NGHIÊN cứu tác DỤNG CHỐNG VIÊM cấp và CHỐNG dị ỨNG của CAO đặc LONG đởm TRÊN THỰC NGHIỆM

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI VŨ THỊ MINH HIỀN NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM CẤP VÀ CHỐNG DỊ ỨNG CỦA CAO ĐẶC LONG ĐỞM TRÊN THỰC NGHIỆM Chuyên ngành: Y học cổ truyền Mã số: 60720201 LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: Ts Phạm Thị Vân Anh PGS.Ts Tạ Văn Bình Hà Nội – Năm 2015 LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn này, nhận bảo nhiệt tình thầy cô, giúp đỡ bạn đồng nghiệp, động viên gia đình người thân Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn tới Ts.Phạm Thị Vân Anh, PGS.Ts Tạ Văn Bình người thầy tạo điều kiện, hướng dẫn, động viên giúp đỡ hoàn thành tốt luận văn Sự hiểu biết sâu sắc khoa học, kinh nghiệm thầy cô động lực giúp tự tin trình làm nghiên cứu Tôi xin cảm ơn Ts Lê Thị Hải Yến, Ts Lê Thành Xuân quan tâm, giúp đỡ đưa dẫn, đề nghị cho luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô Khoa Y học cổ truyền – Trường Đại học Y Hà Nội tận tình bảo, truyền đạt kiến thức suốt thời gian học tập Xin cảm ơn anh chị, bạn Bộ môn Dược lý - Trường Đại học Y Hà Nội giúp đỡ thời gian nghiên cứu Xin cảm ơn Phòng sau đại học – Trường Đại học Y Hà Nội, Ban giám hiệu Trường cao đẳng y tế Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi để tiến hành luận văn tốt nghiệp Tôi xin cảm ơn gia đình, bạn bè bên cổ vũ, động viên để hoàn thành tốt luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2015 Vũ Thị Minh Hiền PHỤ LỤC Hình ảnh số thiết bị động vật thí nghiệm nghiên cứu Kết đánh giá tác dụng chống viêm cấp mô hình gây phù chân chuột cống trắng carrageenin Kết đánh giá tác dụng chống viêm cấp mô hình gây viêm màng bụng chuột cống trắng carrageenin Kết đánh giá tác dụng chống dị ứng mô hình gây shock phản vệ chuột nhắt trắng Kết đánh giá tác dụng chống dị ứng mô hình gây ngứa chuột nhắt trắng Kết đánh giá tác dụng chống dị ứng mô hình gây phù chân chuột nhắt trắng compound 48/80 Kết đánh giá tác dụng chống dị ứng mô hình làm bền vững tế bào mast chuột nhắt trắng Tiêu chuẩn sở cao đặc Long đởm Phiếu kiểm nghiệm cao đặc Long đởm 10 Phiếu kiểm nghiệm dược liệu Long đởm PHỤ LỤC Hình ảnh số thiết bị động vật thí nghiệm nghiên cứu Thiết bị đo thể tích chân chuột Thiết bị định lượng protein Plethysmometer Chemistry analyzer XC-55 Thiết bị định lượng bạch cầu Máy ly tâm Hittech Animal Blood Counter Đo thể tích chân chuột phù kế Tiến hành tiêm thuốc gây mô hình phù viêm Chân chuột sau tiêm thuốc Đo chiều dày chân chuột thước đo điện tử PHỤ LỤC Kết đánh giá tác dụng chống viêm cấp mô hình gây phù chân chuột cống trắng carrageenin Lô 1: Mô hình STT Trọng lượng (g) Phù chân chuột 4h ΔV% 6h 89,29 2,10 87,50 1,80 60,71 1,40 25,00 51,46 1,64 59,22 1,60 55,34 1,43 38,83 64,39 2,40 81,82 2,16 63,64 1,60 21,21 69,42 2,02 66,94 1,92 58,68 1,45 19,83 63,49 2,00 58,73 2,03 61,11 1,62 28,57 58,73 