Nghiên cứu ứng dụng mannooligosaccharide (MOS) làm thức ăn bổ sung nuôi tôm

LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, cố gắng nỗ lực thân, nhận ủng hộ, giúp đỡ hướng dẫn tận tình thầy cô giáo, gia đình bạn bè Trước hết, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới GS.TS ĐẶNG THỊ THU - Phòng Vi sinh - Hóa sinh - Sinh học phân tử - Viện Công nghệ sinh học Công nghệ thực phẩm - Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội, tận tình định hướng, hướng dẫn, truyền cho niềm đam mê nghiên cứu suốt thời gian thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn TS Đỗ Biên Cương, Phòng Vi sinh - Hóa sinh Sinh học phân tử - Viện Công nghệ sinh học Công nghệ thực phẩm - Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội - người thiết kế hướng dẫn suốt trình thí nghiệm Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo, anh chị, bạn học viên, sinh viên phòng thí nghiệm hóa sinh - sinh học phân tử nhiệt tình giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho trình học tập thực luận văn Cuối xin gửi lời cảm ơn chân thành tới gia đình, bạn bè người thân động viên, khuyến khích giúp vượt qua khó khăn suốt trình nghiên cứu Hà Nôi, ngày tháng năm 2012 Vũ Kim Dung Luận văn thạc sỹ khoa học Công nghệ sinh học LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu luận văn khoa học Các kết nghiên cứu luận văn hoàn toàn trung thực, số liệu, tính toán hoàn toàn xác chưa công bố công trình nghiên cứu Mọi liệu, hình ảnh, biểu đồ trích dẫn tham khảo luận văn thu thập sử dụng nguồn liệu mở trích dẫn rõ nguồn gốc Tôi xin chịu hoàn toàn trách nhiệm với cam đoan Hà Nội, ngày tháng năm 2012 Vũ Kim Dung Vũ Kim Dung Luận văn thạc sỹ khoa học DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT CD Xyclodextrin CGTase Xyclodextrin glucanotransferase DMSO Dimethyl sulfoxide DNS Dinitrosalicylic acid ĐC Đối chứng FCR Hệ số sử dụng thức ăn FOS Fructo – oligosaccharide GOS Galacto – oligosaccharide HPLC High performance liquid chromatoghraphy LBG Locust bean gum M1 Mannose M2 Mannobiose M3 Mannotriose M4 Mannotetraose M5 Mannopentose M6 Mannohexose MOS Mannooligosacharide PAS Prebiotic activity score TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam TN Thí nghiệm TOS Transgalacto - oligosaccharide TTCT Tôm thẻ chân trắng TCA Trichoracetic acid Vũ Kim Dung Công nghệ sinh học Luận văn thạc sỹ khoa học Công nghệ sinh học MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH MỞ ĐẦU .1 Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 Sơ lược Prebiotics 1.2 Tổng quan Mannooligosaccharide (MOS) 1.2.1 Cấu tạo Mannooligosaccharide 1.2.2 Tính chất Mannooligosaccharide 1.2.3 Hoạt tính sinh học Mannooligosaccharide 1.2.4 Phương pháp sản xuất Mannooligosaccharide .11 1.2.4.1 Sản xuất MOS phương pháp hóa học .13 1.2.4.2 Sản xuất MOS phương pháp tách chiết trực tiếp 13 1.2.4.3 Sản xuất MOS phương pháp thủy phân chất mannan nhờ endo - β - 1,4 mannanase 14 1.2.5 Ứng dụng Mannooligosaccharide 15 1.2.6 Ứng dụng Mannooligosaccharide thủy sản 17 1.2.7 Tình hình nghiên cứu, ứng