Xây dựng quy trình nuôi tôm sạch sử dụng chế phẩm vi sinh thay thế hóa chất

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI =======* & *====== XÂY DỰNG QUY TRÌNH NUÔI TÔM SẠCH SỬ DỤNG CHẾ PHẨM VI SINH THAY THẾ HÓA CHẤT LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC CHUYÊN NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC HƢƠNG DẪN KHOA HỌC: NGƯT PGS.TS KHUẤT HỮU THANH HỌC VIÊN : LÊ THẾ XUÂN Hà Nội - 2012 LỜI CAM ĐOAN Tôi Lê Thế Xuân xin cam đoan nội dung luận văn với đề tài “XÂY DỰNG QUY TRÌNH NUÔI TÔM SẠCH SỬ DỤNG CHẾ PHẨM VI SINH THAY THẾ HÓA CHẤT” công trình nghiên cứu sáng tạo thực hướng dẫn PGS.TS Khuất Hữu Thanh Các số liệu, kết trình bày luận văn hoàn toàn trung thực chưa công bố công trình khoa học khác LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, cố gắng nỗ lực thân, nhận ủng hộ, giúp đỡ tận tình thầy cô giáo, gia đình, quan, đồng nghiệp bạn bè Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Khuất Hữu Thanh - Viện Công nghệ sinh học & Công nghệ thực phẩm, Trường Đại học Bách khoa Hà Nội tận tình bảo suốt trình thực luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn tới thầy cô giáo thuộc Viện Công nghệ sinh học & Công nghệ thực phẩm, Trường Đại học Bách khoa Hà Nội giảng dạy giúp đỡ suốt trình học tập thực luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè đồng nghiệp tạo điều kiện, quan tâm, động viên góp ý cho suốt trình học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng 11 năm 2012 Học viên Lê Thế Xuân MỤC LỤC MỞ ĐẦU PHẦN I TỔNG QUAN 1.1 Tình hình nuôi tôm giới 1.2 Tình hình nuôi tôm Việt Nam 1.2.1 Tình hình nghề nuôi tôm Việt Nam 1.2.2 Các mô hình công nghệ nuôi tôm chủ yếu Việt Nam 1.2.3 Đặc điểm môi trường nước nuôi tôm 1.2.4 Các số đánh giá nước nuôi tôm 1.2.5 Tình trạng dịch bệnh ô nhiễm nước nuôi tôm 11 1.3 Tình hình nghiên cứu ứng dụng chế phẩm sinh học nuôi trồng thủy sản 14 1.3.1 Vai trò vi khuẩn chuỗi thức ăn thủy sinh 15 1.3.2 Nghiên cứu ứng dụng vi sinh vật nuôi trồng thủy sản giới 15 1.3.3 Tình hình sử dụng chế phẩm sinh học nuôi tôm nước lợ Việt Nam 17 1.4 Một số đặc điểm vi sinh vật có ứng dụng sản xuất chế phẩm sinh học 19 1.4.1 Chế phẩm sinh học probiotic 19 1.4.2 Các nhóm vi sinh vật chủ yếu sử dụng tạo chế phẩm sinh học probiotic 21 1.4.2.1 Vi khuẩn lactic 23 1.4.2.2 Vi khuẩn Bacillus 24 1.5 Một số phƣơng pháp định loại vi sinh vật 25 1.5.1 Kỹ thuật định loại truyền thống 25 1.5.2 Kỹ thuật định loại sinh học phân tử 26 1.6 Một số yếu tố công nghệ tạo chế phẩm sinh học 26 1.6.1 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy 27 1.6.1.1 Ảnh hưởng thành phần dinh dưỡng 27 1.6.1.2 Ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy 28 1.6.2 Quá trình lên men vi sinh vật 29 1.6.3 Chất mang chế phẩm sinh học 30 1.6.4 Kỹ thuật sấy chế phẩm sinh học probiotic 31 1.7 Tổng quan loài tôm 33 1.7.1 Đặc điểm phân loại 33 1.7.2 Tôm thẻ chân trắng 34 1.7.2.1 Đặc điểm hình thái sinh trưởng 34 1.7.2.2 Đặc điểm dinh dưỡng môi trường sống 35 1.7.2.3 Đặc điểm sinh sản 36 1.7.3 Tôm sú 36 1.7.3.1 Đặc điểm hình thái sinh trưởng 36 1.7.3.2 Đặc điểm sinh trưởng 37 1.7.3.3 Đặc điểm sinh sản 38 1.7.3.4 Đặc điểm dinh dưỡng 39 PHẦN II VẬT LIỆU VÀ PHUƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 40 2.1 Vật liệu 40 2.2 Môi trƣờng 40 2.2.1 Môi trường sử dụng nghiên cứu vi khuẩn lactic 40 2.2.2 Môi trường sử dụng nghiên cứu vi khuẩn Bacillus 41 2.2.3 Môi trường sử