phép thử LDC oxidaza hóa lỏng gelatin

Nhóm phép thử: LDC Oxidaza Hóa lỏng gelatin I Thử nghiệm LDC( Lysin Decarboxylase) Mục đích tiến hành: Xác định khả tạo enzyme decarboxylase số loại vi sinh vật, xúc tác phân cắt nhóm carboxyl số axit amin Trong chương trình học, nhóm tập trung vào phân tích phép thử LDC để khẳng định vi khuẩn Salmonella Quy trình phân tích Sallmonella Đồng nuôi cấy tăng sinh  225g dd đệm peptone, 37◦C, 24h Cấy môi trường tăng sinh chọn lọc 37◦C, 24h Cấy mt thạch nhận dạng 37◦C, 24-48h Nuôi cấy BHI/TSA Phép thử khẳng định Cơ sở phương pháp - VK Salmonella có khả tạo enzym lysin decarboxylase môi trường có lysin( ngoại trừ vài chủng S.gallinarum S.Choleraesuis) - Cơ chế lên men decarboxylase tác động lên nhóm carboxyl(-COOH) axit amin sinh amin CO2 làm pH môi trường tăng môi trường chuyển sang màu tím nhờ chất thị Bromocesol purple mt LDC CO2 Lysin enzym LDC pH amin (mt chuyển màu tím) Cách tiến hành kết - Chuẩn bị mt LDC gồm: cao nấm men 3g/l, L-Lysin HCl 10g/l, NaCl, thị Bromocersel purple 0,016g/l, glucose, peptone, dextronse, ferric(II) amonium citrate 0,5g/l - Dùng que cấy vòng/pipet chuyển sinh khối từ mt đặc hiệu (TSA/BHI) sang mt thử nghiệm LDC - Nuôi 37◦C 1-4 ngày lấy mẫu quan sát: ống màu tím: dương tính ống màu vàng: âm tính Cấy chuyền pH6,8 Nuôi 37 ◦C 1-4 ngày Mt đặc hiệu MT LDC (+) (-) II Phép thử oxydaza 1.Mục tiêu Phát vsv có hệ enzym cytochrome c oxidaza (Pseudomonas Aeruginosa) 2.Nguyên tắc phép thử khẳng định Pseudomonas Aeruginosa Hoạt tính enzym cytochrome c oxidaza phát nhờ thuốc thử TMPD ( 0,1%): p – phenylanediamin 3 Cách tiến hành bị Chuẩn Tiến hành pha loãng mẫu Phép thử khẳng định oxydaza Cấy mt thạch Pseudomonnas (42 48h) Chọn khuẩn lạc nghi ngờ  Phân tích cách tiến hành:  Chuẩn bị dung dịch muối đệm pepton vô trùng để pha loãng mẫu Pha loãng theo tỷ lệ thập phân  Chuẩn bị môi trường thạch Pseudomonas: Pepton gelatin 16g, casein thủy phân 10g, cetrimit 1,4g, thạch 15g, 1000ml H20 chỉnh pH đến 7,0 khử trùng 121 thời gian 15’  Nuôi cấy mẫu pha loãng môi trường thạch 42 24 – 48h ( 2f, hộp)  Chọn khuẩn lạc nghi ngờ ( màu xanh, tròn đều, mặt nhẵn) đặt lên giấy thấm  Nhỏ thuốc thử TMPD  Quan sát sau 10-30s + phản ứng (+): có màu xanh + phản ứng (-): màu trắng III Phép thử khả hóa lỏng gelatin clostridium Giới thiệu vi khuẩn clostridium: Các đặc điểm clostridium  Trực khuẩn  Đứng  Vi riêng lẻ thành chuỗi khuẩn Gram dương  Yếm  Bào khí bắt buộc tử hình trứng chịu nhiệt cao tới 75-80◦C  Clostridium khử sulfit thành sulfua  Clostridium perfringens bền với cycloserin Môi trường xác định clostridium Cl.perfringens  Môi trường Winson Blair  Môi trường thạch TSC  Môi trường lỏng Thioglycollat+Resazurin natri  Phương pháp nuôi cấy: Phép thử khẳng định clostridium perfringens  Mục đích: khẳng định vi khuẩn clostridium nuôi cấy thuộc loại clostridium perfringens  Phép  Cơ thử: khả hóa lỏng gelatin sở lý thuyết: clostridium perfringen có khả lên men đường lactoza- gelatin, làm cho môi trường thay đổi trạng thái từ đặc hóa lỏng Cách tiến hành phép thử  Sau nuôi cấy vi khuẩn clostridium bình kín 37◦C, 24-48h Đếm khuẩn lạc màu đen, tròn, lồi chọn khuẩn lạc nghi ngờ clostridium perfringen Chuẩn bị ống nghiệm chứa môi trường thạch gelatin Dùng que cấy lấy khuẩn lạc nghi ngờ cấy vào ống nghiệm Nuôi cấy nhiệt độ 37 24h Quan sát, nhận xét Nhận xét kết  Ống nghiệm bị hóa lỏng: dương tính vi khuẩn clostridium perfringen  Ống nghiệm chứa môi trường đông đặc : âm tính  Giải thích: clostridium perfringen có khả lên men đường lactoza, sinh khí hóa lỏng gelatin ...  Phép  Cơ thử: khả hóa lỏng gelatin sở lý thuyết: clostridium perfringen có khả lên men đường lactoza- gelatin, làm cho môi trường thay đổi trạng thái từ đặc hóa lỏng Cách tiến hành phép thử. .. mặt nhẵn) đặt lên giấy thấm  Nhỏ thuốc thử TMPD  Quan sát sau 10-30s + phản ứng (+): có màu xanh + phản ứng (-): màu trắng III Phép thử khả hóa lỏng gelatin clostridium Giới thiệu vi khuẩn... sang mt thử nghiệm LDC - Nuôi 37◦C 1-4 ngày lấy mẫu quan sát: ống màu tím: dương tính ống màu vàng: âm tính Cấy chuyền pH6,8 Nuôi 37 ◦C 1-4 ngày Mt đặc hiệu MT LDC (+) (-) II Phép thử oxydaza