dụng MOS thủy hải sản Việt Nam .19 1.3 Tổng quan tôm thẻ chân trắng 21 1.3.1 Đặc điểm tôm thẻ chân trắng 21 1.3.2 Tình hình nuôi tôm thẻ chân trắng 22 1.3.3 Vấn đề dịch bệnh tôm 24 1.3.3.2.Hạn chế việc sử dụng hóa chất, chất kháng sinh phòng trị bệnh tôm 26 Chương 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1 Vật liệu, hóa chất thiết bị máy móc .27 2.1.1 Vật liệu 27 2.1.2 Môi trường .27 Vũ Kim Dung Luận văn thạc sỹ khoa học Công nghệ sinh học 2.1.3 Hóa chất thiết bị 28 2.2 Phương pháp nghiên cứu 29 2.2.1 Phương pháp vi sinh vật 29 2.2.1.1 Nuôi Pichia pastoris tái tổ hợp sinh endo - β - 1,4 mannanase 29 2.2.1.2 Xác định hoạt tính prebiotics MOS invitro 30 2.2.1.3 Xác định vi sinh vật tổng số .30 2.2.1.4 Xác định Lactobacillus 31 2.2.1.5 Xác định Bifidobacterium 31 2.2.1.6 Xác định Coliform 31 2.2.1.7 Xác định Clostridium 31 2.2.1.8 Xác định Anaerobic 31 2.2.1.9 Xác định Salmonella 31 2.2.1.10 Xác định Vibrio 31 2.2.2 Phương pháp hóa sinh 31 2.2.2.1 Xác định đường khử tổng số theo phương pháp DNS .31 2.2.2.2 Xác định hoạt độ endo - β - 1,4 mannanase .32 2.2.2.3 Sản xuất MOS phương pháp thủy phân giới hạn endo - β - 1,4 mannanase 33 2.2.2.4 Xác định thành phần MOS sắc ký lớp mỏng 33 2.2.2.5 Định lượng MOS phương pháp sắc ký lỏng cao áp HPLC .33 2.2.2.6 Tối ưu hóa thủy phân bã dừa endo - β - 1,4 mannanase theo quy hoạch bậc hai Box-Benken 33 2.2.2.7 Xác định hoạt tính chống oxy hóa .35 2.2.3 Xác định hoạt tính sinh học MOS đường ruột TTCT nuôi có bổ sung MOS 35 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 37 3.1 Hoàn thiện công nghệ thu chế phẩm MOS .37 3.1.1 Tối ưu hóa điều kiện thu chế phẩm MOS 37 3.1.2 Quy trình sản xuất MOS quy mô pilot 41 Vũ Kim Dung Luận văn thạc sỹ khoa học Công nghệ sinh học 3.1.3 Kiểm tra chất lượng vệ sinh an toàn thực phẩm chế phẩm MOS 42 3.1.3.1.Phân tích thành phần hàm lượng MOS 42 3.1.3.2.Kiểm tra chất lượng vệ sinh an toàn thực phẩm MOS 44 3.2 Nghiên cứu hoạt tính sinh học MOS điều kiện invitro (PTN) .47 3.2.1 Hoạt tính chống oxi hóa 47 3.2.2 Khả làm tăng số lượng vi khuẩn có lợi MOS .48 3.2.3 Khả làm giảm số lượng vi khuẩn có hại MOS 55 3.2.4 Hoạt tính prebiotics Mannooligosaccharide 58 3.3 Nghiên cứu ứng dụng MOS làm thức ăn bổ sung nuôi tôm thẻ chân trắng .59 3.3.1 Ảnh hưởng MOS đến hệ vi sinh vật đường ruột TTCT 59 3.3.1.1 Ảnh hưởng MOS đến khả sinh trưởng TTCT 70 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 73 TÀI LIỆU THAM KHẢO .75 PHỤ LỤC 80 Vũ Kim Dung Luận văn thạc sỹ khoa học Công nghệ sinh học DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Hóa chất 28 Bảng 2 Máy móc, thiết bị 29 Bảng Các biến số khoảng chạy chúng 33 Bảng Ma trận thực nghiệm 34 Bảng Ma trận thực nghiệm Box-Behnken ba yếu tố hàm lượng MOS thu điều kiện thủy phân khác 38 Bảng Kết phân tích phương sai mô hình ưu phần mềm DX7.1.5 39 Bảng 3 Hàm lượng MOS thành phần, phân tích HPLC .42 Bảng Kết phân tích tiêu vi sinh vật chế phẩm MOS nghiên cứu 45 Bảng Kết phân tích tiêu hóa-lý chế phẩm MOS nghiên cứu 46 Bảng Khả chống oxi hóa MOS 47 Bảng Tỷ lệ tăng sinh L acidophilus môi trường khác .48 Bảng Số lượng khuẩn lạc vi khuẩn có hại môi trường 55 Bảng Ảnh hưởng MOS đến đồng nuôi cấy vi khuẩn có lợi gây hại .56 Bảng 10 Kết số lượng khuẩn lạc Samonella sau tuần thí nghiệm .69 Bảng 11 Ảnh hưởng MOS đến khả tăng trọng tôm thẻ chân trắng .70 Vũ Kim Dung Luận văn thạc sỹ khoa học Công nghệ sinh học DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1 Cấu tạo FOS Inulin Hình Isomaltotriose isomaltopentose Hình Cấu tạo D – mannose mannotriose Hình Cấu tạo mannobiose Hình Khả cạnh tranh MOS với thụ thể tương tác với vi sinh vật gây bệnh Hình Cấu trúc mannan 12 Hình Tôm thẻ chân trắng 21 Hình Sản lượng tôm số nước châu Mỹ latinh Châu Á 24 Hình Đồ thị đường chuẩn mannose 32 Hình 2 Hệ thống thí nghiệm nuôi tôm thẻ chân trắng 36 Hình Hàm kỳ vọng điều kiện tối ưu để thủy phân bã dừa 40 Hình Sơ đồ quy trình thu nhận MOS từ bã dừa 41 Hình 3 Khảo sát hoạt tính prebiotic loại MOS .44 Hình Vi khuẩn Lactobacillus acidophilus L8 L9 đĩa thạch 48 Hình Ảnh xác định khả thủy phân LBG dịch nuôi cấy L acidophilus L9 môi trường MRS + MOS 50 Hình Ảnh sắc ký TLC dịch nuôi cấy L acidophilus L9 môi trường MRS + MOS thời gian khác 50 Hình Biểu đồ tỷ lệ tăng sinh L acidophilus L9 B lactis Bb12 môi trường MRS chứa loại prebiotic khác 51 Hình Sự phát triển L acidophilus L9 sau 24 nuôi cấy môi trường MRS với nguồn cacbon MOS, glucose loại prebiotic khác .52 Hình Ảnh hưởng MOS số sản phẩm đường chức thương mại đến tăng sinh vi khuẩn có lợi 53 Hình 10 Sự phát triển Lactobacillus amylovorans sau 24 môi trường chứa loại đường khác 54 Vũ Kim Dung Luận văn thạc sỹ khoa học Công nghệ sinh học Hình 11 Sự phát triển vi khuẩn có hại sau 24 nuôi cấy môi trường lỏng chứa MOS đĩa thạch 55 Hình 12 Sự phát triển Samonella L acidophilus L9 môi trường ĐC MOS .57 Hình 13 Biểu đồ biểu diễn điểm hoạt tính prebiotics loại đường 58 Hình 14 Sự thay đổi tỷ lệ vi khuẩn tổng số đường ruột TTCT 60 Hình 15 Sự thay đổi tỷ lệ vi khuẩn Anaerobic đường ruột TTCT 61 Hình 16 Sự thay đổi tỷ lệ vi khuẩn Lactobacillus đường ruột TTCT 62 Hình 17 Khuẩn lạc Lactobacillus đường ruột tôm thẻ chân trắng 62 Hình 18 Sự thay đổi tỷ lệ vi khuẩn Bifidobacterium đường ruột TTCT 63 Hình 19 Sự thay đổi tỷ lệ vi khuẩn Coliforms đường ruột TTCT 65 Hình 20 Khuẩn lạc Coliform đường ruột tôm thẻ chân trắng .65 Hình 21 Sự thay đổi tỷ lệ vi khuẩn Vibrio đường ruột TTCT 66 Hình 22 Khuẩn lạc Vibrio đường ruột tôm thẻ chân trắng 66 Hình 23 Sự thay đổi tỷ lệ vi khuẩn Clostridium đường ruột TTCT 68 Hình 24 Tôm thẻ chân trắng thí nghiệm .72 Vũ Kim Dung Luận văn thạc sỹ khoa học Công nghệ sinh học MỞ ĐẦU Trong năm gần đây, thủy sản ba lĩnh vực xuất mạnh Việt Nam Trong đó, tôm sản phẩm chủ lực chiếm tỷ trọng lớn Hiện nay, ngành nuôi tôm nói chung nuôi tôm thẻ chân trắng nói riêng gặp nhiều khó khăn giá thành nguyên liệu thức ăn thị trường tăng cao, giống nuôi trồng lão hóa suy thoái, khí hậu biến đổi, môi trường ô nhiễm,… Để kiểm soát dịch bệnh, nhiều nơi lạm dụng hóa chất kháng sinh nuôi trồng, dẫn đến chất lượng giá trị sản