dụng để xác định hoạt tính enzym 41 2.3 Thiết bị 41 2.4 Hóa chất 42 2.5 Phƣơng pháp nghiên cứu 43 2.5.1 Phương pháp phân lập xác định vi sinh vật tổng số 43 2.5.2 Nghiên cứu đặc điểm hình thái, sinh l , sinh hóa chủng vi khuẩn 43 2.5.3 Phương pháp xác định hoạt tính kháng khuẩn 44 2.5.4 Phương pháp xác định hoạt tính enzym 45 2.5.5 Định tên chủng vi khuẩn kỹ thuật phân tử 45 2.5.6 Phương pháp nghiên cứu điều kiện lên men 45 2.5.7 Phương pháp nuôi cấy thu sinh khối 46 2.5.8 Phương pháp tạo chế phẩm sinh học 46 2.5.9 Xây dựng mô hình thí nghiệm nuôi tôm sử dụng chế phẩm sinh học 47 2.5.9.1 Quy trình nuôi chăm sóc 47 2.5.9.2 Phương pháp chọn thả giống 49 2.5.10 Xác định số thông số kỹ thuật chủ yếu nuôi tôm 50 2.5.11 Xử l số liệu 50 PHẦN III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 51 3.1 Phân lập tuyển chọn chủng giống vi sinh vật probiotic thích hợp 51 3.1.1 Phân lập chủng vi sinh vật hữu ích 51 3.1.2 Tuyển chọn chủng có hoạt tính enzym phân hủy hữu cao kháng khuẩn mạnh 54 3.1.2.1 Tuyển chọn chủng vi khuẩn Bacillus có khả sinh enzym thủy phân hợp chất hữu 54 3.1.2.2 Tuyển chọn chủng vi khuẩn Lactic có khả sinh acid lactic enzym ngoại bào phân hủy hợp chất hữu 57 3.1.2.3 Đánh giá khả kháng vi sinh vật kiểm định 58 3.1.2.4 Tuyển chọn chủng có khả chịu mặn 60 3.1.3 Kết định tên chủng vi khuẩn kỹ thuật phân tử 63 3.2 Nghiên cứu điều kiện lên men tạo chế phẩm sinh học quy mô thí nghiệm 65 3.2.1 Nghiên cứu điều kiện lên men chủng vi khuẩn lactic 65 3.2.1.1 Nghiên cứu thành phần môi trường dinh dưỡng thích hợp với chủng vi khuẩn lactic 65 3.2.1.2 Nghiên cứu xác định điều kiện pH thích hợp cho vi khuẩn lactic 66 3.2.1.3 Nghiên cứu xác định điều kiện nhiệt độ cho vi khuẩn lactic 66 3.2.1.4 Xác định thời gian lên men thích hợp cho chủng vi khuẩn lactic 67 3.2.2 Nghiên cứu điều kiện lên men chủng vi khuẩn Bacillus 69 3.2.2.1 Nghiên cứu thành phần môi trường dinh dưỡng thích hợp với chủng Bacillus 69 3.2.2.2 Xác định điều kiện nhiệt độ thích hợp cho lên men thu sinh khối vi khuẩn Bacillus 70 3.2.2.3 Xác định điều kiện pH thích hợp 70 3.2.2.4 Xác định thời gian lên men thích hợp 71 3.2.2.5 Nghiên cứu ảnh hưởng tốc độ lắc đến khả sinh trưởng vi khuẩn thuộc chi Bacillus 72 3.2.3 Nghiên cứu điều kiện thu chế phẩm quy mô pilot (100 lít) 73 3.2.3.1 Nghiên cứu lên men chủng Bacillus sp 73 3.2.3.2 Nghiên cứu điều kiện thu hồi sinh khối tạo chế phẩm chủng vi khuẩn Bacillus sp 74 3.2.3.3 Nghiên cứu lên men chủng vi khuẩn lactic 77 3.3 Xây dựng mô hình nuôi tôm 80 3.3.1 Sơ đồ ao nuôi tôm thâm canh 81 3.3.2 Quy trình áp dụng chế phẩm sinh học nuôi tôm thâm canh 82 3.4 Hiệu mô hình nuôi tôm sử dụng chế phẩm sinh học thay hóa chất 84 3.4.1 Ảnh hưởng chế phẩm nghiên cứu đến khả sinh trưởng tôm 85 3.4.1.1 Ảnh hưởng chế phẩm nghiên cứu đến đối tượng tôm thẻ chân trắng 85 3.4.1.2 Ảnh hưởng chế phẩm nghiên cứu đến đối tượng tôm sú 86 3.4.2 Ảnh hưởng chế phẩm vi khuẩn nghiên cứu đến hệ vi khuẩn ao nuôi 88 PHẦN IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 91 TÀI LIỆU THAM KHẢO 93 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC VIẾT TẮT BOD (Biochemical oxygen demand) Nhu cầu oxy sinh học BTC Bán thâm canh COD (Chemical Oxygen Demand) Nhu cầu oxy hóa học CMC Cacboxyl methyl cellulose CFU (Colony forming unit) Đơn vị khuẩn lạc DO (Demand oxygen) Nồng độ oxy hòa tan ĐC Đối chứng FOS Fructooligosaccharides MOS Mannan oligosaccharides MRS (de Man, Rogosa