt thc nghim Footer Page of 116 Header Page 10 of 116 CHNG TNG QUAN 1.1 Gii thiu v cõy Sõm Ngc Linh 1.1.1 c im thc vt 1.1.1.1 Lch s phỏt hin Trc cú s phỏt hin t phớa cỏc nh khoa hc, sõm Ngc Linh ó c cỏc ng bo dõn tc thiu s Trung Trung b Vit Nam, c bit l dõn tc Xờ ng, s dng nh mt loi c rng, m h gi l c ngi rm hay cõy thuc giu, cha nhiu loi bnh theo cỏc phng thuc c truyn.[18,19,20] Da trờn nhng thụng tin lu truyn cng ng cỏc dõn tc thiu s Qung Nam, Kon Tum v mt loi c quý him trờn nỳi Ngc Linh cú tỏc dng tt i vi sc khe ngi, v nhu cu ca khỏng chin ó khin ngnh dc khu Trung Trung B quyt phi tỡm cõy sõm chi Panax ti Trung, mc dự trc ú nhiu nh khoa hc cho rng chi Panax ch cú Bc [15,16] Nm 1973, khu Y t Trung Trung b c mt t cỏn b dc s o Kim Long lm trng on, k s Nguyn Bỏ Hot, dc s Nguyn Chõu Giang, dc s Trn Thanh Dõn l thnh viờn, i iu tra phỏt hin cõy sõm theo hng chõn nỳi Ngc Linh thuc huyn c Tụ tnh Kon Tum Khi on lờn tnh Kon Tum, Ban Dõn y Kon Tum c thờm dc tỏ Nguyn Th Lờ tr giỳp cho on, dn ng lờn nỳi Ngc Linh [12,14] Sau nhiu ngy vt sui bng rng, n gi sỏng ngy 19 thỏng 03 nm 1973, cao 1.800 so vi mt bin, on ó phỏt hin hai cõy sõm u tiờn v bui chiu cựng ngy ó phỏt hin c mt vựng sõm rng ln thuc phớa Tõy nỳi Ngc Linh Sau 15 ngy nghiờn cu ton din v hỡnh thỏi, sinh thỏi, qun th, qun lc, phõn b, di c v phỏt tỏn, dc s o Kim Long ó xỏc nh nỳi Ngc Linh l quờ hng ca cõy sõm mi, c bit quý him, cha tng xut hin ti bt c ni no khỏc trờn th gii Theo ỏnh giỏ ca Tin s Trn Chớ Liờm, nguyờn Th trng B Y t Vit Nam: õy l cng hin quan trng cho khoa hc, b sung tri thc mi v vựng phõn b chi Panax xung v tuyn 15 v b sung cho chi Panax h Araliaceae mt loi mi[1-4,6-8] Footer Page 10 of 116 Header Page 38 of 116 Thi gian bi(s) 180 160 140 120 100 80 60 40 20 VG VG VG KRGE nc ct Hỡnh 3.9: Tỏc dng ca sõm ngc linh lờn thi gian bi ca chut 3.2.3 Dark/light test Chut sau chia lụ c cho ung thuc ngy lin Ngy th 7, sau ung thuc 60 phỳt, Chut c t vo mt ti v ca c m t ng giõy sau chut c cho vo bung ti Quan sỏt chut phỳt, ghi li thi gian v s ln vo bung sỏng v bung ti Kt qu c trỡnh by bng 12 v 13 Bng 3.12: Tỏc dng ca Sõm Ngc Linh lờn s ln lu ca chut bung sỏng/bung ti Lụ Thuc ung n S ln/ bung sỏng Nc ct 10 3,2 2,33 KRGE200 mg/kg 10 8,6 2,72 VG 100mg/kg 10 32 VG 200mg/kg 10 7,4 1,43 VG 300mg/kg 6,57 5,47 p p 3,2 2,35 P1-2< 0,05 P1-3>0,05 P230,05 P25>0,05 31 Footer Page 38 of 116 S ln/bung ti 8,2 2,66 2,8 2,09 7,3 1,49 P1-20,05 P2-30,05 P2-50,05 P2-30,05 P2-50,05 ) S ln 10 VG VG VG KRGE nc ct s ln/sỏng s ln/ti 32 Footer Page 39 of 116 Header Page 40 of 116 Hỡnh 3.10: Tỏc dng ca sõm ngc linh lờn s ln lu ca chut bung sỏng/ti Thi gian(s) 300 250 VG 200 VG 150 VG KRGE 100 nc ct 50 time/sỏng time/ti Hỡnh 11: tỏc dng ca sõm ngc linh lờn thi gian lu ca chut bung sỏng/ti 3.3 BN LUN: 3.3.1 V cỏc test nghiờn cu: a La chn test nghiờn cu: Ngy