1,97 56,35 1,90 50,79 1,58 25,40 57,02 2,12 75,21 2,07 71,07 1,40 15,70 60,00 1,70 70,00 1,35 35,00 1,16 16,00 38,52 2,00 48,15 1,91 41,48 1,59 17,78 78,57 2,20 74,60 2,17 72,22 1,60 26,98 1,96 63,09 2,02 67,85 1,89 57,01 1,48 23,53 0,23 14,03 0,22 12,31 0,26 11,90 0,14 7,05 310 215 320 320 270 300 340 220 235 340 BT 1,12 1,03 1,32 1,21 1,26 1,26 1,21 1,00 1,35 1,26 2h 2,12 1,56 2,17 2,05 2,06 2,00 1,90 1,60 1,87 2,25 X 287,00 1,20 SE 48,49 0,12 10 ΔV% ΔV% 24h ΔV% Lô 2: Chứng dương (Aspirin liều 200mg/kg) STT Trọng lượng (g) Phù chân chuột 200 315 300 280 240 280 245 250 270 340 BT 1,10 1,30 1,34 1,20 1,15 1,30 1,21 1,20 1,20 1,31 2h 1,46 1,50 1,70 1,62 1,50 1,55 1,65 1,40 1,40 1,52 X 272 1,23 SE 40,57 p 2-1 0,46 10 ΔV% 4h ΔV% 6h ΔV% 24h ΔV% 32,73 1,64 49,09 1,60 45,45 1,40 27,27 15,38 1,90 46,15 1,70 30,77 1,56 20,00 26,87 2,20 64,18 2,10 56,72 1,51 12,69 35,00 1,70 41,67 1,80 50,00 1,40 16,67 30,43 1,68 46,09 1,73 50,43 1,45 26,09 19,23 1,90 46,15 1,85 42,31 1,50 15,38 36,36 1,86 53,72 1,72 42,15 1,31 8,26 16,67 1,72 43,33 1,83 52,50 1,33 10,83 16,67 1,60 33,33 1,50 25,00 1,51 25,83 16,03 1,80 37,40 1,74 32,82 1,50 14,50 1,53 24,54 1,80 46,11 1,76 42,82 1,45 17,75 0,08 0,10 8,59 0,18 8,56 0,16 10,36 0,08 6,76 0,52 0,00 0,0000 0,03 0,000230 0,18 0,01077 0,51 0,07774 Lô 3: Cao đặc Long đởm liều thấp (8g/kg) STT Trọng lượng (g) Phù chân chuột ΔV% 4h ΔV% 6h ΔV% 24h ΔV% 36,36 1,60 45,45 1,56 41,82 1,40 27,27 68,07 2,00 68,07 2,00 68,07 1,34 12,61 33,86 2,10 65,35 1,90 49,61 1,32 3,94 67,50 2,11 75,83 2,02 68,33 1,41 17,50 61,02 1,98 67,80 1,70 44,07 1,36 15,25 32,23 2,12 75,21 2,00 65,29 1,30 7,44 66,67 2,00 85,19 1,67 54,63 1,52 40,74 31,78 1,03 -20,16 1,98 53,49 1,46 13,18 89,19 1,89 70,27 1,78 60,36 1,60 44,14 48,15 2,12 57,04 2,12 57,04 1,61 19,26 1,83 53,48 1,90 59,01 1,87 56,27 1,43 20,13 0,20 19,84 0,34 29,84 0,18 9,40 0,11 13,38 0,93 0,20 0,23 0,36 0,40 0,86 0,88 0,39 0,49 0,38 0,00 0,00 0,45 0,21 0,15 0,01 0,74 0,62 200 305 270 350 310 240 350 270,0 300,0 300 BT 1,10 1,19 1,27 1,20 1,18 1,21 1,08 1,29 1,11 1,35 2h 1,50 2,00 1,70 2,01 1,90 1,60 1,80 1,70 2,10 2,00 X 289,50 1,20 SE 46,45 0,09 p 3-1 0,91 p 3-2 0,38 10 Lô 4: Cao đặc Long đởm liều cao (16g/kg) STT Trọng lượng (g) Phù chân chuột 290 305 310 230 220 350 250 290 310 250 BT 1,10 1,21 1,23 1,19 1,20 1,32 1,30 1,31 1,13 1,20 2h 1,60 1,72 1,69 1,80 1,52 1,68 2,00 1,79 1,89 1,60 X 280,50 1,22 SE 41,40 p 4-1 p 4-3 p 4-2 10 ΔV% 4h ΔV% 6h ΔV% 24h ΔV% 45,45 1,90 72,73 1,85 68,18 1,45 31,82 42,15 2,00 65,29 1,87 54,55 1,45 19,83 37,40 2,01 63,41 1,88 52,85 1,53 24,39 51,26 1,80 51,26 1,72 44,54 1,38 15,97 26,67 1,78 48,33 1,48 23,33 1,33 10,83 27,27 1,90 43,94 1,98 50,00 1,61 21,97 53,85 2,00 53,85 2,03 56,15 1,54 18,46 36,64 1,91 45,80 2,01 53,44 1,59 21,37 67,26 1,90 68,14 1,79 58,41 1,40 23,89 33,33 1,70 41,67 1,73 44,17 1,51 25,83 1,73 42,13 1,89 55,44 1,83 50,56 1,48 21,44 0,07 0,14 12,71 0,10 11,09 0,17 