and Sharpe) Môi trƣờng dinh dƣỡng MRS NB (Nutrien Broth) Môi trƣờng dinh dƣỡng lỏng PCR (Polymerase Chain Reaction) Phản ứng khuếch đại gen QC Quảng canh QCCT Quảng canh cải tiến TC Thâm canh USD Đô la Mỹ DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Các thông số thích hợp cho nuôi tôm nƣớc lợ 10 Bảng 2.1 Thành phần dinh dƣỡng loại môi trƣờng lên men lactic 40 Bảng 2.2 Thành phần dinh dƣỡng loại môi trƣờng lên men Bacillus .41 Bảng 2.3 Nghiên cứu điều kiện lên men 46 Bảng 3.1 Danh sách chủng vi khuẩn phân lập đƣợc 52 Bảng 3.2 Hoạt tính protease, cellulase amylase chủng vi khuẩn thuộc chi Bacillus phân lập t tự nhiên đất ao nuôi hệ tiêu hóa ruột tôm 55 Bảng 3.3 Hoạt tính protease, cellulose amylase chủng vi khuẩn Bacillus phân lập t chế phẩm 56 Bảng 3.4 Khả sinh acid lactic enzym ngoại bào chủng vi khuẩn lactic 58 Bảng 3.5 Khả kháng vi sinh vật kiểm định hoạt tính sinh catalase chủng tuyển chọn 59 Bảng 3.6 Kiểm tra khả sinh trƣởng môi trƣờng muối NaCl 61 Bảng 3.7 Các chủng có hoạt tính sinh lý sinh hóa phù hợp 62 Bảng 3.8 Kết định danh chủng tuyển chọn 64 Bảng 3.9 Ảnh hƣởng điều kiện dinh dƣỡng đến mật số sinh khối sau lên men 65 Bảng 3.10 Xác định giá trị pH thích hợp cho vi khuẩn lactic 66 Bảng 3.11 Ảnh hƣởng nhiệt độ lên men đến mật số tế bào vi khuẩn 67 Bảng 3.12 Ảnh hƣởng thời gian lên men đến mật số vi khuẩn 67 Bảng 3.13 Ảnh hƣởng môi trƣờng dinh dƣỡng đến mật số chủng vi khuẩn thuộc chi Bacillus 69 Bảng 3.14 Ảnh hƣởng nhiệt độ đến mật số vi khuẩn thuộc chi Bacillus sp 70 Bảng 3.15 Ảnh hƣởng pH đến khả tạo sinh khối chủng thuộc chi Bacillus sp theo thời gian 71 Bảng 3.16 Xác định thời gian lên men thích hợp cho chủng thuộc chi Bacillus sp 71 Qua số liệu thu cho thấy, mật số vi khuẩn Vibrio ao nuôi tôm sú tôm thẻ chân trắng ao đối chứng cao gấp khoảng 10 lần ao thử nghiệm, việc bổ sung chế phẩm thường xuyên vào môi trường nước nuôi trộn vào thức ăn nuôi tôm giúp kìm hãm sinh trưởng vi khuẩn Vibrio từ giúp ngăn chặn bệnh dịch để tôm phát triển tốt 90 PHẦN IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Sau trình nghiên cứu thực đề tài, có số kết luận sau: Từ 16 mẫu đất ao nuôi, mẫu tôm nuôi mẫu chế phẩm vi sinh phân lập 41 chủng vi khuẩn thuộc chi Bacillus chủng thuộc vi khuẩn lactic Đã tiến hành thử hoạt tính kháng khuẩn 11 chủng, kết cho thấy tất có hoạt tính kháng khuẩn cao với chủng kiểm định Trong 11 chủng có 10/11 chủng có khả chịu nồng độ muối 5% chủng sinh trưởng điều kiện 7% muối Bằng phương pháp sinh học phân tử định tên 11 chủng D1, D11, D12,, D15, D18, D26, M1, M5, AX1, AX3 AX4 chủng thuộc loài Bacillus subtilis, chủng thuộc loài Bacillus licheniformis, chủng thuộc loài Bacillus amyloliquefaciens , chủng thuộc loài Pediococcus acidilactici chủng thuộc loài Lactobacillus rhamnous, chủng thuộc Bacillus sp Đã tuyển chọn chủng vi khuẩn lactic AX1, AX3, AX4 chủng Bacillus D11, D18 M5 có hoạt tính enzym (protease, amylase, cellulase) hoạt tính kháng khuẩn cao để lên men tạo chế phẩm cho nuôi tôm Đã xác định điều kiện thích hợp lên men tạo chế phẩm vi khuẩn Bacillus sp (TA PONDPRO): Điều kiện lên men: (môi trường NB5, pH 7, tốc độ lắc 150v/p, sục khí 0,5 l/ l/h, nhiệt độ 370C, thời gian sấy 5h, phối trộn với diatomit với tỷ lệ 1:1, sấy 410C, mật số vi khuẩn 5,6.109 cfu/g, thời gian lên men 24h) Xác định điều kiện thích hợp lên men tạo chế phẩm vi khuẩ lactic 91 Điều kiện lên men: môi trường LA3 lên men 21h, 