Hướng dẫn thực hành phòng thử nghiệm tốt khi phân tích dư lượng thuốc bảo vệ thực vật

Hướng dẫn thực hành phòng thử nghiệm tốt khi phân tích dư lượng thuốc bảo vệ thực vậtHướng dẫn thực hành phòng thử nghiệm tốt khi phân tích dư lượng thuốc bảo vệ thực vậtHướng dẫn thực hành phòng thử nghiệm tốt khi phân tích dư lượng thuốc bảo vệ thực vậtHướng dẫn thực hành phòng thử nghiệm tốt khi phân tích dư lượng thuốc bảo vệ thực vậtHướng dẫn thực hành phòng thử nghiệm tốt khi phân tích dư lượng thuốc bảo vệ thực vật

TIÊU CHUẨN VIỆT NAM TCVN 5141 : 2008 HƯỚNG DẪN THỰC HÀNH PHÒNG THỬ NGHIỆM TỐT KHI PHÂN TÍCH DƯ LƯỢNG THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT Guidelines on good laboratory pratice in residue analysis Lời nói đầu TCVN 5141:2008 thay TCVN 5141:1990; TCVN 5141:2008 hoàn toàn tương đương với CAC/GL 40, Rev.1-2003; TCVN 5141:2008 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn TCVN/TC/F 13 Phương pháp phân tích lấy mẫu biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học Công nghệ công bố Lời giới thiệu Tiêu chuẩn nhằm giúp cho việc bảo đảm độ tin cậy kết phân tích kiểm tra tuân thủ giới hạn dư lượng tối đa cho phép thực phẩm lưu thông thương mại quốc tế Các kết phân tích đáng tin cậy có tầm quan trọng việc bảo vệ sức khỏe người tiêu dùng thúc đẩy thương mại quốc tế Ngoài tiêu chuẩn này, có khuyến cáo có liên quan khác Codex Ban Kỹ thuật Codex quốc tế dư lượng thuốc bảo vệ thực vật (CCPR) xây dựng, liên quan đến tính hiệu lực giới hạn tối đa Codex thuốc bảo vệ thực vật (BVTV) sau: Phương pháp lấy mẫu để xác định dư lượng thuốc BVTV (CAC/GL 33-1999, Tập 2A, Phần 1, Xuất lần 2, Rome, 2000) Phần sản phẩm áp dụng Giới hạn tối đa dư lượng thuốc BVTV Codex phân tích (CAC/GL 33-1999, Tập 2A, Phần 1, Xuất lần 2, Rome, 2000) Danh mục Giới hạn tối đa dư lượng thuốc BVTV (Codex Alimentarius, Tập 2, Dư lượng thuốc BVTV thực phẩm, Rome, 1993) Phương pháp phân tích dư lượng thuốc BVTV (CAC/GL 33-1999, Tập 2A, Phần 1, Xuất lần 2, Rome, 2000) Phân loại Codex thực phẩm thức ăn chăn nuôi (Codex Alimentarius, Tập 2, Dư lượng thuốc BVTV thực phẩm, Rome, 1993) HƯỚNG DẪN THỰC HÀNH PHÒNG THỬ NGHIỆM TỐT KHI PHÂN TÍCH DƯ LƯỢNG THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT Guidelines on good laboratory pratice in residue analysis Giới thiệu Trong nhiều vấn đề khác, người ta cho mục tiêu cuối công thương mại quốc tế phụ thuộc vào độ tin cậy kết phân tích Đặc biệt phân tích dư lượng thuốc BVTV, không phụ thuộc sẵn có phương pháp phân tích đáng tin cậy mà phải dựa vào kinh nghiệm cán phân tích tùy thuộc vào việc trì “thực hành tốt phân tích thuốc BVTV” Tiêu chuẩn xác định thực hành phân tích tốt xem xét ba phần có liên quan: Cán phân tích (Phần 2); Các nguồn (Phần 3); Phép phân tích (Phần 4); Các yêu cầu trang thiết bị, quản lý, nhân sự, đảm bảo chất lượng kiểm soát chất lượng, báo cáo kết số liệu thô vấn đề khác có liên quan coi điều kiện tiên để thu kết đáng tin cậy có khả truy nguyên, mô tả chung TCVN/ISO/IEC 17025:2001 hàng loạt tài liệu Hướng dẫn OECD GLP, tương ứng với pháp luật quy định quốc gia hành Hướng dẫn chưa phải hoàn toàn đề cập hết khía cạnh, đưa hầu hết nguyên tắc quy phạm thực hành quan trọng phải tuân thủ phân tích dư lượng thuốc BVTV Cán phân tích 2.1 Phân tích dư lượng bao gồm chuỗi qui trình mà nhà hóa học đào tạo biết đọc phải hiểu được, nồng độ chất phân tích phạm vi từ μg/kg đến mg/kg phép phân tích công việc có nhiều khó khăn nên cần đặc biệt ý đến chi tiết Cán phân tích đảm nhiệm công việc phải có trình độ tay nghề phù hợp phải có kinh nghiệm thành thạo phân tích dư lượng Các nhân viên phải đào tạo đầy đủ có kinh nghiệm để sử dụng xác thiết bị thực thành thạo kỹ phòng thử nghiệm Ngoài ra, cán lần sử dụng phương pháp phải thực đầy đủ phép thử theo qui định 4.4.5 Bảng để chứng minh họ sử dụng phương pháp khuôn khổ thông số thực hành mong muốn đánh giá phê duyệt phương pháp trước phân tích mẫu Họ phải nắm nguyên tắc phân tích dư lượng thuốc BVTV yêu cầu hệ thống Đảm bảo Chất lượng Phân tích (AQA) Họ phải hiểu mục đích giai đoạn phương pháp, tầm quan trọng việc tuân thủ cách xác phương pháp mô tả tầm quan trọng việc thông báo sai lệch tránh khỏi Họ phải đào tạo đánh giá giải thích số liệu mà họ đưa Phải lưu giữ hồ sơ đào tạo kinh nghiệm nhân viên phòng thử nghiệm 2.2 Khi thành lập phòng thử nghiệm phân tích dư lượng thuốc BVTV, nhân viên phải qua thời gian đào tạo học hỏi kinh nghiệm phòng thử nghiệm tốt Nếu phòng thử nghiệm có liên quan đến phân tích phạm vi rộng dư lượng thuốc BVTV, cần đến nhân viên cần tích lũy kinh nghiệm nhiều phòng thử nghiệm chuyên ngành Các nguồn 3.1 Phòng thử nghiệm 3.1.1 Phòng thử nghiệm trang thiết bị phải thiết kế cho phép thực nhiệm vụ khu vực xác định có khả đảm bảo an toàn tối đa giảm thiểu nhiễm bẩn mẫu thử nghiệm Phòng thử nghiệm phải xây dựng, sử dụng vật liệu chịu loại hóa chất sử dụng với chúng Trong điều kiện lý tưởng, cần thiết kế phòng riêng cho việc tiếp nhận bảo quản mẫu, chuẩn bị mẫu, chiết mẫu làm sạch, thiết bị sử dụng bước xác định Khu vực sử dụng để chiết làm phải đáp ứng quy định phòng thử nghiệm dung môi thiết bị hút mùi phải có chất lượng cao Tiếp nhận, bảo quản chuẩn bị mẫu phải thực khu vực dành riêng cho công việc mức dư lượng Việc trì độ nguyên vẹn mẫu quy định đầy đủ an toàn cá nhân yêu cầu ưu tiên 3.1.2 Vấn đề an toàn phòng thử nghiệm phải xem xét cần thiết ưu tiên, phải thừa nhận việc bắt buộc tuân thủ điều kiện làm việc chặt chẽ phòng thử nghiệm dư lượng vài nơi giới điều khó khăn phòng thử nghiệm Không hút thuốc, ăn uống trang điểm khu vực làm việc Chỉ giữ lượng nhỏ dung môi khu vực làm việc dung môi có dung tích lớn phải bảo quản riêng, cách xa khu vực làm việc Cần hạn chế sử dụng dung môi thuốc thử có độc tính cao đến mức thấp Các dung môi thải phải cất giữ an toàn phải tiêu hủy phương pháp an toàn không ảnh hưởng đến môi trường, có xem xét đến quy định cụ thể quốc gia, có 3.1.3 Khu vực làm việc phải thiết kế trang bị để sử dụng phạm vi thích hợp dung môi phân tích Tất thiết bị đèn, máy ngâm tủ lạnh phải “không bắt lửa” “chống nổ” Các công đoạn chiết, làm cô đặc phải thực khu vực thông gió tốt, thích hợp tủ hút 3.1.4 Cần sử dụng lưới an toàn dùng đồ vật thủy tinh điều kiện chân không áp suất Cần có nguồn cung cấp đầy đủ kính an toàn, găng tay quần áo bảo hộ khác, thiết bị tẩy rửa khẩn cấp xử lý chất bị tràn Phải có thiết bị chữa cháy thích hợp Các nhân viên phải nhận thức có nhiều thuốc BVTV có đặc điểm độc tính mãn tính cấp tính, phải đặc biệt ý xử lý hợp chất chuẩn đối chứng 3.2 Thiết bị nguồn cung cấp 3.2.1 Phòng thử nghiệm phải yêu cầu nguồn cung cấp điện, nước đầy đủ đáng tin cậy Nhất thiết phải có nguồn cung cấp thuốc thử, dung môi, khí, đồ dùng thủy tinh, nguyên liệu sắc ký … đầy đủ có chất lượng phù hợp 3.2.2 Thiết bị sắc ký, cân phân tích, máy quang phổ … phải bảo dưỡng, thường xuyên hiệu chuẩn phải trì hồ sơ ghi chép dịch vụ/sửa chữa cho phận thiết bị Quá trình hiệu chuẩn thiếu cho thiết bị thực phép đo Đường hiệu chuẩn so sánh với chất chuẩn phải đầy đủ 3.2.3 Việc hiệu chuẩn tái hiệu chuẩn thường xuyên thiết bị đo phải tiến hành có thay đổi giá trị danh định ảnh hưởng đáng kể đến độ không đảm bảo phép đo Cân phân tích pipet/dụng cụ phân chia tự động thiết bị tương tự phải hiệu chuẩn thường xuyên Nhiệt độ hoạt động loại tủ đông sâu tủ lạnh cân theo dõi liên tục phải kiểm tra đặn sau khoảng thời gian qui định Mọi hồ sơ ghi chép phải lưu giữ cập nhật 3.2.4 Thiết bị sử dụng phải phù hợp với mục đích sử dụng 3.2.5 Tất phòng thử nghiệm yêu cầu chất chuẩn đối chứng thuốc BVTV