nay, c bit l cỏc nc phỏp trin, chng suy nhc thn kinh ngy cng ph bin v nh hng khụng ch n cỏ nhõn v cũn n ton xó hi Cú th núi cỏc nghiờn cu cú lờn quan n cỏc thuc chng ri lon lo õu, trm cm cha bao gi l c Trờn th gii, hin nay, cỏc th nghim c dựng ỏnh giỏ tỏc dng v mt tõm thn thng c s dng ng vt l chut (c chut nht v chut cng) Cỏc th nghim c dựng ph bin bao gm: 33 Footer Page 40 of 116 Header Page 41 of 116 Th nghim Grip (Grip Test) Th nghim EPM (EPM Test) Th nghim Rota-Rod (Rota-Rod Test) Th nghim mụi trng m (Open-field test) Th nghim o hot ng t nhiờn ca chut bng lng rung (Spontaneous activity Test) o thi gian ng ca chut ung thuc ng barbital sau ó dựng thuc cn c nghiờn cu (Barbital sleeping time Test) Th nghim chut bi (Forced swimming Test) Th nghim mụi trng sỏng/ ti (Light/dark Test) Th nghim Y-maze Th nghim trỏnh th ng (Passive avoidance test) Trong s ú mụ hỡnh th nghim EPM v mụ hỡnh th nghim Rota-Rod l hai mụ hỡnh c s dng ph bin nht Trong phm vi ca ti khúa lun ny, chỳng tụi la chn cỏc th nghim: Th nghim EPM Th nghim EMP ó c mụ t nh mt phng phỏp n gin ỏnh giỏ phn ng lo lng ca loi gm nhm theo File v ng nghip Thớ nghim EPM c Pellow v cng s phỏt trin t cỏc mụ hỡnh th nghim mờ cung khỏc (Y-maze, Zero maze) nm 1985-1986 v c ng dng rng rói t ú n Tht vy, EMP ó c s dng rng rói hn hai thp k, v hin cú hn 2.000 bỏo cỏo liờn quan n ch ny EMP ó c sa i thnh mt mờ cung nõng lờn vi bn tay (hai m v hai tay kớn) c sp xp to thnh mt hỡnh dng du cng v c mụ t bi Handley v Mithani Cỏc tỏc gi ny mụ t vic ỏnh giỏ hnh vi lo lng ca loi gm nhm bng cỏch s dng t l thi gian dnh cho cỏnh tay m thi gian dnh cho cỏnh tay khộp kớn Thớ nghim ny da trờn bn nng ca chut l s nhng ni h v cú bn nng thớch khỏm phỏ Khi c t dng c hỡnh ch thp trờn cao, chut s b cm giỏc lo lng cao nờn ớt tip xỳc vi tay h õy s l iu kin phỏt hin tỏc dng chng lo õu s hói.[28,30] 34 Footer Page 41 of 116 Header Page 42 of 116 Cng thng lo õu l mt triu chng i kốm vi nhiu ri lon ca h TKTW v bn thõn nú cng l mt ri lon ngi, nú c biu hin bng s hi hp xen ln mt mi, kit sc cỏc loi ng vt gm nhm, s lo õu cng thng thng liờn quan n cỏc hnh vi t v nh: bt ng, tỡm ch trỳ n, lim lụng, nhy dng Cỏc hnh vi ny ng vt cú th quan sỏt c Cú l õy cng l c s cỏc mụ hỡnh th nghim da trờn s quan sỏt ng vt thớ nghim nh EPM, Open field (vựng m) i.[33,38] Mt u im na ca EPM l khụng cn hun luyn ng vt trc lm thớ nghim, iu kin nuụi dng cng khụng cn c bit Thớ nghim ny cho kt qu vi lp li cao.[39] Dng c tin hnh thớ nghim EPM n gin, cú th ch to c iu kin Vit nam.