phẩm thủy sản nói chung tôm thẻ chân trắng nói riêng giảm ảnh hưởng nhiều đến sản lượng xuất khẩu, gây thiệt hại lớn cho doanh nghiệp nuôi trồng chế biến thủy sản Tạo vacxin phòng bệnh, sử dụng chế phẩm sinh học (prebiotic, probiotic) để tăng cường sức đề kháng đối tượng nuôi, hạn chế thay kháng sinh,…là giải pháp nhiều nhà khoa học doanh nghiệp nuôi trồng thủy sản nước quan tâm Mannooligosacharide (MOS) loại prebiotic tốt, kích thích phát triển vi khuẩn có lợi hệ tiêu hóa như: Bifidobacterium, Lactobacillus, ức chế vi khuẩn gây hại đường ruột Escherichia coli, Listeria monocytogens, Clostridium perfrigens, Một số nghiên cứu khác cho thấy MOS có nhiều chức sinh lý đáng quan tâm: Giảm hàm lượng mỡ máu, kiềm chế gia tăng hàm lượng đường máu, tăng cường hệ thống miễn dịch, MOS có khả chống oxy hóa, … Với hoạt tính sinh học có lợi nên MOS sử dụng làm thực phẩm chức sản phẩm dược, thức ăn gia súc, gia cầm thức ăn cho thủy hải sản, Chính tầm quan trọng khả ứng dụng MOS, tiến hành nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu ứng dụng Mannooligosaccharide (MOS) làm thức ăn bổ sung nuôi tôm” Nội dung nghiên cứu gồm: - Hoàn thiện công nghệ thu chế phẩm MOS Vũ Kim Dung Luận văn thạc sỹ khoa học Công nghệ sinh học 19 Jelena Vulevic, Robert A Rastall, Glenn R, Gibson (2004), Developing a quantitative approach for determining the in vitro prebiotic potental of dietary oligosaccharides, FEMS Microbiology Letter 236, pp 153 – 15 20 Kelly S Swanson, Christine M.Grieshop, Elizabeth A.Flichinger, Laura L Bauer (2002), Supplemental fructooligosaccarides and mannooligosaccarides influende Immune Function, American Society for Nutritional Sciences 2, pp 0022-3166 21 Kim SW, Park GG (2004), Preparation of Gal3Man4 (63-mono-α-Dgalacto-pyranosyl-β-mannotetraose) by Bacillus sp β-mannanase and growth activity to intestinal bacteria, J Korean Soc Appl Biol Chem, 47(4), pp 379-383 22 Kim YJ, Park GG (2005), Indentification and Growth Activity to Bifidobacterium spp of Locust Bean Gum Hydrolysates by Trichoderma harzianum β-mannanase J Korean Soc Apple.Biol.Chem, 48 (4), pp 364-369 23 Kumao T, Fujii S (2006), Mannooligosaccharides blended coffee beverage intake increase the fat level in feces, J Health Sci, 52 (3), pp 329-332 24 Kurakake M, Sumida T, Masuda D, Oonishi S, Komaki T (2006), Production of galacto-manno-oligosaccharides from guar gum by beta-mannanase from Penicillium oxalicum SO, J Agric Food Chem, 54(20), pp 7885-7889 25 Leon V B, Polina I A, Alexander S., Alexey A.G, Nikolay K.K, Sergey A N, J F S (2002), An efficient approach toward the Convergent Synthesis of “fully-cacbonhydrate”, Mannodendrimers Chem Eur,8 (19), pp 4412-4423 26 Li Y., Jiang Z., Wei Y., Li L., Kusakabe I (2005), Preparation of mannooligosaccharides by enzymatic method and its separation as well as crystallization, Food Sci 26, pp 58-60 27 Liu B, Zhang X, Xie J (2008), Application of Oligosaccharride on the Aquaculture http://sunpubc.com/News/ShowInfo.aspx?ID=296 28 Ma Y, Xue Y, Dou Y, Xu Z, Tao W, Zhou P (2004), Characterization and gene cloning of a novel β-mannanase from alkaphilic Bacillus sp N16-5, Extremophiles 8, pp.2447-454 Vũ Kim Dung 77 Luận văn thạc sỹ khoa học Công nghệ sinh học 29 Murphy T, Roy I, Harrop A, Dixon K, Keshavarz T (2007), Effect of oligosaccharide elicitors on bacitracin A production and evidence of transcriptional level control, J Biotechnol, 131, pp 397–403 30 Rycroft CE, Jones MR, Gibson GR, Rastall RA (2001), A comparative in vitro evaluation of the fermentation properties of prebiotic oligosaccharides, J Appl Microbiol, 91(5), pp 878-887 31 Sachslehler A (2000), Hydrolysis of isolated coffee mannan and coffee extract by endo-beta-1,4-mannanase of Sclerotium rolfsii, Journal of Biotechnology 80, pp 127-134 32 Salze G, McLean E, Schwarz MH, Craig SR (2008), Dietary mannan oligosaccharide enhances salinity tolerance and gut development of larval cobia, Aquaculture, 274 (1), pp 148-152 33 Tanimoto T, Ikuta A, Sugiyama M, Koizumi K (2002), HPLC analysis manno-oligosaccharides derived from Saccharomyces cerevisiae mannan using an amino column or a graphitized carbon column, Chem Pharm Bull, 50 (2), pp 280-283 34 Titapoka S, Keawsompong S, Haltrich D, Nitisinprasert S (2009), Selection and characterization of mannanase-producing bacteria useful for the formation of prebiotic manno-oligosaccharides from copra meal, Worls Journal of Microbiology and Biotechnology, 24 (8), pp 1425-1433 35 Vanhulle S, Radman R, Parra R, Cui T, Bols CM, Tron T, Sannia G, Keshavarz T (2007), Effect of mannan oligosaccharide elicitor and ferulic acid on enhancement of laccases production in liquid cultures of basidiomycetes, Enzyme Microbial Tech, 40, pp 1712–1718 36 Vo Thi Thanh Binh, Nguyen Thi Thanh Truc, Le Thanh Hung (2008), Effects of Bio-MOS (Mannan oligosaccharide) on growth performances and fish health improvement of tra catfish Hội nghị Quốc tế Cá tra ĐH Cần Thơ 37 Wang Y, Han F, Hu B, Li JB, Yu WG (2006), In vivo prebiotic properties of alginate oligosaccharides prepared through enzymatic hydrolysis of alginate, Nut Res, 26, pp 597-603 Vũ Kim Dung 78 Luận văn thạc sỹ khoa học Công nghệ sinh học 38 Zhigang Zhou, Zhaokun Ding, L.V Huiyuan (2007), Effects of dietary short-chain Fructooligosaccharides on intestinal microflora, survival, and growth performce of juvenile white shrimp, Litopenaeus vannamei, Journal of the world aquaculture society, 38 (2), pp 296 – 301 TRANG WEB 39 http://www.ctu.edu.vn/colleges/aquaculture/catfish/ 40 http://Sunpubc.com.news 41 www.kailimedical.com 42 www.milkproductsinc.com 43 www.techmartvietnam.vn 44 www.ioop.org.vn 45 www.bayer.com.vn 46 www.invitrogen.com 47 www.sigmaaldrich.com 48 www.megazyme.com 49 http://www.tiengiang.gov.vn 50 http://vietrade.gov.vn/thu-hi-sn/2550-thuy-hai-san-the-gioi-2011-motnam-nhin-lai-phan-1.html 51 http://tepbac.com/disease/full/28/Benh-dom-trang-do-vi-khuan-o-tomdom-voi.htm Vũ Kim Dung 79 Luận văn thạc sỹ khoa học Công nghệ sinh học PHỤ LỤC Hình PL Đường chuẩn MOS phân tích HPLC A Vũ Kim Dung 80 Luận văn thạc sỹ khoa học