NGHIÊN CỨU SỬ DỤNG CHẾ PHẨM SINH HỌC TRONG ƯƠNG NUÔI ẤU TRÙNG TÔM CÀNG XANH (Macrobrachium rosenbergii) QUI TRÌNH NƯỚC TRONG

TÓM TẮT Nghiên cứu được thực hiện nhằm đánh giá hiệu quả sử dụng hai loại chế phẩm sinh học lên môi trường, tỷ lệ sống của ấu trùng tôm Càng Xanh Macrobrachium rosenbergii ương theo qu

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ

(Macrobrachium rosenbergii) QUI TRÌNH NƯỚC TRONG

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH NUÔI TRỒNG THỦY SẢN

2009

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ

(Macrobrachium rosenbergii) QUI TRÌNH NƯỚC TRONG

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH NUÔI TRỒNG THỦY SẢN

Giáo viên hướng dẫn:

Ts TRẦN NGỌC HẢI PGs.Ts NGUYỄN THANH PHƯƠNG

2009

XÁC NHẬN CỦA CBHD

Hội đồng bảo vệ luận văn ngày 22/05/2009 Thành viên hội đồng gồm Thầy Ts Trần Ngọc Hải, Thầy Ts Nguyễn Văn Hòa và Cô Ts Ngô Thị Thu Thảo Bài viết đã qua chỉnh sửa

Chữ ký của CBHD Chữ ký của sinh SV thực hiện

………

LỜI CẢM TẠ

Tác giả xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đối với thầy hướng dẫn Ts Trần Ngọc Hải đã định hướng, nhắc nhở và cho những lời khuyên quý báo trong suốt quá trình thực hiện đề tài

Xin chuyển lời cảm ơn sâu sắc đến thầy PGs.Ts Nguyễn Thanh Phương, cô Thạc sĩ Nguyễn Thị Thu Hằng, anh Châu Tài Tảo và chị Cao Mỹ

Án đã giúp đỡ tác giả thực hiện đề tài

Cảm ơn toàn thể các Thầy cô trong Khoa Thủy sản – Trường đại học Cần Thơ, Thầy Ts Vũ Ngọc Út cố vấn học tập và toàn thể các bạn lớp Nuôi trồng thủy sản K31 đã động viên, giúp đỡ trong suốt quá trình học tập

Nhân đây tác giả cũng xin chân thành cảm ơn anh Nguyễn Đăng Khoa

và anh Trần Ngọc Tuấn lớp Bệnh học thủy sản K28 đã giúp đỡ, tạo điều kiện thực hiện đề tài

Xin cảm ơn tất cả những người thân đã giúp đỡ trong những lúc khó khăn để được thành công như ngày hôm nay!

Cù Văn Thành

TÓM TẮT

Nghiên cứu được thực hiện nhằm đánh giá hiệu quả sử dụng hai loại chế phẩm sinh học lên môi trường, tỷ lệ sống của ấu trùng tôm Càng

Xanh (Macrobrachium rosenbergii) ương theo qui trình nước trong

Thí nghiệm được bố trí với 4 nghiệm thức: (1) không sử dụng chế phẩm sinh hoc; (2) sử dụng chế phẩm sinh học A; (3) sử dụng chế phẩm sinh học B; (4) kết hợp 2 loại chế phẩm trên Theo dõi các yếu tố môi trường, các chỉ số ấu trùng, phân tích vi khuẩn trong môi trường nước và đánh giá tỷ lệ sống ở giai đoạn tôm bột 10 ngày tuổi Kết quả cho thấy khi kết hợp hai loại chế phẩm sinh học cho kết quả tốt nhất với tỷ lệ sống trung bình là 75,3% Sử dụng chế phẩm sinh học góp phần làm giảm mật

độ vi khuẩn Vibrio và làm tăng mật độ vi khuẩn tổng số Các yếu tố môi

trường ổn định và tốt hơn, ấu trùng phát triển nhanh và tỷ lệ sống cao hơn

ở các nghiệm thức sử dụng chế phẩm sinh học so với nghiệm thức không

sử dụng chế phẩm sinh học Sử dụng chế phẩm sinh học trên đã góp phần tích cực trong quản lý môi trương bể ương cũng như hiệu quả trong sản xuất giống tôm Càng Xanh và qui trình có thể ứng dụng trong thực tế