biết có độ tinh khiết cao mức chấp nhận Chất chuẩn phân tích phải có sẵn hợp chất gốc mà phòng thử nghiệm theo dõi mẫu, chất chuyển hóa đưa vào MRL 3.2.6 Tất chất chuẩn phân tích, dung dịch gốc thuốc thử phải ghi nhãn cách bao gồm ngày chuẩn bị, dấu hiệu nhận biết người phân tích, dung môi sử dụng, điều kiện bảo quản áp dụng, hợp chất mà tính nguyên vẹn chúng bị ảnh hưởng trình phân hủy phải ghi nhãn ngày hết hạn sử dụng bảo quản điều kiện thích hợp Các chất chuẩn đối chứng phải bảo quản điều kiện để giảm thiểu tốc độ suy giảm chất lượng, nhiệt độ thấp, tránh ẩm ánh sáng Cần ý cho dung dịch chuẩn thuốc BVTV không bị hư hỏng ảnh hưởng ánh sáng nhiệt trình bảo quản bị đậm đặc lại dung môi bay Phân tích Các phương pháp áp dụng để xác định dư lượng thuốc BVTV cần phải đáp ứng tiêu chí đưa Bảng 4.1 Tránh nhiễm bẩn 4.1.1 Một vấn đề việc phát triển dư lượng thuốc BVTV khác biệt đáng kể so với phân tích vĩ mô nhiễm bẩn gây nhiễu phân tích Lượng nhiễm bẩn dạng vết mẫu cuối với giai đoạn xác định phương pháp làm tăng sai số chẳng hạn cho kết âm tính dương tính sai làm độ nhạy ngăn cản việc phát dư lượng Sự nhiễm bẩn tăng từ nguyên liệu sử dụng, có liên quan đến lấy mẫu, vận chuyển bảo quản mẫu, phân tích Mọi dụng cụ thủy tinh, thuốc thử, dung môi hữu nước phải kiểm tra khả có chất nhiễm bẩn gây nhiễu trước sử dụng, cách phân tích thuốc thử trắng 4.1.2 Các chất tẩy rửa, kem bảo vệ da, xà phòng chứa chất sát trùng, thuốc xịt côn trùng, nước hoa mỹ phẩm làm tăng nhiễu đặc biệt tăng đáng kể sử dụng detector bắt điện tử Chưa có giải pháp thực cho vấn đề việc cấm nhân viên sử dụng chúng phòng thử nghiệm 4.1.3 Dầu bơi trơn, chất chống thấm, chất dẻo, cao su tự nhiên cao su tổng hợp, găng tay bảo hộ, dầu từ ống khí nén tạp chất sản xuất vòng đệm, giấy lọc gỗ-bìa làm tăng nhiễm bẩn 4.1.4 Thuốc thử hóa học, chất hấp phụ dung môi phòng thử nghiệm nói chung chứa chất hấp thụ hợp chất hấp phụ làm nhiễu phép phân tích Có thể cần phải tinh chế thuốc thử chất hấp phụ nói chung cần sử dụng dung môi chưng cất lại Nước khử ion thường bị nghi ngờ; tốt dùng nước cất lại, nhiều trường hợp nước máy nước giếng đáp ứng yêu cầu 4.1.5 Sự nhiễm bẩn đồ dùng thủy tinh, xyranh cột sắc ký khí tăng lên tiếp xúc với mẫu chất chiết trước Mọi đồ dùng thủy tinh phải làm dung dịch tẩy rửa, tráng kỹ nước cất (hoặc nước sạch) sau tráng lại dung môi sử dụng Dụng cụ thủy tinh sử dụng để phân tích dạng vết phải bảo quản riêng không sử dụng cho mục đích khác 4.1.6 Các chất chuẩn đối chứng thuốc BVTV phải bảo quản nhiệt độ thích hợp phòng riêng biệt với phòng thử nghiệm dư lượng Dung dịch chuẩn phân tích đậm đặc chất chiết không bảo quản khu vực bảo quản 4.1.7 Thiết bị thử nghiệm có chứa polyvinylclorua (PVC) phải coi đồ dùng bị nghi ngờ và, cho thấy nguồn nhiễm bẩn, không phép sử dụng phòng thử nghiệm dư lượng Các nguyên liệu khác có chứa chất dẻo cần xem xét nhiên PTFE cao su silicon thường chấp nhận số chất khác chấp nhận số tình cụ thể Các vật chứa mẫu gây nhiễm bẩn cần sử dụng chai thủy tinh nút mài đậy kín Dụng cụ phân tích phải để phòng riêng biệt Tính chất tầm quan trọng việc nhiễm bẩn khác tùy theo kỹ thuật xác định mức dư lượng thuốc BVTV xác định Ví dụ vấn đề nhiễm bẩn, mà quan trọng với phương pháp dựa vào sắc ký khí sắc ký lỏng hiệu cao, đáng kể áp dụng phương pháp quang phổ, ngược lại Đối với mức dư lượng cao, nhiễu dung môi nguyên liệu khác không đáng kể so với lượng dư lượng có mặt Các vấn đề khắc phục cách sử dụng detector thay Nếu chất nhiễm bẩn không làm nhiễu phép xác định, chấp nhận có mặt 4.1.8 Phân tích dư lượng chất lượng phải có phòng thử nghiệm riêng biệt thực Các mẫu việc chuẩn bị mẫu phải tiến hành độc lập với thao tác phòng thử nghiệm dư lượng để loại trừ nhiễm bẩn chéo 4.2 Tiếp nhận bảo quản mẫu 4.2.1 Mỗi mẫu nhận đưa vào phòng thử nghiệm cần phải có đầy đủ thông tin kèm theo nguồn gốc mẫu, phép phân tích theo yêu cầu mối nguy tiềm ẩn liên quan đến việc xử lý mẫu 4.2.2 Khi nhận mẫu, mẫu thử phải đặt mã nhận biết với suốt giai đoạn phân tích đến báo cáo kết Mẫu phải tuân theo hệ thống thải bỏ thích hợp phải lưu giữ hồ sơ 4.2.3 Xử lý mẫu lấy mẫu cần thực theo quy trình chứng minh để cung cấp phần mẫu phân tích đại diện để không gây ảnh hưởng đến nồng độ dư lượng có mặt 4.2.4 Nếu phân tích mẫu mẫu phải phân tích nhanh, cần bảo quản chúng nhiệt độ oC đến oC, tránh ánh sáng trực tiếp, phân tích vòng vài ngày Tuy nhiên, mẫu nhận dạng đông lạnh sâu phải giữ nhiệt độ ≤ - 16 oC phân tích Trong số trường hợp, cần phải bảo quản mẫu khoảng thời gian dài trước phân tích Trong trường hợp này, nhiệt độ bảo quản phải khoảng -20 oC, phân hủy enzym dư lượng thuốc BVTV thường chậm Nếu cần thời gian bảo quản lâu, cần kiểm tra hiệu trình bảo quản cách phân tích mẫu bổ sung bảo quản điều kiện khoảng thời gian tương tự Thông tin ổn định bảo quản dư lượng thuốc BVTV tìm ấn phẩm hàng năm FAO với tiêu đề: Dư lượng thuốc BVTV – Đánh giá FAO/WHO JMPR chuẩn bị thông tin nhà sản xuất gửi đến để giúp cho việc đăng ký chất BVTV họ 4.2.5 Khi mẫu bảo quản đông lạnh, cần lấy phần mẫu thử để phân tích trước đông lạnh để giảm thiểu ảnh hưởng có phân tách nước thành tinh thể đá bảo quản Phải thận trọng để bảo đảm toàn phần mẫu thử sử dụng phép phân tích 4.2.6 Các vật chứa mẫu không để rò rỉ Vật chứa nắp đậy không gây nhiễm vào nơi bảo quản 4.3 Quy trình thao tác chuẩn (SOPs) 4.3.1 SOPs cần sử dụng thao tác SOPs phải bao gồm hướng dẫn làm việc đầy đủ thực thông tin khả áp dụng, đặc tính mong đợi, kiểm soát chất lượng nội (xác định giá trị đặc tính) cách tính kết Nó cần phải bao gồm thông tin mối nguy xuất từ phương pháp, từ chất chuẩn từ thuốc thử 4.3.2 Bất sai lệch từ SOP phải ghi lại phải người có thẩm quyền phê duyệt 4.4 Đánh giá phê duyệt phương pháp6 4.4.1 Hướng dẫn phải đánh giá phê duyệt quy trình phân tích dành cho mục đích khác Các nguyên tắc mô tả phần xem thực tế thích hợp để đánh giá phê duyệt phương pháp phân tích dư lượng thuốc BVTV Hướng dẫn bắt buộc Người phân tích phải định mức độ đánh giá phê duyệt theo yêu cầu để chứng minh phương pháp phù hợp cho mục đích sử dụng, theo phải đưa liệu cần thiết đánh giá phê duyệt Ví dụ như, yêu cầu kiểm tra tính phù hợp với MRLs cung cấp số liệu để ước tính tiêu thụ khác 4.4.2 Một phương pháp phân tích dãy quy trình từ tiếp nhận mẫu đến có kết cuối Đánh giá phê duyệt phương pháp trình khẳng định phương pháp phù hợp với mục đích sử dụng Phương pháp xây dựng chỗ, lấy từ tư liệu hay cách khác bên thứ ba cung cấp Khi chấp nhận phương pháp sửa đổi để thích hợp với yêu cầu khả phòng thử nghiệm và/ phù hợp với mục đích mà phương pháp áp dụng Điển hình, việc đánh giá phê duyệt phương pháp phải tuân theo đầy đủ việc xây dựng phương pháp với giả định yêu cầu hiệu chuẩn, tính phù hợp hệ thống, tính ổn định phép phân tích… xây dựng thỏa đáng Khi đánh giá sử dụng phương pháp phân tích, thông số đo phải thiết lập giới hạn hiệu chuẩn hệ thống phát Nhìn chung, trình đánh giá phê duyệt phương pháp tiến hành thực nghiệm trước áp dụng phương pháp để phân tích mẫu thử việc kiểm tra tính thực khâu quan trọng tiếp nối trình Yêu cầu liệu kiểm tra tính thực điều khoản yêu cầu để đánh giá phê duyệt phương pháp Kiểm tra độ thành thạo (hoặc quy trình kiểm tra liên phòng thử nghiệm khác), có thể, cung cấp biện pháp quan trọng để khẳng định độ xác chung kết thu thực phương pháp đó, cung cấp thông tin khác biệt kết phòng thử nghiệm Tuy nhiên, kiểm tra độ thành thạo nói chung không đưa tính ổn định phân tích đồng khả chiết chất phân tích mẫu xử lý Khi yêu cầu liệu không đảm bảo, thông tin phải bao gồm số liệu kiểm