35oC, pH 6, bổ sung tinh bột tan với tỷ lệ phối trộn 1:1, sấy 410C, mật số tế bào sống đạt 2,5.109 cfu/g Xây dựng mô hình nuôi tôm suất cao, bổ sung chế phẩm vi khuẩn Bacillus sp (TAPONDPRO) 200g/1000m2/tuần 5% chế phẩm vi khuẩn lactic (DR SHRIMP) vào thức ăn nuôi tôm Sau thu hoạch đạt: - Tỷ lệ sống tôm sú tăng 7,67% tôm thẻ tăng 5,5% so với ao đối chứng - Trọng lượng tôm thẻ tăng 29,08% 30,8% với tôm sú - Mật số vi khuẩn Vibrio ao nuôi tôm sú tôm thẻ chân trắng ao đối chứng cao gấp khoảng 10 lần ao thử nghiệm KIẾN NGHỊ - Nghiên cứu hoàn thiện công nghệ sản xuất chế phẩm probiotic quy mô lớn tuyển chọn bổ sung chủng vi sinh vật hữu ích từ đáy nước ao nuôi nhằm tạo chế phẩm sinh học hiệu cao nuôi tôm thâm canh - Tiếp tục thử nghiệm mô hình sử dụng chế phẩm sinh học nuôi tôm thâm canh thay hoàn toàn hóa chất quy mô lớn 92 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Nguyễn La Anh (2006), “Nghiên cứu ứng dụng chế phẩm sinh học nuôi tôm công nghiệp suất cao”, Báo cáo tổng kết khoa học kỹ thuật Viện Công Nghiệp Thực Phẩm Hoàng Văn Chước (2004), Kỹ thuật sấy, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, TP HCM Nguyễn Tử Cương cộng (2005), Sổ tay hướng dẫn thực hành nuôi tôm sú (GAP) thâm canh Việt Nam Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty (2002), Vi sinh vật học, Nhà xuất giáo dục Hà Nội Nguyễn Văn Hảo (2004), Một số bệnh thường gặp tôm sú (Penacus monodon), phương pháp chẩn đoán biện pháp phòng trị, Nhà xuất Nông nghiệp, thành phố Hồ Chí Minh Bùi Lai, Nguyễn Thị Kim Lan, Lê Thị Quỳnh Hà (2005), “Nghiên cứu trình ô nhiễm hữu ao nuôi tôm sú công nghiệp” Kỷ yếu hội thảo toàn quốc, Bảo vệ môi trường nguồn lợi thủy sản, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội Lê Thành Lựu (2004), “Thành tựu, thách thức, định hướng kiến nghị công tác Khoa học công nghệ nuôi trồng thủy sản”, Tuyển tập Hội thảo toàn quốc nghiên cứu ứng dụng khoa học công nghệ nuôi trồng thủy sản, Vũng tàu, tr 25 – 39 Nguyễn Trọng Nho, Tạ Khắc Thương (1996), “Các tiêu ao nuôi tôm tỉnh Nam Trung Bộ”, Báo cáo tổng kết đề tài cấp Bộ Nguyễn Trọng Nho, Tạ Khắc Thường, Lục Minh Diệp (2006), Kỹ thuật nuôi giáp xác, Nhà xuất Nông nghiệp, TP Hồ Chí Minh 93 10 Lương Đức Phẩm (2002), Công nghệ x lý nước thải b ng biện pháp sinh học, Nhà xuất giáo dục, Hà Nội 11 Nguyễn Thanh Phương, Trương Trọng Nghĩa Trần Ngọc Hải (1999), Kỹ thuật sản xuất giống thuỷ sản nước lợ, Nhà xuất Nông nghiệp, Cần Thơ 12 Trần Văn Quỳnh (2004), "Những thông tin đặc điểm sinh học nuôi tôm thẻ chân trắng (Litopenaeus vannamei) số nước Việt Nam", Trung tâm Khuyến ngư Quốc gia 13 Khuất Hữu Thanh (2010), "Nghiên cứu ứng dụng công nghệ sinh học hoàn thiện chế phẩm BIO – TS3 có khả tăng sức đề kháng tôm nuôi tôm sú thâm canh", Báo cáo đề tài Khoa học Công nghệ cấp nhà nước 14 Thạch Thanh (2005), “Nghiên cứu ứng dụng nước biển nhân tạo sản xuất tôm sú giống (Penaeus monodon) qua hệ thống lọc sinh học tuần hoàn”, Báo cáo Khoa học đề tài cấp Bộ 15 Võ Thị Thứ, Trương Ba Hùng, Nguyễn Minh Dương, La Thị Nga, Lê Thị Thu Hiền, Phạm Thị Minh Hà, Lê Danh Toại, Nguyễn Trường Sơn, Đào Thị Thanh Xuân, Nguyễn Liêu Ba (2004), “Nghiên cứu sử dụng Bacillus subilis, Bacillus megaterium, Bacillus lichenifomic, Lactobacillus acidophilus để sản xuất chế phẩm sinh học Bichie xử l nước nuôi thủy sản”, Tuyển tập Hội thảo khoa học toàn quốc nghiên cứu ứng dụng khoa học công nghệ nuôi trồng thủy sản, Vũng Tàu, tr 