MỤC LỤC

LỜI CẨM TẠ i

TÓM TẮT ii

MỤC LỤC iii

DANH SÁCH CÁC BẢNG v

DANH SÁCH CÁC HÌNH vi

CHƯƠNG 1 10

ĐẶT VẤN ĐỀ 10

1.1 Giới thiệu 10

1.2 Mục tiêu của đề tài 10

1.3 Nội dung nghiên cứu 11

CHƯƠNG 2 12

LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 12

2.1 Đặt điểm sinh học của tôm Càng Xanh 12

2.1.1 Vị trí phân loại 12

2.1.2 Phân bố 12

2.1.3 Vòng đời của tôm càng xanh 12

2.1.4 Đặc điểm sinh trưởng và yêu cầu môi trường sống 12

2.1.5 Tính ăn của tôm 13

2.1.6 Đặc điểm sinh sản 13

2.2 Tình hình sản xuất giống tôm Càng Xanh trên thế giới và trong nước 14

2.3 Một số vấn đề liên quan đến ứng dụng vi sinh trong nuôi trồng thủy sản 15

CHƯƠNG 3 17

VẬT LIỆU - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17

3.1 Địa điểm – thời gian 17

3.1.1 Địa điểm 17

3.1.2 Thời gian 17

3.2 Vật liệu và dụng cụ 17

3.3 Phương pháp nghiên cứu 18

3.3.1 Chuẩn bị thí nghiệm 18

3.3.2 Bố trí thí nghiệm 18

3.3.3 Chăm sóc – cho ăn 19

3.3.4 Theo dõi các yếu tố môi trường 21

3.3.5 Thu và phân tích mẫu vi khuẩn 21

3.4 Phương pháp xử lý số liệu 21

CHƯƠNG 4 22

KẾT QUẢ - THẢO LUẬN 22

4.1 Các yếu tố môi trường 22

4.1.1 Nhiệt độ 22

4.1.2 pH 23

4.1.3 Đạm tổng số (TAN) 23

4.1.4 Nitric (NO2-) 24

4.2 Kết quả phân tích vi sinh 25

4.3 Các chỉ tiêu theo dõi ấu trùng và tôm bột 27

4.3.1 Chỉ số biến thái (LSI) 27

4.3.2 Chiều dài ấu trùng và tôm bột 28

4.4 Tỷ lệ sống 29

CHƯƠNG 5 31

KẾT LUẬN - ĐỀ XUẤT 31

5.1 Kết luận 31

5.2 Đề xuất 31

TÀI LIỆU THAM KHẢO 32

PHỤ LỤC 34

DANH SÁCH CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1: Năm nước dẫn đầu về sản lượng tôm nước ngọt năm 2001 5

Bảng 3.1: Cách bố trí thí nghiệm 10

Bảng 3.2: Công thức thức ăn chế biến cho ấu trùng tôm 11

Bảng 3.3: Kích cỡ thức ăn cho các giai đoạn ấu trùng 11

Bảng 4.1: Biến động nhiệt độ (oC) trong thí nghiệm 13

Bảng 4.2: Yếu tố pH trong thí nghiệm 14

Bảng 4.3: Hàm lượng đạm tổng số ( TAN) và Nitrite trong thí nghiệm 15

Bảng 4.4: Mật độ vi khuẩn trong môi trường nước ương 16

Bảng 4.5: Chỉ số ấu trùng (LSI) 19

Bảng 4.6: Chiều dài ấu trùng (mm) 19

Bảng 4.7: Chiều dài tôm bột (mm) 20

Bảng 4.8: Kết quả ương ấu trùng TCX 20

DANH SÁCH CÁC HÌNH

Trang

Hình 2.1: Vòng đời tôm Càng Xanh 3

Hình 3.1: Mô hình trại sản xuất giống tôm Càng Xanh 8

Hình 3.2: Hệ thống bể bố trí thí nghiệm 10

Hình 3.3: Cho ấu trùng ăn thức ăn chế biến 11

Hình 4.1: Vi khuẩn tổng cộng trong môi trương nước ương (NT1: không sử dụng phẩm sinh học, NT2: sử dụng A, NT3: sử dụng A kết hợp với B và NT4: sử dụng B) 17

Hình 4.2: Vi khuẩn Vibrio trong môi trường nước ương (NT1: không sử dụng chế phẩm sinh học, NT2: sử dụng A, NT3: sử dụng A kết hợp với B và NT4 sử dụng B) 18

