Tế bào gốc và các ứng dụng trong y học

T BO GC V CC NG DNG TRONG Y HC PGS.TS.BS Trn Cụng Toi Mc tiờu: Bit c cỏc khỏi nim v t bo gc Phõn loi c mt s nhúm t bo gc Bit c cỏc ngun t bo gc c thu nhn hin Bit c mt s ng dng t bo gc y hc Hiu c tm quan trng ng dng t bo gc y hc v tim nng ng dng tng lai I CC KHI NIM T bo gc l nhng t bo cha bit húa, cú kh nng phõn chia vụ hn cỏc t chc sng, cú ngun gc t phụi, thai hay mụ c th trng thnh Di iu kin thớch hp hay cú tớn hiu kớch thớch, t bo gc s bit húa thnh cỏc t bo cú hỡnh dng v chc nng chuyờn bit nh t bo c tim, t bo da, t bo thn kinh, t bo mỏu T bo gc ang l ngun hy vng ca loi ngi vic phỏt trin liu phỏp t bo ch ng cỏc bnh him nghốo nh ung th mỏu, mt trớ nh (Azheimer), lit rung (Parkinson), tiu ng, d tt tim, bnh thiu nng dch di truyn Cỏc hot ng nghiờn cu t bo gc ang c tin hnh ti hu ht cỏc Vin, Trung tõm Sinh hc v cỏc Cụng ty Y sinh trờn th gii Hng chc ngn cụng trỡnh v t bo gc ó c cụng b bao gm cỏc lnh vc khỏc nh nghiờn cu c bn v c im sinh hc v tim nng t bo gc; nghiờn cu cụng ngh phõn lp sn xut t bo gc v nghiờn cu ng dng lõm sng T bo gc c nh ngha nh sau: T bo gc (Stem cell) l nhng t bo cú kh nng t lm mi v bit hoỏ to thnh nhng t bo bit hoỏ cao Cn phõn bit t bo gc (Stem cell) l loi t bo cú kh nng phõn chia v bit húa to cỏc loi t bo sinh dng nh t bo sng, t bo thn kinh, t bo mỏu Mt loi t bo khỏc cú tờn l t bo mm (Germ cell) l loi t bo cú kh nng phõn chia bit húa thnh t bo sinh dc nh tinh trựng hoc trng T bo gc l nhng t bo cha bit húa, khụng cú mt chc nng chuyờn bit c th no Chỳng l nhng t bo cú kh nng bit húa cao tựy theo ngun gc m chỳng cú kh nng bit húa thnh bt k dũng tờ bo mong mun no ph thuc vo iu kin ca mụi trng nuụi cy Do cú nhng c tớnh quan trng ny m t bo gc tr thnh mt lnh vc y hn vic cung cp ngun t bo cho iu tr [4-10] Mt cú c cỏc dũng t bo gc, chỳng ta cú th tin hnh cy ghộp vo mụ ca ngi bnh cú s thiu ht hoc gim chc nng ca dũng t bo ny tỏi to mi, phc hi mt phn hay hon ton cỏc chc nng b suy gim hoc ó mt Cho n nay, trờn th gii ó cú nhiu mụ hỡnh nghiờn cu thnh cụng trờn ng vt thc nghim vic s dng t bo gc iu tr mt s bnh tim mch [11-18], h thng to mỏu [19-26], tiu ng [27-31] v bnh lý ca h thn kinh [32-34] Nhng phng phỏp ny ó v ang bc u c ng dng iu tr trờn ngi Bớ quyt then cht m bo s thnh cụng, bn vng ca hng iu tr ny chớnh l cụng ngh t bo ú cỏc cụng ngh: phõn lp, nhõn v bo qun di ngy v nghiờn cu tỡm cỏc iu kin bit húa chuyờn bit úng vai trũ then cht nht Bờn cnh ú cỏc k thut cao nhm a ngun t bo gc n ỳng c quan, ỳng v trớ thng tn cn tỏi to, phc hi cựng vi cỏc tiờu chun k thut nhm lng giỏ hiu qu iu tr thay th cú vai trũ ht sc quan trng Tt c cỏc k thut, cụng ngh trờn hp thnh mt dõy chuyn cụng ngh hon chnh nhm ng dng t bo gc vo y hc lõm sng Nu chỳng ta kt hp cụng ngh t bo gc v cụng ngh gien vi vic a gien lnh vo t bo gc ca ngi bnh ri cy ghộp tr li cho bnh nhõn thỡ s ng dng ca t bo gc li cng ln hn nhiu v cú th núi l khụng cú gii hn [27] V mt chc nng ta cú cỏc loi t bo gc: T bo gc ton nng (Totipotent) l nhng t bo cú kh nng phõn chia, bit húa thnh cỏ th mi vớ d t bo gc t phụi 1-3 ngy sau th tinh T bo gc a nng (Pluripotent) l nhng t bo cú kh nng phõn chia bit húa thnh nhiu loi t bo khỏc vớ d: t bo gc t phụi nang 5-14 ngy sau th tinh T bo gc a tim nng (Multipotent) cú kh nng nh t bo gc a nng, nhiờn ngun t bo gc ny xut phỏt t ngi trng thnh hoc mỏu cung rn T bo gc n nng (Monopotent) l t bo gc ch phõn chia bit húa to mt loi t bo bit húa cao nh t bo sng da, t bo rỡa giỏc mc V ngun gc t bo cú hai loi t bo gc hin ang c ng dng: T bo gc t ngi trng thnh (Adult stem cell) l nhng t bo cha bit hoỏ c tỡm thy cỏc mụ ó bit hoỏ, cú kh nng tỏi to v bit hoỏ thnh cỏc mụ ny; T bo gc t phụi (Embryonic stem cells = ES) l t bo nguyờn phỏt t phụi, cú kh nng bit hoỏ thnh nhiu loi t bo khỏc Trong 2-3 nm gn õy, mt s tỏc gi ó chng minh khụng cú s khỏc v chc nng gia hai loi t bo ny Lnh vc to cu trỳc thay th mt phn c th cú rt sm khỏm phỏ s phỏt trin mụ nh mt qui lut Vic tỏi cu trỳc mt mụ sng bao gm c da, mch mỏu gm ba loi t bo, tuyn giỏp, t bo m v nhng mụ khỏc ó c bỏo cỏo t nm 1979-1986 E Bell v cng s Trc thi k ú cỏc mụ ghộp c ly t ngõn hng mụ, cỏc mụ ghộp ng loi sng cn cú tng hp mụ hoc c ch dch sau ghộp chng thi ghộp Hin mt s loi t bo c chỳ ý nhiu nht l cỏc t bo gc t ngi Vo nm 1998 cỏc nh nghiờn cu ó ci tin k thut nuụi cy t bo gc phụi (ES=Embryonic Stem Cell) ngi ng nghim Tp th cỏc nh nghiờn cu ch rừ, ngy cú th nuụi t bo ES ngi trờn mụi trng huyt t trờn cỏc lp mng dinh dng Nuụi cy di ngy t bo ES ngi cú hot tớnh telomerase v gi c di ca telomere, du hiu khỏc ca tng sinh t bo Tng quỏt, cỏc t bo a tim nng cú th c bit hoỏ in vitro t t bo ES v EG (Embryonic Germ Cell = T bo mm t phụi) ngi khụng tng ng v kh nng tng sinh v bit hoỏ (t bo ES thu nhn t t bo lp ca tỳi phụi sau ngy th tinh, t bo EG thu nhn t t bo sinh dc s khai 5-10 tun sau th tinh) T bo ES cú kh nng tng sinh trờn 300 qun th kộp cỏc t bo thu nhn t th phụi-sinh t EG-t ti a 7080 qun th Cỏc nh khoa hc mi bt u tỡm hiu sinh hc ca t bo ES v cú nhiu cõu hi then cht cha th tr li hoc ch tr li c mt phn Vớ d nh tinh ch v ci tin h thng nuụi cy t bo ES thỡ iu quan trng l cỏc nh khoa hc cn xỏc nh c ch cho phộp t bo ES ngi ng nghim tng sinh m khụng bit hoỏ C ch iu ho s tng sinh ca t bo ES ngi ó c bit, nú cú th ỏp dng s hiu bit ny ci tin nhng khú khn ó tn ti t lõu v kh nng t thay mi ng nghim ca t bo trng thnh Cng s rt quan trng xỏc nh c tớnh di truyn ca t bo ES, nú úng vai trũ quan trng vic gi li t bo v iu khin s bit hoỏ ca chỳng hoc xỏc nh kh nng ca chỳng cỏc c quan Mt nhng tỏc ng ca tng trng tỳi phụi chut nuụi cy l s thay i nh s methyl hoỏ cỏc gen chuyờn bit kim soỏt s tng trng v phỏt trin ca phụi Cú hay khụng s thay i tng t cỏc mu gen xy t bo ES hoc phụi nang (Blastocyte) Nu cng cú nh vy thỡ nhng tỏc ng s phỏt trin in vitro v cỏc t bo bit hoỏ-thu nhn t t bo ES, l gỡ? Vy cú th cú kh nng rng t bo ES ngi in vitro tn ti trng thỏi bit hoỏ mt phn hay khụng? V nu iu ú xy thỡ lm th no c gng tỏc ng iu khin s bit hoỏ ca chỳng hoc gi li cỏc t bo trng thỏi tng sinh Cỏc nh khoa hc cn xỏc nh tớn hiu ca nhng ng ti np phi c hot hoỏ cm ng t bo ES bit hoỏ theo ng c bit iu ny bao gm s hiu bit v s tng tỏc Ligand-Receptor v cỏc thnh phn tng tỏc ca h thng tớn hiu, cng tt nh vic xỏc nh gen no hot ng hoc khụng hot ng cú s bit hoỏ cỏc loi t bo chuyờn bit Xỏc nh cỏc trng thỏi trung gian ca quỏ trỡnh bit hoỏ t bo ES cng rt quan trng Nh t bo ES ngi bit hoỏ in vitro ó hỡnh thnh t bo tin thõn v t bo nguyờn thy thỡ cú th xỏc nh v tỏch chit c hay khụng? Nu cỏc t bo ES hỡnh thnh cỏc loi t bo trung gian, sau ú cú th gi li v m rng c hay khụng? Cỏc t bo tin thõn v t bo nguyờn thu s c s dng cho liu phỏp cy ghộp? Cui cựng cỏc nh khoa hc cn xỏc nh nhng giai on bit húa no ca t bo ES l tt nht cho nhng ng dng khỏc Chng hn nh giai on no ca t bo ES s tt nht cho sng lc thuc hoc c t hoc phõn phi kh nng tr liu ca thuc Mt khỏi nim khỏc cng cn lu ý l sinh sn vụ tớnh (cloning) l hỡnh thc hỡnh thnh cỏc th mi vi cht liu di truyn t mt t bo sinh dng V mt ngun gc cú th phõn chia cỏc t bo gc nh: 1.1 T bo gc phụi (Embryonic Stem Cells ESCs) õy l cỏc t bo c thu nhn t t bo bờn ca phụi ang lm t sut giai on phụi nang Chỳng cú kh nng bit húa thnh hu nh tt c cỏc loi t bo ca c th v c xem nh l cỏc t bo gc tim nng Chỳng cng cú kh nng tng sinh vi mt trng thỏi cha bit húa, ngha l cú kh nng t i mi Ngoi cỏc t bo gc c thu nhõn cú ngun gc t phụi nang cũn cú cỏc dũng t bo gc khỏc cng c thu nhn t phụi, chỳng c gi l cỏc t bo gc mm phụi hay t bo mm phụi thai (Embryonic Germ Cells EGCs) õy l nhng t bo c thu nhn t mm sinh dc ca thai khong t n 10 tun tui v õy l nhng t bo mm nguyờn thy s phỏt trin thnh trng hoc tinh trựng c th trng thnh Mc dự cỏc TBG thng c s dng sa cha cỏc t bo b tn thng c th trng thnh nhng cú nhiu loi TBG c tỡm thy phụi giai on sm Tng t nh vy, hin ti cú nhng bng chng mi cho thy cú nhiu li ớch sau ghộp TBG phụi ngi cú ngun gc t t bo thn kinh v t bo mụ c tim vo cỏc mụ hỡnh ng vt ca bnh Parkinson v tn thng c tim (Ben-Hur et al, 2004: Kofidis et al, 2006; Singh v Williams, 2008; Liu et al, 2008) Trong mụ hỡnh chut thớ nghhim, ngi ta s dng cỏc mụ cú ngun gc t TBG phụi iu tr cỏc mụ hỡnh bnh tiu ng, bnh parkinson (Frenck et al, 1998; Singh v Williams, 2008; Serra et al, 2002), nhi mỏu c tim (Rufer et al, 1999), chn thng ct sng (Reyes et al, 2001) v mt s bnh liờn quan n cỏc ri lon dch di truyn (Abdelkrim et al, 2009) ó cú nhiu thớ nghim vi TBG phụi chut nhiu nm qua v t c nhiu kt qu ỏng khớch l i vi vic bit húa TBG phụi thnh hu ht cỏc loi t bo quan tõm thỡ iu ny cha thc s kh thi, mc dự mt s qun th t bo (nh t bo tin thõn thn kinh) cú th thng xuyờn thu c t vic nuụi cy cỏc TBG phụi, cú th nhõn lờn v s lng v bit húa thnh cỏc t bo trng thnh i vi cỏc bnh thoỏi húa thn kinh, tt hn l ghộp t bo thn kinh tin thõn hoc t bo thn kinh hon ton trng thnh Ngc li, gn õy cú mt s nghiờn cu cho rng c trng thỏi cha bit húa cỏc TBG phụi ngi biu hin mc thp ca khỏng nguyờn HLA lp I sau ú tng lờn t bo dn trng thnh (Martin et al, 2005; Bajada et al, 2008) TBG phụi l nhng TBG a tim nng cú th phỏt trin thnh tt c cỏc loi t bo cú ngun gc t lp mm phụi Do c tớnh ny, cỏc TBG phụi cú tim nng vụ cựng ln cho liu phỏp ghộp t bo c hiu cho tng ngi bnh 1.2 T bo gc a nng cm ng (Induced Pluripotent Stem Cells iPS Cells) Cỏc t bo iPS l kt qu ca s chuyn i t mt t bo trng thnh (t bo sinh dng) thụng qua quỏ trỡnh tỏi lp trỡnh thnh t bo gc a nng Mc dự cú tớnh a tim nng, nhng