815 – 821 16 Võ Thị Thứ (2006), “Hoàn thiện triển khai công nghệ sản xuất chế phẩm sinh học phục vụ xử l môi trường nuôi trồng thủy sản”, Báo cáo tổng kết khoa học kỹ thuật 17 Tổng cục Thống kê, Niên giám thống kê 2001 – 2011 18 Đào Văn Trí (2002), “Một số đặc điểm sinh học tôm thẻ chân trắng thử nghiệm nuôi thương phẩm Khánh Hòa Phú Yên”, Tuyển tập nghề cá sông Cửu 94 Long (số đặc biệt), Báo cáo khoa học hội thảo Quốc gia Nghiên cứu khoa học phục vụ nghề NTTS tỉnh phía Nam, Nhà xuất Nông nghiệp, TPHCM, tr 365 - 369 19 Ngô Anh Tuấn (1995), “Nghiên cứu nuôi tôm sú (Penaeus monodon Fabricius) phát dục nhân tạo”, Luận văn thạc sỹ, Đại học Thủy Sản Tài liệu tiếng Anh 20 Baltasar Mayo, Douwe van Sinderen (2010) “Bifidobacteria: Genomics and Molecular Aspects” ISBN: 978-1-904455-68-4 21 Blancheton J.P., Calvas J., Michel A H., Vonau V (1985), Intensive shrimp breeding process, Us patent, No 4640227 22 Brierley J.A., Brierley C.l., Decker R.f., Goyak, G.M (1991) Metal recovery U.S Pat No 4992179 23 Farzanfar A (2006), “The use of probiotics in shrimp aquaculture”, FEMS immunol Med Microbiol, 46, pp 149 – 158 24 Foarty (1986) “Microbial enzymes and biotechnology” Appl Scienc Publishers, 317p 25 Foster J (1991) “Bacterial culture renovates useless pond”, Practical Aquaculture & Lake management, pp 12 – 13 26 Fry J.C (1987), “Functional role of major groups of bacteria associated with detritus”, Detritus and Microbial ecology in aquaculture, Philippines, pp 83 – 121 27 Fuller R (1989) “Probiotics in man and animals”, Journal of Applied Bacteriology, 66, pp 365 – 378 28 Gordon R E (1973) “The Genus Bacillus” Handbook of Microbiology, I, pp 71 – 78 95 29 Jim Wyban (2007) “Thailand’s white shrimp revolution”, Global aquaculture advocate 30 Logan W.T., Bartlett S.L (1998) Water treatment with large numbers of nonpathogenic bacteria to improve yield of aquatic animals, Us Pat., No 5746155 31 Madigan M., Martinko J (2005) Brock Biology of Microorganisms (11th ed.) Prentice Hall ISBN 0-13-144329-1 32 Malik K A (1987) “The role of culture collections in the stability and preservation of microorganisms” Societe Francaiise de Microbiologie Paris, pp 118 – 150 33 Malik K A (1988) “A new freeze – drying method for the of nitrogen – fixing and other fragile bacteria” J Microbiol Methods, 8, pp 259 – 271 34 Moriarty D.J.W (1986), “Measurement of bacterial growth rates in aquiv – systems from from rates of nucleic acid systhesis”, Adv Microb Ecol 9, pp 245 – 292 35 Moriarty D.J.W (1987) “Methodology for determining biomass and productivity of microorganisms in detrital food webs” Detritus and Microbial ecology in aquaculture, Philippines, pp – 28 36 Moriarty D.J.W., Robert D.G (1987), “Lacunal gas discharge as a measure of productivity in the seagrasses Zostera capricornii, Cymodocea serulata and Syringodium isoetifolium, Aquat Bot, 28, pp 143 – 160 37 Pissamai Powedchagun, Hideyuki Suzuki and Sirirat Rengpipat (2011), “Characterization of a probiotic Bacillus S11 bacterium of black tiger shrimp Penaeus monodon”, Songklanakarin J Sci Technol 33 (1), pp.1-8 38 Rengpipat S., Phianphak W., Piyatiratitivorakul S and Menasveta P (1998) “Effect of probiotics bacterium on Black Tiger shrimp - Penaeus monodon, survival and growth”, Aquaculture 167, pp 301-313 96 39 Roberfroid M (2007) “Prebiotics: the concept revisited”, The Journal of Nutrition, vol 137, No 830S-837S 