Hinh 4.4: Tỷ lệ sống của ấu trùng đến giai đoạn PL10 21

CHƯƠNG 1 ĐẶT VẤN ĐỀ

1.1 Giới thiệu

Đồng Bằng Sông Cửu Long (ĐBSCL), vùng nuôi thủy sản lớn nhất cả nước Trong chiến lược phát triển nuôi trồng thủy sản của vùng, thì nhiều đối tượng được xem là quan trọng và có ý nghĩa quyết định Hiện nay, khi nghề nuôi tôm biển không còn thuận lợi như trước thì tôm Càng Xanh (TCX) là đối tượng nuôi rất có triển vọng, phù hợp với chủ trương về chuyển dịch cơ cấu trong sản xuất nông nghiệp của Chính phủ năm 2000 Trong những năm qua, diện tích nuôi tôm TCX ở ĐBSCL tăng lên rất nhanh khoảng 5.000 ha, tăng gấp 10 lần so với 5 năm trước (1/2008- TTXVN) Nhưng vấn đề đặt ra vẫn là con giống Việc sản xuất con giống chưa đáp ứng nhu cầu về số lượng cũng như về chất lượng và giá quá cao đang gây trở ngại lớn cho nghề nuôi (Lê Xuân Sinh, 2007) Việc chủ động quản lý môi trường bể ương và áp dụng các giải pháp kỹ thuật đồng bộ là nhân tố quyết định đến thành công Thời gian qua, đã có nhiều công trình nghiên cứu sản xuất giống TCX nhưng vẫn còn một số hạn chế Nên việc tiếp tục nghiên cứu và cải tiến các qui trình là cần thiết

Hiện nay, qui trình được áp dụng phổ biến nhất trong sản xuất giống TCX là nước xanh cải tiến với nhiều ưu điểm, song việc quản lý môi trường bằng tảo lại gặp khó khăn, không chủ động và khó ứng dụng trong thực tế Để chủ động hơn trong quản lý môi trường bể ương, việc sử dụng vi sinh và yuca

là có cơ sở Ứng dụng vi sinh trong quản lý môi trường bể ương là một hướng mới và đã đạt những thành công bước đầu như nghiên cứu của Nguyễn Thanh Phương (2007), Đặng Thị Hoàng Oanh (2000), Trần Thị Cẩm Hồng (2008),…Để tiếp tục nghiên cứu và được sự đồng ý của các thầy cô trong

Khoa Thủy sản - Trường đại học Cần Thơ, đề tài: “Nghiên cứu sử dụng chế

phẩm sinh học trong ương ấu trùng tôm Càng Xanh (Macrobrachium rosenbergii) qui trình nước trong” được thực hiện

1.2 Mục tiêu của đề tài

Đánh giá hiệu quả sử dụng chế phẩm sinh học A và chế phẩm sinh học

B trong quản lý môi trường bể ương Nhằm góp phần từng bước tìm ra qui trình ương ấu trùng TCX hiệu quả, dễ áp dụng trong thực tế

1.3 Nội dung nghiên cứu

Đánh giá ảnh hưởng của việc sử dụng chế phẩm sinh học A và B lên môi trường, phát triển, tỷ lệ sống của ấu trùng TCX trong hệ thống ương nước trong

CHƯƠNG 2 LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU

2.1 Đặt điểm sinh học của tôm Càng Xanh

2.1.1 Vị trí phân loại

Ngành: Arthropoda

Lớp: Crustacea Lớp phụ: Malacostraca Bộ: Decapoda

Bộ đặc biệt là vùng ĐBSCL Tùy từng thủy vực với đặc điểm môi trường khác nhau và tùy mùa vụ khác nhau mà TCX xuất hiện với kích cở, giai đoạn thành thục và mức độ phong phú khác nhau

2.1.3 Vòng đời của tôm càng xanh

Vòng đời của TCX có 4 giai đoạn bao gồm trứng, ấu trùng, hậu ấu trùng và tôm trưởng thành TCX trưởng thành sống chủ yếu ở nước ngọt Khi thành thục tôm bắt cặp, đẻ trứng và trứng dính vào các chân bụng của tôm

mẹ Tôm mẹ ôm trứng di cư ra vùng cửa sông nước

lợ (6-18 ppt) để nở Ấu trùng nở ra sống phù du và trải qua 11 lần biến thái để trở thành hậu ấu trùng lúc này tôm có xu hướng tiến vào vùng nước ngọt như: sông, rạch, ruộng, ao, hồ… Ở đó, chúng sinh sống và lớn lên