tra tính thực không dựa số liệu đánh giá phê duyệt phương pháp Phần dựa vào khuyến cáo AOAC/FAO/IAEA hội đàm tổ chức Miskolc, Hungary, năm 1999 Toàn tài liệu có sẵn tại: WWW.iaea.org/trc A Fajgelj & A Ambrus Principles and Practices of Method Validation, Royal Society of Chemistry, 2000 4.4.3 Bất phòng thử nghiệm tiến hành xây dựng phương pháp và/hoặc cải tiến phương pháp, cần xác định hiệu thay đổi phân tích, ví dụ: việc sử dụng phép thử ổn định trước đánh giá phê duyệt phương pháp Cần thực biện pháp kiểm soát nghiêm ngặt liên quan đến yếu tố phương pháp ảnh hưởng đến kết quả, chẳng hạn kích cỡ mẫu thử, dung tích; thay đổi đặc tính hệ thống làm sạch; tính ổn định thuốc thử chất dẫn xuất chuẩn bị; ảnh hưởng ánh sáng, nhiệt độ, dung môi trình bảo quản chất phân tích chiết; ảnh hưởng dung môi, ống tiêm, cột phân tách, đặc tính pha động (thành phần tốc độ dòng chảy), nhiệt độ, hệ thống phát hiện, chất đồng tách chiết… hệ thống xác định Điều quan trọng phải xây dựng cách rõ ràng mối tương quan định tính định lượng dấu hiệu đo chất phân tích tìm thấy 4.4.4 Cần ưu tiên cho phương pháp có khả áp dụng đa dư lượng đa chất Việc sử dụng chất phân tích đại diện chất quan trọng đánh giá phê duyệt phương pháp Vì mục đích này, sản phẩm phải phân biệt đầy đủ không cần thiết Ví dụ, có nhiều sản phẩm có sẵn thị trường với nhiều kiểu sản xuất khác nhau, giống cây, khác Nhìn chung, không thay đổi, biến thể đơn sản phẩm cụ thể xem đại diện cho biến thể khác sản phẩm nhưng, ví dụ như, loại rau đơn lẻ lấy để đại diện cho tất loại rau (Bảng 5) Cần xem xét trường hợp theo giá trị riêng nhiên có biến thể cụ thể phạm vi sản phẩm biết khác với sản phẩm mà ảnh hưởng chúng đến tính phương pháp, cần phân tích biến thể Chênh lệch đáng kể độ độ chụm phương pháp, đặc biệt liên quan đến bước xác định, xuất từ loài sang loài khác 4.4.4.1 Kinh nghiệm cho thấy việc thực tương tự trình chiết làm sản phẩm tương tự/chất mẫu nói chung, chấp nhận biện pháp đơn giản để đánh giá khả thực Một sản phẩm đại diện lựa chọn từ Bảng để đại diện cho nhóm sản phẩm có đặc tính, sử dụng để đánh giá phê duyệt quy trình phương pháp Bảng 5, sản phẩm phân loại theo Phân loại Codex Một số ví dụ việc số liệu đánh giá phê duyệt áp dụng sản phẩm khác như: • ngũ cốc, đánh giá phê duyệt ngũ cốc nguyên hạt áp dụng cho cám bánh mỳ nhiên đánh giá phê duyệt hạt lúa mỳ áp dụng cho hạt lúa mạch bột lúa mỳ • sản phẩm động vật, việc đánh giá phê duyệt thịt đem dùng để áp dụng cho chất béo nội tạng đánh giá phê duyệt chất béo thịt gà áp dụng cho chất béo gia súc; • Hoa rau, đánh giá phê duyệt sản phẩm tươi nguyên dùng để áp dụng cho sản phẩm sấy khô chúng, bắp cải áp dụng cho cải Brussel 4.4.4.2 Tương tự vậy, sử dụng chất phân tích đại diện để đánh giá tính phương pháp Các hợp chất lựa chọn gồm đặc tính lý, hóa chất phân tích để thực phép xác định phương pháp Việc lựa chọn chất phân tích đại diện phải vào mục đích phạm vi áp dụng phép phân tích liên quan đến vấn đề sau: (a) Các chất phân tích đại diện lựa chọn phải: (i) có phạm vi rộng đủ bao trùm đặc tính hóa – lý chất phân tích; (ii) chất phát thường xuyên, vào kết phải đưa định quan trọng chúng Codex Alimentarius, Tập 2, xuất lần Dư lượng thuốc BVTV thực phẩm trang 147 đến 365 FAO, 1993 (b) Càng thực tế tốt, chất phân tích đưa vào trình đánh giá phê duyệt ban đầu phải chất phải kiểm tra thường xuyên xác định đồng thời hệ thống xác định sử dụng (c) Nồng độ chất phân tích sử dụng để đặc trưng cho phương pháp cần lựa chọn để bao gồm giới hạn chấp nhận (AL, xem phần giải thuật ngữ) chất phân tích dự định tìm thấy sản phẩm Do chất phân tích đại diện lựa chọn phải gồm, số chất khác có Als cao thấp Kết là, mức bổ sung sử dụng phép thử đặc tính sản phẩm đại diện/chất phân tích đại diện không cần thiết phải tương ứng với Als thực 4.4.5 Khi có liệu thích hợp, người phân tích không cần phải thực phép thử Tuy nhiên, thông tin yêu cầu phải đưa vào đề cập đến hồ sơ đánh giá Bảng đưa tổng quan thông số đánh giá dành để đánh giá phê duyệt phương pháp theo tình trạng phương pháp xác nhận Các thông số tiêu chí cụ thể đánh giá liệt kê Bảng Cần hạn chế thông số đánh giá đến mức thích hợp phương pháp mục đích mà phương pháp áp dụng Trong nhiều trường hợp, đặc tính thực liên quan đến số thông số thu sử dụng thực nghiệm riêng lẻ Phép thử xây dựng yếu tố khác thay đổi thời điểm (mục đích thực nghiệm thực tế), giúp giảm thiểu nguồn cần thiết Tính thực phương pháp phân tích cần kiểm tra, suốt trình xây dựng trình sử dụng tiếp sau 4.5, theo tiêu chí cho Bảng 4.4.6 Các phương pháp riêng lẻ (dư lượng đơn) cần đánh giá đầy đủ với chất phân tích nguyên liệu mẫu theo mục đích, sử dụng chất mẫu đại diện cho chất phân tích phòng thử nghiệm 4.4.7 Các phương pháp nhóm đặc thù (GSM) cần đánh giá bước đầu với nhiều sản phẩm đại diện tối thiểu hai chất phân tích đại diện lựa chọn từ nhóm 4.4.8 MRMs đánh giá phê duyệt với sản phẩm đại diện chất phân tích đại diện 4.5 Kiểm tra tính thực 4.5.1 Mục đích việc kiểm tra tính thực là: • Theo dõi việc thực phương pháp điều kiện thực sử dụng phương pháp đó; • Cần lưu ý đến ảnh hưởng thay đổi tránh khỏi gây bởi, ví dụ như: thành phần mẫu, đặc tính dụng cụ, chất lượng hóa chất, thay đổi việc thực cán phân tích điều kiện môi trường phòng thử nghiệm; • Chứng tỏ đặc tính thực phương pháp nhìn chung tương tự với đặc tính xây dựng đánh giá phê duyệt phương pháp, cho thấy phương pháp “kiểm soát thống kê”, độ xác độ không đảm bảo kết so sánh với độ xác độ không đảm bảo mong đợi phương pháp Vì mục đích này, số liệu thu đánh giá phê duyệt phương pháp cập nhật theo liệu thu từ việc kiểm tra tính thực trình sử dụng phương pháp thường xuyên Kết việc kiểm tra chất lượng nội cung cấp thông tin cần thiết độ tái lặp dài hạn đặc điểm thực khác phương pháp bao gồm chất phân tích sản phẩm phối hợp trình mở rộng phương pháp Các đặc tính thực kiểm tra quy trình thử thích hợp mô tả Bảng Để đánh giá phê duyệt có hiệu quả, phân tích mẫu đồng thời với phép phân tích kiểm soát chất lượng thích hợp (phép xác định trắng xác định độ thu hồi, nguyên liệu đối chứng…) Biểu đồ kiểm soát sử dụng để kiểm tra chiều hướng thực phương pháp để bảo đảm trì biện pháp kiểm tra thống kê 4.5.2 Xây dựng sử dụng biểu đồ kiểm soát 4.5.2.1 Biểu đồ kiểm soát công cụ có tác dụng để chứng minh khả thực phương pháp độ tái lặp thông số lựa chọn Một ví dụ biểu đồ kiểm soát độ thu hồi Việc áp dụng tùy thuộc vào nhiệm vụ phòng thử nghiệm Khi có số lượng lớn loại mẫu phân tích cho thành phần có hoạt tính biểu đồ kiểm soát vào độ thu hồi trung bình sai lệch chuẩn thu trình sử dụng phương pháp thường xuyên Khi có lượng nhỏ loại lớn mẫu phân tích cho lượng lớn chất phân tích quy trình đa dư lượng biểu đồ kiểm soát áp dụng theo cách Trong trường hợp này, trước tiên xây dựng biểu đồ kiểm soát theo độ thu hồi trung bình (Q) chất phân tích đại diện chất đại diện điển hình hệ số biến thiên (CVAlyp) độ tái lặp phòng thử nghiệm, thu mô tả Khi số liệu độ thu hồi trung bình hệ số biến thiên chúng thu đánh giá phê duyệt phương pháp chất phân tích/chất mẫu đơn lẻ không khác biệt thống kê, xem ước tính độ thu hồi độ chụm thực tế phương pháp, với kết hợp thích hợp chúng, độ thu hồi điển hình (Q lyp) hệ số biến thiên (CVAlyp) phương pháp thiết lập sử dụng để xây dựng biểu đồ kiểm soát ban đầu Giới hạn cảnh báo giới hạn tác dụng Qtyp ± * CVAtyp Qtyp ± * CVAtyp * Q 4.5.2.2 Khi phương pháp áp dụng để phân tích thường xuyên chất phân tích đa dạng/phức chất đại diện đánh giá phê duyệt phương pháp, độ thu hồi đơn lẻ đánh dấu biểu đồ Độ tái lặp phương pháp sử dụng bình