cỏc t bo ny khụng c xem xột nh cỏc t bo gc phụi mc dự chỳng cú tim nng ging Vic tỏi lp trỡnh ban u c thc hin bng vic chuyn np vi retrovirus Hin ti cú nhiu n lc quỏ trỡnh thc hin tỏi lp trỡnh m khụng cn dựng vector chuyn l retrovirus cỏc nghi ng cú hi t phng phỏp ny mang li 1.3 T bo gc trng thnh (Adult Stem Cells ASCs) Qun th t bo gc trng thnh ó c tỡm thy nhiu loi mụ ca c th trng thnh Chỳng c cho l rt quan trng i vi c ch sa cha ni ti vi nhiu loi mụ v c quan ca c th Núi chung, õy l cỏc t bo gc khỏ c bit Mt nhng loi t bo gc trng thnh c s dng khỏ ph bin hin ti ú l t bo gc trung mụ (Mesenchymal Stem Cells) õy l loi t bo gc trng thnh cú mt nhiu loi mụ khỏc c th m ph bin nht l cht nn ca ty xng hay mụ m Trong thc t, vic ghộp ty xng cú th c xem l trng hp ng dng liu phỏp t bo sm nht Trong nuụi cy in vitro cỏc ASC cú th bit húa thnh nhiu loi t bo khỏc Do ú cỏc t bo gc ny cng c xem cú tớnh a nng nhng khụng phi l a tim nng hay tim nng Cỏc t bo ny cng cú kh nng t i mi nh ESCs, cú th bit húa thnh nhiu loi t bo khỏc Nh vy, cũn rt nhiu vic cn phi lm hiu rừ c c im ca cỏc loi t bo gc khỏc v cỏc yu t liờn quan quỏ trỡnh bit húa thnh mt loi t bo khỏc ca cỏc t bo gc iu ny cho thy cỏc phõn t hũa tan, cỏc tng tỏc gia t bo t bo v t bo vi mụi trng ngoi bo (vi mụi trng) ni m cỏc t bo gc hot ng tỏc ng lờn rt nhiu n cỏc hot ng ca t bo gc, giỳp chỳng tng sinh, bit húa hay trỡ trng thỏi khụng bit húa ca mỡnh thi gian di hot ng tr li sau ú Hỡnh: S phõn loi t bo gc (Ngun: V Ramakrishna, P B Janardhan and L Sudarsanareddy (2011), Stem Cells and Regenerative Medicine A Review, Annual Review & Research in Biology, 1(4): 79-110) Qun th TBG trng thnh ó c miờu t rt chi tit ty xng chut v ngi, ni chỳng luụn bit húa thay th cỏc t bo mỏu ngoi vi b mt i T cỏc nghiờn cu v h thng to mỏu ó xỏc nh mt qun th TBG cú kh nng t i mi v to nhiu loi t bo ca cỏc dũng t bo khỏc m ngy c bit n nh l cỏc TBG to mỏu Kh nng ca cỏc TBG to mỏu bờn ty xng phỏt trin thnh tt c cỏc thnh phn t bo ca mỏu ó c khai thỏc rng rói lõm sng ghộp ty xng v ghộp t bo gc to mỏu Mt s bỏo cỏo gn õy cho thy cỏc TBG ny cú th bit húa thnh cỏc t bo khỏc vi loi mụ m TBG c thu nhn (chuyn bit húa) Ngoi cỏc TBG to mỏu ra, hin ti cỏc loi TBG trng thnh cú th c tỡm thy nhiu loi mụ khỏc Nh hai loi mụ c v mụ thn cng l ngun cung cp TBG trng thnh (Jackson et al, 1999; Galli et al, 2000; Ma et al, 2008), ú ty xng c xem nh l nh mỏy sn xut cỏc t bo tin thõn ca mụ c (Ferrari et al, 1998) Ngoi ra, cht nn ty xng cú cha cỏc TBG trung mụ (Liechty et al, 2000; Abdelkrim et al, 2009) cng cú th phỏt trin thnh t bo bo thn kinh v thn kinh m (Mezey et al, 2000; Woodbury et al, 2000; Ma et al, 2008) cng nh bit húa thnh nhiu loi t bo khỏc, thm l chỳng cú kh nng chuyn bit húa (kh nng bit húa thnh cỏc loi t bo khỏc vi ngun gc lỏ mm phụi) Tht vy, kh nng phỏt trin thnh nhiu dũng t bo khỏc ca cỏc TBG trung mụ v TBG to mỏu bờn ty xng l i tng c nghiờn cu rt nhiu v tho lun rt sụi ni (Liechty et al, 2000; Weissman, 2000; Gardner, 2007; Gorden, 2008; Bajada et al, 2008) T bo gc t t bo phụi chuyn gien: T bo trng c loi b nhõn v sau ú c chuyn nhõn ca mt t bo trng thnh ó bit húa bt k T bo trng c chuyn nhõn s phõn chia v phỏt trin nh mt trng ó c th tinh Cỏc t bo gc phụi chuyn gien l cỏc t bo ton nng, ging ht nh t bo gc phụi c to th tinh õy l cỏch m cỏc nh khoa hc to t bo phụi song trỏnh c s tr ngi ca o c k thut ny to mt bc t phỏ vic to t bo gc phụi ton nng Tuy nhiờn, tr ngi v k thut lm cho nghiờn cu ny cú nhiu hn ch [35] TèNH HèNH NGHIấN CU NGOI NC T bo gc l nhng t bo cha bit húa, cú kh nng phõn chia vụ hn cỏc t chc sng, cú ngun gc t phụi, thai hay mụ c th trng thnh Di iu kin thớch hp hay cú tớn hiu kớch thớch, t bo gc s bit húa thnh cỏc t bo cú hỡnh dng v chc nng chuyờn bit nh t bo c tim, t bo da, t bo thn kinh, t bo mỏu T bo gc ang l ngun hy vng ca loi ngi vic phỏt trin liu phỏp t bo ch ng cỏc bnh him nghốo nh ung th u, mt trớ nh (Azheimer), lit rung (Parkinson), tiu ng, d tt tim, bnh thiu nng dch di truyn v nhiu bnh khỏc Cỏc hot ng nghiờn cu t bo gc ang c tin hnh ti hu ht cỏc Vin, Trung tõm Sinh hc v cỏc Cụng ty Y sinh trờn th gii Hng chc ngn cụng trỡnh v t bo gc ó c cụng b bao gm cỏc lnh vc khỏc nh nghiờn cu c bn v c im sinh hc v tim nng t bo gc; nghiờn cu cụng ngh phõn lp sn xut t bo gc v nghiờn cu ng dng lõm sng Vi nhng hiu bit ó tớch ly, tn s nghiờn cu v u t hin nay, cú th núi cụng ngh t bo gc ang ngng hỡnh thnh mt cuc cỏch mng mi Y hc tỏi to nhng nm u ca th k 21 - Nm 1968, ca ghộp ty xng u tiờn (t bo gc trng thnh) ó thnh cụng vic cha tr bnh khim khuyt dch kt hp trm trng (Severe Combined Immunodeficiency Disorder - SCID) - T nm 1970, cỏc t bo gc trng thnh ó c s dng thnh cụng iu tr bnh khim khuyt dch v leukemia - Trong nhiu nm, t bo phụi ngi ó c s dng nuụi cy virus cỏc nghiờn cu vaccin v thuc cha bnh cho ngi Nm 1954, John Enders ln u tiờn ó s dng cỏc t bo phụi nuụi virus Polio - Nm 1998, ln u tiờn ó phõn lp c t bo gc phụi ngi James Thomson (i hc Wisconson - Madison) ó phõn lp cỏc t bo t t bo bờn ca phụi nang v ó phỏt trin cỏc dũng t bo gc phụi ngi u tiờn John Gearhart (i hc Johns Hopkins) ó thu c t bo gc phụi ngi t cỏc t bo mụ sinh dc ca thai - Nm 2000, Pera, Trounson v Bongso (Singapore v c) ó bit húa t bo gc phụi ngi t t bo bờn ca phụi nang T bo gc phụi phỏt trin nhanh chúng iu kin nuụi cy in vitro, trỡ kiu nhõn bỡnh thng, cú kh nng bit húa thnh cỏc dũng t bo khỏc thu t ba lp phụi - Nm 2001, tip tc nghiờn cu bit húa t bo mm phụi ngi thnh cỏc dũng t bo khỏc nhau, nhiu nhúm nghiờn cu ó bỏo cỏo cỏc phng phỏp nh hng s bit húa t bo gc phụi iu kin nuụi cy in vitro, bao gm nhng t bo ty tng, t bo thn kinh, t bo c tim - Thỏng nm 2004, A Melton v cng s ó bit húa 17 loi t bo khỏc t t bo gc phụi thu nhn t t bo bờn ca blastocyst ngi Riờng v lónh vc ng dng t bo gc iu tr tn thng b mt nhón cu, nhiu cụng trỡnh nghiờn cu ó c cụng b - Nm 2000, Koizumi NJ v cng s ó nuụi cy t bo rỡa giỏc mc v ghộp t thõn trờn th Cựng nm ny, Chen HJ v cng s cng ó thnh cụng s dng mng i ghộp iu tr loột giỏc mc nng Mt nhúm nghiờn cu ca tỏc gi Tsai RJ ó bỏo cỏo thnh cụng nghiờn cu tỏi to giỏc mc tn thng bng ghộp t bo biu mụ limbal t thõn - Nm 2002, Jun Shimazaki ó nuụi cy t bo vựng rỡa giỏc mc ngi trờn mng i iu tr cỏc bnh lớ b mt nhón cu - Nm 2005, Ang v cng s ó bỏo cỏo nuụi cy t bo biu mụ kt mc trờn mng i Sau ú tin hnh ghộp trờn 22 bnh nhõn Kt qu cho thy tt c bnh nhõn ó hi phc sau 14 thỏng iu tr - Gn õy, nm 2007 Kazunari Higa v cng s ó to c tm biu mụ giỏc mc trờn mng i v ghộp iu tr trờn th Kt qu cho thy tm biu mụ giỏc mc trỡ c tớnh gc ca t bo sau ghộp Nhn nh chung v tỡnh hỡnh nghiờn cu v trin khai ng dng t bo gc trờn th gii - u t nghiờn cu v ng dng cụng ngh t bo gc ang liờn tc tng lờn, cuc cnh tranh nhm ginh v trớ dn u th gii v t bo gc ang din gay gt gia cỏc nc, c bit ln súng nghiờn cu v t bo gc phụi ngui ó nhanh chúng lan ta t Chõu u sang Chõu vi nhng ci tin ỏng ghi nhn - Nm 2004, Nht Bn ó khỏnh thnh cỏc phũng thớ nghim hin i nht th gii vi cỏc chng trỡnh nghiờn cu c bn mụ hỡnh t bo gc ti Vin Sinh hc phỏt trin Riken Trong nm qua, chớnh ph Hn Quc ó u t 27 triu ụ la cho t bo gc Ti Singapore, chớnh ph ó u t mnh m cho nghiờn cu t bo gc, ú cú t hp phũng thớ nghim Biopolis rng 18.000m2 v ó u t 22 triu ụ la cho Cụng ty ES Cell International, cụng ty ang s hu dũng t bo gc v ang trung nghiờn cu ng dng chỳng iu tr bnh tiu ng Australia, Trung Quc, Nht Bn, n , Thỏi Lan, cng coi nghiờn cu t bo gc l mt ũn by ca cụng ngh sinh hc - Nhng u t v chng trỡnh nghiờn cu ny cho thy tm quan trng ca nghiờn cu c s khoa hc cụng ngh lm nn tng cho vic phỏt trin liu phỏp t bo gc iu tr - Liu phỏp t bo gc s l mt gic m nu chỳng ta khụng th hiu v kim soỏt cỏc tin trỡnh kớch thớch t bo gc, bin chỳng thnh nhng loi t bo chuyờn bit. (Theo GS Julia Goodfellow, giỏm c iu hnh BBSRC (Hi ng nghiờn cu cụng ngh sinh hc v khoa hc sinh hc Anh) TèNH HèNH NGHIấN CU TRONG NC Nghiờn cu v t bo gc l mt lónh vc mi m nc ta, ch mi bt u tin hnh vũng thp niờn tr li õy, rt ớt cụng trỡnh c ng ti, c bit l nhng cụng trỡnh ng dng t bo gc vo mc ớch iu tr v cỏc mc ớch thc t khỏc Ngoi tr mt s ti nghiờn cu v t bo gc phụi ng vt (Nguyn Mng Hựng v CS nm 2004, Khc Hiu v CS nm 2005) hu ht cỏc nghiờn cu u trung vo t bo gc ngi trng thnh hoc t bo gc t mỏu cung rn - Nghiờn cu qui trỡnh nuụi cy t bo sng t thõn trờn mng nn collagen iu tr bng sõu v cỏc vt thng mt da, ti nghiờn cu cp nh nc Vin Bng quc gia thc hin Ti Trng i hc Khoa hc T nhiờn, i hc Quc gia Thnh ph H Chớ Minh, cỏc nghiờn cu v t bo gc ó tin hnh t nhiu nm qua Cỏc nghiờn cu ó bt u tip cn n vic nuụi cy v ng dng t bo gc t nhiu ngun khỏc bao gm: t bo gc thu nhn t phụi, t bo gc thu nhn t thai v t bo gc trng thnh trờn hai i tng chut v ngi Mt s dũng t bo ó thu nhn nh t bo gc phụi thu nhn t blastocyst chut, t bo mm thu nhn t cu sinh dc chut, t bo gc trung mụ t tu xng chut, nguyờn bo si thu nhn t da quy u ngi, mng i ngiPhan Kim Ngc v CS (2,5,6,7,11,12,18) ó nghiờn cu cú kt qu vic thu nhn, nuụi cy v ỏnh giỏ tớnh gc ca t bo gc t mỏu cung rn Mt s nghiờn cu v bit húa t bo gc thnh t bo thn kinh, t bo si, t bo m, t bo c tim, t bo tit insulin ó cho kt qu bc u, lm nn tng cho nhng nghiờn cu hon chnh, k thut cú th ng dng sau ny (Phm Vn Phỳc v CS, nm 2008) Trn Lờ Bo H (2007) ó bc u nghiờn cu thit k vi mụi trng lm giỏ th thu nhn t bo gc ngi Ti Trng i hc y khoa Phm Ngc Thch TPHCM, nhúm nghiờn cu ca Trn Cụng Toi ó quan tõm nghiờn cu ng dng t bo gc, t bo sng vo thc t iu tr mt s bnh (bng, bnh