2.1.4 Đặc điểm sinh trưởng và yêu cầu môi trường sống

2.1.4.1 Đặc điểm sinh trưởng

Trong quá trình lớn lên, tôm trải qua nhiều lần lột xác Chu kỳ lột xác của tôm trải qua 4 giai đoạn (tiền lột xác, lột xác, hậu lột xác và giữa chu kỳ lột xác) và phụ thuộc vào kích cỡ, thức ăn, nhiệt độ, giới tính và môi trường

Sự tăng trưởng của tôm phu thuộc nhiều vào giai đoạn, giới tính, điều

Hình 2.1: Vòng đời tôm Càng Xanh

kiện ương nuôi Tôm nhỏ có tốc độ tăng trưởng nhanh hơn tôm lớn và tôm đực lớn nhanh hơn tôm cái

2.1.4.2 Yêu cầu môi trường sống

- Các loại khí độc: dưới 0,01 ppm, không có càng tốt

2.1.5 Tính ăn của tôm

2.1.5.1 Tính ăn

TCX ăn tạp thiên về động vật như nguyên sinh động vật, giun nhiều tơ, giáp xác, côn trùng, nhuyễn thể, các mảnh cá vụn, các loài tảo mùn bả hữu cơ…

2.1.5.2 Nhu cầu dinh dưỡng

- Nhu cầu chất đạm: tôm giống nhu cầu chất đạm khoảng 27-35% và tôm bố mẹ cần khoảng 40-45%

- Nhu cầu chất béo: hàm lượng lipid thích hợp cho tôm khoảng 6-7,5%

- Nhu cầu chất bột đường: thức ăn có hàm lượng chất bột đường đến 40% vẫn cho kết quả tốt

- Nhu cầu Vitamin và khoáng: vitamin C khoảng 200-500 mg/kg thức

ăn Các chất khoáng cần thiết như Canxi, phosphorus…

2.1.6 Đặc điểm sinh sản

Trong tự nhiên tôm thành thục và giao vĩ xảy ra hầu như quanh năm nhưng tập trung vào những mùa chính tùy từng nơi Ở ĐBSCL có hai mùa tôm sinh sản chính là khoảng tháng 4-6 và tháng 8-10 hàng năm Tuy nhiên, tuổi thành thục và kích cỡ thành thục của tôm còn phụ thuộc vào rất nhiều yếu tố như môi trường và thức ăn

TCX trưởng thành sống ở nước ngọt, chúng thành thực, giao vĩ và đẻ trứng ở đó, nhưng khi ôm trứng vào ấp trứng chúng có xu thế bơi ra vùng nước lợ từ 6-18 ppt

Khi buồng trứng đạt giai đoạn IV, tôm cái lột xác tiền giao vĩ Quá trình lột xác tiền giao vĩ của tôm cái sẽ tiết ra hormon có tác dụng kích thích tôm đực tìm đến Sự hiện diện của tôm đực còn giúp bảo vệ tôm cái mới lột khỏi bị các tôm cái khác tấn công

Quá trình giao vĩ xảy ra vào ban đêm, trong vòng 20-35 phút Sau khi giao vĩ tôm đực nằm cạch tôm cái khoảng 5-10 phút Tôm cái ở trong tình trạng chuẩn bị để đẻ Sau khi giao vĩ 25 giờ tôm cái bắt đầu đẻ trứng Trong

quá trình đẻ trứng, trứng được thụ tinh khi đi ngang túi chứa tinh Trứng sẽ lần lượt dính từng chùm vào các lông tơ của các đôi chân bụng Thời gian đẻ trứng khoảng 10-60 phút và thường 15-25 phút Trong quá trình ấp trứng tôm cái thường dùng chân bụng quạt nước để tạo dòng chảy, làm thoáng khí cho trứng Tùy theo nhiệt độ ấp mà thời gian ấp trứng có thể từ 15-23 ngày

Tùy vào kích cỡ và trọng lượng của tôm cũng như chất lượng và số lần tham gia sinh sản của chúng mà sức sinh sản của tôm có thể thay đổi trungbình dao động trong khoảng 500-1000 trứng/g trọng lượng tôm mẹ