11,79 0,09 5,73 0,751 0,702 0,016 0,003 0,124 0,029 0,561 0,239 0,942 0,476 0,653 0,568 0,210 0,145 0,965 0,727 0,624 0,247 0,320 0,780 0,648 0,728 0,002 0,002 0,181 0,049 0,303 0,136 0,428 0,205 PHỤ LỤC Kết đánh giá tác dụng chống viêm cấp mô hình gây viêm màng bụng chuột cống trắng carrageenin Lô 1: Mô hình STT TL chuột (g) V/100g 2,35 2,29 2,06 2,50 1,91 2,62 2,12 2,24 2,50 2,21 Dịch MB Protein/ml Pro 5,00 30,00 7,00 49,70 4,90 34,30 6,00 36,00 4,10 18,04 4,80 38,40 4,90 26,95 4,70 26,32 5,00 27,50 4,90 30,38 255 310 340 240 230 305 260 250 220 10 280 V (ml) 6,00 7,10 7,00 6,00 4,40 8,00 5,50 5,60 5,50 6,20 BC/ml 9,90 11,00 4,10 16,30 9,00 7,40 15,00 8,00 13,30 15,00 SLBC 59,40 78,10 28,70 97,80 39,60 59,20 82,50 44,80 73,15 93,00 X 269,00 6,13 2,28 5,13 31,76 10,90 65,63 SE 38,79 1,02 0,22 0,80 8,53 3,94 23,18 Dịch MB V/100g Protein/ml Pro 1,00 5,50 18,70 2,14 4,80 28,80 1,61 5,10 18,87 1,45 6,30 31,50 2,56 4,90 31,36 1,60 5,10 20,40 1,46 4,40 15,40 1,43 4,90 19,60 2,00 4,60 23,92 1,72 5,40 27,00 BC/ml 6,50 11,00 7,20 7,50 11,30 10,90 9,20 6,00 5,90 7,10 SLBC 22,10 66,00 26,64 37,50 72,32 43,60 32,20 24,00 30,68 35,50 Lô 2: Chứng dương (Aspirin liều 200mg/kg) STT TL chuột (g) 340,00 280,00 230,00 345,00 250,00 250,00 240,00 280,00 260,00 10 290,00 V (ml) 3,40 6,00 3,70 5,00 6,40 4,00 3,50 4,00 5,20 5,00 X 276,50 4,62 1,70 5,10 23,56 8,26 39,05 SE 39,58 1,06 0,44 0,54 5,78 2,15 17,17 p 2-1 0,67 0,004 0,001 0,92 0,02 0,0794 0,01 Lô 3: Cao đặc Long đởm liều thấp (8g/kg) STT TL chuột (g) 10 230,00 300,00 260,00 340,00 300,00 330,00 250,00 250,00 240,00 350,00 V (ml) V/100g 5,20 2,26 5,00 1,67 6,00 2,31 4,20 1,24 5,20 1,73 3,40 1,03 4,10 1,64 7,00 2,80 3,50 1,46 4,00 1,14 Dịch MB Protein/ml Pro 5,00 26,00 4,90 24,50 5,10 30,60 6,00 25,20 4,60 23,92 5,10 17,34 5,50 22,55 5,20 36,40 6,00 21,00 5,50 22,00 BC/ml 9,00 14,00 11,50 11,00 5,20 14,60 15,00 7,00 10,00 16,00 SLBC 46,80 70,00 69,00 46,20 27,04 49,64 61,50 49,00 35,00 64,00 24,95 11,33 51,82 X 285,00 4,76 1,73 5,29 SE 44,53 1,14 0,57 0,46 5,31 3,60 14,28 p 3-1 0,40 0,01 0,01 0,59 0,046 0,80 0,13 p 3-2 0,66 0,78 0,90 0,41 0,58 0,03 0,09 Lô 4: Cao đặc Long đởm liều cao (16g/kg) STT 10 TL chuột (g) 300,00 340,00 310,00 330,00 340,00 280,00 250,00 270,00 260,00 250,00 V (ml) V/100g 6,00 2,00 4,30 1,26 4,20 1,35 5,00 1,52 6,50 1,91 4,10 1,46 4,30 1,72 6,50 2,41 5,00 1,92 5,10 2,04 Dịch MB Protein/ml Pro BC/ml 3,00 18,00 10,20 3,90 16,77 10,00 4,00 16,80 6,20 3,90 19,50 6,80 4,00 26,00 9,90 5,00 20,50 11,30 5,00 21,50 7,00 4,20 27,30 6,90 4,00 20,00 10,10 5,00 25,50 8,00 SLBC 61,20 43,00 26,04 34,00 64,35 46,33 30,10 44,85 50,50 40,80 X 293,00 5,10 1,76 4,20 21,19 8,64 44,12 SE 35,92 0,93 0,36 0,64 3,84 1,84 12,41 p 4-1 0,168 0,030 0,001 0,010 0,002 0,118 0,019 p 4-3 0,664 0,476 0,880 0,000 0,086 0,050 0,214 p 4-2 0,342 0,296 0,730 0,003 0,295 0,676 0,460 PHỤ LỤC Kết đánh giá tác dụng chống dị ứng mô hình gây shock