thường cao độ tái lặp thu đánh giá phê duyệt phương pháp Do vậy, có vài độ thu hồi nằm giới hạn cảnh báo nằm giới hạn tác động, chúng lại nằm phạm vi tính từ giá trị CV A quy định Bảng 3, không cần thiết phải có tác động đặc biệt 4.5.2.3 Căn vào 15 đến 20 phép thử thu hồi bổ sung tiến hành sử dụng thường xuyên phương pháp này, phần việc kiểm tra tính thực hiện, độ thu hồi trung bình độ thu hồi điển hình CVA phải tính lại biểu đồ kiểm soát xây dựng phản ánh độ tái lặp thời hạn dài áp dụng phương pháp Các thông số thiết lập phải nằm phạm vi chấp nhận quy định Bảng 4.5.2.4 Nếu đạt được, ví dụ trường hợp chất phân tích có tính đặc thù, kết từ mẫu phải báo cáo độ xác độ chụm thấp so với xác định dư lượng thuốc BVTV thông thường 4.5.2.5 Khi sử dụng phương pháp thường xuyên, giá trị trung bình ≥ 10 phép thử thu hồi chất phân tích đặc thù/chất mẫu sai khác đáng kể (P = 0,05) so với độ thu hồi trung bình thu chất phân tích đại diện/chất mẫu, Q typ CVtyp áp dụng Tính toán giới hạn cảnh báo giới hạn tác động cho chất phân tích đặc thù/chất mẫu, áp dụng độ thu hồi trung bình giá trị CV đo 4.5.2.6 Nếu liệu kiểm tra xác nhận đặc tính nằm giới hạn cảnh báo (1 20 thông số đo nằm giới hạn chấp nhận được), cần kiểm tra điều kiện áp dụng phương pháp, nguồn sai số cần nhận biết, hành động khắc phục cần thiết trước sử dụng phương pháp 4.5.2.7 Nếu liệu kiểm tra tính thực nằm giới hạn tác động xác định theo phần từ 4.5.2.1 đến 4.5.2.3, mẻ phân tích liên quan (hoặc mẫu mà dư lượng tìm thấy ≥ 0,7 AL 0,5 AL tương ứng, chất phân tích phát thường xuyên thỉnh thoảng) cần lặp lại 4.5.2.8 Phân tích lại phần chất phân tích mẫu dương tính viện pháp có hiệu lực khác việc kiểm tra tính thực Kết chúng sử dụng để tính toán độ tái lặp tổng thể phòng thử nghiệm phương pháp (CV Ltyp) nói chung chất phân tích đặc thù/chất mẫu Trong trường hợp đó, CV Ltyp bao gồm độ không bảo đảm trình chế biến mẫu, không chất phân tích bị hao hụt trình 4.6 Phép thử khẳng định 4.6.1 Khi phép phân tích thực nhằm mục đích theo dõi để thực hiện, đặc biệt quan trọng chỗ liệu khẳng định thu trước báo cáo mẫu có chứa dư lượng thuốc BVTV mà không thường kèm với sản phẩm, MRLs xem vượt mức Các mẫu có chứa hóa chất gây nhiễu mà bị xác nhận sai thuốc BVTV Các ví dụ phép sắc ký khí gồm đáp ứng detector bắt giữ điện tử với este phtalat detector chọn lọc phospho hợp chất có chứa sulphua nitơ Vì bước đầu tiên, nên cần lặp lại phép phân tích sử dụng phương pháp, có phần mẫu thực phân tích Nó tạo chứng độ lặp lại kết quả, dư lượng khẳng định Cần lưu ý tạo chứng hỗ trợ cho mặt dư lượng phát số liệu kiểm tra tính thực 4.6.2 Phép thử khẳng định định tính và/hoặc định lượng nhưng, hầu hết trường hợp, cần phải có hai loại thông tin Các vấn đề cụ thể xuất dư lượng cần khẳng định giới hạn xác định, khó xác định số lượng dư lượng mức này, thiết phải khẳng định đầy đủ mức nhận biết 4.6.3 Nhu cầu cần có phép thử khẳng định tùy thuộc vào loại mẫu lịch sử biết Trong số nông sản nhóm sản phẩm, thường tìm thấy dư lượng Với dãy mẫu có nguồn gốc tương tự, mà có chứa dư lượng loại thuốc BVTV, đủ để khẳng định loại dư lượng với phần nhỏ mẫu chọn ngẫu nhiên Tương tự vậy, biết loại thuốc BVTV cụ thể dùng cho mẫu không cần phải khẳng định loại dư lượng, kết lựa chọn ngẫu nhiên phải khẳng định Khi có sẵn mẫu “trắng”, mẫu phải sử dụng để kiểm tra xuất chất gây nhiễu có 4.6.4 Tùy thuộc vào kỹ thuật xác định ban đầu, quy trình thay kỹ thuật phát khác, cần thiết để định lượng Đối với việc khẳng định định tính (nhận biết) việc sử dụng số liệu khối phổ, kết hợp kỹ thuật dựa đặc tính hóa – lý khác nhau, cần thiết (xem Bảng 6) 4.6.5 Các bước cần thiết để xác nhận dương tính vấn đề cần điều chỉnh theo người phân tích phải đặc biệt ý đến việc chọn phương pháp để giảm thiểu ảnh hưởng hợp chất gây nhiễu Kỹ thuật chọn tùy thuộc vào dụng cụ thích hợp có sẵn kỹ phòng thử nghiệm Một số quy trình thay để khẳng định đươc đưa Bảng 4.7 Phổ khối 4.7.1 Số liệu dư lượng thu sử dụng phổ khối đại diện cho hầu hết chứng xác định có thiết bị thích hợp, kỹ thuật khẳng định lựa chọn Kỹ thuật sử dụng cho mục đích sàng lọc dư lượng Phép xác định dư lượng phổ khối thường tiến hành với kỹ thuật phân tách sắc ký để có thời gian lưu, tỷ số khối lượng ion/điện tích đồng thời số liệu nhiều ion Kỹ thuật phân tách cụ thể, máy đo phổ khối, giao diện chúng phạm vi thuốc BVTV phân tích thường phụ thuộc lẫn kết hợp đơn lẻ thích hợp để phân tích tất hợp chất Việc chuyển định lượng chất phân tích không bền qua hệ thống sắc ký mặt phân cách thường tạo vấn đề tương tự với detector khác Sự khẳng định chắn có mặt dư lượng thu toàn phổ khối ion hóa tác động lên electron (trong thực tế nói chung từ m/z50 đến vượt qua vùng ion phân tử) Sự xuất nhiều ion liên quan phổ việc mặt ion gây nhiễu đánh giá quan trọng khẳng định loại dư lượng Kiểu phân tích cách lựa chọn cần phải tuyệt đối tránh nhiễu từ chất nhiễm bẩn tạo chuẩn bị bảo quản chất chiết Hệ thống liệu máy đo phổ khối cho phép dấu hiệu gây nhiễu ẩn (như cột khuyếch tán), loại bỏ “chiết xuất nền” kỹ thuật phải thận trọng sử dụng Thường tăng độ nhạy biện pháp quét giới hạn khối hạn chế việc theo dõi ion chọn, số lượng ion theo dõi nhỏ (đặc biệt chúng có khối lượng thấp), số liệu tạo xác Phép khẳng định bổ sung định tính thu (i) việc sử dụng cột sắc ký thay thế; (ii) việc sử dụng kỹ thuật ion hóa thay (như ion hóa hóa học); (iii) việc theo dõi sản phẩm phản ứng ion chọn quang phổ khối kép (MS/MS MS”); cách theo dõi ion chọn độ phân giải khối tăng Khi định lượng, ion theo dõi cần phải ion đặc thù chất phân tích, phải chất gây nhiễu tạo tỷ lệ tín hiệu nhiễu tốt Phép xác định quang phổ khối cần đáp ứng tiêu chí kiểm soát chất lượng phân tích tương tự tiêu chí áp dụng cho hệ thống khác 4.7.2 Khẳng định dư lượng phát việc phân tách HPLC nhìn chung khó so với sử dụng sắc ký khí Nếu trình phát hấp thụ UV, việc tạo phổ toàn diện đưa chứng tốt loại dư lượng Tuy nhiên, phổ UV vài loại thuốc BVTV thường khó phát được, tương tự phổ tạo nhiều hợp chất khác có nhóm chức cấu trúc tương tự, việc hòa tan hợp chất gây nhiễu gây vấn đề phụ khác Số liệu hấp thụ UV tạo bước sóng hỗn hợp hỗ trợ bác bỏ việc xác nhận, nhiên nhìn chung, chúng chưa tự có đặc trưng đầy đủ Số liệu huỳnh quang sử dụng để hỗ trợ cho liệu thu việc hấp thụ UV LC-MS cung cấp chứng hỗ trợ tốt nhiên, phổ tạo nhìn chung đơn giản cho thấy giải đặc tính, nên kết tạo từ LC-MS gần chưa xác định LC-MS/MS kỹ thuật có nhiều hiệu hơn, kết hợp tính chọn lọc với tính đặc thù, thường cho chứng tốt tính đồng Kỹ thuật LC-MS nhằm tới hiệu ứng chất nền, đặc biệt ức chế, việc khẳng định định lượng cần phải sử dụng thêm chất chuẩn sử dụng chất chuẩn đồng vị đánh dấu Có thể sử dụng dẫn xuất để khẳng định dư lượng phát HPLC (đoạn 4.6.5.4) 4.7.3 Trong số trường hợp, việc khẳng định kết sắc ký khí đạt dễ dàng TLC Phép xác nhận vào hai tiêu chí, giá trị Rf phản ứng hình ảnh Phương pháp phát dựa phản ứng sinh học (như enzym - ức chế hạt diệp lục ức chế nấm) đặc biệt thích hợp với phép khẳng định định tính chúng đặc thù loại hợp chất định, độ nhạy thường bị ảnh hưởng chất đồng chiết Có nhiều tài liệu khoa học tham khảo kỹ thuật này, Báo cáo IUPAC thuốc BVTV (13) (Báotara, V., Victorovic, S.Y., Thier, H.