2.2 Tình hình sản xuất giống tôm Càng Xanh trên thế giới và trong nước

TCX là đối tượng nuôi quan trọng của nhiều nước trên thế giới với nhiều hình thức nuôi khác nhau Tuy nhiên, hình thức nuôi thâm canh khá phổ biến năng suất trung bình từ 900-4.500 kg/ha/năm (New,1995).`

Bảng 2.1: Năm nước dẫn đầu về sản lượng tôm nước ngọt năm 2001

đó, tình hình sản xuất giống TCX phát triển và đã có 4 qui trình được áp dụng rộng rãi: nước trong hở do Ling (1969) và Aquacop (1977) đề xuất; nước trong kín được Sandifer (1977), Menasveta (1980) và Singholka (1982) nghiên cứu thành công; nước xanh bắt đầu nghiên cứu bởi Fujimura (1966); nước xanh cải tiến được Ang đề xuất từ năm 1986

Nuôi TCX là nghề truyền thống ở Việt Nam, đặc biệt là vùng ĐBSCL Việc nghiên cứu sản xuất giống đã bắt đầu từ những năm đầu thập niên 80 với qui trình nước trong hở và tuần hoàn (Nguyễn Thanh Phương và Trần Ngọc Hải, 2004) Trại sản xuất giống đầu tiên tại Vũng Tàu do Tổ chức Nông lương Quốc tế (FAO) đầu tư xây dựng nhưng chưa hoàn thành Năm 1987, chính phủ

Úc thông qua Ủy ban Quốc tế sông Mê-kông đã tài trợ khôi phục và hoàn thành trại tôm Vũng Tàu (Trần Thị Cẩm Hồng, 2008) Các nghiên cứu sản

xuất giống TCX ở ĐBSCL được thực hiện chủ yếu ở Trường đại học Cần Thơ, Viện nghiên cứu Nuôi trồng thủy sản II qua việc ứng dụng và cải tiến các qui trình nước trong kín, nước trong hở và nước xanh Qui trình nước trong hở đã mang lại hiệu quả đáng kể và được ứng dụng khá phổ biến ở Vũng Tàu, Bến Tre, Tiền Giang, Cần Thơ, Trà Vinh với việc một số trại giống được thành lập (Nguyễn Việt Thắng, 1993) Do bước đầu nghiên cứu qui trình chưa ổn nên một một số trại ngưng hoạt động chỉ có trại Vũng Tàu (thuộc Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản II) và trại Long Mỹ (thuộc tỉnh Cần Thơ) là duy trì hoạt động nhưng chưa hết công xuất Tuy nhiên, sản xuất giống TCX nhân tạo đã phát triển mạnh từ 1999 khi nghề nuôi phát triển và ứng dụng thành công mô hình nước xanh cải tiến Năm 1998, Viện Hải sản - Khoa Nông nghiệp - Trường đại học Cần Thơ đã tiến hành các nghiên cứu ương ấu trùng TCX ứng dụng mô hình “nước xanh cải tiến” bước đầu cho kết quả tốt và triển khai ở một số tỉnh ĐBSCL (Nguyễn Thanh Phương và Trần Ngọc Hải, 2004) Hiện nay, ĐBSCL có 111 trại, sản xuất được 107,1 triệu Post/năm và 95% áp dụng

mô hình nước xanh cải tiến (Lê Xuân Sinh, 2007)

2.3 Một số vấn đề liên quan đến ứng dụng vi sinh trong nuôi trồng thủy sản

Việc ứng dụng vi sinh trong nuôi trồng thủy sản đã được công bố vào những năm cuối của thập kỉ 80 Yasuda và Taga (1980) cho rằng vi khuẩn có lợi tìm thấy không chỉ là thức ăn đơn thuần mà còn có tác dụng kiểm soát sinh học trong việc ngăn ngừa bệnh ở cá Hầu hết các loài vi khuẩn hữu ích ứng dụng trong nuôi trồng thủy sản là vi khuẩn lactic acid (Lactobacillus,