[44] V thi gian thớ nghim: thớ nghim EPM, thi gian quan sỏt mi chut l phỳt l da trờn suy lun õy l khong thi gian chut biu l hnh vi t v hoc trn trỏnh rừ nht Nu khong thi gian ny kộo di hn phỳt, chut cú th quen vi mụi trng, lm nh hng n kt qu[44,48] Th nghim chut bi: Chut bi l mụ hỡnh thớ nghim kinh in ca Dc lý hc Vit nam mụ hỡnh ny c s dng ch yu cỏc nghiờn cu tỏc dng tng lc ca thuc Tuy nhiờn, hin nhiu nghiờn cu trờn th gii cng s dng mụ hỡnh chut bi ỏnh giỏ tỏc dng trờn TKTW [26,31,42] Da trờn suy lun thun thuc kớch thớch TKTW lm tng s phi hp thn kinh c dn n tng kh nng ng v sc ca ng vt Khi b th vo nc, theo bn nng t nhiờn, chut s cú phn x lờn v bi sng sút Chut s ch ngng bi v chỡm s phi hp thn kinh c khụng cũn Thi gian chut bi cng di chng t chut gi c s phi hp thn kinh- c lõu Thớ nghim ny cú tớnh kh thi cao vỡ phng phỏp tin hnh khụng quỏ phc tp, vic hun luyn ngi theo dừi thớ nghim cng khụng khú khn, trang thit b phc v cho thớ nghim d kim[21,25] Dark/light test Kim tra chuyn tip ỏnh sỏng / ti l mt nhng bi kim tra c s dng rng rói nht o lng s lo lng ging nh hnh vi chut Th nghim sỏng ti da trờn s ỏc cm bm sinh ca loi gm nhm i vi cỏc khu vc c chiu sỏng mnh v hnh vi khỏm phỏ t nhiờn ca loi gm nhm vi cỏc tỏc ng 35 Footer Page 42 of 116 Header Page 43 of 116 bờn ngoi tc l mụi trng mi l v ỏnh sỏng Th nghim ny ny cm vi cỏc thuc an thn, chng lo õu s hói, trm cm Thit b kim tra bao gm khoang ti v khoang sang c chiu sỏng Mt khe hp, rng 3cm, cao 5cm kt ni hai bung Chut c phộp di chuyn t gia hai bung S ln v thi gian dnh cho bung sỏng th hin s lo lng ớt hay nhiu ca chut vi khụng gian sỏng Phng phỏp ny d thc hin v kt qu tng i chớnh xỏc Tuy nhiờn, s khỏc gia cỏc phũng thớ nghim khin cho vic lp li hoc so sỏnh kt qu gia cỏc phũng thớ nghim rt khú khn [28,45] Trong th nghim ny tụi s dng phiờn bn khỏc vi phiờn bn gc u tiờn, bung sỏng ln hn bung ti phiờn bn ban u, kớch thc ca hai bung l ging phiờn bn th nghim ca chỳng tụi Th hai, phiờn bn ban u, bung sỏng khụng cú trn v tng, bung sỏng l sut (Crawley v Goodwin, 1980), chỳng tụi s dng cht mu trng c cho trn v tng ca bung sỏng Nhng khỏc bit ny, c th l kớch c v m ca bung sỏng, cho phộp phỏt hin ng thi s lo lng khụng gian sỏng cng nh s lo lng khụng gian m phiờn bn gc ca bi kim tra Tuy nhiờn, th nghim ca tụi, hnh vi ging nh lo õu khụng gian m chut c th nghim th nghim EMP Mc dự th nghim sỏng/ ti v EMP u c s dng ỏnh giỏ hnh vi lo õu, nhng kt qu khụng phi lỳc no cng nht quỏn Th nghim chuyn i ỏnh sỏng / ti ca tụi v cỏc bi kim tra trờn EMP ỏnh giỏ cỏc khớa cnh khỏc ca hnh vi lo õu, chng hn nh s lo lng khụng gian sỏng v hnh vi lo lng ging nh khụng gian m[28,31,45] Mt s thớ nghim cha lm c: Nh ó núi trờn, cú rt nhiu th nghim cú th dựng ỏnh giỏ tỏc dng kớch thớch TKTW ca thuc Mi thớ nghim u cú nhng u im v nhc im riờng Trong khuụn kh ca ti khúa lun, vỡ iu kin thi gian v kinh phớ khụng cho phộp, chỳng tụi mi chn tin hnh cỏc th nghim nh ó trỡnh by trờn Trong nhng ti liu tham kho trờn th gii, õy l nhng th nghim m chỳng tụi thy rng cú tớnh hp lý v kh thi nht v cú th thc hin c khuụn kh khúa lun nghiờn cu k hn tỏc dng kớch thớch TKTW ca sõm ngc linh, nờn ỏp dng cỏc th nghim ny: Th nghim o gic ng Barbital: Th nghim ny dựng ỏnh giỏ tỏc dng gim thi gian ng ca thuc Th nghiờm cú u im hn th nghim chut bi vỡ ỏnh giỏ tỏc dng trc tip hn ch 36 Footer Page 43 of 116 Header Page 44 of 116 khụng giỏn tip qua cỏc c ch thn kinh c, kh nng nh hng khụng gian, kh nng chu lnh Ngoi ra, vic tin hnh thớ nghim cng n gin, d thc hin, v th nghim fhon ton thc hin c vit nam ng thi cho kt qu cng tng i chớnh xỏc Y-maze test Th nghim ny cú u im l dng c thớ nghim hin i, cú chớnh xỏc cao Dng c thớ nghim ny ó cú mt v c s dng Vit nam Th nghim ỏnh giỏ hot ng t nhiờn ca chut Th nghim ny cú chớnh xỏc cao, dng c thớ nghim hin i Dng c my ó c s dng Vit nam Th nghim Rota rod Th nghim ny cng dựng ỏnh phi hp thn kinh c ca chut Dng c ny cng ó c s dng vit nam, cú chớnh xỏc cao, d thc hin v vic hun luyn ngi lm thớ nghim d dnh b iu kin nghiờn cu Thớ nghim EMP c thc hin phũng ti, cũn thớ nghim chut bi v th nghim sỏng ti c thc hin phũng vi ỏnh sỏng va phi v yờn tnh Trờn thc t, chỳng ti thc hin cỏc th nghim EMP iu kiờn mụi trng cú ỏnh sỏng v ting ng Th nghim chut bi v sỏng/ti cng iu kin cú ting n Nờn kt qu l cỏc s liu thu c rt dao ng, khú ỏnh giỏ Cng cỏc thớ nghim ú nhng tin hnh mụi trng phự hp vi iu kin ca tng th nghim thỡ thu c kt qu rt chung v d phõn tớch T nhng iu trờn chỳng t rng, mụi trng nghiờn cu l cc k quan trng i vi cỏc th nghim ỏnh giỏ tỏc dng ca thuc trờn h TKTW c La chn thuc chng dng Nhõn sõm t lõu ó c s dng nh mt phng thuc truyn thng cho cỏc sc kho khỏc Ngi ta tin rng cú nhiu li ớch v th cht v tõm lý nh tng nng lng / tng sc bn, kớch thớch tinh thn, ci thin tõm trng, tng cng nhn thc T cỏc kt qu nghiờn cu trờn th gii chng minh rng nhõn sõm cú tỏc dng chng mt mi [27,41] Nhõn sõm cú cỏc chc nng dc lý bao gm chng oxy húa, tng cng dch v bỡnh thng húa h thng chuyn húa ca ngi Trong y hc c truyn phng ụng, nhõn sõm ó c s dng ch yu tng cng sc chu ng v gim cng thng v th cht v s mt mi Mt th nghim ngu nhiờn, mự ụi, gi 37 Footer Page 44 of 116 Header Page 45 of 116 dc ó cho thy rng nhõn sõm cú tỏc dng chng mt mi nhng bnh nhõn b mt mi tớnh t phỏt Ngoi ra, nhõn sõm ó c chng minh l cú hot ng chng mt mi mt nghiờn cu ng vt Trong mt nghiờn cu khỏc, nhõn sõm lm tng lng c, thi gian bi bn Nhõn sõm cú tỏc dng chng s lo lng ó dc chng minh trờn mụ hỡnh thớ nghim s lo lng vi diazepam bng vic s dng th nghim EMP Th nghim EMP cho thy rng nhõn sõm lm tng s ln v thi gian chut lu trờn cỏnh tay h Trong th nghim sỏng/ti, nhõn sõm cng lm tng thi gian v s ln lu gi ca chut bung sỏng.[27,32,38,41] Da vo kt qu ca nhng nghiờn cu trờn chỳng tụi ó la chn nhõn sõm hn quc lm chng dng cho th nghim ny Liu ca KGRE dựng th nghim nghiờn cu chng suy nhc thn kinh l liu 200mg/kg Chỳng tụi ó tham kho liu t cỏc nghiờn cu trờn th gii trc y v tin hnh kho sỏt liu ca KGRE cú tỏc dng chng lo õu, trm cm d Tỏc dng chng suy nhc thn kinh ca sõm ngc linh Trờn th nghim EMP, sõm ngc linh liu 100, 200, 300mg/kg khụng cho tỏc dng rừ rt(p> 0,05) so vi mu chng iu ú cho thy rng, VG khụng th hin rừ tỏc dng chng suy nhc thn kinh ca sõm ngc linh trờn th nghim ny Th nghim chut bi, VG liu 100mg/kg, 300mg/kg khụng gõy tỏc dng rừ rng th nghim ny (p>0,05) VG liu 200mg/kg lm rừ rt thi gian bi so vi mu chng(p< 0,05) iu chng t, VG liu 200mg/kg cú tỏc dng chng suy nhc thn kinh trờn th nghim ny Kt qu ca nhúm dựng VG 200mg/kg so vi nhúm dựng KRGE khụng cú s khỏc bit rừ rng (p>0,05) Nh vy, liu 200mg/kg, cho tỏc dng tng ng vi KRGE 200mg/kg Th nghim sỏng/ti, VG liu 100mg/kg, 300mg/kg khụng cho tỏc dng rừ rt so vi mu chng (p> 0,05) Nhng VG liu 200mg/kg lm rừ rt thi gian v s ln di chuyn bung sỏng so vi mu chng( P0,05) Nh vy, liu 200mg/kg, cho tỏc dng tng ng vi KRGE 200mg/kg 38 Footer Page 45 of 116 Header Page 46 of 116 CHNG 4: KT LUN V KIN NGH 4.1 Kt lun Qua thi gian nghiờn cu ti chỳng tụi ó thu c cỏc kt qu theo cỏc ni dung nghiờn cu ó nh sau: - ó a qui trỡnh chit xut saponin ton phn t dc liu sõm Ngc Linh - ó tin hnh c cỏc mụ hỡnh ỏnh giỏ tỏc dng chng suy nhc thn kinh ca sõm Ngc Linh 4.2 Kin ngh T nhng kt qu nghiờn cu c, chỳng tụi cú mt s kin ngh nh sau: V vic nghiờn cu thờm: Trong khúa lun ny, chỳng tụi ch tin hnh c nhng mụ hỡnh thớ nghim cn bn v cú tớnh kinh in mt Vỡ õy cng l nghiờn cu u khụng th trỏnh c cỏc sai sút, cn cú nhng nghiờn cu sõu hn Chỳng tụi ó ch rng ung VG to kớch thớch TKTW, chng lo õu s hói Do nhng hn ch ca nghiờn cu ny, cỏc thnh phn c th liờn quan n cỏc hot ng sinh lý tõm thn qua th nghim EMP cha c th hin rừ õy cú th l trng tõm ỏnh giỏ cỏc nghiờn cu tng lai Qua tỡm hiu, chỳng tụi nhn thy mt s mụ hỡnh nghiờn cu tỏc dng an chng lo õu, trm cm trờn ng vt cú th ỏp dng nghiờn cu tip: Th nghim nghim gic ng barbital Th nghim ỏnh giỏ mc ng ca chut Th nghim mụi trng m (open field test) Th nghiờm ỏnh giỏ hot ng t nhiờn ca chut V quỏ trỡnh chit xut: Trong nghiờn cu ny chỳng tụi s dng phng phỏp chit siờu õm, nhng quỏ trỡnh tin hnh cũn nhiu sai sút, cn khc phc v cn tin hnh nghiờn cu sõu hn õy cú th l mt nghiờn cu tõm tng lai Trong cỏc th nghim tip theo chỳng tụi kin ngh mt s phng phỏp tin hnh c phũng thớ nghim v cú th mang li hiu xut cao hn: Phng phỏp chit bng soxhlet 39 Footer Page 46 of 116 Header Page 47 of 116 - Phng phỏp chit hi lu Phng phỏp chit ngm kit 40 Footer Page 47 of 116 Header Page 48 of 116 TI LIU THAM KHO TI LIU TING VIT Bỏo cỏo iu tra tr lng khoanh vựng cõy sõm K5 Tnh Qung Nam - Nng (9/1979), Ty y t Qung Nam - Nng B Y t (2008), Y hc c truyn, NXB Y hc, H Ni B y t (2011), Dc liu hc, Nh xut bn Y hc, H Ni Bỏo cỏo túm tt tng kt ti khoa hc ỏp dng mt s bin phỏp k thut to ging gieo trng nhm bo v, nuụi trng v phỏt trin ngun sõm K5 ti Tr Linh - Tr My (Qung Nam), Cụng ty dc phm Qung Nam - Nng, 197 B Y t - Vin y hc c truyn vit nam ỏnh giỏ tỏc dng ca thuc Long Quy