Phân lập và nghiên cứu khả năng chuyển hóa một số chất đa vòng thơm của nấm sợi sinh tổng hợp enzme laccase từ đất nhiễm chất diệt cỏ dioxin

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI NGUYỄN NGUYÊN QUANG PHÂN LẬP VÀ NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG CHUYỂN HÓA MỘT SỐ CHẤT ĐA VÒNG THƠM CỦA NẤM SỢI SINH TỔNG HỢP ENZYME LACCASE TỪ ĐẤT NHIỄM CHẤT DIỆT CỎ/DIOXIN Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC PGS TS ĐẶNG THỊ CẨM HÀ HÀ NỘI - 2010 i LỜI CẢM ƠN Trước hết, xin bày tỏ biết ơn chân thành sâu sắc tới PGS TS Đặng Thị Cẩm Hà, người tận tình bảo, quan tâm, giúp đỡ dìu dắt suốt trình học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn, giúp có nhiều kiến thức, kinh nghiệm quý báu nghiên cứu khoa học công nghệ Trong trình nghiên cứu vừa qua, nhận giúp đỡ, tận tình bảo, ủng hộ động viên anh, chị, em đồng nghiệp nhóm nghiên cứu, phòng Công nghệ sinh học môi trường, đặc biệt TS Nguyễn Bá Hữu, NCS Đàm Thúy Hằng, KS Nguyễn Quang Huy, ThS Đào Thị Ngọc Ánh, KS Chu Đức Tài, KS Nguyễn Thị Lan Anh Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy, cô Viện Công nghệ sinh học thực phẩm, Đại học Bách khoa Hà Nội dạy dỗ, tạo điều kiện giúp đỡ trình học tập trường Cuối xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới người thân gia đình bạn bè ủng hộ, động viên giúp đỡ vật chất tinh thần để hoàn thành luận văn Một lần xin chân thành cảm ơn tất giúp đỡ quý báu đó! Hà Nội, tháng 10 năm 2010 Nguyễn Nguyên Quang ii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan: Đây công trình nghiên cứu số kết cộng tác với cộng khác; Các số liệu kết trình bày luận án trung thực, chưa công bố tác giả Hà Nội, ngày 12 tháng 10 năm 2010 Học viên Nguyễn Nguyên Quang iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT 1,2,3,7,8-PeCDD 2,3,7,8-TCDD 2,3,7-TriCDD 2,4,5-T 2,4-D ABTS BaP CB DBF DCP DD DDT HCH LiP MCDD MnP OCDD PAH PCB PCDD PCDF POP TCP TEF TNT VSV 1,2,3,7,8-pentachlorodibenzo-p-dioxin 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin 2,3,7-Trichlorodibenzo-p-dioxin 2,4,5-trichlorophenoxyacetic acid 2,4-dichlorophenoxyacetic acid Axit 2,2’-azino-bis 3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic Benzo(a)Pyrene Biphenyl chứa clo Dibenzofuran Dichlorophenol Dibenzo-p-dioxin 1,1,1-trichloro-2,2-bis (p-chlorophenyl)ethane Hexacyclohexan Lignin peroxidase Monochlorodibenzo-p-dioxin Manganese peroxidase Octachlorodibenzo-p-dioxin Hydrocarbon thơm đa vòng Polychlorobiphenyl Polychlorinated dibenzo-p-dioxin Polychlorinated dibenzofuran Hợp chất hữu khó phân huỷ Trichlorophenol Hệ số độc tố tương đương 2,4,6-Trinitrotoluen Vi sinh vật ix DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Cấu trúc hóa học tính chất vật lí số PAH 19 Bảng 1.2 Các enzyme ngoại bào áp dụng phân hủy sinh học 36 chất ô nhiễm khác Bảng 1.3 Phân hủy chất ô nhiễm nấm enzyme chúng 38 sinh Bảng 2.1 Các loại màu sử dụng nghiên cứu 40 Bảng 3.1 Các chủng nấm phân lập 47 Bảng 3.2 Hoạt tính laccase chủng FBH11 49 Bảng 3.3 Hoạt tính laccase chủng FDNR14 49 Bảng 3.4 Hoạt tính laccase trình loại màu chủng FBH11 63 Bảng 3.5 Hoạt tính laccase sau 24h khảo sát khả loại màu 65 xi DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Trang Hình 1.1 Cấu trúc hóa học PCDD, PCDF PCB Hình 1.2 Các nguồn phát sinh dioxin vào môi trường Hình 