Carnobacterium…), giống Vibrio (Vibrio alginolyticus…), giống Bacillus

hoặc giống Pseudomonas Có nhiều nghiên cứu ứng dụng trong các trại giống nhưng ít có nghiên cứu sâu Maeda và Liao (1992) sử dụng vi khuẩn phân lập

từ đất PM-4 cho vào môi trường ương tôm Năm 1994, Maeda và Liao đã làm

tương tự với dòng vi khuẩn NS-110 Một dòng Vibrio alginolyticus đã được cho vào bể ương ấu trùng tôm (Litopenaeus vannamei) hàng ngày (Garriques

và Arevalo, 1995) Rengpipat và Rukpratanpom (1998) đã kết luận rằng,

Bacillus S11 là dòng vi khuẩn hữu ích có thể giàu hóa Artemia trước khi cho

ấu trùng tôm Sú ăn…Nhìn chung, ứng dụng vi sinh trong nuôi trồng thủy sản khá nhiều nhưng việc ứng dụng trong sản xuất giống TCX còn hạn chế

Ở nước ta, việc ứng dụng vi sinh trông nuôi trồng thủy sản còn khá mới

mẻ nhưng xu hướng phát triển ngày càng nhanh với nhiều loại chế phẩm sinh

học ra đời có nguồn gốc trong nước hay nhập nội Tính đến 6/2005, hiện có trên 200 thương hiệu chế phẩm sinh học và vitamin đang bán trên thị trường nước ta (Tăng Thị Chính và Đặng Đình Kim, 2005) Hiện nay, các mô hình nuôi tôm ứng dụng chế phẩm sinh học phát triển khá phổ biến các tỉnh ĐBSCL Ở Cà Mau, việc triển khai công nghệ EM.ZEO đang được sử dụng rộng rãi trong nuôi tôm và đạt năng suất, chất lượng cao Ở Đồng Tháp, việc

sử dụng men Eco-tab trong sản xuất giống TCX mô hình nước trong cũng đang được ứng dụng và tỷ lệ sống trên 30% (Trần Thị Cẩm Hồng, 2008)

Đặng Thị Hoàng Oanh và ctv (2000), đã tìm hiểu tác dụng của men vi sinh

Bio-dream lên các yếu tố vô sinh và hữu sinh trong ương nuôi ấu trùng TCX

Nguyễn Thanh Phương và ctv (2001), nghiên cứu sử dụng 3 loại men

Ecomarine, Bio-dream, BZT trong ương ấu trùng TCX qui trình nước xanh cải tiến Và mới đây nhất là đề tài nghiên cứu sử dụng men Eco-tab trong ương nuôi ấu trùng TCX quy trình nước trong của Trần Thị Cẩm Hồng (2008)

CHƯƠNG 3 VẬT LIỆU - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.1 Địa điểm – thời gian

3.1.1 Địa điểm

Trại sản xuất giống TCX số 29/42, đường Cái Sơn Hàng Bàng, phường

An Khánh, quận Ninh Kiều, Thành phố Cần Thơ

- Hệ thống bể: bể ương bằng nhựa có thể tích là 50 L gồm 12 cái, bể chứa

và xử lý nước ót, bể cho tôm nở, xô ấp Artemia

- Ống dẫn khí, van, đá bọt, túi lọc vải 1 µm

- Máy đo độ mặn, nhiệt kế, kính hiển vi, lame, lamel

- Cân, nồi, bếp gas, vợt, ống nhỏ giọt, cốc thủy tinh 50 ml…

- Bộ test đạm, test pH của Đức

- Chế phẩm sinh học: A dạng bột, 1 kg chứa: Bacillus spp 2.4*1012CFU, chất chiết xuất từ cây Yuca schidigera 30g và men phân hủy chất

hữu cơ, liều lượng theo khuyến cáo của nhà sản xuất 2,5 g/m3 nước

ương B dạng bột, 1 kg chứa: vi khuẩn Bacillus spp chất chiết xuất từ cây Yuca schidigera 300g, mannanoligosccharide 50g, liều lượng theo

khuyến cáo của nhà sản xuất 10 g/m3 nước ương

- Hóa chất: chlorine 70%, formol 38% …

- Dụng cụ trong phòng phân tích vi sinh

3.3 Phương pháp nghiên cứu

- Tôm mẹ và cho nở: tôm trứng được chọn từ những vựa thu tôm tự nhiên, chọn những con khỏe mạnh, không thương tích, không có dấu hiệu bệnh (đốm trắng, đốm đen, đóng rong…), có trọng lượng từ 30-80 g/con và trứng có cùng màu xám đen được xử lý bằng formol 20 ppm trong 30 phút, sau đó đưa vào bể nở 7 ppt mật độ 10 con/100 lít