Sinh trờn bnh nhõn suy nhc thn kinh Huy Bớch (2006), Nhng cõy thuc v ng vt lm thuc vit nam (tp 2) phn 1,, NXB Khoa hc k thut, 704 713 Tt Li (1999), Nhng cõy thuc v v thuc Vit Nam, Nh xut bn Y hc, 808- 810 Phm Hong H, Cõy c Vit Nam, NXB tr Nguyn Th Hnh, Bi ging Y hc c truyn: Tõm cn suy nhc, H Y khoa Thỏi Nguyờn 10 T Minh Koúng, K thut sn xut dc phm 1, phn 2, 145-162 11 Trn Cụng Lun, Kt qu nghiờn cu v thnh phn húa hc Sõm Ngc Linh, Trung tõm Sõm v Dc liu TP.HCM - Viờn Dc Liu 12 Nghiờn cu v sõm ngc linh v hm lng cỏc cht sõm ngc linh truy cp ngy, ti trang web http://text.123doc.org/document/71210-nghiencuu-ve-sam-ngoc-linh-va-ham-luong-cac-chat-trong-sam-ngoc-linh.htm 13 Nguyn Thiờn Quyn (Biờn dch), Chn oỏn phõn bit chng hu ụng y, 492-497 14 Sỏch Vit Nam, NXB khoa hc k thut, 88 15 Tp sinh hc (9/1985), 45-48 41 Footer Page 48 of 116 Header Page 49 of 116 16 Tp Tp Khoa hc HQGHN: Khoa hc Y Dc (1/2016), "Nghiờn cu thnh phn Saponin v iu ch phc Saponin Phytosome ca c cõy tam tht Panax Notoginseng trng Tõy Bc Vit Nam" 32, 1-7 17 Th vin quc gia Vit Nam (1992), "Nghiờn cu v Saponin inh lng v dng bo ch t inh lng" 18 Vin y hc bn a Vit Nam, truy cp ngy, ti trang web http://dongyvietbac.com.vn/suy-nhuoc-met-moi-nhuoc-co.html 19 Vin Dc Liu (2006), Nghiờn Cu Thuc T Tho Dc, NXB Khoa Hc K Thut, 200-222 20 V Phng Xuõn (2000), Thc vt Vit Nam, Tp 2, NXB khoa hc v k thut TI LIU NC NGOI 21 Bailey Kathleen Rand Crawley Jacqueline N (2009), "Anxiety-related behaviors in mice" 22 Bao, L., Cai, X., Wang, J., Zhang, Y., Sun, B and Li, Y (2016), "Anti-Fatigue Effects of Small Molecule Oligopeptides Isolated from Panax ginseng CA Meyer in Mice", Nutrients 8(12), 807 23 Bum, E N., Taùwe, G S., Moto, F., Ngoupaye, G., Nkantchoua, G., Pelanken, M., Rakotonirina, S and Rakotonirina, A (2009), "Anticonvulsant, anxiolytic, and sedative properties of the roots of Nauclea latifolia Smith in mice", Epilepsy & Behavior 15(4), 434-440 24 Calabrese, E J (2008), "An assessment of anxiolytic drug screening tests: hormetic dose responses predominate", Critical reviews in toxicology 38(6), 489-542 25 Can Adem, Dao David T, Arad Michal, Terrillion Chantelle E, Piantadosi Sean C and Gould Todd D (2012), "The mouse forced swim test", JoVE (Journal of Visualized Experiments)(59), e3638-e3638 26 Carobrez, A.and Bertoglio, L (2005), "Ethological and temporal analyses of anxiety-like behavior: the elevated plus-maze model 20 years on", Neuroscience & Biobehavioral Reviews 29(8), 1193-1205 42 Footer Page 49 of 116 Header Page 50 of 116 27 Carr, M N., Bekku, N and Yoshimura, H (2006), "Identification of anxiolytic ingredients in ginseng root using the elevated plus-maze test in mice", European journal of pharmacology 531(1), 160-165 28 Castagnộ Vincent, Moser Paul and Porsolt Roger D (2009), "Behavioral assessment of antidepressant activity in rodents" 29 Chuck, T L., McLaughlin, P J., Arizzi LaFrance, M N., Salamone, J D and Correa, M (2006), "Comparison between multiple behavioral effects of peripheral ethanol administration in rats: sedation, ataxia, and bradykinesia", Life sciences 79(2), 154-161 30 Daley, M., Morin, C M., LeBlanc, M., Grộgoire, J.