40 Shigueno K (1975), Shrimp culture in Japan, Association for International Technical Promotion, Japan 150 pp 41 Sirirat Dengripat et al (1998) “Effect of probiotic bacterium on black tiger shrimp Penaeus monodon surviral and growth”, Aquaculture, 167, pp 301 – 313 42 Skyring G.W (1987), “Sulfate reduction in coastal ecosystems”, Geomicrobiol J., 295 – 374 43 Sung Hung-Hung, Hsu Shi-Fang, Chen Chih-Kun, Ting Yun-Yuan, Chao WeiLiang (2001) “Relationships between disease outbreak in cultured tiger shrimp (Penaeus monodon) and the composition of Vibrio communities in pond water and shrimp hepatopancreas during cultivation”, Aquaculture (Amsterdam), Y vol 192, No.2-4, pp 101-110 44 Verschuere L., Rombaut G., Sorgeloos P., Verstraete W (2000), “Probiotic bacteria as biological control agents in aquaculture” Microbiology and Molecular Biology Review 64, pp 655–671 45 Watson Brenda F., Watson Tomy Stanley (2002) Probiotic formulation US patent No: US 6468525 Tài liệu Internet 46 http://www.agroviet.gov.vn 47 http://www.en.wikipedia.org/wiki/Leuconostoc 48 http://www.nongnghiep.vn/ 49 http://www.vasep.com.vn/ 50 http://www.vietfish.org 97 PHỤ LỤC Trình tự gen số chủng lựa chọn D11 Bacillus licheniformis strain RSP-09: 99% GCTGGCTCCAAAGGTTACCTCACCGACTTCGGGTGTTACAAACTCTCGTGG TGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCT GATCCGCGATTACTAGCGATTCCAGCTTCACGCAGTCGAGTTGCAGACTGC GATCCGAACTGAGAACAGATTTGTGGGATTGGCTTAGCCTCGCGGCTTCGC TGCCCTTTGTTCTGCCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGG CATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCA CCTTAGAGTGCCCAACTGAATGCTGGCAACTAAGATCAAGGGTTGCGCTCG TTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCA CCACCTGTCACTCTGCCCCCGAAGGGGAAGCCCTATCTCTAGGGTTGTCAG AGGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACA TGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGTCTTGC GACCGTACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAATGCGTTTGCTGCAGCACTAAAGG GCGGAAACCCTCTAACACTTAGCACTCATCGTTTACGGCGTGGACTACCAG GGTATCTAATCCTGTTCGCTCCCCACGCTTTCGCGCCTCAGCGTCAGTTA CAGACCAGAGAGTCGCCTTCGCCACTGGTGTTCCTCCACATCTCTACGCA TTTCACCGCTACACGTGGAATTCCACTCTCCTCTTCTGCACTCAAGTTCC CCAGTTTCCAATGACCCTCCCCGGTTGAGCCGGGGGCTTTCACATCAGAC TTAAGAAACCGCCTGCGCGCGCTTTACGCCCAATAATTCCGGACAACGCT TGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGGCTTT CTGGTTAGGTACCGTCAAGGTACCGCCCTATTCGAACGGTACTTGTTCTT CCCTAACAACAGAGTTTTACGATCCGAAAACCTTCATCACTCACGCGGCG TTGCTCCGTCAGACTTTCGTCCATTGCGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTC CCGTAGGAATCTGGGCC 98 M5 Bacillus amyloliquefaciens strain CICC 20606: 100% CACTTCGGCGGCTGGCTCCAAAAGGTTACCTCACCG ACTTCGGGTGTTACAAACTCTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGC CCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCC AGCTTCACGCAGTCGAGTTGCAGACTGCGATCCGAACTGAGAACAGATTT GTGGGATTGGCTTAACCTCGCGGTTTCGCTGCCCTTTGTTCTGCCCATTG TAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATC CCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCACCTTAGAGTGCCCAACTG AATGCTGGCAACTAAGATCAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCA ACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTCACTCTGC CCCCGAAGGGGACGTCCTATCTCTAGGATTGTCAGAGGATGTCAAGACCT GGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTG TGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGTCTTGCGACCGTACTCCC CAGGCGGAGTGCTTAATGCGTTAGCTGCAGCACTAAGGGGCGGAAACCCC CTAACACTTAGCACTCATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAAT CCTGTTCGCTCCCCACGCTTTCGCTCCTCAGCGTCAGTTACAGACCAGAG AGTCGCCTTCGCCACTGGTGTTCCTCCACATCTCTACGCATTTCACCGCT ACACGTGGAATTCCACTCTCCTCTTCTGCACTCAAGTTCCCCAGTTTCCA ATGACCCTCCCCGGTTGAGCCGGGGGCTTTCACATCAGACTTAAGAAACC GCCTGCGAGCCCTTTACGCCCAATAATTCCGGACAACGCTTGCCACCTAC GTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGGCTTTCTGGTTAGGT ACCGTCAAGGTGCCGCCCTATTTGAACGGCACTTGTTCTTCCCTAACAAC AGAGCTTTACGATCCGAAAACCTTCATCACTCACGCGGCGTTGCTCCGT CAGACTTTCGTCCATTGCGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGT 99 D18 Bacillus subtilis strain LY-001: 100% TGTCACTTCGGCGGCTGGCTCCTAAAGGTTACCTCACCGACTTCGGGTGT TACAAACTCTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGT ATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCAGCTTCACGC AGTCGAGTTGCAGACTGCGATCCGAACTGAGAACAGATTTGTGGGATTGG CTTAACCTCGCGGTTTCGCTGCCCTTTGTTCTGTCCATTGTAGCACGTGT GTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCC TCCGGTTTGTCACCGGCAGTCACCTTAGAGTGCCCAACTGAATGCTGGCA ACTAAGATCAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACG ACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTCACTCTGCCCCCGAAGG GGACGTCCTATCTCTAGGATTGTCAGAGGATGTCAAGACCTGGTAAGGTT CTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCC CCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGTCTTGCGACCGTACTCCCCAGGCGGAG TGCTTAATGCGTTAGCTGCAGCACTAAGGGGCGGAAACCCCCTAACACTT AGCACTCATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGC TCCCCACGCTTTCGCTCCTCAGCGTCAGTTACAGACCAGAGAGTCGCCTT CGCCACTGGTGTTCCTCCACATCTCTACGCATTTCACCGCTACACGTGGA ATTCCACTCTCCTCTTCTGCACTCAAGTTCCCCAGTTTCCAATGACCCTCC CCGGTTGAGCCGGGGGCTTTCACATCAGACTTAAGAAACCGCCTGCGAG CCCTTTACGCCCAATAATTCCGGACAACGCTTGCCACCTACGTATTACCG CGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGGCTTTCTGGTTAGGTACCGTCAA GGTACCGCCCTATTCGAACGGTACTTGTTCTTCCCTAACAACAGAGCTTTA CGATCCGAAAACCTTCAT 100 AX4 Pediococcus acidilactici: 99% GGCTTTGGGTGTTACAAACTCTCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAG GCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCGAT TCCGACTTCGTGTAGGCGAGTTGCAGCCTACAGTCCGAACTGAGAATGGT TTTAAGAGATTAGCTAAACCTCGCGGTTTCGCGACTCGTTGTACCATCCAT TGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCG TCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCTCACTAGAGTGCCCAAC TGAATGCTGGCAACTAGTAATAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACC CAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTCATTCT GTCCCCGAAGGGAACGCCTAATCTCTTAGGTTGGCAGAAGATGTCAAGAC CTGGTAAGGTTCTTCGCGTAGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCT TGTGCGGGCCCCCGTCAATTCTTTTGAGTTTCAACCTTGCGGTCGTACTC CCCAGGCGGATTACTTAATGCGTTAGCTGCAGCACTGAAGGGCGGAAAC CCTCCAACACTTAGTAATCATCGTTTACGGCATGGACTACCAGGGTATCTA ATCCTGTTCGCTACCCATGCTTTCGAGCCTCAGCGTCAGTTACAGACCAG ACAGCCGCCTTCGCCACTGGTGTTCTTCCATATATCTACGCATTTCACCG CTACACATGGAGTTCCACTGTCCTCTTCTGCACTCAAGTCTCCCAGTTTCC AATGCACTTCTTCGGTTGAGCCGAAGGCTTTCACATTAGACTTAAAAGACC GCCTGCGCTCGCTTTACGCCCAATAAATCCGGATAACGCTTGCCACCTAC GTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGGCTTTCTGGTTAAAT ACCGTCACTGGGTGAACAGTTACTCTCACCCACGTTCTTCTTTACAACAGA GCTTTACGAGCCGAAACCCTTCTTCACTCACGCGGCGTTGCTCCATCAGA CTTGCGTCCATTGTGGAAGATTCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAATCTGG 101 GCCG AX3 Pediococcus acidilactici: 99% TTCCGTTAATTGATCAGGACGTGCTTGCACTGAATGAGATTTTAACACGAA GTGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCAGAAGCAGG GGATAACACCTGGAAACAGATGCTAATACCGTATAACAGAGAAAACCGCC