lớ giỏc mc) Bnh vin truyn mỏu huyt hc TPHCM l mt nhng c s i tiờn phong lónh vc nghiờn cu c bn v nghiờn cu ng dng t bo gc (t bo gc mỏu cung rn) Trn Vn Bộ, Nguyn Tn Bnh, Hunh Ngha v CS ó cú nhiu cụng trỡnh c ng ti v phõn lp, nuụi cy, ghộp t bo gc mỏu cung rn trờn cỏc bnh nhõn b cỏc bnh mỏu ỏc tớnh (20, 24, 25, 28, 30, 31,32) Gn õy, B khoa hc v cụng ngh cng nh mt s trng i hc, vin nghiờn cu, bnh vin ó quan tõm nhiu hn n lnh vc nghiờn cu t bo gc Dn dn nc ta ó hỡnh thnh mt s phũng thớ nghim v mt s nhúm nghiờn cu v t bo gc i hc quc gia TPHCM, Trng i hc Y khoa Phm Ngc Thch, Trng i hc Y H Ni, Bnh vin 108, Bnh vin truyn mỏu huyt hc TPHCMMt s ti nghiờn cu khoa hc cp nh nc ang c trin khai, t c mt s kt qu bc u kh quan Ti cụng ty dc Mekophar ó xõy dng ngõn hng mỏu cung rn v t bo biu mụ bc cung rn Ngõn hng ang i vo hot ng v cú th h tr cho cỏc nghiờn cu c bn v nghiờn cu ng dng t bo gc vo iu tr Ti TPHCM, vic B khoa hc cụng ngh v S khoa hc cụng ngh ó u t xõy dng phũng thớ nghim trng im chuyờn v nghiờn cu ng dng t bo gc l mt tớn hiu ỏng mng Chc chn phũng thớ nghim ny s l mt nhng ch da giỳp cỏc nh khoa hc ti TPHCM v c nc y mnh nghiờn cu t bo gc t hiu qu tt hn Nm 2007 S khoa hc cụng ngh TPHCM ó phờ duyt v cp kinh phớ thc hin ti: Nghiờn cu ng dng t bo vựng rỡa giỏc mc v bc u bit húa t bo gc mỏu cung rn ngi Trn Cụng Toi v Phan Kim Ngc lm ch nhim ( ) Trong khuụn kh ti ny, 20 bnh nhõn b cỏc bnh lớ v giỏc mc (hi chng Steven-Johnson, so giỏc mc, mng tht, ) ó c iu tr bng phng phỏp t bo gc v ó t hiu qu tt Nh vy, ti S khoa hc cụng ngh TPHCM qun lớ ny cú mt s ni dung tng t vi ti c lp cp nh nc Nghiờn cu quy trỡnh s dng t bo gc iu tr mt s bnh lớ b mt nhón cu ng kớ thc hin ti cp nh nc ny l rt cn thit cho s phỏt trin s nghip nghiờn cu ng dng t bo gc vo iu tr cỏc bnh lớ ngi õy cng l c hi nhúm nghiờn cu chỳng tụi tip tc hon thin cỏc k thut v t bo gc phc v iu tr cỏc bnh lớ giỏc mc C th l: hon thin quy trỡnh phõn lp nuụi cy, xỏc nh tớnh gc, bit húa t bo gc biu mụ vựng rỡa giỏc mc v biu mụ niờm mc ming; so sỏnh hiu qu v cht lng ca t bo gc vựng rỡa giỏc mc v t bo gc biu mụ niờm mc ming; hon thin quy trỡnh k thut ghộp; ỏnh giỏ hiu qu v tiờu tn (cost-benefit); o to v hỡnh thnh i ng cỏc nh khoa hc v k thut viờn cú th trỡ v phỏt trin cỏc nghiờn cu ng dng t bo gc y hc tỏi to II CC NGUN THU NHN Tấ BO GC ( ) Trn Cụng Toi, Phan Kim Ngc Nghiờn cu ng dng t bo vựng rỡa giỏc mc v bc u bit húa t bo gc mỏu cung rn ngi ti nghiờn cu S Khoa hc Cụng ngh TP.HCM 2007 2009 Da trờn cỏc giai on phỏt trin t trng th tinh cho n giai on phỏt trin thnh cỏc th hon chnh m cú th thu nhn t bo gc Tựy thuc vo ngun thu nhn m chỳng ta cú th t c ngun t bo gc phụi hoc t bo gc ngi trng thnh v t ngun gc t bo ny m cú th nuụi cy, bit húa to nhng dũng t bo v hoc mụ tng ng Do thi lng cú hn xin gii thiu mt loi t bo gc d thu nhn v hin cú nhiu tớnh nng u vit ú l t bo gc mỏu cung rn ngi T thp niờn 70 ca th k trc, mỏu cung rn ngi bt c c lu ý vỡ mang mt s c tớnh tim nng, ngun cung cp t bo gc di vi s lng khụng nh nu bit tn dng Vỡ vy, mỏu cung rn dc xem nh ngun t bo gc d tr ti u Ngun gc t bo mỏu cung rn S hỡnh thnh t bo mỏu xut phỏt t trung bỡ phụi thai Nhng t bo non s khai ca dũng hng cu v nhng t bo to mỏu mang CD34 + c tỡm thy u tiờn tỳi nừan hũang sau 18,5 ngy th tinh Nhng t bo tim nng ca hai dng lympho v dng ty c tỡm thy vựng ng mch ch-tuyn sinh dc-trung thn vo ngy 24-34 sau th tinh Mng ni mch cú kh nng to mỏu nm mt lng ng mch ch cng cú ngun gc ng mch ch-tuyn sinh dc-trung thn Cú mi liờn quan cht ch gia to mỏu v to mch, vỡ chỳng cựng c to t loi t bo gc Nhng t bo gc di chuyn khp c th theo dũng mỏu ú nhng t bo to mỏu t tỳi nừan hũang hay vựng ng mch ch-tuyn sinh dc-trung thn n gan Vo tun th ca s phỏt trin phụi, gan l c quan chớnh ca s to mỏu ca thai, sau ú cỏc t bo gc t gan s di chuyn vo ty xng thnh c quan to mỏu vo thỏng 4-5 ca thai T thỏng th 6, ty xng l c quan m nhn to mỏu chớnh thc mc dự s to mỏu cũn gan v lỏch n sau sanh tun Cu trỳc v s phỏt trin ca cung rn, mỏu cung rn Cung rn to s liờn kt gia m v thai nhi Cung rn cu to gm mt tnh mch rn v ng mch rn c bao quanh bi lp thch mụ nhy Wharton v bờn ngũai l mng i mt ct ngang cung rn, cho thy vựng phõn bit gia t bo m v cht nn gm: lp di mng i, lp thch Wharton lp ỏo gia v lp ngoi mc bao quanh cỏc mch mỏu Vựng mụ nhy Wharton di vi cỏc phõn t ca cht nn m nh collagen loi I, III, VI, lamina, heparin sulfate proteoglycan Mụ nhy c bao quanh bi cỏc t bo m, l nhng t bo mnh mai cú hỡnh dng nh si c Nhng si c ny gm vimentin v actin ging desmin Vo giai on u cung rn ch c cu to vimentin v desmin Cu trỳc v thnh phn ca mỏu cung rn l mụ m cú tớnh n hi cao giỳp bo v mch mỏu ỏp lc v d dng cho s trao i cht gia mỏu cung rn v dch i Cung rn cú ngun gc t lp trung bỡ ngũai phụi Sau giai on phụi nang, t bo bờn s to thnh thng bỡ phụi Cỏc t bo thng bỡ phụi s i qua ng nguyờn thy to nờn trung bỡ Trung bỡ ngoi phụi s tng sau vi giai on to phụi to thnh trung bỡ lỏ nuụi, trung bỡ i v cung phụi Chớnh vỡ vy lp trung bỡ ngoi phụi cu to nờn mng m, mng i, tỳi noón hong v c cung rn Phõn loi t bo mỏu cuụng rn T bo gc to mỏu Cỏc marker b mt t bo c s dng xỏc nh dng t bo v giai on phỏt trin Khỏng nguyờn CD34 l glycoprotein biu hin dng t bo gc to mỏu v t bo u dũng khỏc õm tớnh i vi khỏng nguyờn CD34 Trong mỏu cung rn trng thnh, t bo CD34 chim 1% s t bo cú nhõn tng t nh ty xng Tuy nhiờn, i vi tui thai nh s lng t bo CD34 lờn ti 11% sau ú s lng t bo gim dn tui thai tng Marker CD34 khụng th phõn bit gia t bo gc v t bo u dũng, ú phi s dng kt hp nhiu marker khỏc T bo gc to mỏu mỏu cung rn: t bo hỡnh thnh dũng bch cu ht v i thc bo, t bo u dũng hng cu, t bo u dũng tiu cu T bo trung mụ Cú th bit húa thnh: xng, sn, gõn, m, mụ liờn kt h tr cho t bo gc to mỏu bit húa Phõn lp t bo trung mụ chớnh da vo nhng t bo bỏm trờn chai nuụi v phỏt trin iu kin c bit hoc s dng cỏc marker tng ng T bo gc sinh dng khụng gii hn: Gn õy Kogler v cng s ó xỏc nh mt s ớt t bo gc m tớnh CD45 v HLA lp II mỏu cung rn, t bo ny khụng bit húa iu kin bỡnh thng nhng nhng iu kin c bit nú tng sinh rt mnh cú th bit húa thnh nhng dũng t bo ca ngoi bỡ, trung bỡ v ni bỡ T bo gc ging t bo gc phụi mỏu cung rn Theo bỏo cỏo ca McGuckin v cng s s nhng t bo bỏm ca mỏu cung rn, cú mt s t bo gc phụi v cỏc phn ng dch cng cho thy ging t bo gc phụi Nhng t bo ny cú th bit húa thnh t bo thn kinh, gan, ty, xng, m, mch mỏu T bo u dũng a tim nng t mỏu cung rn Cú nhng c im khỏc vi t bo gc to mỏu v t bo trung mụ Sau cy 3-4 tun, nhng t bo ny to thnh lp n, hỡnh dng ng nht ging nguyờn bo si Nhng t bo ny cú kh nng bit húa thnh to ct bo, t bo ni mụ, gan v thn kinh T bo bit húa thnh t bo thn kinh cú marker tyrosin hydroxylase, acetylcholinesterase v glutamate decarboxylase S lng cỏc loi t bo u dũng 1ml mỏu cung rn 8000 t bo hng cu u dũng 13000-24000 t bo u dũng ty 1000-10000 t bo a nng Trong cỏc loi t bo gc trng thnh, t bo gc to mỏu c nghiờn cu ng dng nhiu nht T bo gc to mỏu ó c nghiờn cu t nhng thp niờn 60 T s phỏt trin ny dn n ghộp t bo mỏu cung rn ó c ng dng iu tr cỏc bnh mỏu ỏc tớnh ti cỏc nc trờn th gii cng nh ti Vit Nam c im sinh hc ca t bo gc t mỏu cung rn Trong cỏc nghiờn cu cho thy thi gian sng v tng sinh trung bỡnh khong thỏng So vi t bo gc t ty xng, t bo gc t mỏu cung rn cú kh nng tng sinh mnh hn ln, s lng t bo CD34 + hn ln, cú chiu di gen telomerase di hn Do t bo gc mỏu cung rn cha trng thnh nờn phn ng dch i vi s thi ghộp gim Mỏu cung rn cú th bo qun lnh tr nhiu nm m khụng mt kh nng sng ng dng ca t bo MCR T bo mỏu cung rn l ngun t bo a tim nng sa cha v tỏi to mụ Mỏu cung rn ó c bỏo cỏo l ngun t bo gc to mỏu, t bo ni mụ u dũng, t bo trung mụ v nhiu dũng t bo khỏc Nhng dũng t bo a tim nng ny cú kh nng bit húa thnh nhng t bo ca nhiu loi mụ Trờn th gii mi nm cú hn 100 triu tr i, mỏu cung rn l ngun t bo ln iu tr Mt iu thun li rt ln l t bo mỏu cung rn phỏt trin rt mnh v cha tip xỳc vi cỏc yu t dch Bn lnh vc ng dng mnh t bo trung mụ mỏu cung rn l: ghộp ti ch, ghộp ton thõn, kt hp iu tr t bo gc vi liu phỏp gien v s dng cụng ngh mụ Ghộp ti ch: tiờm ti ch t bo trung mụ t thõn nhng bnh nhõn khim khuyt xng ln cho thy lnh ch khuyt xng Cỏc bỏo cỏo khỏc c thc hin vi khim khuyt sn, bnh ng mch vnh v cỏc vt thng da mn tớnh T bo c tiờm ó dung np rt tt v cỏc kt qu t c khỏ ngon mc Tuy nhiờn, cỏc kt qu ny nờn c cng c bng cỏc th nghim lõm sng vi s lng bnh nhõn thớch hp Ghộp ton thõn: ó cú mt s th nghim s dng t bo trung mụ ng loi ghộp trờn tr em b bnh to xng bt ton nhng hin ti kt qu cha rừ rng Kt hp t bo gc v liu phỏp gien: s bin i gien ca t bo gc l mc tiờu hp dn liu phỏp gien vỡ kh nng tng sinh mnh m v thi gian sng di hn so vi t bo sinh dng T bo trung mụ cú th biu hin cỏc protein ngoi sinh cú th trỡ kh nng ny nờn ng dng iu tr theo phng phỏp ny kh thi Cụng ngh mụ: cung cp cỏc gii phỏp thay th cú c cỏc mụ v c quan cn cho vic ghộp vỡ cỏc c quan ca ngi hin rt hn ch v b thi ghộp Cụng ngh mụ cho phộp nhn c t bo ca chớnh bnh nhõn, nuụi chỳng trờn giỏ ghộp hỡnh thnh nhng mụ c bit v nhng mụ ny cú th sa cha mụ khim khuyt bnh hoc chn thng T bo trung mụ l loi t bo tt s dng cụng ngh mụ vỡ chỳng cú th c nuụi cy in vitro cú kh nng tng sinh v bit húa rt tt Mt vi loi giỏ th hin ti ang c s dng t vt liu sinh hc hoc cú ngun gc polymer c phõn lp t cht nn ngoi bo, collagen loi I hoc fibronectin ó cú vi th nghim c thc hin trờn ng vt v ng dng trờn ngi s c thc hin mt tng lai rt gn u im ca ngun t bo gc mỏu cung rn T bo gc cú th c phõn lp t phụi, mụ thai, dch i, mỏu cung rn v t