-P Klisenco, M.A.; Pure & Appl.Chem., 53, 1039-1049 (1981)) sử dụng hướng dẫn thuận tiện Tuy nhiên, việc phân tích định tính sắc ký lớp mỏng bị hạn chế Sự mở rộng tiếp kỹ thuật liên quan đến việc loại bỏ vùng đĩa tương ứng với Rf chất có liên quan việc rửa giải từ nguyên liệu lớp phép phân tích khẳng định hóa học vật lý Một dung dịch thuốc BVTV chuẩn cần chấm thường xuyên lên đĩa dọc theo chất chiết mẫu để loại bỏ vấn đề độ không lặp lại Rf Việc chấm nhiều chất chiết thuốc BVTV chuẩn cho kết có lợi Lợi ích phép đo sắc ký lớp mỏng tiến hành nhanh, chi phí thấp có khả áp dụng cho nguyên liệu nhạy cảm với nhiệt; hạn chế bao gồm (thông thường) độ nhạy thấp lực phân tách thấp so với kỹ thuật phát sắc ký dụng cụ cần có mức độ làm hiệu trường hợp phát dựa phản ứng màu hóa chất 4.8 Dẫn xuất Lĩnh vực khẳng định xem xét theo tiêu đề lớn sau: (a) Các phản ứng hóa học Các phản ứng hóa học phạm vi nhỏ dẫn đến sản phẩm thuốc BVTV phân hủy, bổ sung ngưng tụ, sau việc kiểm tra lại sản phẩm kỹ thuật sắc ký, phải sử dụng thường xuyên Các phản ứng tạo sản phẩm có thời gian lưu khác và/hoặc độ nhạy detector với phản ứng hợp chất gốc Một mẫu thuốc BVTV chuẩn cần xử lý với nghi ngờ dư lượng cho kết mẫu so sánh trực tiếp Một chất chiết bổ sung cần đưa vào để chứng minh phản ứng tiến hành có mặt nguyên liệu mẫu Độ nhiễu xuất chất dẫn xuất phát đặc điểm thuốc thử dẫn xuất Một đánh giá tổng quan phản ứng hóa học sử dụng cho mục đích khẳng định Cochrane, W.P công bố (Dẫn xuất hóa học phân tích thuốc BVTV, ấn Plenum, NY (1981)) Các phản ứng hóa học có lợi ích tiến hành nhanh dễ thực hiện, nhiên thuốc thử chuyên ngành cần phải mua /hoặc tinh chế pháp này, thông tin chưa cung cấp với phương pháp ấn bản, nhận Cần tiến hành hoạt động thay sau phương pháp sử dụng phòng thử nghiệm 3.2 Tính ổn định chất phân tích chất chiết dung dịch chuẩn Xem 1.10 Xem 1.1 Xem 1.1 Xem 1.1 Phép thử bị hủy cung cấp đầy đủ thông tin tính ổn định chất phân tích với phương pháp phương pháp thay phương pháp sử dụng trước chất phân tích thông tin tính ổn định phương pháp trước có 3.3 Hàm số hiệu chuẩn, hiệu ứng chất LCL đến (3) lần AL Thử hàm số đáp ứng chất phân tích đại diện đưa vào phương pháp ≥ mức chất phân tích cộng với mẫu trắng Đối với độ nhạy không tuyến tính, xác định cường độ nhạy ≥ mức ≥ phép thử kép Đối với hiệu chuẩn tuyến tính: hệ số hồi qui, dung dịch chuẩn phân tích (r) ≥ 0,99 SD dư lượng tương ứng (Sy/x) ≤ 0,1 Đối với hiệu chuẩn tuyến tính: hệ số hồi qui (r) ≥ 0,98 SD dư lượng tương ứng (Sy/x) ≤ 0,2 Xem 1.2 Thử hiệu ứng chất với chất phân tích đại diện chất đại diện Đối với hàm số đa thức (r) ≥0,98 Phân tích chất phân tích đại diện/kết hợp chất ≥ phần mẫu phân tích cho mẫu trắng spiked AL phần mẫu gây nhiễu mức AL Độ thu hồi trung bình CVA phải khoảng dải Bảng 3.4 Độ xác độ chụm dải phân tích, giới hạn phát hiện, Chất chiết mẫu trắng AL Các phép thử độ thu hồi cần Đối với hàm số đa thức (r) ≥0,95 Tất độ thu hồi phát LCL Các nguyên liệu chuẩn mức AL: chất phân tích phát Xem ý kiến góp ý 1.3 giới hạn định lượng 3.5 Đặc tính tính chọn lọc phép phát chất phân tích phân công cho người phân tích, người mà sử dụng phương pháp, dụng cụ mức AL Kiểm tra đặc tính thực detectơ sử dụng so sánh chúng với detectơ quy định phương pháp Kiểm tra độ nhạy mẫu trắng sản phẩm đại diện, nói cách khác tiến hành phép thử mô tả phần 1.4 Độ nhạy đo chất phân tích Tính thực detectơ (độ nhạy độ chọn lọc) phải tương đương tốt so với detectơ quy định phương pháp Xem 1.4 Tỉ số mẫu âm tính sai (sai số) mức AL điển hình < 5% CVsp < 15% 3.6 “Tính đồng nhất” chất phân tích khoảng AL dư lượng dễ dàng phát Tiến hành thử hai sản phẩm đại diện có chất khác CVsp < 10% 3.7 Tính ổn định chất phân tích chất chiết dung dịch Xem 1.1 Xem 1.1 Xem 1.1 Độ nhạy tương ứng detectơ qui định liên tiếp thay đổi tùy theo model Kiểm tra đặc tính phép phát quan trọng để thu kết đáng tin cậy So sánh độ nhạy mẫu trắng quan sát với pic điển hình báo cáo lại chất chiết mẫu trắng Xem ý kiến góp ý khác 1.4 Đối với phương pháp sàng lọc, mong muốn tiến hành phép thử phần mẫu dư lượng mong muốn mức cao (ví vỏ bưởi) việc đạt tính đồng không cần thiết Xem 1.1 Tiến hành phép thử để khẳng định tính tương đồng áp dụng điều kiện khả áp dụng thông số thu việc xác nhận giá trị sử dụng phương pháp phòng thử nghiệm Khi kết thử tương tự CVsp báo cáo, điều kiện xử lý mẫu xem xét tương đương phép thử không cần đánh giá phê duyệt phương pháp Có thể hủy phép thử cung cấp đầy đủ thông tin tính ổn định chất phân tích với phương pháp phương pháp thay cho phương pháp sử dụng trước chất phân tích chuẩn phương pháp có thông tin đầy đủ tính ổn định Bảng – Phạm vi tiêu chí đánh giá phê duyệt phương pháp phòng thử nghiệm để phân tích dư lượng thuốc BVTV Độ lặp lại Độ tái lặp Độ Nồng độ CVA%3 CVL%4 CVA%3 CVL%4 Dải giá trị trung bình % độ thu hồi ≤ μg/kg 35 36 53 54 50 đến 120 > μg/kg ≤ 0,01 mg/kg 30 32 45 46 60 đến 120 > 0,01 μg/kg ≤ 0,1 mg/kg 20 22 32 34 70 đến 120 > 0,1 mg/kg ≤ mg/kg 15 18 23 25 70 đến 110 > mg/kg 10 14 16 19 70 đến 110 Với phương pháp đa dư lượng, có chất phân tích xác định mà tiêu chí thực định lượng chúng đáp ứng nghiêm ngặt Khả chấp nhận số liệu có điều kiện tùy thuộc vào mục đích phép phân tích kiểm tra tính phù hợp MRL tiêu chí đặt cần đáp ứng đủ nhiều tốt kỹ thuật, liệu thấp MRL chấp nhận với độ không đảm bảo cao Dải độ thu hồi chất thích hợp với phương pháp dư lượng đa Có thể cần có tiêu chí chặt chẽ số mục đích phương pháp cho chất phân tích đơn dư lượng thuốc thú y (Xem Codex tập 3, 1996); CVA: Hệ số biến thiên phép phân tích loại trừ trình xử lý mẫu Thông số ước tính từ phép thử thực với nguyên liệu đối chứng phần chất phân tích điều chỉnh trước chiết Một nguyên liệu đối chứng chuẩn bị phòng thử nghiệm sử dụng nguyên liệu đối chứng công nhận CVL: Hệ số biến thiên tổng thể kết thử nghiệm, gồm tới 10% tính thay đổi dư lượng phần chất phân tích (CV sp) CHÚ THÍCH: Mức độ thay đổi dư lượng chất phân tích tính từ độ bất định việc phần mẫu lặp lại (CV L) có chứa dư lượng: CVL2 = CVsp2 + CVA2 Bảng – Yêu cầu việc xác nhận đặc tính Thông số Mức Số phép phân tích loại phép thử yêu cầu Tiêu chí Phương pháp định lượng Ý kiến góp ý Phương pháp sàng lọc Kiểm soát chất lượng (xác nhận đặc tính) 4.1 Phương pháp sử dụng hàng ngày 4.1.1 Tính phù hợp hóa chất, thuốc thử chất hấp thụ Đối với mẻ mới: Thử thuốc thử trắng, khả áp dụng thuốc thử chất hấp thụ (chất hấp phụ) Thực dẫn xuất mà mẫu Số hiệu phản ứng nhiễu ≥ 0.3 LCL Số hiệu phản ứng nhiễu ≥ 0,5 LCL Bằng cách khác, mẫu trắng, trình hiệu chuẩn độ thu hồi thỏa mãn tính phù hợp thuốc thử… khẳng định 4.1.2 Hiệu chuẩn phạm vi phân tích Việc hiệu chuẩn điểm đơn lẻ sử dụng với hỗn hợp chất chuẩn, điểm chặn hàm số hiệu chuẩn gần Áp dụng trình hiệu chuẩn đa điểm (3 x 2) để khẳng định định lượng Mẻ phân tích xem xét kiểm soát thống kê chất chuẩn phân tích chất chiết mẫu luân phiên bơm vào, SD dư lượng tương đối tính ≤ 0,1 Chất phân tích phát LCL Dung dịch chuẩn mẫu cần luân phiên bơm vào Dùng với chất bơm chuẩn thích hợp tiết kiệm thời gian thay cho việc hiệu chuẩn đa điểm đặc biệt sẵn lấy mẫu tự động Vì độ cảm ứng hệ thống thường thay đổi nên việc hiệu chuẩn đa điểm phải thực thường xuyên để khẳng định điểm chặn gần Hiệu chuẩn đa điểm không cần thiết để khẳng định định lượng chất hiệu chuẩn gần với nồng độ mẫu 4.1.3 Độ xác độ chụm Trong phạm vi phân tích Đưa vào mẻ phân tích ≥ mẫu có bổ sung hỗn hợp chuẩn, phân tích lại phần giống Đặc tính thực detetor cột sắc ký phải tốt đặc tính detector quy định phương pháp Bổ sung phần phân tích hỗn hợp chuẩn Thay hỗn hợp chuẩn mẻ khác để thu độ thu hồi mẫu dương tính Tốt độ thu hồi cần nằm giới hạn cảnh báo biểu đồ kiểm soát xây dựng theo phần 4.5.2 Trên đường chạy dài 20 mẫu 100 mẫu nằm giới hạn cảnh báo giới hạn tác dụng Mẻ phân tích cần lặp lại có độ thu hồi nằm giới hạn tác dụng, kết phép phân tích lặp lại mẫu dương tính vượt giới hạn tới hạn Cmax – Cmin > 2,8 CVLtypQ Q dư lượng trung bình thu từ phép đo mẫu kép CVLtyp thông số đo độ tái lặp phòng thử nghiệm, mà bao gồm độ không đảm bảo kết hợp chế biến phân tích mẫu chất phân tích liên quan với khoảng thời gian đặn Tiến hành luân phiên nghiên cứu độ thu hồi AL LCL lần AL, cần, để khẳng định khả áp dụng phương pháp dải phân tích Tần suất nghiên cứu độ thu hồi AL cần phải cao từ đến lần độ thu hồi chúng mức khác Phân tích lặp lại mẫu dương tính thay cho phép thử độ thu hồi mẻ đặc thù Đối với MRM, chuẩn bị hỗn hợp chuẩn đặc thù sản phẩm/mẫu từ chất phân tích mà xuất mẫu đặc thù Việc lựa chọn chất phân tích cho hỗn hợp cần bảo đảm trình phân tách/phát chọn lọc mà khó khăn Đối với việc xác định tạm thời: chuẩn bị mẻ phân tích có chứa hỗn hợp thử phát thích hợp, mẫu Đối với phép xác định/khẳng định định lượng, đưa vào mẻ phân tích hỗn hợp thử phát hiện, số lượng hỗn hợp hiệu chuẩn thích hợp, mẫu trắng bổ sung, mẫu dương tính lặp lại mẫu dương tính Lần lượt bơm chất chuẩn mẫu vào 4.1.4 Tính Đưa hỗn hợp Rs, T1 hợp Tính Đôi nên đề cập chọn lọc trình phân tách, tính đặc thù trình phát hiện, tính thực detector thử phát thích hợp vào mẻ sắc ký Đưa sản phẩm chưa xử lý (nếu có) vào mẻ phân tích Dùng chất bổ sung chuẩn có sẵn mẫu chưa xử lý (tương tự với chất phân tích mẻ) Khẳng định tính đồng định tính chất phân tích xuất ≥ 0,7 AL 4.1.5 Tính đồng chất phân tích mẫu xử lý 4.1.6 Hiệu chiết mức nồng độ chất phân tích dễ dàng phát Lựa chọn ngẫu nhiên mẫu dương tính Lặp lại phép phân tích hai phần mẫu phân tích khác chất thử, RRF δ trình phát cần nằm dải quy định Mức giữ lại tương ứng cần nằm khoảng 2% phép xác định GLC 5% phép xác định HPLC Tính thực detector cần nằm dải qui định Chất chiết mẫu gây nhiễu chất phân tích có mặt không ≥ 0,3 LCL Độ thu hồi chất chuẩn bổ sung cần nằm dải độ thu hồi chấp nhận chất phân tích thực detector cần nằm dải quy định Chất phân tích phải thấy LCL CC hợp chất bị cấm sử dụng Các dư lượng đo hai ngày khác cần nằm giới hạn độ tái lặp phần mẫu phân tích lặp lại: Cmax – Cmin ≤ 2,8 * CVLtypQ Q dư lượng trung bình thu từ phép đo lặp lại, CVLtyp độ không đảm bảo kết hợp việc xử lý mẫu phân tích mẫu thu kiểm tra phương pháp đến phép thử “tính phù hợp hệ thống” Chuẩn bị hỗn hợp thử phát cho phương pháp phát Lựa chọn thành phần hỗn hợp thấy thông số đặc trưng phân tách phát sắc ký Điều chỉnh số liệu RRt hợp chất hỗn hợp thử phát chất phân tích sử dụng cho trình hiệu chuẩn Xác định RRF đặc thù hệ thống phát Tiến hành khẳng định định lượng chất chuẩn phân tích chuẩn bị chất chiết trắng hiệu ứng chất đáng kể Tiến hành thay phép thử bao gồm sản phẩm phân tích Thử tính đồng thời điểm bắt đầu hong khô, giai đoạn đầu phép phân tích loại mẫu cho Các kết chấp nhận phép thử khẳng định độ tái lặp phép phân tích (CVA) phù hợp Hiệu trình chiết không kiểm soát phân tích Để đảm bảo hiệu chiết thích hợp, cần thực quy trình chiết xác nhận giá trị sử dụng mà thay đổi 4.1.7 Quá trình phân tích Các mẫu, chất chiết… không bảo quản lâu so với khoảng thời gian mà theo tính ổn định bảo quản thử nghiệm xác nhận giá trị sử dụng phương pháp Cần theo dõi điều kiện bảo quản ghi chép thường xuyên Các ví dụ việc cần có phép thử bổ sung tính ổn định bảo quản đưa Bảng 4.2 Các chất phân tích phát không thường xuyên Các phép thử sau mô tả 4.1 với loại trừ đây: 4.2.1 Độ xác độ chụm Ở xung quanh AL Phân tích lại phần mẫu phân tích khác; Sử dụng bổ sung chất chuẩn mức chất phân tích đo Các dư lượng đo ngày khác cần nằm dải tới hạn: Kiểm tra độ xác dư lượng tìm thấy ≥0,5 AL Cmax – Cmin ≤ 2,8 *CVLtypQ Q dư lượng trung bình thu từ phép đo lặp lại CVLtyp thu trình xác nhận giá trị sử dụng phương pháp Độ thu hồi sau bổ sung chất chuẩn phải nằm giới hạn tác dụng 4.3 Các phương pháp sử dụng khoảng thời gian không Các phương pháp thử sau mô tả 4.1 với loại trừ đây: 4.3.1 Độ xác độ chụm (độ lặp lại) Tại AL LCL Đưa mẫu bổ sung LCL hai mẫu AL vào mẻ phân tích Bổ sung chất chuẩn sẵn mẫu chưa xử lý (tương tự chất phân tích mẻ) Thực phân tích với ≥ phần mẫu phân tích Hai độ thu hồi tối thiểu phải giới hạn cảnh báo, độ thu hồi giới hạn tác dụng Các dư lượng đo phần mẫu lặp lại cần nằm dải tiêu chí: Cmax – Cmin ≤ 2,8 *CVLtypQ Cmax – Cmin ≤ f(n)*CVLtypQ Q dư lượng trung bình thuốc thu từ phép đo lặp lại, CVLtyp thu phê chuẩn phương pháp, f(n) hệ số để tính dải lớn tùy thuộc vào số lượng mẫu lặp lại Các kết chấp nhận chứng minh tính phù hợp hóa chất, chất hấp thụ thuốc thử sử dụng Khẳng định dư lượng 0,5 AL Nếu tiêu chí thực không đáp ứng, cần lặp lại phương pháp đặc tính thực (Q, CVAtyp , CVLtyp) thiết lập lại trình xác nhận giá trị sử dụng phần phương pháp 4.4 Sự thay đổi thực phương pháp Sự thay đổi Các thông số thử nghiệm Đối với phương pháp thử tiêu chí có khả chấp nhận Xem phần thích hợp Phụ lục 4.4.1 Cột sắc ký Phép thử tính chọn lọc trình phân tách, Không làm ảnh hưởng đến đặc tính thực Sử dụng hỗn hợp thử thích hợp để thu phân giải, tính trơ, giá trị RRt thông tin thực cột 4.4.2 Thiết bị để xử lý mẫu Tính đồng mẫu xử lý; Tính ổn định chất phân tích Phép thử mô tả 1.6 1.7 phải thực chúng phải cho kết phù hợp với tiêu chí tương ứng… Phép thử tính đồng cần thiết mức độ nghiền và/hoặc trộn thấp với mức thiết bị gốc Tính ổn định chất phân tích cần kiểm tra thời gian nhiệt độ xử lý tăng đáng kể 4.4.3 Thiết bị chiết So sánh mức dư lượng bị nhiễm phát thiết bị cũ ≥ mẫu lặp lại Các dư lượng trung bình không khác đáng kể p = 0,05 Phép thử cần thiết sử dụng loại thiết bị 4.4.4 Phát Kiểm tra tính chọn lọc trình phân tách tính chọn lọc độ nhạy phép phát Các đặc tính thực phải tương tự quy định cụ thể mô tả phương pháp Phép thử phát cách riêng rẽ thuốc thử phát 4.4.5 Người phân tích ≥ phép thử độ thu hồi mức (LCL, AL (3) AL), phân tích lại mẫu trắng mẫu dương tính (không để người phân tích biết) Mọi kết phải nằm giới hạn cảnh báo quy định cho phương pháp phòng thử nghiệm Đây yêu cầu tối thiểu Các phòng thử nghiệm lĩnh vực dư lượng sử dụng biên chi tiết gồm (1) Khái quát đường chuẩn phạm vi tiêu chí có khả chấp nhận được; (2) tối thiểu đường phân tích cho chất nền, có chất phân tích đại diện bổ sung thêm người phân tích tối thiểu mức kép, (3) tối thiểu đường phân tích có mẫu bổ sung mẫu bị nhiễm, mức kép, người phân tích Mọi kết phải thỏa mãn tiêu chí chấp nhận được, phải lặp lại Độ xác độ chụm ≥ phép thử độ thu hồi mức (LCL, AL (3) AL) người phân tích khác thực vào Tất kết phải nằm giới hạn cảnh báo quy định cụ thể cho phương pháp phòng thử nghiệm 4.4.6 Phòng thử nghiệm Phân tích mẫu lặp lại phải dải tới hạn Độ tái lặp phương pháp điều kiện phải xây dựng phải tiến hành nhiều người phân tích ngày khác Bảng – Các sản phẩm/mẫu đại diện để xác nhận giá trị sử dụng quy trình phân tích dư lượng thuốc BVTV Nhóm sản phẩm Đặc tính chung Loại sản phẩm Loài đại diện Các sản phẩm thực vật I Hàm lượng nước clorophyl cao Lá rau cải Brassica Lá rau Rau ngũ cốc Rau chân vịt rau diếp, cải, bắp cải, cải xoăn, đậu xanh II Hàm lượng nước cao hàm lượng clorophyl thấp clorophyl Quả loại táo Quả có hạt Quả mâm xôi Quả nhỏ Loại làm rau Rễ làm rau Táo, lê Đào, chery (sơ ri) Dâu tây Nho Cà chua, hạt tiêu chuông, nấm meton Khoai tây, cà rốt, mùi tây III Hàm lượng axit cao Quả họ bưởi Cam, chanh IV Hàm lượng đường cao V Hàm lượng chất béo dầu cao Hạt có dầu Hạnh nhân Quả bơ, hạt hướng dương, óc chó, hồ đào pêcan, hồ trăn VI Các nguyên liệu khô Ngũ cốc Lúa mỳ, gạo hạt ngô Các sản phẩm ngũ cốc Cám lúa mỳ, bột lúa mỳ Nho khô, chà Các loại hàng hóa cần thử độc lập Ví dụ: tỏi, húp lông, chè, gia vị, man việt quất Các sản phẩm có nguồn gốc động vật Thịt