-P and Savard, J (2009), "The economic burden of insomnia: direct and indirect costs for individuals with insomnia syndrome, insomnia symptoms, and good sleepers", Sleep 32(1), 55-64 31 dela Peủa, I J I., Kim, H J., Botanas, C J., de la Peủa, J B., Van Le, T H., Nguyen, M D., Park, J H and Cheong, J H (2016), "The psychopharmacological activities of Vietnamese ginseng in mice: characterization of its psychomotor, sedativehypnotic, antistress, anxiolytic, and cognitive effects", Journal of Ginseng Research 32 Deng, J., Zhou, Y., Bai, M., Li, H and Li, L (2010), "Anxiolytic and sedative activities of Passiflora edulis f flavicarpa", Journal of Ethnopharmacology 128(1), 148-153 33 Duc, N M., Kasai, R., Ohtani, K., Aiko, I., Nguyen, T N., Yamasaki, K and Tanaka, O (1994), "Saponins from Vietnamese ginseng, Panax vietnamensis Ha et Grushv collected in central Vietnam III", Chemical and pharmaceutical bulletin 42(3), 634-640 34 Duc, N M., Kasai, R., Ohtani, K., Ito, A., Nham, T., Yamasaki, K and Tanaka, O (1994), "Saponins from Vietnamese ginseng, Panax vietnamensis Ha et Grushv collected in central Vietnam II", Chemical and pharmaceutical bulletin 42(1), 115-122 35 Duc, N M., Nham, N T., Kasai, R., Ito, A., Yamasaki, K and Tanaka, O (1993), "Saponins from Vietnamese ginseng, Panax vietnamensis Ha et Grushv collected in central Vietnam I", Chemical and pharmaceutical bulletin 41(11), 2010-2014 43 Footer Page 50 of 116 Header Page 51 of 116 36 Emamghoreishi, M., Khasaki, M and Aazam, M F (2005), "Coriandrum sativum: evaluation of its anxiolytic effect in the elevated plus-maze", Journal of Ethnopharmacology 96(3), 365-370 37 Heydorn, W E (2000), "Zaleplon-a review of a novel sedative hypnotic used in the treatment of insomnia", Expert opinion on investigational drugs 9(4), 841-858 38 Jamal, H., Ansari, W H and Rizvi, S J (2008), "Evaluation of chalconesa flavonoid subclass, for, their anxiolytic effects in rats using elevated plus maze and open field behaviour tests", Fundamental & clinical pharmacology 22(6), 673-681 39 Komada Munekazu, Takao Keizo and Miyakawa Tsuyoshi (2008), "Elevated plus maze for mice", JoVE (Journal of Visualized Experiments)(22), e1088e1088 40 Ma, G D., Chiu, C H., Hsu, Y J., Hou, C W., Chen, Y M and Huang, C C (2017), "Changbai Mountain ginseng (Panax ginseng CA Mey) extract supplementation improves exercise performance and energy utilization and decreases fatigue-associated parameters in mice", Molecules 22(2), 237 41 Park, J H., Cha, H