1.3 Con đường phân hủy 2,7-dichlorodibenzo-p-dioxin (27DCDD) nấm đảm trắng Phanerochaete chrysosporium 12 Hình 1.4 Công thức cấu tạo 2,4,5-T 14 Hình 1.5 Công thức cấu tạo 2,4,-D 14 Hình 1.6 Cấu trúc hóa học của vài PAH đại diện 17 Hình 1.7 Con đường phân hủy pyrene 22 Hình 1.8 Hình ảnh không gian chiều laccase từ M albomyces 28 Hình 1.9 Trung tâm hoạt động laccase 28 Hình 1.10 Cơ chế xúc tác laccase 29 Hình 1.11 Cơ chế xúc tác laccase công nghiệp 30 Hình 3.1 Hình thái khuẩn lạc hai chủng nấm sợi môi trường PCz có bổ sung guaiacol 47 Hình 3.2 Ảnh hưởng nhiệt độ lên khả sinh laccase 51 Hình 3.3 Ảnh hưởng pH lên khả sinh trưởng chủng FBH11 52 Hình 3.4 Ảnh hưởng pH lên khả sinh laccase 53 Hình 3.5 Ảnh hưởng nồng độ pyrene lên khả sinh trưởng chủng FBH11 Hình 3.6 54 Ảnh hưởng nồng độ pyrene lên khả sinh laccase chủng nấm FBH11 54 Hình 3.7 Ảnh hưởng nguồn cacbon 55 Hình 3.8 Khả sinh laccase FBH11 nguồn cacbon xi khác Hình 3.9 56 Khả sinh laccase nguồn nitơ chủng nấm FBH11 57 Hình 3.10 Hoạt tính laccase chất cảm ứng khác 58 Hình 3.11 Thiết bị lên men 60 Hình 3.12 Hoạt tính laccase lên men theo thời gian 60 Hình 3.13 Khả loại màu NY1 chủng nấm FBH11 62 Hình 3.14 Khả loại màu NY5 chủng nấm FBH11 62 Hình 3.15 Hình ảnh loại màu NY1 NY5 chủng FBH11 63 Hình 3.16 Khả loại màu dịch enzyme thô theo thời gian 64 Hình 3.17 Hình ảnh màu bị loại bỏ sau 24 h 65 Hình 3.18 Phân hủy anthracene pyren tế bào nấm FBH11 66 Hình 3.19 Phân hủy anthracene pyrene dịch enzyme thô Hình 3.20 FBH11 67 Hình thái khuẩn lạc môi trường PCz cuống sinh bào 68 tử chủng FBH11 Hình 3.21 Trình tự chủng FBH11 68 Hình 3.22 Cây phát sinh chủng loại chủng FBH11 69 MỤC LỤC Trang Lời cảm ơn i Lời cam đoan ii Danh mục chữ viết tắt iii Danh mục bảng ix Danh mục hình vẽ, đồ thị xi MỞ ĐẦU Phần I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1.Cấu trúc, tính chất dioxin chất tương tự 1.1.1 Cấu trúc, tính chất dioxin chất tương tự 1.1.2 Các nguồn tạo dioxin 1.1.3 Tình trạng ô nhiễm dioxin Việt Nam 1.1.4 Ảnh hưởng dioxin đến sức khỏe người hệ sinh thái 1.1.5 Các phương pháp khử độc đất nhiễm chất độc hóa học 1.1.6 Phân hủy dioxin hợp chất tương tự nấm 1.2 Phân hủy sinh học 2,4,5-T 2,4-D 11 14 1.2.1 Một số tính chất 2,4,5-T 2,4-D 14 1.2.2 Phân hủy sinh học hiếu khí 2,4,5-T 2,4-D 15 1.3 Các hợp chất hydrocacbon thơm đa vòng (PAH) 16 1.3.1 Giới thiệu chung 16 1.3.2 Vi sinh vật phân hủy PAH 19 1.4 Thuốc nhuộm vi sinh vật phân hủy thuốc nhuộm 23 1.5 Enzyme laccase 26 1.5.1 Giới thiệu laccase 26 1.5.2 Cấu trúc phân tử laccase 27 1.5.3 Cơ chế xúc tác laccase 28 1.5.4 Tính chất hóa sinh laccase 31 1.5.5 Sự phân bố laccase vi sinh vật sinh enzyme laccase 31 1.5.6 Gene mã hóa enzyme laccase 32 1.5.7 Ứng dụng laccase 33 1.6 Lignin peroxidase Manganese peroxidase 34 1.6.1 Lignin peroxidase 34 1.6.2 Manganese peroxidase 34 1.7 Tiềm ứng dụng enzyme ngoại bào xử lý ô nhiễm môi trường 35 Phần VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 2.1 Vật liệu 40 2.1.1 Chủng nấm sợi 40 2.1.2 Hóa chất 40 2.1.3 Các loại màu sử dụng 40 2.1.4 Thiết bị máy móc 40 2.2 Phương pháp nghiên cứu 41 2.2.1 Môi trường nuôi cấy 41 2.2.2 Phân lập sàng lọc chủng nấm sợi 41 2.2.3 Chọn lọc môi trường chất thích hợp 41 2.2.4 Khảo sát điều kiện môi trường ảnh hưởng đến khả phát triển sinh laccase chủng FBH11 42 2.2.5 Lên men quy mô 15 