Thịt gia cầm, thịt gà Nội tạng ăn Gan, cật Mỡ mỡ thịt Sữa Sữa bò Trứng Trứng gà CHÚ THÍCH: Phương pháp cần xác nhận loại thuốc BVTV đại diện cho nhóm sản phẩm Các sản phẩm khó phân tích cần phép thử riêng Bảng – Các ví dụ phương pháp phát thích hợp để phép phân tích khẳng định chất Phương pháp phát LC GC Phổ khối Tiêu chí số lượng đầy đủ ion chẩn đoán theo dõi Codex Alimentarius, Tập 2, xuất Dư lượng Thuốc BVTV thực phẩm trang 147 đến 365, FAO, 1993 LC – DAD đưa qua UV phổ UV đặc trưng LC – huỳnh quang kết hợp với kỹ thuật khác – D TLC – (quang phổ) kết hợp với kỹ thuật khác GC – ECD, NPD, FPD kết hợp với nhiều kỹ thuật phân tách Dẫn xuất phương pháp lựa chọn LC – phổ miễn dịch kết hợp với kỹ thuật khác LC – UV/VIS (bước sóng đơn) kết hợp với kỹ thuật khác Các hệ thống sắc ký khí khác (áp dụng pha tĩnh và/hoặc động tính chọn lọc khác nhau) kỹ thuật khác Giải thích thuật ngữ Giới hạn chấp nhận (AL) [accepted limit (AL)] Giá trị nồng độ cho chất phân tích tương ứng với giới hạn quy định giá trị hướng dẫn mà tạo nên mục đích phép phân tích, MRL, MPL; tiêu chuẩn thương mại, giới hạn nồng độ đạt tới (đánh giá thói quen ăn uống), mức chấp nhận (môi trường)… Đối với chất MRL với chất bị cấm AL (về mặt hiệu zero giới hạn) nồng độ đạt tới mà dư lượng phát cần khẳng định (giới hạn tác dụng giới hạn hành chính) Độ xác (accuracy) Tính gần giá trị kết thử nghiệm giá trị đối chứng chấp nhận Sai số ( α ) [alpha error ( α )] Khả mà nồng độ thực chất phân tích mẫu thử phòng thử nghiệm nhỏ so với giá trị cụ thể (ví dụ AL) phép đo tiến hành nhiều phần mẫu thử/phần phân tích cho thấy nồng độ vượt giá trị (dương tính giả) Giá trị chấp nhận tính xác suất thường nằm phạm vi từ 1% đến 5% Chất phân tích (analyte) Chất hóa học xác định phát mẫu Sự đồng chất phân tích (trong mẫu) [analyte homogeneity (in sample)] Sự phân tán đồng chất phân tích chất Tính thay đổi kết phân tích nảy sinh trình mẫu tùy thuộc vào kích cỡ phần mẫu phân tích Hằng số lấy mẫu mô tả tương quan kích cỡ phần mẫu phân tích độ biến thiên mong đợi mẫu phân tích trộn kỹ: Phần mẫu phân tích (analytical portion) Một lượng đại diện nguyên liệu lấy từ mẫu phân tích, có kích cỡ thích hợp phép đo nồng độ dư lượng Mẫu phân tích (analytical sample) Nguyên liệu chuẩn bị để phân tích từ mẫu phòng thử nghiệm, việc phân tách phần sản phẩm phân tách sau cách trộn, nghiền, cắt lát nhỏ,… để loại bỏ phần mẫu phân tích với sai số lấy mẫu tối thiểu Khả áp dụng (applicability) Các chất phân tích, chất nồng độ mà theo phương pháp phân tích chứng minh đáp ứng Ks = w (CVsp)8, w khối lượng phần mẫu phân tích CV sp hệ số biến thiên nồng độ chất phân tích phần mẫu phân tích lặp lại w [g] lấy từ mẫu phân tích Sai số ( β ) [Beta ( β ) error] Khả mà nồng độ thực chất phân tích mẫu phòng thử nghiệm lớn so với giá trị cụ thể (ví dụ AL) phép đo tiến hành nhiều phần mẫu phân tích cho thấy nồng độ không vượt giá trị (âm tính sai) Giá trị chấp nhận xác suất thường khoảng 1% đến 5% Độ lệch (bias) Chênh lệch giá trị trung bình đo chất phân tích giá trị đối chứng chấp nhận mẫu Độ lệch sai số hệ thống tổng thể đối chiếu với sai số ngẫu nhiên Có thể có nhiều thành phần sai số hệ thống góp phần tạo nên độ lệch Một chênh lệch hệ thống lớn từ giá trị đối chứng chấp nhận phản ánh giá trị sai lệch lớn Nhóm hàng hóa (commodity group) Nhóm thực phẩm thức ăn chăn nuôi mang đặc tính hóa học đầy đủ để làm cho chúng tương đương với mục đích phân tích theo phương pháp Các đặc tính dựa thành phần (ví dụ nước, đường, chất béo, hàm lượng axit) mối tương quan sinh học xác định quy định Phương pháp khẳng định (confirmatory) Phương pháp cung cấp thông tin đầy đủ thông tin bổ sung cho phép chất phân tích xác định với mức độ đảm bảo chấp nhận (ở giới hạn chấp nhận mức quan tâm) Càng nhiều tốt, phương pháp khẳng định cung cấp thông tin đặc tính hàng hóa chất phân tích, tốt sử dụng kỹ thuật quang phổ Nếu kỹ thuật đơn lẻ thiếu tính đặc thù đầy đủ, khẳng định đạt quy trình bổ sung gồm kết hợp thích hợp việc làm sạch, phân tách sắc ký phát chọn lọc Phân tích sinh học cung cấp số số liệu khẳng định Để bổ sung cho việc khẳng định chất phân tích nồng độ cần khẳng định Điều cần phải phân tích phần mẫu thứ hai và/hoặc phân tích lại mẫu ban đầu phương pháp thích hợp khác (nghĩa cột và/hoặc detector khác nhau… Khẳng định định tính định lượng tiến hành phương pháp, thích hợp Giới hạn định (CC α ) [Decision limit (CC α )] Giới hạn mà định nồng độ chất phân tích có mặt mẫu thực vượt giới hạn với xác suất sai số (dương tính sai) Trong trường hợp chất có AL 0, CC α mức nồng độ thấp nhất, phương pháp phân biệt với xác suất thống kê - α kể chất phân tích xác định có mặt CC α tương đương với giới hạn phát (LOD) theo số định nghĩa (thường α = 1%) Trong trường hợp chất có AL thiết lập, CC α nồng độ đo được, mà giá trị định với xác suất thống kê 1- α hàm lượng chất phân tích xác định AL Khả phát (CC β ) [detection capability (CC β )] Nồng độ thực nhỏ chất phân tích bị phát hiện, xác định định lượng mẫu có sai số bêta (âm tính sai) Trong trường hợp chất bị cấm sử dụng CC β nồng độ thấp phương pháp xác định chất phân tích mẫu bị nhiễm với xác suất thống kê - β Trong trường hợp chất có MRL thiết lập, CC β nồng độ phương pháp áp dụng để phát mẫu mà vượt MRL với xác suất thống kê - β Khi áp dụng nồng độ phát thấp nhất, thông số dùng để cung cấp thông tin tương đương với giới hạn định tính (LOQ), nhiên CC β thường kèm với xác xuất thống kê cụ thể phát hiện, tốt lấy mức LOQ Hỗn hợp thử phát (detection test mixture) Hỗn hợp chất chuẩn phân tích mà thích hợp để kiểm tra điều kiện phân tách phát sắc ký Hỗn hợp thử phát cần có chất phân tích mà cung cấp thông tin tính chọn lọc yếu tố độ nhạy detector, tính trơ (ví dụ đặc trưng hóa cách theo dõi thông số Tf) lực phân cách (ví dụ phân giải Rs) cột, độ tái lặp giá trị RRt Hỗn hợp thử phát cho qua cột detector cụ thể Kết âm tính sai (false negative result) Xem sai số bêta Kết dương tính (false positive result) Xem sai số alpha Nhóm phương pháp đặc thù (group specific method) Phương pháp thiết kế để phát chất có cấu trúc hóa học tương tự phần ví dụ axit axetic phenoxy, dithiocarbanat, metyl carbamat Dư lượng bị nhiễm (incurred residue) Các dư lượng chất phân tích chất nảy sinh theo thường lệ mà qua tạo mức dạng vết mong muốn, thường trái với dư lượng việc tăng cường mẫu phòng thử nghiệm Nghĩa dư lượng bị thay đổi Phương pháp đơn lẻ (individual method) Phương pháp thích hợp để xác định nhiều hợp chất định Có thể cần phương pháp tách biệt riêng, ví dụ xác định số chất trao đổi đưa vào phần định nghĩa dư lượng loại thuốc BVTV thuốc thú y riêng Mẫu phòng thử nghiệm (laboratory sample) Mẫu tiếp nhận phòng thử nghiệm (không kể bao gói) Giới hạn phát (LD) [limit of detection (LD)] Nồng độ nhỏ mà chất phân tích xác định Phổ biến định nghĩa nồng độ tối thiểu chất phân tích mẫu thử xác định với xác xuất công bố mà chất phân tích có mặt nồng độ lớn nồng độ mẫu trắng Tiêu chuẩn IUPAC ISO khuyến cáo viết tắt LD Xem thêm khả định Giới hạn định lượng (LOQ) [limit of quantitation (LOQ)] Nồng độ nhỏ chất phân tích định lượng Phổ biến xác nhận nồng độ tối thiểu chất phân tích mẫu thử mà xác định theo độ chụm chấp nhận (độ lặp lại) độ xác điều kiện cho phép thử Xem Khả phát Mức hiệu chuẩn thấp (LCL) [lowest calibrated level (LCL)] Nồng độ nhỏ chất phân tích phát đo hiệu chuẩn hệ thống phát Nó biểu thị theo nồng độ dung dịch mẫu thử theo khối lượng không tính đến góp phần từ mẫu trắng Chất (matrix) Nguyên liệu hợp chất lấy mẫu để phục vụ cho nghiên cứu phân tích, trừ chất phân tích Chất trắng (matrix