ngun mụ trng thnh T bo gc t mụ trng thnh cú nhiu c quan c th nh: mt, nóo, mụ m, mm rng, gan, ty, da, ty xng, ng tiờu húa Hin nay, cỏc nh khoa hc trung mi quan tõm sang t bo gc t mỏu cung rn, ú cú t bo gc trung mụ t mỏu cung rn cỏc c im sau: Khụng vi phm y c v tớn ngng tụn giỏo v vic s dng ngun t bo ny, khụng gõy nh hng n m v quỏ trỡnh thu nhn mỏu cung rn Ngun cung cp mỏu cung rn l vụ tn Mỏu cung rn d thu nhn, cú th lu tr lõu di v sn sng s dng nhanh chúng cn t gõy phn ng thi ghộp cy ghộp Cỏc t bo t c th mi sinh thng ớt mang cỏc mm bnh gii phỏp phũng trỏnh tr liuvớ d to dũng nguyờn bo si, nguyờn bo xng, nuụi cy trờn giỏ th san hụ hoc t em ghộp li cho bnh nhõn Cỏc ng dng nuụi cy to da iu tr cỏc vt thng mt da, u cỏc tỏc gi nuụi cy t bo sng v dn dn c nhng t bo sc t, t bo Langerhans to thnh biu mụ da hon chnh ghộp cho bnh nhõn Vic cy ghộp t bo v mụ thay th cỏc b phn h hoi ca c th l c mun ca y hc cú t rt lõu Tuy vy, cỏc ng dng ny cng ch ỏp dng vo cui th k 20 ny Cỏc t bo c cy ghộp vo c th nh: iu tr ung th mỏu, mt bnh lý gõy suy ty l c ch phỏt trin mt s dũng t bo Vỡ vy cỏch iu tr l dựng hoỏ cht tiờu dit cỏc t bo ung th k c nhng t bo gc v sau ú s dng t bo gc ty xng ng loi ghộp vo, vi ngun gc t t bo tu xng hoc t bo gc mỏu ngoi biờn ngi cho hoc cú th s dng t bo gc t mỏu cung rn sau sinh; iu tr tn thng cỏc t bo thn kinh chn thng hoc bnh lý thoỏi hoỏ iu tr cỏc bnh lý b mt nhón cu iu tr cỏc bnh lý tim mch iu tr cỏc bnh lý c, da Liu phỏp gen cú th c phỏt huy bng cỏch s dng t bo gc bin i di truyn nh mt vector mang gen chuyn Hai khim khuyt ln ca liu phỏp gen: (1) Cỏc ri ro h thng mang gen cú th gõy (2) S ỏp ng thi loi dch S dng t bo gc a gen vo c th, theo lý thuyt s khc phc hai khú khn trờn, bi chỳng l ca bn thõn (my stem cell), ngha la thu nhn t bo sinh dng trng thnh ca c th dựng cho nhõn, nhõn ny c chuyn vo t bo trng loi b nhõn v sau ú t bo ny s phỏt trin to thnh phụi mi giai on blastocyst, cỏc t bo gc lp ICM c thu nhn, chỳng c gi l cỏc my stem cell (myES) Khụng ging nh h thng mang gen ca virus tim n nhiu ri ro, cỏc myES hu nh an ton, b gen la ca c th ch v vỡ vy, cỏc t bo ny khú b thi loi IV CC XU HNG PHT TRIN Cỏc nh khoa hc ang nghiờn cu nhiu dũng, nhiu chng loi t bo s dng y hc nht l lnh vc ghộp vi nhu cu ngy cng tng chn oỏn v iu tr Mt cỏch n gin dựng phng phỏp phõn lp, bo qun v em ghộp cho bnh nhn, vớ d nh bo qun t bo gc tu xng t mỏu ngoi biờn hoc t mỏu cun rn v ghộp li cn, bo qun tinh trựng v trng hoc phụi giai on sm Cao cp hn cỏc tỏc gi hon thin dn nuụi cy t bo v ghộp nh ghộp t bo bờta tu iu tr bnh nhõn ỏi thỏo ng ph thuc insulin, nguyờn bo si, nguyờn bo xng, t bo sntrờn mụi trng nuụi cy thụng thng hoc trờn cỏc giỏ th san hụ, si, titanium giỳp ngy cng nõng cao cht lng iu tr Mt quan im khỏc m cỏc nh khoa hc cng rt quan tõm l lnh vc sinh sn vụ tớnh, hoc cỏc mụ bng cỏc phng phỏp nuụi cy Nhiu tim nng ng dng t bo ES ó c ngh, khụng liờn quan n ghộp c quan Vớ d nh: t bo ES ngi cú th c dựng nghiờn cu cỏc s kin sm s phỏt trin ca ngi Nhng s kin cha c gii thớch giai on u ca s phỏt trin ngi cú th l kt qu thiu ht bm sinh, quỏi thai, m dn u l s xy thai t phỏt Bng nghiờn cu t bo ES ngi ng nghim, cú th xỏc nh cỏc s kiờn v di truyn phõn t, v cỏc cú liờn quan gõy nh hng xu n tỡnh trng sc kho tỡm phng phỏp ngn chn chỳng Cỏc t bo cng cú th c dựng thm dũ tỏc ng ca cỏc nhim sc th bt thng s phỏt trin sm iu ny bao gm kh nng kim soỏt s phỏt trin ca cỏc mụ ung th giai on sm T bo ES ngi cng c dựng kim tra thuc tr bnh mi Hin trc thuc mi c kim tra trờn nhng ngi tỡnh nguyn, chỳng c a vo mt lot cỏc kim tra u iu ú bao gm sng lc thuc trờn mụ hỡnh ng vt vớ d nh kim tra in vitro m nú liờn quan n vic a thuc vo mt vt ỏnh giỏ mc an ton ca thuc Mc dự kim tra mụ hỡnh ng vt l phng phỏp chớnh ca cỏc nghiờn cu v s dng thuc nhng nú khụng th luụn luụn d oỏn c nhng tỏc ng ca thuc cú th cú t bo ngi Vỡ lý ny, t bo ngi nuụi cy luụn c dựng cho bc kim tra u Vi nhng hiu bit ó tớch ly, tn s nghiờn cu v u t hin nay, cú th núi cng ngh t bo gc ang ngng hỡnh thnh mt cuc cỏch mng mi Y hc iu tr nhng nm u ca th k 21 Ti liu tham kho Trn Vn Bộ Nghiờn cu ng dng k thut x lớ v tr t bo gc mỏu cung rn ti cp b, B Y t Vit Nam 2000: 29-33, 34-41 Trn Vn Bộ Nghiờn cu hon thin k thut chit tỏch t bo gc to mỏu t mỏu cung rn iu tr bnh lớ v mỏu ti cp s, S khoa hc cụng ngh TPH Chớ Minh 2004: 11-14 Nguyn Trớ Dng Sinh hc phõn t t bo 2008; 1: 274-276 Nguyn Trớ Dng Phụi thai hc ngi 2005: 5-7 Ngụ Quang Hng, Nguyn Hong Vin Thanh Nghiờn cu phõn lp t bo gc mỏu cung rn ng dng nuụi cy bit húa Lun tt nghip bỏc s y khoa 2007 Hunh Ngha Nghiờn cu ng dng quy trỡnh x lớ t bo gc mỏu cung rn Lun ỏn tin s Y hc 2007 Phan Kim Ngc, Phm Vn Phỳc Cụng ngh sinh hc ngi v ng vt Nh xut bn giỏo dc 2006 Nguyn Th Thựy, Thỏi Thi Mai Duyờn Kho sỏt th tớch mỏu cung rn Y hc Vit Nam 1998; 221: 1-6 Phan Vit Xuõn Thu nhn v nuụi cy t bo mỏu cung rn trờn mng i ngi Khúa lun c nhõn khoa hc-Chuyờn ngnh sinh hc 2007: 43-44 10 Erices A, Conget P, Minguell JJ Mesenchymal progenitor cells in human umbilical cord blood Br J Haematol 2000; 109: 235-242 11 J A Allay, J E Dennis, S E Haynesworth, M K Majumdar D LacZ and interleukin-3 expression in vivo after retroviral transduction of marrow-derived human osteogenic mesenchymal progenitors Human Gene Therapy 1997; 8: 1417-1427 12 B Assmus, V Schachinger, C Teupe, RLehmann M Britten, N Transplantation of progenitor cells and regeneration enhancement in acute myocardial infarction Circulation 2002; 106: 3009-3017 13 E V Badiavas, V Falanga: T Arch Treatment of chronic wounds with bone marrow-derived cells Dermatol 2003; 139: 510-516 14 Strauer BE, Bremh M Repair of infracted myocardium by autologous intracoronary mononuclear bone marrow cell transplantation in human Circulation 2002; 106: 1913-1918 15 Vacanti CA, Vacanti JP Bone and cartilage reconstruction with tissue engineering approaches Otolaryngol Clin North Am 1994; 27: 263-276 16 Damien CJ, Parsons JR Bone graft and bone graft substitutes: a review of current technology and applications J Appl Biomater 1991; 2: 187-208 17 Orlic D Adult bone marrow stem cells regenerate myocardium in ischemic heart disease Ann N Y Acad Sci 2003; 996 18 MD Daniel V Surbek, Eva Visca Umbilical cord blood collection before placental delivery during cesarean delivery increases cord blood volume and nucleated cell number available for transplantation Am J Obstet Gynecol 2000; 183: 218-222 19 D R Diduch, L C Jordan, C M Mierisch & G Balian Marrow stromal cells embedded in alginate for repair of osteochondral defects Arthroscopy 2000; 16: 571-577 20 Robert A Dracker Cord blood stem cell: How to get them and what to with them Journal of Hematotherapy 1996; 5: 145-148 21 Denhardt DT, Mistretta D, Chambers AF Transcriptional regulation of osteopontin and the metastatic phenotype: evidence for a Ras-activated enhancer in the human OPN promoter Clin Exp Metastasis 2003; 20 77-84 22 Gluckman E, Broxmeyer HA, Auerbach AD et al Hematopoietic reconstitution in a patient with Fanconi's anemia by means of umbilical-cord blood from an HLA-identical sibling N Engl J Med 1989; 321: 1174-1178 23 Alejandro Erices, Paulette Conget, Josea, J Minguell Mesenchymal progenitor cells in human umbilical cord blood British Journal of Haematology , 2000; 109: 235-242 24 R.Ian Freshney Culture human stemcell 2007: 159-186 25 Feng Gao, De-Quan Wu, Yan-Hua Hu, Guang-Xin Jin In vitro cultivation of islet-like cell clusters from human umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells Translational Research 2008 26 Atmani H, Chappard D, Basle MF Proliferation and differentiation of osteoblasts and adipocytes in rat bone marrow stromal cell cultures: effects of dexamethasone and calcitriol J Cell Biochem 2003; 2:364e72 27 Jorg Handschel, Karin Berr Induction of osteogenic markers in differentially treated cultures of embryonic stem cells Head & Face Medicine , : 2008; 28 E M Horwitz, P L Gordon, W K K Koo, M D J C Marx Isolated allogeneic bone marrow-derived mesenchymal cells engraft and stimulate growth in children with osteogenesis imperfecta Implications for cell therapy of bone Proc Nat Acad Sci U S A 2002; 99: 8932-8937 29 Binderman I, Fin N Bone substitutesorganic, inorganic, and polymeric: Cell material interactions CRC Handbook of Bioactive Ceramics 1990: 45-51 30 Xin-Qin Kang, Wei-Jin Zang, Li-Jun Bao Differentiating characterization of human umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells in vitro Cell Biology International 2006; 30: 569-575 31 Langmans Medical embryology 2005: 101-103 32 Lasky LC, Lane T, et al Miller J In utero or ex utero cord blood collection: which is better? Transfusion 2002; 42: 1261-1267 33 Meng Liu, Zhong Chao Han Mesenchymal stem cells: Biology and clinical potential in Type Diabetes Review ArticleTherapy Review ArticlReview ArticleReview Article 2007 34 Korbling M, Estrov Z Adult stem cells for tissue repairda new therapeutic concept? N Engl J Med 2003; 349: 570-582 35 Xiao M, Dooley DC Assessment of cell viability and apoptosis in human umblical cord blood following storage J Hematother Stem cell Res 2003; 12: 115-120 36 F Mancinelli, A Tamburini, A Spagnoli, C Malerba, G Suppo Optimizing Umbilical Cord Blood Collection: Impact of Obstetric Factors Versus Quality of Cord Blood Units Transplantation Proceedings 2006; 38: 1174-1176 37 Daniel R Marshak, Richard L Gardner Stem cell biology 2001: 37-60 38 Hector Mayani