TGGTTTTCTTTTAAAAGATGGCTCTGCTATCACTTCTGGATGGACCCGCGGC GCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGATGATGCGTAGCC GACCTGAGAGGGTAATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTC CTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCAAGTCTGATG GAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGGTTTCGGCTCGTAAAGCTCTGTTGT TAAAGAAGAACGTGGGTGAGAGTAACTGTTCACCCAGTGACGGTATTTAAC CAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTG GCAAGCGTTATCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTCTTT TAAGTCTAATGTGAAAGCCTTCGGCTCAACCGAAGAAGTGCATTGGAAAC TGGGAGACTTGAGTGCAGAAGAGGACAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTG AAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTGTCTGGT CTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCATGGGTAGCGAACAGGATTAGAT ACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGATTACTAAGTGTTGGAGGGTTT CCGCCCTTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGTAATCCGCCTGGGGAGTA CGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAAGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGG TGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCTACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTT GACATCTTCTGCCAACCTAAGAGATTAGGCGTTCCCTTCGGGGACGGAAT GACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTA AGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATTACTAGTTGCCAGCATTCAGTTGG GCACTCTAGTGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGACAACG TCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCT 102 AX1 Lactobacillus rhamnosus: 100% GGGTTACGCCACCGGCTTCGGGTGTTACAAACTCTCATGGTGTGACGGG CGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCGTGCTGATCCGC GATTACTAGCGATTCCGACTTCGTGTAGGCGAGTTGCAGCCTACAGTCCG AACTGAGAATGGCTTTAAGAGATTAGCTTGACCTCGCGGTCTCGCAACTC GTTGTACCATCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATG ATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCTTA CTAGAGTGCCCAACTAAATGCTGGCAACTAGTCATAAGGGTTGCGCTCGT TGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCA CCACCTGTCATTTTGCCCCCGAAGGGGAAACCTGATCTCTCAGGTGATCA AAAGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCAC ATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAACCT TGCGGTCGTACTCCCCAGGCGGAATGCTTAATGCGTTAGCTGCGGCACT GAAGGGCGGAAACCCTCCAACACCTAGCATTCATCGTTTACGGCATGGAC TACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTACCCATGCTTTCGAGCCTCAGCGT CAGTTACAGACCAGACAGCCGCCTTCGCCACTGGTGTTCTTCCATATATC TACGCATTTCACCGCTACACATGGAGTTCCACTGTCCTCTTCTGCACTCAA GTTTCCCAGTTTCCGATGCACTTCCTCGGTTAAGCCGAGGGCTTTCACAT CAGACTTAAAAAACCGCCTGCGCTCGCTTTACGCCCAATAAATCCGGATA ACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGT GGCTTTCTGGTTGGATACCGTCACGCCGACAACAGTTACTCTGCCGACCA TTCTTCTCCAACAACAGAGTTTTACGACCCGAAAGCCTTCTTCACTCACGC 103 GGCGTTGCTCCATCAGACTTGCGTCCATTGTGGAAGATTCCCTACTGCTG CCTCCCGTAGGAGTTTGGGCC 104 ... “ XÂY DỰNG QUY TRÌNH NUÔI TÔM SẠCH SỬ DỤNG CHẾ PHẨM VI SINH THAY THẾ HÓA CHẤT“ Đề tài thực nội dung sau: 1/ Phân lập tuyển chọn chủng vi sinh vật probiotic 2/ Tạo chế phẩm sinh học 3/ Xây dựng. .. 3.3.2 Quy trình áp dụng chế phẩm sinh học nuôi tôm thâm canh 82 3.4 Hiệu mô hình nuôi tôm sử dụng chế phẩm sinh học thay hóa chất 84 3.4.1 Ảnh hưởng chế phẩm nghiên cứu đến khả sinh trưởng tôm. ..LỜI CAM ĐOAN Tôi Lê Thế Xuân xin cam đoan nội dung luận văn với đề tài “XÂY DỰNG QUY TRÌNH NUÔI TÔM SẠCH SỬ DỤNG CHẾ PHẨM VI SINH THAY THẾ HÓA CHẤT” công trình nghiên cứu sáng tạo thực