phản vệ chuột nhắt trắng Số chuột Sau 10 phút Sau 20 phút Sau 30 phút Sau 40 phút Sau 50 phút Sau 60 phút Tỉ lệ chết sau tiêm C48/80 sau 60 phút Lô 1: Mô hình 10 10 0 100% Lô 2: Methylprednisolon 10 7 7 30% Lô 3: CĐLĐ 12g/kg 10 10 4 4 60% Lô 4: CĐLĐ 24g/kg 10 2 80% sống Lô 52 Như vậy, qua tiêu chí cho thấy CĐLĐ liều 16g/kg có tác dụng điều trị viêm cấp Qua hai thử nghiệm chuột mô hình carrageenin gây phù chân gây viêm màng bụng chuột kết luận CĐLĐ có khả điều trị viêm cấp tốt tương đương aspirin Liều khuyến cáo sử dụng 16g/kg Trong số tài liệu công trình nghiên cứu Long đởm dược liệu dùng loại thuốc chống viêm, chống dị ứng giải độc Nghiên cứu Shen Tao cộng cho thấy: dịch chiết ethanol Long đởm có thành phần xanthon (chất đại diện mangiferin) có tác dụng điều trị số viêm nhiễm bệnh da liễu Ngoài ra, alkaloid polysaccharide Long đởm có tác dụng giảm đau, chống viêm [46] Theo nghiên cứu Guo Haifeng, Po Huishun thành phần gentiopicroside thân rễ Long đởm hoạt chất có tác dụng chống viêm, giảm đau, chống oxy hóa Bên cạnh đó, hoạt chất có thêm số tác dụng khác như: lợi mật, làm nhanh lành vết thương, giãn trơn, làm hưng phấn thần kinh liều thấp có tác động gây tê liều cao…[41] Trong đề tài công bố vào tháng 8/2015, nghiên cứu tác dụng gentiopicroside thuốc Gentiana macrophylla Pall., mô hình gây viêm chuột 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl) - 2,5diphenyltetrazolium bromide (MTT), liều dùng 50, 500 1500μg/m cho thấy chất có tác dụng ức chế interleukin-1 beta, chất trung gian gây viêm Từ đó, kết luận gentiopicroside chất tiềm điều trị bệnh lý viêm [47] 53 4.2 Nghiên cứu tác dụng chống dị ứng cao đặc Long đởm 4.2.1 Tác dụng chống dị ứng mô hình gây shock phản vệ Mô hình gây shock phản vệ chuột nhắt trắng sử dụng chất compound 48/80 dùng để đánh giá tác dụng chống dị ứng cấp tính thuốc nghiên cứu Compound 48/80 sản phẩm ngưng tụ p-methoxyphenethylmethylamin với formaldehyd Trong mô hình này, dùng compound 48/80mg liều cao 8mg/kg tiêm màng bụng chuột nhắt trắng gây shock phản vệ gây chết chuột làm tăng hoạt tính tế bào mast dẫn tới giải phóng nhiều histamin chất trung gian serotonin, bradykinin, leucotrien [48],[49],[50],[51] Đây mô hình toàn diện giúp cho việc nghiên cứu khả chống dị ứng thuốc Tác dụng compound 48/80 mạnh, mô hình bệnh hoàn toàn tương tự ca bệnh dị ứng thông thường Cho nên chứng minh thuốc có tác dụng mô hình khẳng định khả điều trị thuốc nghiên cứu Methylprednisolon thuốc chống viêm steroid thường sử dụng việc điều trị bệnh dị ứng Tuy nhiên sử dụng lâu dài có nhiều tác dụng không mong muốn viêm loét dày, suy tuyến thượng thận Do đó, chứng tỏ khả điều trị cao đặc Long đởm lựa chọn tốt tác dụng phụ Theo nhiều nghiên cứu thành phần dược liệu Long đởm có nhiều loại triterpenoids; có tác dụng ức chế hoạt động indoleamine 2,3dioxygenase (IDO), chất có tác dụng xúc tác phản ứng chuyển tryptophan thành kynurenine Kynurenine chất trung