Công nghệ sinh học B Hình PL Kết chạy sắc ký HPLC phân tích thành phần MOS A: Dịch sau thủy phân thí nghiệm số (Nồng độ enzym 35U/g, nhiệt độ 550C độ pH 4,5), B: Dịch sau thủy phân thí nghiệm số 12 (Nồng độ enzym 40U/g, nhiệt độ 750C độ pH 5,5) Hình PL Bề mặt đáp ứng hàm lượng đường MOS: nhiệt độ nồng độ enzym môi trường thay đổi, nồng độ enzym độ pH thay đổi, nhiệt độ độ pH thay đổi Vũ Kim Dung 81 Luận văn thạc sỹ khoa học Công nghệ sinh học Bảng PL Tỷ lệ tăng sinh L.acidophilus L9 môi trường chứa đường Số lượng khuẩn lạc Loại đường Số lượng khuẩn Tỷ lệ tăng sinh Ban đầu Sau 24 lạc tăng sau so với Glucose (*10^3) (*10^5) 24h/ml (*105) (%) Glucose 156.00 154.00 3811 100.00 BioMOS 171.00 91.00 2232.3 58.57 MOS 145.00 257.00 6388.8 167.64 MOStm 168.00 111.00 2733 71.71 FOS 164.00 162.00 4009 105.20 Hermesetas 186.00 214.00 5303.5 139.16 Inulin 164.00 122.00 3009 78.96 Vitan1 178.00 187.00 4630.5 121.50 Bảng PL Tỷ lệ tăng sinh B lactis Bb12 môi trường chứa loại đường Số lượng khuẩn lạc Loại đường Ban đầu Sau 24 Số lượng khuẩn Tỷ lệ tăng sinh lạc tăng sau so với Glucose (*10^3) (*10^5) 24h/ml (*10 ) (%) Glucose 46 46.00 1138.5 100 BioMOS 41 19.00 464.75 40.82 MOS 45 62.00 1538.8 135.16 MOStm 48 26.67 654.75 57.51 FOS 48 38.00 938 82.39 Hermesetas 44 69.00 1714 150.55 Inulin 44 58.67 1455.8 127.87 Vitan1 46 60.33 1496.8 131.47 Vũ Kim Dung 82 Luận văn thạc sỹ khoa học Công nghệ sinh học Bảng PL Mức độ tăng sinh vi khuẩn probiotics môi trường chứa loại đường Số tế bào tăng Tỷ lệ sau 24 giờ/ml tăng sinh (*106) (%) 144 1551 100 114.75 148 1779.78 114.75 MRS+FOS 111.1 151 1723.12 111.1 MRS+Vitan 107 142 1659.5.7 107 MRS+Hermesetas 111.09 150 1723.01 111.09 MRS 100 154 1650.0 100 L reuteri MRS+MOS 132.9 151 2192.8.5 132.9 ATCC MRS+FOS 101.8 158 1679.7 101.8 55730 MRS+Vitan 113 160 1864.5 113 MRS+Hermesetas 105.31 152 1737.62 105.31 MRS 100 147 1597.2 100 L MRS+MOS 117.93 152 1883.58 117.93 plantarum MRS+FOS 101.2 149 1616.37 101.2 B33 MRS+Vitan 100 150 1597.2 100 MRS+Hermesetas 102.61 148 1638.89 102.61 156 1808.4 Vi khuẩn Ban đầu Sau 24h *10^3 *10^6 MRS 100 MRS+MOS Môi trường L rhamnosus ATCC 53103 MRS L MRS+MOS 194.36 145 3514.81 194.36 plantarum MRS+FOS 107.3 178 1940.41 107.3 WCFS1 MRS+Vitan 104 186 1880.74 104 MRS+Hermesetas 159.69 164 2887.83 159.69 L MRS 100 166 1570.8 100 fermentum MRS+MOS 117.87 159 1851.50 117.87 ATCC MRS+FOS 100.6 163 1580.23 100.6 Vũ Kim Dung 83 Luận văn thạc sỹ khoa học 14931 Công nghệ sinh học MRS+Vitan 99.8 158 1567.66 99.8 MRS+Hermesetas 92.828 164 1458.14 92.828 MRS 100 161 1630.2 100 MRS+MOS 125.1 165 2039.38 125.1 MRS+FOS 101.9 157 1661.17 101.9 MRS+Vitan 105 158 1711.71 105 MRS+Hermesetas 107.36 162 1750.18 107.36 MRS 100 158 1531.2 100 L MRS+MOS 114.75 149 1757.05 114.75 amylovorans MRS+FOS 111.1 154 1701.16 111.1 DSM 20531 MRS+Vitan 107 155 1638.38 107 MRS+Hermesetas 111.09 159 1701.01 111.09 MRS 100 145 1498.20 100 MRS+MOS 111.09 151 1664.35 111.09 MRS+FOS 92.68 148 1388.53 92.68 MRS+Vitan 90.6 153 1357.37 90.6 MRS+Hermesetas 103.04 152 1543.75 103.04 L