lít 42 2.2.6 Phương pháp xác định hoạt tính enzyme laccase 43 2.2.7 Đánh giá khả loại màu thuốc nhuộm tế bào 45 2.2.8 Đánh giá khả phân hủy PAH tế bào 45 2.2.9 Đánh giá khả loại màu dịch enzyme thô 45 2.2.10 Đánh giá khả phân hủy PAH enzyme thô 45 2.2.11 Phân loại chủng nấm FBH11 45 Phần III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Chọn lọc môi trường chất thích hợp cho sinh tổng hợp enzyme laccase 47 3.2 Ảnh hưởng môi trường đến khả phát triển sinh tổng hợp laccase FBH11 3.2.1 Ảnh hưởng nhiệt độ pH 51 51 3.2.2 Ảnh hưởng nồng độ pyrene đến khả sinh trưởng sinh laccase chủng FBH11 53 3.2.3 Ảnh hưởng nguồn cacbon nitơ 56 3.2.4 Ảnh hưởng chất cảm ứng 58 3.3 Lên men quy mô 15 lít 59 3.4 Phân hủy thuốc nhuộm chủng dịch enzyme thô FBH11 60 3.4.1 Phân hủy NY1 NY5 chủng 60 3.4.2 Phân hủy màu dịch enzyme thô 64 3.5 Khả phân hủy PAH chủng FBH11 dịch enzyme thô 65 3.5.1 Phân hủy PAH chủng nấm FBH11 65 3.5.2 Phân hủy pyrene anthracene dịch enzyme thô 67 3.6 Phân loại định tên chủng nấm sợi FBH11 67 Phần IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận 71 4.2 Kiến nghị 72 TÀI LIỆU THAM KHẢO 73 Luận văn thạc sĩ sinh học 4.2 Kiến nghị - Nghiên cứu xử lý màu PAH tế bào nấm dịch enzyme laccase thô chủng quy mô lớn (10-15 lít) qui mô trường với cố định lên giá thể; - Xác định trình tự gene mã hóa cho sinh tổng hợp enzyme laccase chủng FBH11; - Xác định trình tự đặc tính laccase FBH11 sinh ra; - Nghiên cứu khả sinh lignin peroxidase manganese peroxidase chủng FBH11 Nguyễn Nguyên Quang 70 CNSH-K810 Luận văn thạc sĩ sinh học TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Đào Thị Ngọc Ánh (2009), “Nghiên cứu phân loại, khả phân hủy DDT sinh laccase chủng nấm sợi phân lập từ đất ô nhiễm hỗn hợp thuốc trừ sâu”, luận văn thạc sĩ sinh học – Đại học Thái Nguyên Hoàng Anh Cung (1993), “Ảnh hưởng 2,4,5-T đến lúa VSV đất Chất diệt cỏ, tác hại lâu dài người thiên nhiên”, Hội thảo quốc tế lần II, pp 139-141 Đặng Thị Cẩm Hà, Phạm Quốc Hiệp, Nguyễn Nguyên Quang, Trần Thị Như Hoà, Nghiêm Ngọc Minh (2009), “Phân lập đánh giá khả phân hủy hexachlorocy clohexane chủng nấm sợi FNA33 từ đất xử lý khử độc thuố trừ sâu băng bioreactor hiếu khí”, Tạp chí công nghệ sinh học, 7(2), pp 257264 Đặng Thị Cẩm Hà, Trần Thị Như Hòa, Nguyễn Bá Hữu, Nguyễn Nguyên Quang, Đàm Thúy Hằng, Nguyễn Quang Huy (2010), “Phân hủy hydrocarbon thơm đa nhân sinh tổng hợp peroxidase, laccase chủng vi khuẩn BDNR10 chủng nấm sợi FDNR40”, Tạp chí độc học, 14, pp 8-14 Hoàng Thị Mỹ Hạnh, Nguyễn Thanh Thủy, Ngô Xuân Quý, Nghiêm Xuân Trường, Nghiêm Ngọc Minh, Đặng Thị Cẩm Hà (2004), “Khả phân hủy 2,4–D dibenzofuran chủng nấm sợi FDN20” Tạp chí công nghệ sinh học, 2(4), pp 517-528 Nguyễn Bá Hữu (2010), “Nghiên cứu đa dạng vi sinh vật số gen liên quan đến khả phân hủy 2,4,5-T dioxin đất nhiễm chất độc hóa học”, Luận án tiến sĩ sinh học Nguyễn Bá Hữu, Lê Thị Thu Hằng, Nguyễn Nguyên Quang, Nghiêm Ngọc Mimh, Đặng thị Cẩm Hà (2010), “Phân hủy sinh học hợp chất vòng thơm sinh enzim laccaza chủng xạ khuẩn XKDNR1”, Tạp chí khoa học công nghệ, nhận đăng Nguyễn Nguyên Quang 71 CNSH-K810 Luận văn thạc sĩ sinh học Nguyễn Đương Nhã, Nghiêm Ngọc Minh, Nguyễn Ngọc Bảo, Đặng Thị Cẩm Hà (2005), “Khả phân hủy hydrocarbon thơm đa nhân dibenzofuran chủng xạ khuẩn XKDN12”, Tạp chí công nghệ sinh học, 3(1), pp 123-132 