gian có tác dụng kích hoạt nhiều tế bào miễn dịch bao gồm bạch cầu T đại thực bào, dẫn đến trình gây 54 viêm Việc ức chế tổng hợp kynurenine mắt xích quan trọng điều trị bệnh lý có viêm [52] Kết thí nghiệm cho thấy cao đặc Long đởm hai liều có tác dụng ức chế phản ứng shock phản vệ (một dạng phản ứng dị ứng nguy hiểm cấp tính nhất), tác dụng không methylprednisolon Cao đặc Long đởm liều thấp cho thấy tác dụng ức chế phản ứng shock phản vệ với tỷ lệ 40% tốt liều cao 20% Như vậy, khẳng định cao đặc Long đởm có khả ức chế shock phản vệ 4.2.2 Tác dụng chống dị ứng mô hình gây ngứa Ngứa triệu chứng thường gặp người bệnh dị ứng Trong nghiên cứu này, gây mô hình cách dùng compound 48/80 với liều thấp 4mg/kg để tiêm da cổ chuột Ở liều lượng histamin gây không đủ gây shock làm chết chuột, đủ để gây ngứa chuột thí nghiệm vị trí tiêm Trong phút đầu, lượng histamin tăng cao, kích thích đầu dây thần kinh da, gây ngứa làm chuột gãi liên tục Sau 15-20 phút, histamin bị phân hủy dần tác dụng nên phản xạ gãi giảm Chính vậy, nghiên cứu đánh giá số lần gãi chuột sau tiêm compound 48/80 thời gian 20 phút sau tiêm [50],[53], [54],[55],[56] Chứng dương sử dụng nghiên cứu gồm methylprednisolon ketotifen Cơ chế tác dụng methylprednisolon nói Ketotifen thuốc thuộc nhóm kháng histamin H1 hệ 2, sử dụng điều trị dị ứng Ưu điểm ketotifen không gây buồn ngủ hệ 1, tác dụng phụ, giá thành rẻ, nhiên tác dụng điều trị thấp, thường sử dụng trường hợp dị ứng nhẹ Sau điều trị thời gian, thuốc thường tác dụng, phải chuyển sang sử dụng loại corticoid 55 Khả điều trị methylprednisolon ketotifen với dị ứng nghiên cứu rõ ràng nên việc lựa chọn hai thuốc làm chứng dương chứng minh: khả điều trị cao đặc Long đởm dự đoán chế chống dị ứng thuốc nghiên cứu Kết thực nghiệm cho thấy cao đặc Long đởm hai liều có tác dụng giảm ngứa, tác dụng rõ rệt thời khoảng 10-15 phút, 15-20 phút Tác dụng giảm ngứa cao đặc Long đởm hai liều cho thấy tác dụng tương đương tốt methylprednisolon ketotifen Long đởm liều thấp có tác dụng giảm ngứa tốt liều cao  Nếu xét khả gây tác dụng không mong muốn hiệu điều trị cao Long đởm có hiệu trội so với hai thuốc lại Liều dùng tối ưu 12g/kg hiệu so với liều 24g/kg thời điểm  Nghiên cứu phù hợp với nghiên cứu công bố Long đởm có tác dụng chống viêm, giảm ngứa phù hợp với hướng điều trị viêm da địa lâm sàng [57] 4.2.3 Tác dụng chống dị ứng mô hình gây phù chân chuột Theo ADO (1978), phản ứng dị ứng kết hợp dị nguyên kháng thể dị ứng (IgE, IgG) gây rối loạn chức ban đỏ, phù nề tổn thương tổ chức: tan hồng cầu, bạch cầu Do đó, mô hình gây phù chân chuột tiêu đánh giá tác dụng chống dị ứng cao đặc Long đởm [48],[49],[50] Compound 48/80 không gây tăng hoạt tính tế bào mast, kích thích giải phóng chất trung gian hóa học gây phản ứng viêm (histamin, cytokin, prostaglandin ) mà kích thích thần kinh cảm giác, gây giải phóng tachykinin SP (substance P), CGRP (calcitonin generelated peptide), NKA (neurokinin A) Các tachykinin gây giãn mạch, phù mô, hoạt hóa tế bào viêm thông qua hoạt hóa receptor NK1, NK2, NK3 56 Như vậy, thông qua kích thích hệ thống miễn dịch thần kinh chế gây phù compound 48/80 [51] Kết thực nghiệm cho thấy, cao đặc Long đởm hai liều có xu hướng ức chế gia tăng thể tích chân chuột thời điểm 30 60 phút sau gây mô hình Cao đặc liều thấp làm tăng chiều dày chân chuột hai thời điểm, liều cao làm tăng chiều dày chân chuột thời điểm 60 phút Hiện tượng viêm dẫn tới phù tượng hay gặp dị ứng Nếu giảm tượng viêm phù cải thiện chất lượng sống người bệnh Kết nghiên cứu cho thấy CĐLĐ liều 12g/kg có tác dụng yếu mô hình gây phù chân chuột so với methylprednisolon nhiên có tác dụng mạnh so với ketotifen Liều 12g/kg có tác dụng vượt trội so với liều 24g/kg Các nghiên cứu phù hợp với nghiên cứu Li Yun, Wang De jian cho thấy dịch chiết nước Long đởm có tác dụng giảm phù chân chuột nghiên cứu tác dụng kháng viêm nhiệt Long đởm [58] Trong nghiên cứu khác Nhật Bản vừa công bố tháng 7.2015 tìm loại 10 loại secoiridoid glycosides (sweroside, swertiamarin dẫn xuất từ hai chất này, nhiều loại chưa xác định rõ cấu trúc hóa học) Long đởm Tất chất có tác dụng chống sản phẩm từ NO, IL-6 TNF-α tổng hợp lipopolysaccharide Do khả chống viêm dị ứng Long đởm khẳng định góc độ phân tử [59] 57 4.2.4 Đánh giá tác dụng làm vững bền tế bào mast cao đặc Long đởm Compound 48/80 có tác dụng kích thích làm ly giải tế bào mast, giải phóng yếu tố trung gian gây viêm Do đó, sử dụng mô hình ủ tế bào mast với compound 48/80 xác định khả làm bền vững tế bào mast thuốc nghiên cứu [49] Cao đặc Long đởm liều 12g/kg 24g/kg có xu hướng làm giảm tỷ lệ tế bào mast vỡ, liều 12g/kg cho thấy tác dụng tốt liều 24g/kg Tác dụng cao đặc Long đởm hai liều tương đương với methylprednisolon ketotifen Theo chế dị ứng tượng vỡ tế bào mast tượng trung gian để giải phóng yếu tố trung gian gây viêm Hiệu sử dụng Long đởm methylprednisolon ketotifen giúp giảm tỷ lệ vỡ tế bào mast so với lô mô hình khác biệt ý nghĩa thống kê cho thấy chế điều trị dị ứng Long đởm không dựa khả làm bền vững tế bào mast Qua đề tài nghiên cứu so sánh thấy chất có Long đởm có tác dụng ức chế chất trung gian interleukin, TNF-α chưa thấy có đề tài chứng minh khả làm bền vững tế bào mast [51],[59] Qua mô hình thực nghiệm chuột sử dụng compound 48/80 để đánh giá tác dụng chống dị ứng thuốc nghiên cứu, thấy tác dụng chống shock phản vệ Long đởm yếu Cao đặc Long đởm có khả điều trị tốt triệu chứng ngứa phù chân chuột, hai triệu chứng thường gặp bệnh dị ứng Việc điều trị tốt hai triệu chứng giúp cải thiện rõ rệt chất lượng sống bệnh nhân, tránh cho người bệnh nguy giảm thiểu khả lao động 58 Kết thực nghiệm chưa nhận thấy khả làm bền vững màng tế bào mast Long đởm Qua so sánh với nghiên cứu quốc tế nhận thấy tác dụng Long đởm chủ yếu chất secoiridoids có tác dụng ức chế chất trung gian phản ứng viêm Trong nghiên cứu đánh giá tác dụng chống