brevis DSM 20054 L acidophilus VTCC-B871 Hình PL Sự phát triển L plantarum môi trường chứa loại đường Vũ Kim Dung 84 Luận văn thạc sỹ khoa học Công nghệ sinh học Hình PL Sự phát triển hai loại vi khuẩn có lợi gây hại đĩa thạch A, B, C: nuôi đồng thời E coli L acidophilus L9 môi trường chứa glucose giờ; môi trường chứa glucose sau 24 môi trường chứa MOS sau 24 giờ; D, E, F: nuôi đồng thời V harveyi L acidophilus L9 môi trường chứa glucose, giờ; môi trường chứa glucose, sau 24 môi trường chứa MOS, sau 24 Bảng PL Điểm hoạt tính prebiotics MOS chủng L acidophillus L9 Loại đường Glucose BioMOS MOS MOStm FOS Vũ Kim Dung Vi Số lượng khuẩn lạc Ban đầu Sau 24h (*103) (*105) L9 156 154 E.coli 165.67 249.67 L9 171 91 E.coli 168 91 L9 145 257 E.coli 173.67 28 L9 168 111 E.coli 159 83 L9 178 187 khuẩn 85 PASL9 PASE.coli 0.8654 PAS 0.3199 0.5455 1.1274 0.4329 0.6946 0.9126 0.3721 0.5405 1.0136 0.3460 Luận văn thạc sỹ khoa học Hermesetas Inulin Vitan1 Công nghệ sinh học E.coli 161 213 L9 164 162 E.coli 146 216 L9 164 122 E.coli 173 222 L9 186 174 E.coli 165 248 0.6676 1.0001 0.3173 0.6828 0.9384 0.2750 0.6634 0.9883 0.3033 0.6850 Bảng PL Điểm hoạt tính prebiotics MOS chủng B lactis Bb12 Số lượng khuẩn lạc Loại đường Glucose BioMOS MOS MOStm FOS Hermesetas Inulin Vitan1 Vũ Kim Dung Vi khuẩn Ban đầu Sau 24h (*103) (*105) Bb12 46.00 46 E.coli 165.67 249.67 Bb12 41.00 19 E.coli 168.00 91 Bb12 45.00 62 E.coli 173 67 280 Bb12 48.00 26.67 E.coli 159.00 83 Bb12 48.00 38 E.coli 161.00 213 Bb12 44.00 69 E.coli 146.00 216 Bb12 44 58.67 E.coli 173.00 222 Bb12 46 60.33 E.coli 165.00 248 86 PASBb12 PASE.coli 0.8330 PAS 0.2875 0.5455 1.0696 0.3750 0.6946 0.8724 0.3319 0.5405 0.9493 0.2817 0.6676 1.0977 0.4149 0.6828 1.0625 0.3991 0.6634 1.0589 0.3739 0.6850 Luận văn thạc sỹ khoa học Công nghệ sinh học Bảng PL Thành phần dinh dưỡng thức ăn nuôi tôm thẻ chân trắng Loại thức ăn: Hipo - CP - 7701 công ty cổ phần chăn nuôi Việt Nam Thành phần dinh dưỡng Hàm lượng Đạm ≥ 40% Chất béo ≥ 5% Chất xơ ≤ 4% Độ ẩm ≤ 11% Nguyên liệu Tỷ lệ Bột cá 30 - 50% Bột mức - 5% Bột đậu nành 25 - 30% Bột mì 20 - 25% Vitamin B, E, A, C… Khoáng chất Ca, Na, P, Fe… Chất chống ô xy hóa Santo Bảng PL Số lượng khuẩn lạc vi khuẩn tổng số hiếu khí đường ruột TTCT Thí nghiệm Số lượng khuẩn lạc (*10^4 cfu/g) Ban đầu Sau tuần Sau tuần 0.4% MOS 640 740 820 950 1120 0.6% MOS 700 880 970 1020 1240 0.8% MOS 680 890 980 1100 1270 1% MOS 680 910 1070 1170 1370 ĐC 690 950 1110 1240 1470 0.4% Bio-MOS 660 920 990 1090 1260 0.6% Bio-MOS 730 940 1040 1140 1320 0.8% Bio-MOS 700 950 1070 1180 1360 Vũ Kim Dung 87 Sau tuần Sau tuần Luận văn thạc sỹ khoa học Công nghệ sinh học Bảng PL Số lượng khuẩn lạc vi khuẩn Coliforms đường ruột TTCT Thí nghiệm Số lượng khuẩn lạc (*10^3 cfu/g) Ban đầu Sau tuần Sau tuần Sau tuần Sau tuần 0.4% MOS 264 234 214 193 166 0.6% MOS 245 192 178 153 130 0.8% MOS 262 214 197 172 152 1% MOS 266 227 206 192 167 ĐC 253 272 293 306 331 0.4% Bio-MOS 265 259 234 224 203 0.6% Bio-MOS 263 254 225 209 188 0.8% Bio-MOS 266 245 216 195 175 Bảng PL