La Thị Thanh Phương, Nghiêm Ngọc Minh, Đặng Thị Cẩm Hà (2005), “Một số đặc điểm sinh học khả sử dụng 2,4,5–T chủng vi khuẩn BDN15 phân lập từ vùng đất ô nhiễm chất độc hóa học”, Tạp chí công nghệ sinh học, 3(3), pp 389-396 10 Nguyễn Nguyên Quang, Đặng Thị Cẩm Hà (2009), “Phân lập, phân loại khả phân hủy DDT, DDD, DDE số chủng nấm sợi”, Tạp chí công nghệ sinh học, 7(1), pp 125-132 11 Trần Xuân Thu (2003), “Bước đầu đánh giá mức độ ô nhiễm dioxin môi trường Việt Nam, phương pháp xác định, xử lý đánh giá vùng ô nhiễm dioxin”, Hội thảo Khoa học Việt Nam - Hoa Kỳ, pp 38-47 12 Đặng Thị Thu, Tô Kim Anh, Lê Quang Hòa, Lê Hồng Nga (2009), “Nghiên cứu phân lập, tuyển chọn nấm mốc sinh tổng hợp laccase từ rừng tự nhiên Việt Nam”, Hội nghị công nghệ sinh học toàn quốc, pp 376-380 13 Nguyễn Thanh Thủy, Hoàng Thị Mỹ Hạnh, Vũ Xuân Đạt, Nghiêm Ngọc Minh, Đặng Thị Cẩm Hà (2008), “Phân loại khả phân hủy chất diệt cỏ 2,4,5Trichlorophenoxyacetic acid chủng nấm sợi FDN41 phân lập từ đất nhiễm chất diệt cỏ/dioxin”, Tạp chí công nghệ sinh học, 6(1), pp 119-126 14 Nguyễn Thanh Thủy, Hoàng Thị Mỹ Hạnh, Nghiêm Ngọc Minh, Đặng Thị Cẩm Hà (2006), “Nghiên cứu phân loại khả phân hủy chất độc chủng nấm sợi FDN22 phân lập từ lô xử lý ô nhiễm chất độc hóa học”, Tạp chí công nghệ sinh học, 4(1), pp 125-132 Tiếng Anh 15 Arockiasamy, S., Krishnan, I.P.G., Anandakrishnan, N., Seenivasan, S., Sambath, A., Venkatasubramani, J.P (2008), “Enhanced production of laccase from Coriolus versicolor NCIM 996 by nutrient optimization using response surface methodology”, Appl Biochem Biotechnol, 151(2-3), pp 371-379 Nguyễn Nguyên Quang 72 CNSH-K810 Luận văn thạc sĩ sinh học 16 Cavallazzi, J.R.P., Kasuya1, C.M., Soares, M.A (2005), “Screening of inducers for laccase production by Lentinula edodes in liquid medium”, Brazilian J Microb, 36, pp 383-387 17 Clemente, A.R., Anazawa, T.A., Durrant, L.R (2001) “Biodegradation of polycyclic aromatic hydrocarbons by soil fungi”, Braz J Microbiol, 32, pp 255– 261 18 Couto, S.R., Gundín, M., Lorenzo, M., Sanromán, M.A (2002), “Screening of supports and inducers for laccase production by Trametes versicolor in semisolid-state conditions”, Process Biochemistry, 38, pp 249-255 19 Cutright, T.J (1995), “Polycyclic aromatic hydrocarbon biodegradation and kinetics using Cunninghamella echinulata var elegans”, Int Biodet Biodeg, 35(4), pp 397–408 20 Daane, L.L., Harjono, I., Barns, S.M., Launen, L.A., Palleroni, N.J., Haggblom, M.M (2002), “PAH-degradation by Paenibacillus spp and description of Paenibacillus naphthalenovorans sp nov., a naphthalene degrading bacterium from the rhizosphere of salt marsh plants”, Int J Syst Evol Microbiol, 52, pp 131–139 21 Dang, T.C.H., Nguyen, B.H., Nghiem, N.M, Nguyen, N.Q., Nguyen, T.T., Dam, T.H., Tran, N.H, Nguyen, N.B (2007), “Application of bioremediation technology for detoxification of herbicide/dioxin contaminated soil’ In proceccdings: “9th International HCH and Pesticides Forum for CEECCA countries”, pp 270-274 22 Eggen, T., Majcherzyk, A (1998), “Removal of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAH) in contaminated soil by white rot fungus Pleurotus ostreatus”, Int Biodet Biodeg, 41, pp 111–117 23 Eggert, C., Temp, U., Eriksson, K.E (1996), “The ligninolytic system of the white rot fungus Pycnoporus