dị ứng cao đặc Long đởm liều thấp cho tác dụng tốt liều cao 59 KẾT LUẬN Qua nghiên cứu thực nghiệm, thu số kết sau:  Tác dụng chống viêm cấp cao đặc Long đởm CĐLĐ liều 16g/kg có tác dụng chống viêm cấp mô hình gây phù chân chuột mô hình gây viêm màng bụng chuột cống trắng Tác dụng tương đương với aspirin liều 200mg/kg  Tác dụng chống dị ứng cao đặc Long đởm CĐLĐ liều 12g/kg 24g/kg có xu hướng ức chế shock phản vệ, ức chế phản xạ gãi, ức chế phù chân chuột giảm tỷ lệ vỡ tế bào mast compound 48/80 chuột nhắt trắng Tác dụng CĐLĐ liều 12g/kg 24g/kg tốt tương đương tốt số trường hợp so sánh với ketotifen methylprednisolon Do tác dụng chống dị ứng cao đặc Long đởm khẳng định 60 KIẾN NGHỊ Với kết tác dụng chống viêm cấp chống dị ứng thực nghiệm cao đặc Long đởm đề tài, đưa đề xuất sau: - Xây dựng dạng bào chế theo đường uống từ cao đặc Long đởm - Tiến hành thử nghiệm lâm sàng tác dụng chống viêm, chống dị ứng Long đởm 65 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC BIỂU ĐỒ DANH MỤC HÌNH VẼ ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN 1.1 Đại cương viêm 1.1.1 Khái niệm 1.1.2 Nguyên nhân gây viêm 1.1.3 Phân loại viêm 1.1.4 Cơ chế bệnh sinh viêm 1.1.5 Thuốc chống viêm 1.2 Đại cương dị ứng 1.2.1 Khái niệm 1.2.2 Dị nguyên 10 1.2.3 Các giai đoạn phản ứng dị ứng 10 1.2.4 Phân loại dị ứng theo Gell Coombs 11 1.2.5 Biểu tình trạng dị ứng 13 1.2.6 Các xét nghiệm dùng cho chẩn đoán 14 1.2.7 Thuốc điều trị 14 1.3 Một số khái niệm y học cổ truyền có liên quan đến tượng viêm dị ứng 14 1.3.1 Liên quan tượng viêm 14 1.3.2 Liên quan tượng dị ứng 15 66 1.3.3 Tình hình sử dụng thuốc YHCT điều trị chứng viêm dị ứng 16 1.4 Dược liệu Long đởm 17 1.4.1 Mô tả 17 1.4.2 Phân bố sinh thái 18 1.4.3 Bộ phận dùng 18 1.4.4 Thành phần hóa học 19 1.4.5 Tác dụng dược lý 20 Chương 23 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Nguyên liệu đối tượng nghiên cứu 23 2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu 23 2.1.2 Đối tượng nghiên cứu 25 2.2 Thuốc, hóa chất, dụng cụ nghiên cứu 25 2.3 Địa điểm nghiên cứu 26 2.4 Phương pháp nghiên cứu 26 2.4.1 Tác dụng chống viêm cấp 26 2.4.2 Tác dụng chống dị ứng 29 2.5 Phương pháp xử lý số liệu 32 Chương 33 KẾT QUẢ 33 3.1 Đánh giá tác dụng chống viêm cấp cao đặc Long đởm 33 3.1.1 Tác dụng chống viêm cấp mô hình gây phù viêm chân chuột carrageenin 33 3.1.2 Tác dụng chống viêm cấp mô hình gây viêm màng bụng chuột cống trắng 37 3.2 Nghiên cứu tác dụng chống dị ứng cao đặc Long đởm 40 67 3.2.1 Tác dụng chống dị ứng mô hình gây shock phản vệ 40 3.2.2 Tác dụng chống dị ứng mô hình gây ngứa 41 3.2.3 Tác dụng chống dị ứng mô hình gây phù chân chuột 43 3.2.4 Tác dụng chống dị ứng mô hình làm bền vững tế bào mast 46 Chương 48 BÀN LUẬN 48 4.1 Đánh giá tác dụng chống viêm cấp cao đặc Long đởm 48 4.1.1 Tác dụng chống viêm cấp mô hình gây phù chân chuột carrageenin 49 4.1.2 Tác dụng chống viêm cấp mô hình gây viêm màng bụng chuột cống trắng 