Biology of human umblical cord blood-derived hematopoietic stem/progenitor cell Stem cell 1998; 16: 153-165 39 Zongning Miao, Jun Jin, Lei Chen Isolation of mesenchymal stem cells from human placenta: Comparison with human bone marrow mesenchymal stem cells Cell Biology International (2006) 2006; 30: 681-687 40 Ghen MJ, Roshan R, Roshan RO, Blyweiss DJ, Corso N, et al Khalili B Potential clinical applications using stem cells derived from human umbilical cord blood Reprod Biomed Online 2006; 13: 72 41 Kubler NR, Wurzler KK, Reuther JF Effect of different factors on the bone forming properties of recombinant BMPs Mund Kiefer Gesichtschir 2000; 2: 42 Lau A Oh IH, Eaves CJ During ontogeny primitive (CD34(ỵ)CD38 (-)) hematopoietic cells show altered expression of a subset of genes associated with early cytokine and differentiation responses of their adult counterparts Blood 2000; 96: 4160-4168 43 R Quarto, M Mastrogiacomo, R Cancedda, V S M Kutepov, Mukhachev, A Lavroukov, E Kon & M Marcacci Repair of large bone defects with the use of autologous bone marrow stromal cells New Engl J Med 2001; 344: 385-386 44 K Quillen, E.M Berkman Methods of isolation and cryopreservation of stem cell from cord blood Journal of Hematotherapy 1996; 5: 153-155 45 Ian Freshney R Culture of animal cell 2005: 123, 335-357 46 Song S, Kamath S, Mosquera D, Zigova T, Sanberg P, Vesely DL et al Expression of brain natriuretic peptide by human bone marrow stromal cells Exp Neurol 2004 47 GE Healthcare Bio - Science Ficoll - Paque Plus 2006 48 Yang SE, Ha CW, Jung M Mesenchymal stem progenitor cells developed in cultures from UC blood Cytotherapy 2004; 6: 76-86 49 Victoria Shalhoub, Fauzia Aslam, Ellen Breen, Andre van Wijnen Multiple Levels of Steroid Hormone-Dependent Control of Osteocalcin During Osteoblast Differentiation: Glucocorticoid Regulation of Basal and Vitamin D Stimulated Gene Expression Journal of Cellular Biochemistry 1998; 69: 154-168 50 Stephen Sullivan, Chad A Cowan Human Embryonic Stem Cells Willey 2007: 249-272 51 Yamata T, Okamoto Y, Kasamatsu H, Horie Y Factor affecting the volume of umblical cord blood collection Acta Obster Gynecol Scand 2000; 79: 830-833 52 Anna Teti Bone CellCulture: Osteoblasts, Osteoclastsand Osteocytes Training course 2004 53 Chen TL, Shen WJ, Kraemer FB Human BMP-7/OP-1 induces the growth and differentiation of adipocytes and osteoblasts in bone arrow stromal cell cultures J Cell Biochem 2001; 54 Carmella van de Ven The potential of umbilical cord blood multipotent stem cell for nonhematopoietic tissue and cell generation Experimental hematology 2007; 35 1753-1765 55 Wolfgang Wagnera, Frederik Weina, Anja Seckingera Comparative characteristics of mesenchymal stem cells from human bone marrow, adipose tissue, and umbilical cord blood Experimental Hematology 2005; 33: 1402-1416 56 F.R Witter, J Ten Broeck, H.E Fox A new device for safer collection of postpartum cord blood International Journal of Gynecology & Obstetrics 2001.; 70: 259-260 57 Ai-Xia Zhang, Wei-Hua Yu, E Bao-Feng Ma Proteomic identification of differently expressed proteins responsible for osteoblast differentiation from human mesenchymal stem cells Mol Cell Biochem 2007; 304: 167-179 58 Yong Zhao, Honglan Wang, Theodore Mazzone Identification of stem cells from human umbilical cord blood with embryonic and hematopoietic characteristics Experimental cellresearch 2006; 312: 2454 # 2464 59 E.A de Wynter, N.G Testa Interest of cord blood stem cells Biomed Pharmacother 2001; 55: 195-200 T BO GC V NHNG NG DNG TRONG Y HC TI TO PGS.TS.BS Trn Cụng Toi Mc tiờu Hiu c khỏi nim v t bo gc Bit c mt s ng dng ca t bo gc y hc tỏi to Hiu c tm quan trng t bo gc y hc tỏi to Da vo kin thc t c cú th phỏt trin cỏc ý tng nghiờn cu t bo gc y hc tỏi to M U Cựng vi s phỏt trin k thut cụng ngh ca th k 21, vic s dng cỏc phng phỏp iu tr da trờn cụng ngh mụ iu tr mt s bnh v/hoc cỏc loi tn thng ó bin nhng gic m tng s khụng bao gi xy cú th tr thnh hin thc mt tng lai gn Mc dự vy, cũn nhiu iu cn phi lm, cũn nhiu th nghiờn cu, nhiờn, rừ rng l cú nhng tin b rt ln ó t hai thp k qua Y hc tỏi to l mt lnh vc ang ni v phỏt trin nhanh chúng vi cỏc nghiờn cu v hng ng dng dựng tỏi to, trỡ v ci thin chc nng c th (Polak et al, 2008) Daar v Greenwood (2007) ch mc ớch chớnh ca y hc tỏi to l nhm "sa cha, thay th hoc tỏi to cỏc t bo, mụ hoc b phn c th phc hi li chc nng b mt i, giỳp h tr c th hỡnh thnh mụ chc nng mi thay th mụ b mt hoc b li Cui cựng, y hc tỏi to s to cỏc phng phỏp iu tr mi cho cỏc trng hp bnh lý hoc cỏc tn thng m khụng th x lý bng cỏc k thut hay phng phỏp iu tr hin ti Liu phỏp t bo v cụng ngh mụ l mt phn ca y hc tỏi to, vi mc ớch l cung cp cỏc phng phỏp iu tr an ton, hiu qu v phự hp vi c th ngi bnh C th ngi cú mt h thng tỏi to v sa cha ni ti thụng qua cỏc t bo gc, cỏc loi TBG ny cú th c tỡm thy hu ht cỏc loi mụ c th Quỏ trỡnh ny c phỏt trin thụng qua s tin húa v cng rt l hp lý cho rng s phc hi chc nng ca cỏc t bo, mụ hay c quan c thc hin thụng qua cỏc t bo gc ny Vỡ vy, cỏc t bo gc mang mt tng lai y trin vng cho y hc tỏi to tng lai (NRC, 2002) CC LOI T BO GC C S DNG TRONG Y HC TI TO Trong nhng nm u 1900, cỏc nh nghiờn cu chõu u nhn rng cú cỏc loi t bo mỏu khỏc - t bo bch cu, hng cu v tiu cu - tt c cỏc loi t bo mỏu ny u n t mt t bo c bit gi l "t bo gc" T bo gc ó c nghiờn cu u tiờn bi Becker v cng s (1963), ngi ó tiờm t bo ty xng vo nhng chut b chiu x v nhn thy rng cỏc cm t bo phỏt trin lỏch ca nhng chut nhn cú ngun gc t t bo ty xng ó tiờm H kt lun rng cỏc cm ny ny xut phỏt t mt t bo ty nht Sau ú, h ó tỡm thy bng chng cho thy cỏc t bo ny cú kh nng t i mi khụng gii hn - mt im c trng rt riờng ca t bo gc Do ú, cỏc t bo gc theo nh ngha cú hai thuc tớnh cn thit, ú l kh nng t i mi v kh nng bit húa thnh cỏc dũng t bo khỏc Trong cỏc iu kin c th hoc cỏc kớch thớch phự hp, cỏc t bo gc cú th tng sinh v bit húa thnh nhiu loi t bo khỏc c th sinh vt Vic xỏc nh dũng t bo gc c gii thớch bi mt s ý tng khỏc nhau, mt s ny trung vo cỏc loi vi mụi trng ni cha cỏc t bo gc hoc cỏc t bo gc (stem cell niche) Mt t bo gc bao gm cỏc phõn t tớn hiu, thụng tin liờn lc ni bo v s tng tỏc gia cỏc t bo gc v mụi trng ngoi bo bao xung quanh chỳng Vi mụi trng ba chiu ny c cho l nh hng hoc kim soỏt gien v xỏc nh tớnh gc ca cỏc t bo gc, tc l kh nng t lm mi hoc bit húa thnh nhiu dũng t bo khỏc Mt lý thuyt thỳ v a l cỏc t bo gc cú th l cỏc t bo bit húa cui cựng vi kh nng biu hin cỏc dng t bo khỏc ph thuc vo vi mụi trng ni t bo gc c ng T bo gc trng thnh c cy vo mt niche hon ton khỏc cú kh nng bit húa thnh cỏc loi t bo tng t nh tỡm thy niche mi Tim nng ca cỏc t bo gc v tớnh mm l c tớnh vụ giỏ cho y hc tỏi to (Singh v Williams, 2008) i tng tha hng thnh qu ca y hc tỏi to bao gm dõn s ngy cng gi i, ngi b chn thng th thao v cỏc tai nn chin tranh Cỏc tin b cụng ngh t c thp k qua vi cỏc phng phỏp chuyn gien v k thut hỡnh nh cng nh s gia tng kin thc gn õy ca chỳng ta v sinh hc t bo, ó m nhng chõn tri mi lnh vc y hc tỏi to Nh ó cp trờn, k t cỏc bỏo cỏo u tiờn vo cui nhng nm 1990 ó cú mt s t phỏ v cỏc hot ng nghiờn cu v t bo gc v dn n s tng tc v cỏc hot ng nghiờn cu NG DNG T BO GC TRONG IU TR MT S BNH PH BIN 2.1 Liu phỏp t bo gc iu tr cỏc ri lon thn kinh H thng thn kinh trung ng trng thnh (Central Nervous System-CNS) cú kh nng sa cha gii hn, ú cú nhiu phng phỏp s dng cụng ngh mụ tỏi to cỏc t bo thn kinh b tn thng T bo gc s cung cp mt ngun vụ tn ca cỏc t bo thn kinh v thn kinh m cho cỏc liu phỏp nhm thay th cho cỏc t bo hoc c ch bo v t bo thn kinh cỏc ri lon lm nh hng n nóo v ty sng ng dng rừ rng nht v thụng dng nht ca t bo gc iu tr cho cỏc ri lon h thng thn kinh l thụng qua liu phỏp thay th t bo Kh nng s dng t bo gc nh l mt ngun gc cung cp cho cỏc t bo thn kinh dung ghộp thay th v tỏi to li cho cỏc t bo trng hp bnh Parkinson, teo c x cng bờn (Amyotrophic Lateral Sclerosis-ALS ), bnh Huntington hoc bnh Alzheimer l mt iu tht thỳ v (Baizabal et al, 2003; Singh v Williams, 2008; Ma v et al, 2008; Sheyn v et al, 2010) Vawda v cng s (2007) xem xột cỏc ngun cung cp t bo tim nng dựng thay th, bao gm t bo gc phụi, t bo gc thn kinh ca thai nhi v tr s sinh v mt lot cỏc t bo gc trung mụ H cng xem xột nhng nghiờn cu ó c cụng b chng minh cho phng phỏp iu tr bng t bo gc ỏnh giỏ cho liu phỏp ny v phõn tớch v nhng khú khn m cn phi c khc phc t c li ớch ca liu phỏp ny Nhỡn chung, h kt lun rng tr em b chn thng nóo hoc ri lon di truyn di truyn nh hng n nóo l nhng bnh nhõn phự hp s dng liu phỏp t bo gc Bnh thoỏi húa thn kinh cú im c trng bi s mt i dn v khụng th o ngc tr li cỏc quỏ trỡnh hot ng sinh lý bỡnh thng ca t bo thn kinh nhiu nm, cui cựng dn n mc bnh v t vong vi t l ỏng k (Steiner et al, 2006) Hai loi ri lon thoỏi húa thn kinh liờn quan n tui ph bin nht l Parkinson v bnh Alzheimer 2.2 T bo gc tỏi to mụ c Chn thng v hy hoi mụ c l loi ph bin v lm suy gim chc nng hot ng ca mụ c v bin dng cu trỳc mụ Mc dự, mụ c l loi mụ cú kh nng tỏi sinh nhng cú gii hn v gim dn theo tui ca bnh nhõn, mt mụ c mt kh nng tỏi to cho chớnh nú, mụ s c lp y vi mụt so v mụ m Ri lon chc nng c l bnh rt nghiờm trng v thng gõy cht ngi, nh trng hp ca bnh teo c Duchenne (Duchenne Muscular Dystrophy-DMD) DMD cú nguyờn nhõn l s thiu ht ca mt loi protein ch yu l dystrophin, dystrophin, gõy s thoỏi húa ca cỏc si c Mc dự cỏc nghiờn cu m rng ca cn bnh ny ó c thc hin, cha cú phng phỏp iu tr no lm gim hoc ngn chn s suy gim mụ c Tỏi to mụ c tht s l mt phng