cinnabarinus: purification and characterization of the laccase”, Appl Environ Microbiol, 602, pp 1151-1158 Nguyễn Nguyên Quang 73 CNSH-K810 Luận văn thạc sĩ sinh học 24 Eichlerová I., Homolka L and Nerud, F (2006), “Ability of industrial dyes decolorization and ligninolytic enzymes production by different Pleurotus species with special attention on Pleurotus calyptratus, strain CCBAS 461”, Process Biochemistry, 41(4), pp 941-946 25 Elisashvili, V., Penninckx, M., Kachlishvili, E., Asatiani, M and Kvesitadze, G (2006), “Use of Pleurotus dryinus for lignocellulolytic enzymes production in submerged fermentation of mandarin peels and tree leaves”, Enzyme Microbial Biotechnol, 38(7), pp 998-1004 26 Gianfreda, L., Sannino, F., Filazzola, M.T., Leonowicz, A (1998), “Catalytic behavior and detoxifying ability of a laccase from the fungal strain Cerrena unicolor”, J Mol Catal B: Enzymatic, 14, pp 13–23 27 Henner, P., Schiavon, M., Morel, J.L., Lichtfouse, E (1997), “Polycyclic aromatic hydrocarbon (PAH) occurrence and remediation methods”, Analusis 25(9-10), pp 1-8 28 Holker, U., Dohse, J., Hofer M (2002), “Extracellular Laccases in Ascomycetes Trichoderma atroviride and Trichoderma harzianum”, Folia Microbiol, 47(4), pp 423-427 29 Hou, H., Zhou, J., Wang, J., Du, C and Yan, B (2004), ’Enhancement of laccase production by Pleurotus ostreatus and its use for the decolorization of anthraquinone dye”, Process Biochemistry, 39(11), pp 1415-1419 30 Husseiny Sh.M (2008), “Biodegradation of the Reactive and Direct Dyes Using Egyptian Isolates”, J Appl Sci Res, 4(6), pp 599- 606 31 Ishii, K., Furuichi, T., Koike, K., Kuboshima, M (2004), “Purification of highly chlorinated dioxins degrading enzyme”, Organohal Compo, 66, pp 1262-1266 32 Jin, X.C., Liu, G.Q., Xu, Z.H., Tao, W.Y (2007), “Decolorization of a dye industry effluent by Aspergillus fumigatus XC6”, Appl Microbiol Biotechnol, 74(1), pp 239-243 Nguyễn Nguyên Quang 74 CNSH-K810 Luận văn thạc sĩ sinh học 33 Khelifi, E., Ayed, L., Bouallagui, H., Touhami, Y., Hamdi M., (2009), “Effect of nitrogen and carbon sources on Indigo and Congo red Decolourization by Aspergillus alliaceus strain 121C”, J Hazard Mater, 163, pp 1056-1062 34 Kunamneni, A., Camarero, S., García-Burgos, C., Plou, F.J., Ballesteros, A and Alcalde M (2008), “Engineer and Application of fungal laccase for organic synthesis”, Microb Cell Fact, 7(32), pp 1-17 35 McDowall, R., Boyle, C., Graham, B (2005), “Review of emerging, innovative technologies for the destruction and decontamination of POPs and the identification of promising technologies for use in developing countries”, The scientific and Technical Advisory Panel of the GEF UNEP, 36 McMullan, G., Meehan, C., Conneely, A., Nirby, N., Robinson, T., Nigam, P., Banat, I.M., Marchant, S.W.F (2001), “Mini review: microbial decolorization and degradation of textile dyes”, Appl Microbiol Biotechnol, 56, pp 81–87 37 Nagpal, V., Srinivasan, M C and Paknikar, K M (2008), “Biodegradation of γhexachlorocyclohexane (Lindane) by a non-white rot fungus conidiobolus 03-156 isolated from litter”, Indian J Microbiol, 48(1), pp 134-141 38 Nakamiya, K., Furuichi, T., Ishii, K (2002), “Isolation of a fugus from denitrifying activated sludge that degrades highly chlorinated dioxins”, J Master Cycles Waste Manag, 