51 4.2 Nghiên cứu tác dụng chống dị ứng cao đặc Long đởm 53 4.2.1 Tác dụng chống dị ứng mô hình gây shock phản vệ 53 4.2.2 Tác dụng chống dị ứng mô hình gây ngứa 54 4.2.3 Tác dụng chống dị ứng mô hình gây phù chân chuột 55 4.2.4 Đánh giá tác dụng làm vững bền tế bào mast cao đặc Long đởm 57 KẾT LUẬN 59 KIẾN NGHỊ 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 68 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ALT Alanine aminotransferase AST Aspartate aminotransferase CSF Colony stimulating factor CCL4 Carbon tetraclorua ICAM Intercellular adhesion molecule Ig Immunoglobulin IL Interleukin MHC Major histocompatibility complex Yếu tố kích thích Phân tử kết dính tế bào Phức hợp hòa hợp mô chủ yếu NSAID Nonsteroidal anti inflammatory drug Thuốc chống viêm không steroid PAF Platelet activating factor Yếu tố hoạt hóa tiểu cầu PG Prostaglandin TNF Tumor necrosis factor Yếu tố hoại tử u Th T helper cell Tế bào T hỗ trợ CĐLĐ Cao đặc Long đởm YHCT Y học cổ truyền 69 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1 Bảng phân loại dị ứng theo Gell Coombs [9] 13 Bảng Ảnh hưởng CĐLĐ mô hình gây phù chân chuột thời điểm sau gây viêm 33 Bảng Ảnh hưởng CĐLĐ mô hình gây phù chân chuột thời điểm sau gây viêm 34 Bảng 3 Ảnh hưởng CĐLĐ mô hình gây phù chân chuột thời điểm sau gây viêm 35 Bảng Ảnh hưởng CĐLĐ mô hình gây phù chân chuột thời điểm sau 24 36 Bảng Ảnh hưởng CĐLĐ lên thể tích dịch rỉ viêm 37 Bảng Ảnh hưởng CĐLĐ lên số lượng bạch cầu dịch rỉ viêm 38 Bảng Ảnh hưởng CĐLĐ lên hàm lượng protein dịch rỉ viêm 39 Bảng Tác dụng CĐLĐ lên phản xạ gãi trung bình chuột 41 Bảng Tác dụng CĐLĐ lên chiều dày chân chuột 43 Bảng 10 Tác dụng CĐLĐ lên gia tăng thể tích chân chuột 44 Bảng 11 Tác dụng cao đặc Long đởm lên tỷ lệ tế bào mast vỡ 46 70 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ Khả ức chế shock phản vệ CĐLĐ 40 Biểu đồ Tác dụng CĐLĐ lên tỷ lệ tế bào mast vỡ 47 DANH MỤC HÌNH VẼ Hình 1 Sơ đồ diễn tiến trình viêm Hình Cơ chế chống viêm Hình Các loài Long đởm [28] 18 Hình Thân rễ rễ loài Gentiana rigescens Franch [30] 19 Hình Cấu trúc hóa học Gentiopicrin 20 Hình Dược liệu Long đởm Gentiana rigescens Franch.(Ảnh chụp) 23 Hình 2 Sơ đồ bào chế cao đặc Long đởm 24 Hình Sơ đồ nghiên cứu 26 Hình Sơ đồ thời gian làm thực nghiệm nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp 27 ... dùng bệnh nhân viêm da địa, tiến hành đề tài với mục tiêu sau: Đánh giá tác dụng chống viêm cấp cao đặc Long đởm thực nghiệm Nghiên cứu tác dụng chống dị ứng cao đặc Long đởm thực nghiệm 3 Chương... đánh giá tác dụng chống dị ứng mô hình làm bền vững tế bào mast chuột nhắt trắng Tiêu chuẩn sở cao đặc Long đởm Phiếu kiểm nghiệm cao đặc Long đởm 10 Phiếu kiểm nghiệm dược liệu Long đởm PHỤ... Theo dịch rỉ viêm: viêm dịch, viêm tơ huyết, viêm mủ… - Theo tính chất: viêm đặc hiệu không đặc hiệu Viêm đặc hiệu hậu xấu phản ứng miễn dịch, lại viêm không đặc hiệu Hai loại khác chế gây viêm