phỏp iu tr vụ cựng hp dn (Jarvinen et al, 2007; Jukes et al , 2010; Sheyn et al, 2010) Kh nng ỏp ng vi vic tỏi to ny ch yu l mt qun th t bo n nhõn ph trỏch c gi l cỏc t bo v tinh (Satellite Cell) Nm 1961, Alexander Mauro s dng k thut siờu cu trỳc v xỏc nh c cỏc t bo v tinh ny l mt qun th t bo rt him m nú c trỳ m c xng trng thnh trờn i tng nghiờn cu l ch Cỏc t bo v tinh cng cú th dung hp li vi to thnh cỏc t bo c a nhõn hoc tỏi thit li thnh cỏc t bo v tinh hot ng cú th kộo di vũng i tỏi sinh (Shihuan Kuang et al, 2007; Fabien et al, 2007) Nhiu nghiờn cu gn õy nuụi cy t bo c chng minh rng t bo v tinh kớch hot bit húa v biu hin cỏc protein ca h protein MyoD Ngc li, cỏc t bo v tinh hot húa cú th thoỏt chu k t bo, tỏi thit lp li dng im lng v c kớch thớch tham gia li chu k t bo, u ny cho thy cỏc t bo v tinh cú kh nng t i mi hoc b sung thờm vo ngun d tr cho t bo (Olguin v Olwin, 2004; Zammit et al, 2004; Shihuan Kuang et al, 2007) Collins v cng s (2005) quan sỏt thy rng vic ghộp mt t bo c cha khong by t bo v tinh ó dn n s gia tng > 100 t bo c mi cú cha > 25.000 t bo c cú nhõn ca ngi hin ó bit húa Quan trng hn, cỏc t bo v tinh ó ghộp ny tng sinh thnh cỏc t bo v tinh cú hỡnh thỏi khỏc bit v tham gia vo s tỏi to qun th cỏc t bo c sau mt tai nn chn thng vi s cm ng ca myotoxin Nghiờn cu sõu hn s lm sỏng t cỏc c ch trc tip dn n s t i mi, xỏc nh kh nng tng trng ca qun th t bo v tinh c th v thỏc phõn nhúm ca cỏc t bo v tinh (Weismann et al, 2000) S phõn nhúm cỏc t bo v tinh s c s dng nh nn tng cho liu phỏp t bo (Stephane et al, 2007) S phỏt trin ca cỏc giỏ th c hiu mụ cú th nõng cao kh nng t chc cho mụ c v cho phộp s hỡnh thnh mch mỏu cng nh s phõn b ca t bo thn kinh s d dng kim soỏt c lnh vc tỏi to mụ ny (Rowlands et al, 2007; Fujita et al, 2009; Jukes et al, 2010) Cui cựng, cỏc bnh ri lon chc nng c, nh DMD, nh hng n cỏc c khỏc ca c th v iu ny lm cho khú khn hn iu tr cho cỏc mụ c b h hng m ch bng phng phỏp cy ghộp ti ch (Benchaouir et al, 2007) gii quyt thỏch thc ny, k thut ghộp t bo h thng v ng mch cn phi c ci thin v hiu bit nhiu hn v c ch v nh ca cỏc t bo gc 2.3 TBG sa cha tim Bnh tim mch l nguyờn nhõn hng u gõy cỏc trng hp t vong ngi trờn ton th gii Trờn ton cu mi nm cú khong 16,7 triu ngi cht vỡ bnh tim mch, chim 29% ca tt c cỏc trng hp t vong khong thi gian nghiờn cu ny (WHO, 2006; Sheyn et al, 2010) Phc hi chc nng tim mch l mc tiờu ti thng ca liu phỏp t bo gc V nguyờn tc, cỏc t bo gc tim mch cú th ci thin chc nng tim thụng qua mt quỏ trỡnh tỏi to mụ c tim c th, tng cng s tỏi to mch mỏu mi ca c tim v phũng nga vic nhi mỏu c tim Cy ghộp t bo gc ci thin chc nng tim ó nhn c cỏc kt qu khỏc cỏc th nghim lõm sng trờn ngi (Liu et al, 2008) Chin lc tỏi to mụ tim b h hng bng cỏch ghộp t bo c tim cú th lm gim nguy c gõy nhi mỏu c tim (Kofidis et al, 2005; Liu et al, 2008) Nghiờn cu gn õy cung cp bng chng u tiờn cho thy t bo gc phụi v ngi trng thnh cú th thay th cỏc t bo c tim b h hng v thit lp cỏc mch mỏu mi T bo c tim co búp y mỏu bung bm chớnh ca tim (tõm tht) Hai loi t bo khỏc quan trng i vi hot ng tim tt l cỏc t bo ni mụ mch mỏu (to thnh cỏc lp lút bờn mch mỏu) v cỏc t bo c trn (to thnh vỏch ca mch mỏu) Kh nng ca c hai t bo gc phụi v ngi trng thnh phỏt trin thay th cỏc t bo ca tim b h hng ang c thc hin nh mt phn ca chin lc dựng khụi phc li chc nng cho tim nhng bnh nhõn ó cú cỏc cn au tim hoc cú suy tim sung huyt Hỡnh: Chin lc sa cha tim bng cỏch s dng cỏc loi t bo gc khỏc (Ngun: V Ramakrishna, P B Janardhan and L Sudarsanareddy (2011), Stem Cells and Regenerative Medicine A Review, Annual Review & Research in Biology, 1(4): 79-110) 2.4 T bo gc y hc chnh hỡnh Mc dự mụ xng cú kh nng tỏi to v khớa cnh sinh lý v xy t nhiờn, nhiờn i vi cỏc khuyt hng xng ln, chng hn nh sau ct b u xng, khp gi v góy xng nghiờm trng, mt i mt phn xng cú th tỏi to v mt sinh lý v iu ny thỡ cn thit phi tin hnh ghộp xng Khong 5-10% cỏc trng hp góy xng cú liờn quan n vic sa cha mụ xng b suy gim, dn n mt s c ng khú khn, khp gi, tõm lý cng thng v chi phớ cho vic iu tr Sau b chn thng xng, mt s c ch phõn t xut hin dựng sa cha xng t cỏc t bo tin thõn/ t bo gc Cỏc yu t gõy phn ng viờm s thu hỳt cỏc t bo tỏi to lm cỏc t bo ny tng sinh v bit húa tỏi to li mụ xng nh trc b chn thng T bo gc trung mụ ty xng cng nh t bo gc mụ c xng v t bo tin thõn ni mụ (EPC) l phng tin to cỏc c ch sa cha ny (Deschaseaux et al, 2010) Phỏt trin mi k thut thay khp ton b v nhng tin b gn õy vic hiu bit v tớnh mm ca t bo gc v ỏp dng cỏc kin thc ny thit k cỏc phng tin dựng sa cha mụ cng ó c thc hin Hn na, nhng tin b ó t c cụng ngh to giỏ th v kt hp vi cỏc c tớnh u vit ca t bo gc s to s kt hp tuyt vi dn n s i cỏc cỏc vt liu mi cú th thay th cỏc mụ xng tt (Sheyn et al, 2010) Mt s nghiờn cu ó chng minh s tn ti ca nhng t bo (nh cỏc t bo gõn v dõy chng) cú kh nng bit húa a dũng Theo truyn thng, ó c gi nh rng cỏc t bo ó bit húa gõn v dõy chng cú hỡnh thỏi n nh Lee v cng s (2006a) bỏo cỏo rng cỏc t bo cú ngun gc t hot dch khp vi chn thng dõy chng chộo trc cú th bit húa thnh cỏc t bo xng, t bo m v t bo sn Steiner v cng s (2006) bỏo cỏo rng cỏc t bo nuụi cy cú ngun gc t mu dõy chng chộo trc thu c ti thi im phu thut cng cú tim nng bit húa a dũng Trong nghiờn cu ny, cỏc nh nghiờn cu ó cn thn loi b hot dch bao ph phn dõy chng chộo trc chc chn thu c ch cú cỏc t bo dõy chng chộo trc; Tuy nhiờn, kh nng cũn sút li mt s ớt cỏc t bo hot dch b ln vo mu chn thng gõy De Mos v cng s (2006) bỏo cỏo rng cỏc t bo cú ngun gc t gõn ngi cng cú tim nng bit húa a dũng, dựng gii thớch cho vic tỡm thy s gia tng lng ng glycosaminoglycan, s vụi húa v tớch ly cht bộo gõn b thoỏi húa Tỏi to mụ xng l mt quỏ trỡnh sinh hc phc liờn quan n s phi hp hot ng gia cỏc yu t hũa tan, cht nn ngoi bo, TBG trung mụ v tin thõn ni mụ ca c h thng c th v ti ch Trong cú nhng bng chng thuyt phc rng cỏc MSC ngoi vi cú hiu qu quan trng sa cha cỏc khuyt hng xng, iu ny ó khụng c chng minh nh th no cỏc MSC ti ch hot ng trờn mụ hỡnh ng vt v ngi, thiu s ng thun liờn quan n c tớnh hỡnh thỏi ca chỳng v cng bi vỡ cỏc d liu thuyt phc v v trớ gii phu quanh mch ca chỳng ch mi bt u xut hin Tng t nh vy, mc dự mt s nghiờn cu ó bỏo cỏo vai trũ quan trng ca t bo tin thõn ni mụ vic tỏi to xng, ang cú mt cuc tranh cói din liờn quan n cỏc qun th khỏc c phõn lp chut v ngi v cỏc c tớnh v chc nng v/hoc kiu hỡnh chng chộo ca chỳng (Deschaseaux et al, 2010) Vỡ vy, mc dự cú nhng tin b gn õy ng h tim nng ca MSC v t bo tin thõn ni mụ cỏc nghiờn cu liờn quan n vic tỏi to xng phi c thc hin ỏp ng nhu cu ngy cng cao ca ngi bnh 2.5 T bo gc iu tr ung th Mt s nghiờn cu c thc hin iu kin in vitro v in vivo thc vi nhiu dũng t bo ung th khỏc v trờn nhiu loi mụ hỡnh ng vt khỏc khỏm phỏ cỏc phng phỏp iu tr mi nhm ngn chn s phỏt trin v/hoc s tn ti ca cỏc t bo ung th Ghộp t bo gc cng c chn la nh mt liu phỏp h tr quỏ trỡnh iu tr bnh ung th, c bit l cỏc bnh nhõn c iu tr bng phng phỏp húa tr liu v bc x vi liu cao, theo sau cỏc phng phỏp iu tr ny thỡ tiờu dit cỏc t bo ung th thỡ cng gõy mt s hy hoi nghiờm trng cho cỏc mụ lnh v/hoc hy hoi cỏc t bo to mỏu Nh vy, vic ghộp t bo gc cú th thay th cỏc t bo gc ni sinh b phỏ hy bi phng phỏp iu tr ung th vi liu cao, t ú to dũng t bo to mỏu khe mnh v ci thin h thng dch (Phatak et al, 2007; Knoepfler, 2009) Ghộp t bo gc mỏu cung rn t thõn hoc ng loi, t bo gc ty xng v cỏc t bo tin thõn cú th cú hiu qu vic kt hp vi HDCT iu tr mt s bnh ung th thay th cỏc t bo to mỏu v ty xng ó b phỏ hy bi húa tr liu AML v U lymphoma t l cao l nhng loi bnh ung th ph bin thng c iu tr vi s h tr t bo to mỏu nh l mt liu phỏp h tr (Wang et al, 2005; Aoudjhane et al, 2005) Cỏc phõn nhúm khỏc ca bnh AML xut hin l nguyờn nhõn ca nhiu dng t bin cỏc cp khỏc ca t bo gc to mỏu, s xut hin ca cỏc loi bnh ny cú th lm gia tng cỏc t bo gc bch cu nguyờn thy (Leukemic Stem Cells-LSCs) mang mt kiu hỡnh c trng, vớ d nh CD90-, CD117- v CD123+ (Cui et al, 2003) Cỏc LSCs ỏc tớnh cú th t lm mi, cú th to mt qun th t bo AML khụng ng nht, qua ú trỡ cỏc nguyờn bo bch cu bnh (Wang et al, 2005, Hope et al, 2004) iu thỳ v l, cỏc LSCs ny cng c cho rng cú kh nng trỡ trng thỏi khụng hot ng cú th úng gúp cho s tn ti ca chỳng sau iu tr húa tr liu v trng hp bnh bch cu tỏi phỏt (Senugupta et al, 2007) Hn na, cỏc t bo gc to mỏu phỏt trin iu kin ex vivo hoc huy ng t ty xng vo mỏu ngoi vi bng cỏch s dng cỏc yu t huy ng nh G-CSF v AMD3100 cng cú th dn n mt s lng ln cỏc t bo gc v t bo tin thõn ca chỳng vo mỏu, qua ú lm gim thi gian phc hi sau iu tr bng HDCT (De Clercq et al , 2005) Cỏc t bo tin thõn cú ngun gc t t bo gc to mỏu ó bit húa, nh l cỏc t bo tua (dendritic cell), l mt cỏc t bo hiu qu nht ca h thng dch vic trỡnh din khỏng nguyờn cho t bo T tr giỳp v t bo T gõy c, cng cú th c s dng nh phng phỏp h tr liu phỏp dch ung th loi b cỏc t bo ung th m biu hin khỏng nguyờn dch trờn b mt mng ca chỳng (Perillo et al, 2004; den Brok et al, 2005) Hn na, cỏc t bo gc mỏu cung rn cng cha mt lng ỏng k cỏc t bo git t nhiờn cú kiu hỡnh CD16-/CD56+ cú th tng sinh cú s b sung ca IL-12 hoc IL-15 v cho thy mt t l tng trng rt cao v hiu qu gõy c chng li mt s bnh ung th, c bit l bnh ung th bch cu (Cohen et al, 2004) 2.6 T bo gc iu tr bnh tiu ng Bnh tiu ng type I hin ti l mt loi bnh ph bin, l i tng nghiờn cu rt hp dn bng liu phỏp thay th t bo T bo gc phụi (ESCs) ó c nghiờn cu da trờn c im a tim nng ca chỳng Mt s bỏo cỏo cho rng tờ bo sn xut insulin cú th bit húa t t bo gc phụi trờn i tng nghiờn cu l chut (Soria et