4, pp 127-134 39 Parshetti, G.K., Kalme, S.D., Gomare, S.S., Govindwar, S.P (2007), “Biodegradation of Reactive blue – 25 by Aspergillus ochraceus NCIM–1146”, Bioresource technology, 98, pp 3638-3642 40 Patnaik, P (1999), “A comprehensive guide to the properties of hazardous chemical substances”, 2nd ed., John Wiley & Sons Publishers 41 Piontek, K., Antorini, M., Crystal, T.C (2002), “Structure of a Laccase from the fungus Trametes versicolor at 1.9 – A0 Resolution Containing a Full Complement of Cooppers”, J Biology Chem, 277, pp 37663-37669 42 Pozdnyakova, N.N., Nikiforova, S.V., Makarov, O.E., Chernyshova, M.P., Pankin, K.E., Turkovskaya, O.V, (2010), “Influence of cultivation conditions on Nguyễn Nguyên Quang 75 CNSH-K810 Luận văn thạc sĩ sinh học pyrene degradation by the fungus Pleurotus ostreatus D1”, World J Microbiol Biotechnol, 26, pp 205–211 43 Pozdnyakova, N.N., Nikiforova, S.V., Turkovskaya, O.V., (2010), “Influence of PAHs on ligninolytic enzymes of the fungus Pleurotus ostreatus D1”, Cent Eur J Biol, 5(1), pp 83–94 44 Rehmann, K., Noll, H.P., Steiberg, C.E.W., Kettrup, A.A (1998), “Pyrene degradation by Mycobacterium sp Strain KR2”, Chemosphere, 36(14), pp 2977–2992 45 Riva, S (2006), “Laccase: Blue enzyms for green chemistry”, Trends in Biotechnology, 24(5), pp 219–226 46 Rubia, T., Ruiz, E., Pérez, J., Matínez, J (2002), “Properties of a laccase produced by Phanerochaete flavio-alba induced by vanillin”, Arch Microbiol, 179, pp 70-73 47 Ruggaber, T.P and Talley, J.W (2006), “Enhancing bioremediation with enzymatic processes: A review practice periodical of hazardous, toxic, and Radioactive”, Waste Management, 10(2), pp 73-85 48 Ryu, Weon (1992), “Decolorization of azo dyes by Aspergillus sojae B10”, J Microb Biotechnol, 2, pp 215–219 49 Sadhasivam, S., Savitha, S., Swaminathan, Lin, F.H (2008), ‘Production, purification and characterization of mid-redox potential laccase from a newly isolated Trichoderma harzianum WL1”, Process Biochemistry, 43, pp 736-742 50 Sakaki, T., Shinkyo, R., Takita, T., Ohta, M., Inouye, K (2002), “Biodegradation of polychlorinated dibenzo-p-dioxins by recombinant yeast expressing rat CYP1A subfamily’, Arch Biochem Biophys, 401, pp 91-98 51 Saratale, G.D., Kalme, S.D., Govindwar, S.P (2006), “Decolorization of textile dyes by Aspergillus ochraceus (NCIM-1146)”, Ind J Biotechnol, 5, pp 407– 410 52 Scheater, A., Birnbaum, L., Ryan, J.J., Constable J.D (2006), “Dioxin: An overview”, Environmental research, 101, pp 419-428 Nguyễn Nguyên Quang 76 CNSH-K810 Luận văn thạc sĩ sinh học 53 Schecter, A., Gasiewicz, T.A (2003), Dioxin and health, A John Wiley & Sons, Inc, New York 54 Sharma, P., Goel, R., Capalash, N (2007), “Bacterial laccases”, World J Microbiol Biotechnol, 23, pp 823–832 55 Shedbalkar, U., Dhanve, R., Jadhave, J (2008), “Biodegradation of triphenylmethane dye cotton blue by Penicillium ochorochloron MTCC 517”, J Hazard Mater, 157, pp 472-479 56 Singh, Ward O.P (2004), Biodegradation and Bioremediation: Series: Soil Biology, vol 2, Springer-Verlag, New York 57 Stellman J.M., Stellman S.D., Christian R., Weber T., Tomasallo C (2003), “The extent and patterns of usege of Agent Orange and other herbicides on Vietnam”, Nature, 422, pp 681-687 58 Takada, S., Nakamura, M., Matsueda, T., Kondo, R., Sakai, K (1996), “Degradation of polychlorinated dibenzo-p-dioxins and polychlorinated dibenzofurans by the white rot fungus Phanerochaete sordida YK-624”, Appl Environ Microbiol, 62, pp 4323-4328 59 Tsutsumi, Y., Haneda, T., Nishida, T (2001), “Removal of estrogenic activities of bisphenol A and nonylphenol by oxidative enzymes from lignindegrading basidiomycetes”, Chemosphere, 42, pp 271–276 60 Verrhiest, G.J., Clement, B., Volat, B., Montuelle, B., Perrodin, Y (2002), “Interactions between a polycyclic aromatic hydrocarbon mixture and microbial communities in a natural freshwater sediment”, Chemosphere, 46, pp 187–196 61 Viswanath, B., Chandra, M.S., Pallavi, H and Reddy, B.R (2008), “Screening and assessment of laccase producing fngi isolated from different environmental samples”, African J Biotech, 7(8), pp 1129-1133 62 Wang, J.W., Wu, J.H., Huang, W.Y and Tan R.X (2006), “Laccase production by Monotospora sp., and endophytic fungus in Cynodon dactylon”, Bioresource Technology, 97(5), pp 786-789 Nguyễn Nguyên Quang 77 CNSH-K810 Luận văn thạc sĩ sinh học 63 Wesenberg, D., Kyriakides, I., Agathos, S.N., (2003), “A review: White-rot fungi and their enzymes for the treatment of industrial dye effluents”, Biotechnol Advance, 2, pp 161–187 64 Westing, A.H (1984), “Herbicides in war the long-term ecological and human consequences”, Sipri, Stockholm international peace research institute 65 Yang, Q., Yediler, A., Yang, M and Kettrup, A (2005), “Decolorization of an azo dye, Reactive Black and MnP production by yeast isolate: Debaryomyces polymorphus”, Biochem Engin J , 24(3), pp 249–253 66 Ye, M.A., Siddiqi, A.E., Maccubbin, S.K., Sikka, H.C (1996), “Degradation of polynuclear aromatic hydrocarbons by Sphingomonas paucimobilis”, Environ Sci Technol, 30, pp 136–142 67 Zeng, G.M., Yu, H.Y., Huang, H.L., Huang, D.L., Chen, Y.N, Huang, G.H and Li, G.B (2006), “Laccase activities of a soil fungus Penicillium simplicissimum in relation to lignin degradation”, W J Microb Biotech, 22(4), pp 317-324 Nguyễn Nguyên Quang 78 CNSH-K810 Luận văn thạc sĩ sinh học PHỤ LỤC Phụ lục Độ độc đồng phân dioxin theo qui định WHO Đồng phân TEF Đồng phân TEF 2,3,7,8-TCDD 3,3’,4,4’,5-PentaCB(126) 0,1 1,2,3,7,8-PeCDD 3,3,’4,4;,5,5’-HexaPCB 0,03 1,2,3,4,7,8-Hexa CCD 0,1 2,3,3’,4,4’-PentaCB (105) 0,00003 1,2,3,6,7,8-HexaCDD 0,1 2,3,4,4’,5-PentaCB (114) 0,00003 1,2,3,7,8,9-HexaCDD 0,1 2,3’,4,4’,5-PentaCB(118) 0,00003 1,2,3,4,6,7,8-HeptaCDD 0,01 2’,3,4,4’,5-PentaCB (123) 0,00003 OCDD 0,0003 2,3,3’,4,4’,5-HexaCB (156) 0,00003 2,3,7,8-TCDF 0,1 2,3,3’,4,4’,5’-HexaCB (157) 0,00003 1,2,3,7,8-PeCDF 0,03 2,3’4,4’,5,5’-HexaCB (167) 0,00003 2,3,4,7,8-PeCDF 0,3 2,3,3’,4,4’,5,5’-PeptaCB (189) 0,00003 1,2,3,4,7,8-Hexa CDF 0,1 1,2,3,4,7,8,9-HeptaCDF 1,2,3,4,7,8-Hexa CDF 0,1 OCDF 0,0003 1,2,3,7,8,9-HexaCDF 0,1 3,3’,4,4’-TCB (77) 0,0001 2,3,4,6,7,8-HexaCDF 0,1 3,4,4’.5-TetraCB (81) 0,0003 1,2,3,4,6,7,8-HeptaCDF 0,01 Nguyễn Nguyên Quang 79 0,01 CNSH-K810 Luận văn thạc sĩ sinh học Phụ lục Một số tính chất vật lý hợp chất dioxin Độ hoà tan Tên chất Nhiệt độ nóng chảy (oC) nước Áp suất (oC) (mmHg) (oC) 1,9.10-5 25 1,5.10-9 25 3,3.10-4 25 1,4.10-8 25 4,4.10-10 25 20 5,6.10-10 25 25 3,8.10-11 25 (mg/l) Tetrachlorodibenzo-p-dioxin 2,3,7,8-TCDD 305-306 Các đồng phân lại Pentachlorodibenzo-p-dioxin 