blank) Nguyên liệu mẫu có mức chất phân tích liên quan phát Hiệu chuẩn phù Quá trình hiệu chuẩn sử dụng chất chuẩn chuẩn bị hợp với chất (matrix – matched calibration) chất chiết sản phẩm phân tích (hoặc sản phẩm đại diện) Mục đích để bù cho ảnh hưởng chất đồng chiết hệ thống xác định Những ảnh hưởng thường đoán trước, nhiên chất phù hợp không cần thiết chất đồng chiết chứng minh ảnh hưởng đáng kể Phương pháp (method) Một dãy quy trình kể từ lúc tiếp nhận mẫu để phân tích tạo kết cuối Xác nhận giá trị sử dụng phương pháp (method validation) Quá trình kiểm tra khẳng định phương pháp phù hợp với mục đích sử dụng Phương pháp đa dư lượng, MRM (multi residue method, MRM) Phương pháp thích hợp để xác nhận định lượng giới hạn chất phân tích, thường với số lượng chất khác Kết âm tính (negative result) Một kết cho thấy chất phân tích mặt mức lớn mức hiệu chuẩn thấp (xem Giới hạn phát hiện) Kiểm tra tính (performance verification) Lập số liệu kiểm tra chất lượng tạo phân tích mẻ mẫu để hỗ trợ cho việc xác nhận tính hợp lệ phép phân tích tiến hành Số liệu sử dụng để cải tiến thông số tính thực phương pháp Kết dương tính (positive result) Một kết cho thấy có mặt chất phân tích với nồng độ mức mức hiệu chuẩn thấp Độ chụm (precision) Sự gần kết thử nghiệm độc lập thu điều kiện quy định Phương pháp định lượng (quantitative method) Một phương pháp có khả cho kết quả, biểu thị giá trị số lượng với đơn vị thích hợp, với độ xác độ chụm phù hợp với mục đích Mức độ chụm độ phải tuân theo tiêu chí quy định Bảng Độ thu hồi (recovery) Sự phân chia tỷ lệ chất phân tích thu hồi sau chiết phân tích mẫu trắng mà theo chất phân tích thêm vào với nồng độ biết (mẫu đưa vào nguyên liệu chuẩn) Thuốc thử trắng (reagent blank) Thực phép phân tích đầy đủ mà không đưa nguyên liệu mẫu theo mục đích QC Nguyên liệu chuẩn (reference material) Một nguyên liệu nhiều nồng độ chất phân tích chúng đủ đồng thiết lập tốt để đánh giá phương pháp đo, để đánh giá nguyên liệu khác Trong tài liệu thuật ngữ “nguyên liệu chuẩn” không đề cập đến nguyên liệu sử dụng để hiệu chuẩn dụng cụ Phương pháp chuẩn (reference method) Phương pháp phân tích định lượng độ tin cậy chứng minh đặc trưng hóa độ đúng, tính đặc trưng, độ chụm lực phát thiết lập tốt Những phương pháp nhìn chung nghiên cứu liên phòng thử nghiệm thường vào quang phổ phân tử Tình trạng phương pháp chuẩn có hiệu lực phương pháp thực chế độ QA thích hợp Quy trình chuẩn (reference procedure) Quy trình mà tính hiệu thiết lập Nếu sẵn nó, quy trình chuẩn quy trình, mà lý thuyết, cần phải có hiệu cao phải khác với quy trình trình thử Độ lặp lại (repeatability) Độ chụm điều kiện lặp lại, nghĩa điều kiện mà kết thử độc lập thu với phương pháp phần mẫu phân tích giống phòng thử nghiệm tiến hành người thao tác sử dụng thiết bị khoảng thời gian ngắn (ISO 3534-1) Chất phân tích đại diện (representative analyte) Chất phân tích chọn để đại diện cho nhóm chất phân tích mà chúng có đặc tính tương tự thông qua phương pháp phân tích đa dư lượng, đánh giá đặc tính hóa lý chúng cấu trúc, độ hòa tan nước, tính phân cực, Kow tính bay hơi, tính ổn định thủy phân, pKa… Chất phân tích đại diện (representative analytical) Chất phân tích có đặc tính hóa lý nằm phạm vi đặc tính chất phân tích đại diện Độ tái lặp (reproducibility) Sự giống kết thu theo phương pháp phần mẫu phân tích giống tiến hành người thao tác khác với thiết bị khác (trong phạm vi độ tái lập phòng thử nghiệm).Tương tự vậy, phép thử tiến hành phòng thử nghiệm khác thu độ tái lặp liên phòng thử nghiệm Sản phẩm đại diện (representative commodity) Một sản phẩm thực phẩm đơn lẻ thức ăn sử dụng để đại diện cho nhóm sản phẩm với mục đích xác nhận giá trị sử dụng phương pháp Một sản phẩm xem đại diện dựa thành phần mẫu gần đúng, chẳng hạn nước, dầu/chất béo, axit, đường hàm lượng chlorophyll, đặc tương tự sinh học mô… Tính nghiêm khắc (ruggedness) Khả trình đo hóa học để ngăn cản thay đổi kết thử có thay đổi nhỏ quy trình phương pháp, môi trường, phòng thử nghiệm, người… Chuẩn bị mẫu (sample preparation) Quy trình sử dụng, cần, để chuyển mẫu phòng thử nghiệm thành mẫu phân tích, việc loại bỏ phần (đất, đá, xương….) mà không đưa vào phép phân tích Xử lý mẫu (sample processing) Các quy trình (cắt, nghiền, trộn…) sử dụng để làm cho mẫu phân tích trở nên đồng chấp nhận liên quan đến việc phân phối chất phân tích, trước lấy phần mẫu phân tích Các yếu tố trình xử lý phải thiết kế cho tránh thay đổi nồng độ chất phân tích Phương pháp sàng lọc (screening method) Một phương pháp sử dụng để phát có mặt chất phân tích nhóm chất phân tích mức mức nồng độ tối thiểu Nó phải xây dựng để tránh kết âm tính sai mức xác suất quy định (nhìn chung, β = 5%) Các kết định tính dương tính cần phải khẳng định phương pháp chuẩn phương pháp khẳng định Xem Giới hạn định Khả phát Tính chọn lọc (selectivity) Đo mức mà theo chất phân tích chắn phân biệt với thành phần mẫu khác, việc phân tách (như sắc ký) độ nhạy tương ứng hệ thống phát Tính đặc trưng (specificity) Việc mở rộng mà theo phương pháp cung cấp độ nhạy từ hệ thống phát xem xét loại trừ đặc tính chất phân tích Bổ sung chất chuẩn (standard addition) Một quy trình lượng chất phân tích biết thêm vào phần mẫu chất chiết có chứa chất phân tích (nồng độ đo ban đầu X), để tạo nồng độ ước lượng (ví dụ 1.5 X X) Độ nhạy chất phân tích tạo phần mẫu đưa vào chất chiết gốc đo, nồng độ chất phân tích chất chiết gốc (bổ sung chất phân tích Zero) xác định từ độ dốc đường chặn đường biểu diễn độ nhạy Nếu đường biểu diễn thu đường tuyến tính, giá trị X phải giải thích kỹ Hệ số theo dõi (tailing factor) Đo pic sắc ký: 10% tối thiểu độ cao pic, tỉ số phần phân đoạn đầu cuối chiều rộng pic, phân tách đường thẳng đứng vẽ qua điểm cao pic Phần mẫu thử (test portion) Xem: “Phần phân tích” Mẫu thử (test sample) Xem “Mẫu phân tích” Độ (trueness) Độ gần giá trị trung bình thu từ dãy lớn kết thử giá trị chuẩn chấp nhận Độ không đảm bảo phép đo (uncertainty of measurement) Các thông số đơn lẻ (thường độ lệch chuẩn khoảng tin cậy) biểu thị khoảng giá trị xung quanh kết đo, giá trị thực mong đợi với mức xác xuất công bố Nó cần lưu ý đến tất tác động công nhận lên kết quả, bao gồm: độ chụm tổng thể dài hạn (trong phạm vi độ tái lập phòng thử nghiệm) phương pháp đầy đủ: độ lệch phương pháp; lấy mẫu thay độ không bảo đảm trình hiệu chuẩn, thay đổi khác biết kết Chữ viết tắt Cmax Dư lượng lớn phát phần mẫu phân tích kép MRM Phương pháp đa dư lượng Cmin Dư lượng thấp phát phần mẫu phân tích kép RRF Yếu tố độ nhạy tương đối CVAtyp Hệ số điển hình thay đổi dung lượng xác định phần mẫu phân tích RRI Giá trị lưu tương đối Pic CVLtyp Hệ số điển hình thay đổi phân tích phần mẫu phòng thử nghiệm Rs Quyết định hai pic sắc ký CVSp Hệ số thay đổi dư lượng phần mẫu phân tích SD Độ lệch chuẩn GLP Thực hành phòng thử nghiệm tốt Sy/x Độ lệch chuẩn dư lượng từ hàm hiệu chuẩn tuyến tính GSM Phương pháp đặc trưng nhóm MRL Giới hạn dư lượng tối đa WHO Tổ chức y tế giới ... kinh nghiệm nhân viên phòng thử nghiệm 2.2 Khi thành lập phòng thử nghiệm phân tích dư lượng thuốc BVTV, nhân viên phải qua thời gian đào tạo học hỏi kinh nghiệm phòng thử nghiệm tốt Nếu phòng thử. .. nghiệm có liên quan đến phân tích phạm vi rộng dư lượng thuốc BVTV, cần đến nhân viên cần tích lũy kinh nghiệm nhiều phòng thử nghiệm chuyên ngành Các nguồn 3.1 Phòng thử nghiệm 3.1.1 Phòng thử. .. mẫu Dư lượng thuốc bảo vệ thực vật thực phẩm FAO – Các phương pháp đánh giá Tài liệu FAO xuất hàng năm Sản xuất Bảo vệ thực vật phép phân tích trình thỏa thuận hành chính, mà phần phương pháp phân