al, 2000, Lumelsky et al, 2001) v t bo gc phụi ngi in vitro (Assady et al, 2001; Segev et al, 2004) c im tỏi to ca ESCs ó c chng minh thờm bi kt qu ghộp cỏc t bo cú ngun gc t ESC dn n mc glucose mỏu tr v mc bỡnh thng hoc c ci thin cỏc chut b bnh tiu ng (Soria et al, 2000; Hori et al, 2002; Blyszczuk et al, 2003) Vic tỏi to ca cỏc t bo ty ni tit sn xut insulin cú ngun gc t t bo gc phụi cú l l khớa cnh quan trng to phng phỏp cha tr cho bnh tiu ng (Mfopou et al, 2007) Sau cy ghộp, vic la chn cỏc dũng t bo cú kh nng v cỏc t bo biu hin insulin trng thnh, cho kt qu ng huyt bỡnh thng mụ hỡnh chut mc bnh tiu ng gõy bi streptozotocin (Soria et al, 2000) Ngc li, s khỏc bit t nhiờn ca cỏc t bo gc phụi chut c tng sinh iu kin in vitro ch chim phn nh (0,1%) vi cỏc c tớnh ca cỏc t bo ging t bo sn xut insulin (Shiroi et al, 2002) Tuy nhiờn, Cỏc cm insulin dng tớnh, tht bi i vi mc glucose mỏu bỡnh thng cỏc thớ nghim ghộp t bo (Lumelsky et al, 2001) Ch khụng phi l vic sn xut insulin ca chớnh bn thõn chỳng, hu ht cỏc t bo tip nhn hormone ny t mụi trng nuụi cy (Rajagopal et al, 2003; Singh v Williams, 2008) Bng cỏch thay i cỏc quy trỡnh khỏc v s dng cỏc t bo phụi chut bin i gien, hai nhúm tỏc gi ó thnh cụng vic to cỏc t bo sn xut insulin (Blyszczuk et al, 2003; Leon-Quinto et al, 2004) Blyszczuk v cng s (2003) ch rng s biu hin cỏc thnh phn iu khin gien Pax4 kim soỏt s phỏt ca tuyn ty v s bit húa kiu hỡnh mụ rt cn thit cho cỏc t bo biu hin insulin, c phỏt hin cú cha cỏc ht ch tit in hỡnh ca c hai dng t bo ngi trng thnh v phụi Quan trng hn, cỏc t bo ny cựng biu hin C- peptide v lng glucose mỏu bỡnh thng sau ghộp vo chut b tiu ng (Mfopou et al, 2007; Blyszczuk et al, 2004) Tng t nh vy, la chn dũng t bo gc phụi chut ó c bin i mang plasid cú cha gien Nkx6 Mt promoter ca gien khỏng neomycin xuụi chiu cú th c s dng to cỏc t bo sn xut insulin to ng huyt bỡnh thng sau ghộp vo ng vt mc bnh tiu ng (Leon-Quinto et al, 2004) Cng s dng phng phỏp iu tr bng cỏc t bo gc phụi chut vi mt cht c ch enzyme phosphoinositide 3-kinase (PI3-K) to cỏc t bo tin thõn t cỏc t bo gc phụi sut giai on bit húa cui cựng biu hin mt s marker c hiu cho t bo khỏc Sau ghộp vo chut b ỏi thỏo ng, cỏc t bo ny cng ci thin tỡnh trng ng huyt v tng cng s sng cho ng vt thớ nghim (Hori et al, 2002) Nhng thớ nghim ban u vi cỏc t bo gc phụi ngi chng minh rng iu kin nghiờn cu in vitro bit húa c khong 1% cỏc t bo tit insulin cú mang ớt nht mt s c im ca t bo ni tit tuyn ty (Assady et al, 2001) Mt quy trỡnh bit húa ó c thay i khỏc (Lumelsky et al, 2001, Rajagopal et al, 2003) cho phộp to cỏc cm t bo sn xut insulin t cỏc t bo gc phụi ngi (Segev et al, 2004), nhng nhng ci tin hn na l cn thit to cỏc t bo cú chc nng ging t bo tiu o ty Cỏc bỏo cỏo ny gi thờm nhng vic cn b trỡ c im chc nng ca nhng t bo trng thnh nh l vic kim soỏt glucose, kim soỏt vic sn xut insulin m mt s trng hp thp hn 50 ln so vi cỏc t bo gc (Lumelsky et al, 2001) Tht vy, mt s bỏo cao cho rng cỏc t bo cht i cng hp th insulin t mụi trng nuụi cy v gõy s nhm ln ca vic sn xut insulin m chỳng tht s khụng hot ng (Rajagopal et al, 2003) Mt s khú khn vic to t bo t t bo gc phụi t nhng n lc ỏp dng cỏc yu t c trng ca s phỏt trin ty giai on cui rt cn thit cho cỏc t bo giai on sm Thc s cú nhng nh hng v mt lõm sng mong i cỏch bit húa trc tip rt rừ rng ca nhng qun th t bo phự hp T cui th k 20, cỏc t bo thu t ty xng ó c bỏo cỏo cú kh nng phỏt trin thnh cỏc t bo cú ngun gc t lp ni bỡ (Petersen et al, 1999; Krause et al, 2001) Trong cỏc mụ ty, mt s bỏo cỏo mụ t s tỏi to ca cỏc t bo cú ngun gc t ty xng da trờn vic ghộp ng loi hoc cựng gien trờn chut Ianus v cng s (2003) u tiờn cho rng s phõn b ca cỏc t bo cú ngun gc t ty xng to cỏc t bo sn xut insulin Hess v cng s (2003 ) tip tc chng minh cú nhng ci thin lng v mc glucose mỏu sau ghộp ty xng cho cỏc chut b bnh tiu ng gõy bng húa cht Mc dự cỏc t bo sn xut insulin cú ngun gc t ty xng ngi hin ó hin din nhng chut nhn, cỏc tỏc gi cho rng mc glucose ó c ci thin nhng chut nhn b bnh tiu ng l s tỏi to ca cỏc t bo cú ngun gc t vt ch ch khụng phi l cỏc t bo sn xut insulin cú ngun gc t ty xng ngi hin cng nh hiu qu bi s gia tng cỏc t bo san xut insulin dng tớnh c ỏnh du vi protein hunh quang xanh lỏ cõy BrdU, ch khụng phi l cỏc t bo sn xut insulin dng tớnh ỏnh du hunh quang BrdU t 4-7 ngy sau ghộp Ianus v cng s (2003) bỏo cỏo cỏc t bo sn xut insulin cú ngun gc t ty xng (Ins-Cre mice) mụ ty chut nhn (Rosa-lox-GFP mice), m cú th c tỏi to thụng qua m c ch dung hp c lp Mt khỏc, cỏc t bo gc cú ngun gc t ty xng gúp phn vo s tỏi to ca cỏc t bo cú ngun gc t lp nimụ khỏc, chng hn nh t bo gan, thụng qua s dung hp t bo (Terada et al, 2002, Alvarez-Dolado et al, 2003) Vic tỏi to ca mụ ty l mt nhim v phc cu trỳc v chc nng phc ca mụ Cn mt s nõng cao hiu v gien liờn quan n quỏ trỡnh bit húa ca ty, mc insulin c kim soỏt tt hn v kh nng thnh cụng ghộp t bo tiu o s ci thin ỏng k vic chm súc nhng bnh nhõn b bnh ỏi thỏo ng CC KHA CNH NGHIấN CU TIP THEO TRONG LNG LAI Nu thc s cỏc t bo gc cú th c s dng nh mt phng phỏp iu tr hoc mt liu phỏp h tr y hc tỏi to, thỡ cn phi cú cỏc phng tin mang cỏc nghiờn cu t bn giy chuyn thnh cỏc nghiờn cu phc v cho cỏc ng dng lõm sng Cú mt s khớa cnh c bit cn quan tõm tin hnh ng dng cỏc nghiờn cu v t bo gc y hc: Cỏc ngun cung ng v phõn lp t bo gc ly t õu, t ngun ni sinh hay ngoi sinh? T bo gc s dng l t bo gc cha bit húa, t bo tin thõn hay t bo sinh dng ó bit húa hon ton? Vic theo dừi cỏc bin i v mt hỡnh thỏi cỏc t bo gc bit húa chỳng nh th no? Phng phỏp gia tng s lng t bo gc t ngun thu nhn ban u Kim soỏt cỏc ng bit húa ca t bo gc Cỏc phng phỏp ỏnh giỏ s n nh v mt di truyn Kim soỏt v mt thi gian cỏc quỏ trỡnh nuụi cy S thc hin vic ghộp t bo t thõn, ng loi hay t ngun d loi? Cú phi cú s khỏc bit liờn quan n tui tỏc, gii tớnh ngi bnh hay tỡnh trng bnh lý ca ngi bnh ? Tt c iu ny cn phi c thc hin vi s kim soỏt cht lng theo cỏc quy nh hin hnh Cú th dn n s i ca mt c s sn xut t bo gc t ng iu ny cú ngha l chỳng ta nghiờn cu t bo gc bng cỏc nghiờn cu thc nghim ch khụng phi thc hin trờn bn giy na Nu chỳng ta mun bin c m v tt c s hiu bit ca chỳng ta v t bo gc ỏp dng vo iu tr cho cỏc bnh nhõn thỡ ú l nhng cõu hi c bn cn chỳng ta phi tr li cú th thc hnh v ng dng t bo gc tt s kt hp vi cụng ngh KT LUN Cụng ngh mụ bao gm vic thay th, sa cha v tỏi to mt phn hay ton b mt mụ hay c quan ca c th em li hy vng tng lai s phỏt trin thờm cỏc liu phỏp v phng phỏp iu tr mi hiu qu cho ngi bnh iu ny s c bit quan trng i vi cỏc bnh nhõn hay cỏc loi bnh m hin ti cha cú phng phỏp iu tr hiu qu Mt quan trng l ngun t bo v cựng vi s a dng ca cỏc loi t bo gc cú sn cú kh nng tr li cho cỏc cõu hi ny Tuy nhiờn, i vi tng loi t bo gc, cú nhng cn c gii quyt Ngoi ra, vt ngoi khoa hc c bn cng s cn phi c nghiờn cu nhm tỡm hiu lm th no ti u húa vic x lý cỏc t bo gc Ch vi s kt hp ca nghiờn cu v c bn v thc nghim t bo gc mi cú th em li cỏc ng dng tng lai v phng phỏp iu tr mi cho bnh nhõn Ti liu tham kho Abdelkrim, H., Juan, D.B., Jane, W., Mohamed, A., Bernat, S (2009) The immune boundaries for stem cell based therapies: problems and prospective solutions J Cell Mol Med., 13, 14641475 Alvarez-Dolado, M., Pardal, R., Garcia-Verdugo, J.M., et al (2003) Fusion of bone marrow- derived cells with Purkinje neurons, cardiomyocytes and hepatocytes Nature, 425, 968973 Aoudjhane, M., Labopin, M., Gorin, N.C., et al (2005) Comparative outcome of reduced intensity and myeloablative conditioning regimen in HLA identical sibling allogeneic haematopoietic stem cell transplantation for patients older than 50 years of age with acute myeloblastic leukaemia: A retrospective survey from the Acute Leukemia Working Party (ALWP) of the European group for Blood and Marrow Transplantation (EBMT) Leukemia, 19, 2304 2312 Assady, S., Maor, G., Amit, M., Itskovitz-Eldor, J., Skorecki, K.L., Tzukerman, M (2005) Insulin production by human embryonic stem cells Diabetes, 50, 16911697 Baizabal, J.M., Magaril, M.F., Jesu, S.O., Covarrubias, L (2003) Neural Stem Cells in Development and Regenerative Medicine Archives of Medical Research, 34, 572588 Bajada, S., Mazakova, I., Richardson, J.B., Ashammakhi, N (2008) Updates on stem cells and their applications in regenerative medicine J Tissue Eng Regen Med., 2, 169 183 Benchaouir, R., Meregalli, M., Farini, A., DAntona, G (2007).Restoration of human dystrophin following transplantation of exon-skipping-engineered DMD patient stem cells into dystrophic mice CellStem Cell, 1(6), 646657 Ben-Hur, T., Idelson, M., Khaner, H., Pera, M., et al (2004) Transplantation of human embryonic stem cell derived neural progenitors improves behavioural deficit in Parkinsonian rats Stem Cells, 22, 12461255 Blyszczuk, P., Asbrand, C., Rozzo, A., Kania, G., et al (2004) Embryonic stem cells differentiate into insulin-producing cells without selection of nestin-expressing cells Int J Dev Biol., 48, 10951104 10 Cohen, Y, Nagler, A (2004) Umbilical cord blood transplantationhow, when and for whom? Blood Rev., 18, 167179 11 De Clercq, E (2005) Potential clinical applications of the CXCR4 antagonist bicyclam AMD3100 Mini Rev Med Chem., 5, 805 824 12 De Mos, M., Jahr, H., Weinans, H., Verhaar, J., Van Osch, G (2006) A possible role for tendon cell differentiation in the development of tendinosis In: Transactions of the 52nd Annual Meeting of the Orthopedic Research Society; Chicago, IL den Brok, M.H., Nierkens, S., Figdor, 13 C.G., et al (2005) Dendritic cells: Tools and targets for antitumor vaccination Expert Rev Vaccines., 4, 699 710 14 Deschaseaux, F., Pontikoglou, C., Luc, S (2010) Bone regeneration: the stem/progenitor cells point of view J Cell Mol Med., 14, 103-115 15 Fabien, L.G., Rudnicki, M.A (2007) Skeletal muscle satellite cells and adult myogenesis Current Opinion in Cell Biology, 19, 628633 16 Ferrari, G., Cusella-De, A.G., Coletta, M., Paolucci, E., Stornaiuolo, A., Cossu, G., Mavilio, F (1998) Muscle regeneration by bone marrow-derived myogenic progenitors Science, 279, 15281530 17 Frenck, R.W.Jr., Blackburn, E.H., Shannon, K.M (1998) The rate of telomere sequence loss 18 in human leukocytes varies with age Proc Natl Acad Sci USA., 95, 5607-5610 19 Fujita, H., Shimizu, K., Nagamori, E (2009) Application of a cell sheet-polymer film complex with temperature sensitivity for increased mechanical strength and cell alignment capability Biotechnol Bioeng., 103(2), 370377 20 Galli, R., Borello, U., Gritti, A., Minasi, M.G., Bjornson, C., Coletta, M., et al (2000) Skeletal 21 myogenic potential of human and mouse neural stem cells Nat Neurosci., 3, 986-91 22 Gardner, R.L (2007) Stem cells and regenerative medicine: principles, prospects and problems C R Biol., 330(6-7), 465-473 23 Gordon, M.Y (2008) Stem cells for regenerative medicine Biological attributes and clinical application Experimental Hematology, 36, 726732 24 Hess, D., Li, L., Martin, M., et al (2003) Bone marrow-derived stem cells initiate pancreatic regeneration Nat Biotechnol, 21, 763770 25 Hope, K.J., Jin, L., Dick, J.E (2004) Acute myeloid leukemia originates from a hierarchy of leukemic stem cell classes that differ inself-renewal capacity Nat Immun., 5, 738743 26 Hori, Y., Rulifson, I.C., Tsai, B.C., et al (2002) Growth inhibitors promote differentiation of insulin-producing tissue from embryonic stem cells Proc, Natl, Acad, Sci, USA., 99,1610516110 27 Ianus, A., Holz, G.G., Theise, N.D., et al (2003) In vivo derivation of glucose competent pancreatic endocrine cells from bone marrow without evidence of cell fusion J Clin Invest 111, 843850 28 Jackson, K.A., Mi, T., Goodell, M.A (1999) Hematopoietic potential of stem cells isolated from murine skeletal muscle Proc Natl Acad Sci USA., 96, 1448214486 29 Jarvinen, T.A., Jọrvinen, T.L., Kọọriọinen, M., et al (2007) Muscle injuries: optimising recovery Best Pract Res Clin Rheumatol., 21(2), 317331 30 Jukes, J.M., van Blitterswijk, C.A., Boer, J (2010) Skeletal tissue engineering using embryonic stem cells J Tissue Eng Regen Med., 4, 165180 31 Knoepfler, P.S (2009) Deconstructing StemCell Tumorigenicity: A Roadmap to Safe Regenerative Medicine Stem Cells, 27, 10501056 32 Kofidis, T., Lebl, D.R., Swignenburg, R.J., Greeve, J.M., et al (2006) Allopurinol/uricase and 33 ibuprofen enhance engraftment of cardiomyocyte-enriched human embryonic stem cells and improve cardiac function following myocardial injury Eur J Cardio-thoracic Surgery, 29, 5055 34 Krause, D.S., Theise, N.D., Collector, M.I., et al (2001) Multi-organ, multi-lineage engraftment by a single bone marrow-derived stem cell Cell, 105, 369377 35 Lee, E.H., Hui, J.H.P (2006) The potential of stem cells in orthopaedic surgery J Bone Jt Surg., 88(7), 841853 36 Leon-Quinto, T., Jones, J., Skoudy, A., Burcin, M., Soria, B (2004) In vitro directed differentiation of mouse embryonic stem cells into insulin-producing cells Diabetologia, 47, 14421451 37 Liechty, K.W., MacKenzie, T.C., Shaaban,A.F., Radu, A., et al (2000) Human mesenchymal stem cells engraft and demonstrate site-specific differentiation after in utero transplantation in sheep Nat Med., 6, 12821286 38 Liu, Y.H., Ravi, K., Wu, S.M (2008) Cardiovascular stem cells in regenerative medicine: ready for prime time? Drug Discovery Today: Therapeutic Strategies, 5(4), 201 39 Lumelsky, N., Blondel, O., Laeng, P., et al (2001) Differentiation of embryonic stem cells to insulin-secreting structures similar to pancreatic islets Science, 292, 13891394 40 Ma, M., Sha, C., Zhou, Z., Zhou, Q., Li, Q (2008) Generation of patient-specific pluripotent stem cells and directed differentiation ofembryonic stem cells for regenerative medicine Journal of Nanjing Medical University, 22(3), 135-142 41 Mezey, E., Chandross, K.J., Harta, G., Maki, R.A., McKercher, S.R (2000) Turning blood into brain: cells bearing neuronal antigens generated in vivo from bone marrow Science, 290, 17791782 42 Mfopou, J.K., De Groote, V., Xu, X., Heimberg,H., Bouwens, L (2007) Sonic hedgehog and other soluble factors from differentiating embryoid bodies inhibit pancreas development Stem Cells, 25, 11561165 43 Olguin, H.C., Olwin, B.B (2004) Pax-7 up-regulation inhibits myogenesis and cell cycle progression in satellite cells: A potential mechanism for self-renewal Dev Biol., 275, 375 388 44 Perillo, A., Bonanno, G., Pierelli, L., et al (2004) Stem cells in gynecology and obstetrics Panminerva Med., 46, 49 59 45 Petersen, B.E., Bowen, W.C., Patrene, K.D., et al (1999) Bone marrow as a potential source of hepatic oval cells Science, 284, 11681170 46 Phatak, P., Cookson, J.C., Dai, F., Smith, V., et al (2007) Telomere uncapping by the Gquadruplex ligand RHPS4 inhibits clonogenic tumour cell growth in vitro and in vivo consistent with a cancer stem cell targeting mechanism British Journal of Cancer, 96, 12231233 47 Rajagopal, J., Anderson, W.J., Kume, S., Martinez, O.I., Melton, D.A (2003) Insulin staining of ES cell progeny from insulin uptake Science, 299: 363 48 Reyes, M., Lund, T., Lenvik, T., Aguiar, D., Koodie, L., Verfaillie, C.M (2001) Purification and ex vivo expansion of postnatal human marrow mesodermal progenitor cells Blood, 98, 2615-2625 49 Rowlands, A.S., Hudson, J.E., Cooper-White, J.J (2007) From scrawny to brawny: the quest for neomusculogenesis; smart surfaces and scaffolds for muscle tissue engineering Expert Rev Med Devices., (5), 709728 50 Rufer, N., Brummendorf, T.H., Kolvraa, S., et al (1999) Telomere fluorescence measurements in granulocytes and T lymphocyte subsets point to a high turnover of hematopoietic stem cells and memory T cells in early childhood J Exp Med., 190, 157167 51 Segev, H., Fishman, B., Ziskind, A et al (2004) Differentiation of human embryonic stem cells into insulin-producing clusters Stem Cells, 22, 265 274 52 Sengupta, A., Banerjee, D., Chandra, S., Banerji, S.K., Ghosh, R., Roy, R., et al (2007) Deregulation and cross talk among Sonic hedgehog, Wnt, Hox and Notch signaling in chronic myeloid leukemia progression Leukemia, 21, 949955 53 Serra, V., von Zglinicki, T (2002) Human fibroblasts in vitro senesce with a donorspecific telomere length FEBS Lett., 516, 71-74 54 Sheyn, D., Mizrahi, O., Benjamin, S., Gazit, Z., Palled, G., Gazit, D (2010) Genetically modified cells in regenerative medicine and tissue engineering Adv Drug Deliv Rev., doi:10.1016/j.addr.2010.01.002 55 Shihuan, K., Kazuki, K., Fabien Le, G., Michael,A.R (2007) Asymmetric self-renewal and commitment of satellite stem cells in muscle Cell, 129, 9991010 56 Shiroi, A., Yoshikawa, M., Yokota, H., Fukui, H., Ishizaka, S., et al (2002) Identification of insulin-producing cells derived from embryonic stem cells by zincchelating dithizone Stem Cells, 20, 284292 57 Singh, P., Williams, D.J (2008) Cell therapies: realizing the potential of this new dimension to medical therapeutics J Tissue Eng Regen Med., 2, 307319 58 Soria, B, Roche, E., Berna, G., Leon-Quinto,T., Reig, J.A., Martin, F (2000) Insulinsecreting cells derived from embryonic stem cells normalize glycemia in streptozotocininduced diabetic mice Diabetes, 49, 157162 59 Steiner, A.F., Karl, N., Pilapil, C., Noth, U., Evans, C.H., Murray, M.M (2006) Multilineage mesenchymal differentiation potential of cellsmigrating out of the anterior cruciate ligament In: Transactions of the 52nd AnnualMeeting of the Orthopaedic Research Society; Chicago, IL Paper #1133 60 Stephane C Boutet, Marie-Hele`ne Disatnik, Lauren S Chan, Kevin Iori, and Thomas A Rando (2007) Regulation of Pax3 by proteasomal degradation of monoubiquitinated protein in skeletal muscle progenitors Cell, 130, 349362 61 Terada, N., Hamazaki, T., Oka, M., et al (2002) Bone marrow cells adopt the phenotype of other cells by spontaneous cell fusion Nature, 416, 542545 62 Weissman, I.L (2000) Stem cells: Units of development, units of regeneration, and units in evolution Cell, 100, 157168 63 Woodbury, D., Schwarz, E.J., Prockop, D.J., Black, I.B (2000) Adult rat and human bone marrow stromal cells differentiate into neurons J Neurosci Res., 61, 364370 64 Zammit, P.S., Golding, J.P., Nagata, Y., Hudon, V., Partridge, T.A., Beauchamp, J.R (2004) Muscle satellite cells adopt divergent fates: A mechanism for self-renewal? J Cell Biol., 166, 347357 ... nuụi cy l s thay i nh s methyl hoỏ cỏc gen chuyờn bit kim soỏt s tng trng v phỏt trin ca phụi Cú hay khụng s thay i tng t cỏc mu gen xy t bo ES hoc phụi nang (Blastocyte) Nu cng cú nh vy thỡ... dựng cỏc phng phỏp khỏc Hydroxyethyl starch (HES) S dng HES 6% g y hy hng cu bng cỏch trn HES mỏu vi t l 1:5 Sau ú quay li tõm 50 vũng phỳt 10 0C Huyt tng giu t bo lympho v ớt hng cu c loi b... li m dũng chy t bo di kớnh hin vi quang hc M y m dũng chy t bo cú th nhn dng cỏc loi t bo khỏc qua tia tỏn x hay ỏnh sỏng hunh quang chỳng phỏt chy qua chựm tia laser nh vy m y ny cng cú th chn