1,2,3,7,8-PeCDD 240-241 1,1.10-4 Các đồng phân lại Hexachlorodibenzo-p-dioxin 4,4.10-6 1,2,3,4,7,8-HxCDD 273-275 1,2,3,6,7,8-HxCDD 285-286 3,6.10-11 25 1,2,3,7,8,9-HxCDD 243-244 4,9.10-11 25 25 4,4.10-11 25 2,4.10-6 20 5,6.10-12 25 2,4.10-6 20 3,2.10-11 25 25 8,2.10-13 25 4,4.10-6 Các đồng phân lại Heptachlorodibenzo-p-dioxin 1,2,3,4,6,7,8-HpCDD 264-265 Các đồng phân lại Octachlorodibenzo-p-dioxin 1,2,3,4,6,7,8,9-OCDD Nguyễn Nguyên Quang 325-326 80 7,4.10-8 CNSH-K810 Luận văn thạc sĩ sinh học Phụ lục Các nhóm màu tổng hợp theo số màu (C.I.) Code Chemical class Code Chemical class Code Chemical class 10.000 Nitroso 42.000 Triarylmethane 53.000 Sulfur 10.300 Nitro 45.000 Xanthene 55.000 Lactone 11.000 Monoazo 46.000 Acridine 56.000 Aminoketone 20.000 Diazo 47.000 Quinoline 57.000 Hydroxylquinone 30.000 Triazo 48.000 Methine 58.000 Anthraquinone 35.000 Polyazo 49.000 Thiazole 73.000 Indigoid 37.000 Azoic 49.400 74.000 Phthalocyanine 40.000 Stilbene 50.000 Azine 75.000 Natural 40.800 Carotenoid 51.000 Oxazine 76.000 Oxidation base 41.000 Diphenylmethane 52.000 Thiazine 77.000 Inorganic Nguyễn Nguyên Quang Idamine/Indoph enol 81 CNSH-K810 Luận văn thạc sĩ sinh học Phụ lục Một số vi sinh vật có khả sinh laccase Nấm đảm Nấm sợi Xạ khuẩn Vi khuẩn Phanerochaete Melanocarpus Streptomyces Bacillus chrysosporium albomyces lavendulae licheniformis Pycnoporus Fusarium Streptomyces Bacillus cinnabarinus oxysporum psammoticus halodurans Rhizotonia solani Aspergillus Streptomyces Thermus nidulans viridosporus thermophilus Trichoderma Streptomyces Escherichia coli harzianum coelicolor Trametes villosa Trametes Aspergillus niger Bacillus subtilis versicolor Pleurotus Aspergillus terreus ostreatus Lentinula edodes Pholiota spp Agaricus bisporus Peniophora spp Botrytis cinerea Mauginiell sp Nguyễn Nguyên Quang 82 CNSH-K810 Luận văn thạc sĩ sinh học Phụ lục Thành phần số môi trường nghiên cứu Môi trường muối khoáng dịch (g/l) Môi trường muối khoáng thạch (g/l) KNO3 Thành phần chất môi trường MgSO4 0,4 muối khoáng dịch bổ sung: KH2PO4 0,3 Agar Na2HPO4 0,7 NaCl H2O lit pH 6,5 Môi trường Czapek dịch (g/l) 20 g Môi trường Czapek thạch (g/l) Sacharose 30 Thành phần chất môi trường NaNO3 Czapek dịch bổ sung: KH2PO4 Agar KCl 0,5 MgSO4 0,5 FeSO4 0,01 NaCl H2O lit pH 6-7 Môi trường Czapek cải tiến (g/l) 20 g Nước muối sinh lý (0,85%) Thành phần chất pha theo tỉ lệ NaCl 8,5 g thể tích = Czapek/5 muối khoáng lit Nguyễn Nguyên Quang H2O 83 CNSH-K810 Luận văn thạc sĩ sinh học Phụ lục Thành phần lên men 15 lít Dịch chiết malt 75 g KNO3 7,2 g MgSO4 6,3 g KH2PO4 6,6 g Na2HPO4 10,5 g NaCl 15 g NaNO3 12 g KCl 1,5 g FeSO4 0,15 g CuSO4 0,1 g MnSO4 0,05 g Pyrene 3g H2O đủ 15 lít pH Nguyễn Nguyên Quang 84 CNSH-K810 ... tài Phân lập nghiên cứu khả chuyển hóa số chất đa vòng thơm nấm sợi sinh tổng hợp enzyme laccase từ đất nhiễm chất diệt cỏ/ dioxin tiến hành Kết trình bày luận văn phần nhỏ đề tài độc lập cấp... sau: ¾ Phân lập, sàng lọc chủng nấm sợi có khả sinh laccase từ đất nhiễm chất diệt cỏ/ dioxin sân bay Biên Hòa đất dioxin thu thập từ sân bay Đà Nẵng trình xử lý; ¾ Chọn chủng để nghiên cứu điều... trò chất xúc tác trình phân hủy sinh học chất có đất nhiễm chất diệt cỏ/ dioxin 1.1.6 Phân hủy dioxin hợp chất tương tự nấm Enzyme cytochrome P-450 monooxygenase hemoprotein phân bố rộng rãi sinh