Số lượng khuẩn lạc vi khuẩn Lactobacillus đường ruột TTCT Thí nghiệm Số lượng khuẩn lạc (cfu/g) Ban đầu Sau tuần Sau tuần Sau tuần Sau tuần 0.4% MOS 460 860 1060 1210 1370 0.6% MOS 420 1400 1930 2350 2740 0.8% MOS 390 1110 1470 1910 2320 1% MOS 490 1040 1270 1620 1880 ĐC 450 640 730 800 930 0.4% Bio-MOS 380 740 850 960 1080 0.6% Bio-MOS 430 820 1030 1170 1260 0.8% Bio-MOS 450 840 1050 1190 1290 Vũ Kim Dung 88 Luận văn thạc sỹ khoa học Công nghệ sinh học Bảng PL 10 Số lượng khuẩn lạc vi khuẩn Bifidobacterium đường ruột TTCT Thí nghiệm Số lượng khuẩn lạc (cfu/g) Ban đầu Sau tuần Sau tuần Sau tuần Sau tuần 0.4% MOS 20 220 320 430 620 0.6% MOS 40 750 1000 1240 1530 0.8% MOS 20 640 900 1080 1290 1% MOS 60 330 550 650 860 ĐC 20 90 140 230 410 0.4% Bio-MOS 50 270 400 540 650 0.6% Bio-MOS 40 380 590 780 960 0.8% Bio-MOS 30 480 650 870 980 Bảng PL 11 Số lượng khuẩn lạc vi khuẩn Anaerobics đường ruột TTCT Thí nghiệm Số lượng khuẩn lạc (*10^3 cfu/g) Ban đầu Sau tuần Sau tuần Sau tuần Sau tuần 0.4% MOS 900 800 750 710 670 0.6% MOS 860 750 700 660 620 0.8% MOS 850 720 680 630 610 1% MOS 870 710 650 610 590 ĐC 880 980 1040 1120 1190 0.4% Bio-MOS 900 870 820 760 700 0.6% Bio-MOS 910 800 750 690 640 0.8% Bio-MOS 890 760 690 650 620 Vũ Kim Dung 89 Luận văn thạc sỹ khoa học Công nghệ sinh học Bảng PL 12 Số lượng khuẩn lạc vi khuẩn Vibrio đường ruột TTCT Thí nghiệm Số lượng khuẩn lạc (*10^5 cfu/g) Ban đầu Sau tuần Sau tuần Sau tuần Sau tuần 0.4% MOS 2690 2560 2420 2290 2150 0.6% MOS 2750 2590 2340 2210 2040 0.8% MOS 2940 2540 2220 2010 1860 1% MOS 2930 2440 2150 1880 1670 ĐC 2730 2950 3260 3390 3570 0.4% Bio-MOS 2730 2600 2530 2360 2110 0.6% Bio-MOS 2660 2460 2350 2230 2010 0.8% Bio-MOS 2650 2420 2310 2120 1930 Bảng PL 13 Số lượng khuẩn lạc vi khuẩn Samonella đường ruột TTCT Thí nghiệm Số lượng khuẩn lạc (cfu/g) Ban đầu Sau tuần Sau tuần Sau tuần Sau tuần 0.4% MOS 0 0 0.6% MOS 0 0 0.8% MOS 0 0 1% MOS 0 0 ĐC 60 60 70 80 0.4% Bio-MOS 0 0 0.6% Bio-MOS 0 0 0.8% Bio-MOS 0 0 Vũ Kim Dung 90 Luận văn thạc sỹ khoa học Công nghệ sinh học Bảng PL 14 Số lượng khuẩn lạc vi khuẩn Clostridium đường ruột TTCT Số lượng khuẩn lạc (cfu/g) Thí nghiệm Ban đầu Sau tuần Sau tuần Sau tuần Sau tuần 0.4% MOS 0 400 230 170 0.6% MOS 0 380 150 90 0.8% MOS 0 340 210 130 1% MOS 0 280 180 160 ĐC 0 500 530 620 0.4% Bio-MOS 0 410 350 270 0.6% Bio-MOS 0 360 310 210 0.8% Bio-MOS 0 400 230 170 Hình PL Hệ thống nuôi yếm khí túi yếm khí Vũ Kim Dung 91 ... tích nuôi tôm thẻ chân trắng ngày tăng lựa chọn đối tượng tôm thẻ chân trắng cho thí nghiệm nghiên cứu ứng dụng MOS làm thức ăn bổ sung nuôi tôm 1.3.2 Tình hình nuôi tôm thẻ chân trắng Tôm thẻ... sản phẩm thức ăn bổ sung, kích thích tôm, cá ăn nhiều Với tác dụng nói trên, chế phẩm MOS sử dụng làm thức ăn bổ sung vào thức ăn cho nhiều loại thủy, hải sản có giá trị kinh tế cao tôm hùm,... MOS sử dụng làm thực phẩm chức sản phẩm dược, thức ăn gia súc, gia cầm thức ăn cho thủy hải sản, Chính tầm quan trọng khả ứng dụng MOS, tiến hành nghiên cứu đề tài: Nghiên cứu ứng dụng Mannooligosaccharide