Y., Seo, J J., Hong, J T., Han, K and Oh, K W (2005), "Anxiolytic-like effects of ginseng in the elevated plus-maze model: comparison of red ginseng and sun ginseng", Progress in NeuroPsychopharmacology and Biological Psychiatry 29(6), 895-900 42 Petit Demouliere, B., Chenu, F and Bourin, M (2005), "Forced swimming test in mice: a review of antidepressant activity", Psychopharmacology 177(3), 245-255 43 Ren, L., Wang, F., Xu, Z., Chan, W M., Zhao, C and Xue, H (2010), "GABA A receptor subtype selectivity underlying anxiolytic effect of 6hydroxyflavone", Biochemical pharmacology 79(9), 1337-1344 44 Rodgers, R.and Dalvi, A (1997), "Anxiety, defence and the elevated plusmaze", Neuroscience & Biobehavioral Reviews 21(6), 801-810 45 Takao Keizoand Miyakawa Tsuyoshi (2006), "Light/dark transition test for mice", JoVE (Journal of Visualized Experiments)(1), e104-e104 46 Thuc quý ca ngi vit "Tỏc dng ca sõm ngc linh" 44 Footer Page 51 of 116 Header Page 52 of 116 47 Tolardo, R., Zetterman, L., Bitencourtt, D R., Mora, T C., de Oliveira, F L., Biavatti, M W., Amoah, S K S., Bỹrger, C and de Souza, M M (2010), "Evaluation of behavioral and pharmacological effects of Hedyosmum brasiliense and isolated sesquiterpene lactones in rodents", Journal of ethnopharmacology 128(1), 63-70 48 Walf Alicia Aand Frye Cheryl A (2007), "The use of the elevated plus maze as an assay of anxiety-related behavior in rodents", Nature protocols 2(2), 322-328 49 Wei, X Y., Yang, J Y., Wang, J H and Wu, C F (2007), "Anxiolytic effect of saponins from Panax quinquefolium in mice", Journal of ethnopharmacology 111(3), 613-618 50 Zhu, H., Mingler, M K., McBride, M L., Murphy, A J., Valenzuela, D M., Yancopoulos, G D., Williams, M T., Vorhees, C V and Rothenberg, M E (2010), "Abnormal response to stress and impaired NPS-induced hyperlocomotion, anxiolytic effect and corticosterone increase in mice lacking NPSR1", Psychoneuroendocrinology 35(8), 1119-1132 51 Kim H.J., Kim P., Shin C.Y A comprehensive review of the therapeutic and pharmacological effects of ginseng and ginsenosides in central nervous system J Ginseng Res 2013;37:829 45 Footer Page 52 of 116 ... Chiết xuất đánh giá tác dụng cao sâm Ngọc Linh mô hình gây suy nhược thần kinh động vật thực nghiệm 1- Chiết xuất cao sâm Ngọc Linh 2- Đánh giá hiệu cao sâm Ngọc Linh mô hình gây suy nhược thần. .. GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC NGƯỜI THỰC HIỆN: LƯƠNG THỊ HỒNG CHIẾT XUẤT VÀ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CỦA CAO SÂM NGỌC LINH TRÊN MÔ HÌNH GÂY SUY NHƯỢC THẦN KINH Ở ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI... THỊ VÀ HÌNH VẼ Tên hình vẽ, đồ thị Hình 1.1: Sâm Ngọc Linh thiên nhiên Hình 1.2: Hình thái sâm Ngọc Linh Hình 1.3: Cây sâm Ngọc Linh Hình 1.4: Cây sâm Ngọc Linh sống mặt đất hình dạng củ sâm Hình