- Thu và định lượng ấu trùng: dùng tấm vải đen che kín bể lại chừa một chổ sáng cho ấu trùng tập trung và siphon thu lấy ấu trùng Ấu trùng sau khi thu xong được tắm qua formol 200 ppm trong 30 giây và tiến hành định lượng Ấu trùng thu ngẫu nhiên 20 ml bằng cốc thủy tinh và đếm, lặp lại 3 lần lấy kết quả trung bình Ấu trùng được bố trí vào bể với mật độ 60 con/lít

3.3.2 Bố trí thí nghiệm

Liều lượng chế phẩm sinh học được sử dụng theo khuyến cáo của nhà sản xuất là 2,5 g/m3 đối với A và 10 g/m3 đối với B Chu kỳ sử dụng như sau: trước khi bố trí, ngày ương thứ 4, ngày ương thứ 8 và từ ngày thứ 8 trở đi sử dụng 2 ngày/lần

Thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên gồm 4 nghiệm thức, mỗi nghiệm thức lặp lại 3 lần

Bảng 3.1: Cách bố trí thí nghiệm

Nghiệm thức Liều lượng Ghi chú

10 g/m3

Đối chứng Chỉ sử dụng A

Sử dụng A + B Chỉ sử dụng B

Ở nghiệm thức 3, bổ sung B xen kẽ với A

3.3.3 Chăm sóc – cho ăn

- Ngày thứ nhất không cho ăn

- Cho ăn: từ ngày thứ 2 đến ngày thứ 5, ấu trùng được cho ăn bằng Artemia Vĩnh Châu mới nở mỗi ngày 2 lần lúc sáng và chiều Mật độ cho ăn là 1-2 Artemia/ml Từ ngày thứ 5 trở đi, cho ấu trùng ăn Artemia NABS 1 lần/ngày vào buổi chiều tối, mật độ cho ăn là 2-4 Artemia/ml Artemia sau khi nở thu cả vỏ, được xử lý với formol 100 ppm trong 1 phút và cho vào các bể ương Cho ăn thức ăn chế biến: bắt đầu cho ăn từ ngày thứ 5 Thức ăn gồm trứng, sữa, dầu mực, lecithin và Vitamin C Tất cả trộn lại cho vào máy xay sinh tố, đem hấp cách thuỷ 15-20 phút, cà qua các khay đem phơi nắng và cho ăn Thức ăn chế biến được lấy vào ly, cho nước vào đổ ra lặp lai 2-3 lần, tắt sục khí đợi cho tôm tập trung lên mặt, dùng ống nhỏ giọt rải đều cho ăn theo nhu cầu và khi ấu trùng ăn hết thì mở sục khí lại Cho ăn 4 lần/ngày (8h, 11h, 14h và16h)

Hình 3.3: Cho ấu trùng ăn thức ăn chế biến

Bảng 3.2: Công thức thức ăn chế biến cho ấu trùng tôm

Bảng 3.3: Kích cỡ thức ăn cho các giai đoạn ấu trùng

- Sục khí liên tục và độ mặn 12 ppt được duy trì suốt chu kỳ ương

- Thức ăn chế biến được cho ăn kỹ, điều chỉnh theo sức ăn của ấu trùng nếu dư thì siphon ra

- Hàng ngày theo dõi hoạt động, biến thái của ấu trùng và 3 ngày/lần theo dõi chỉ số LSI, chiều dài

LSI = ∑(Ai)/i Trong đó: LSI là chỉ số biến thái

Ai là giai đoạn của ấu trùng thứ i

L = ∑(Li)/i Trong đó: L là chiều dài của ấu trùng (mm)

Li là chiều dài của ấu trùng thứ i (từ mút chủy đến mút đốt đuôi)

- Khi ấu trùng đã chuyển gần hết sang Post thì tiến hành thay nước hạ độ mặn

và xác định tỷ lệ sống ở P10

TLS (%) = (số Post/ấu trùng bố trí)*100

3.3.4 Theo dõi các yếu tố môi trường

Các yếu tố môi trường được theo dõi từ lúc bố trí đến ngày thay nước như sau:

- Nhiệt độ: đo bằng nhiệt kế, 2 lần/ngày lúc 7 giờ và 14 giờ

- pH: đo bằng bộ test pH 2 lần/ngày lúc 7 giờ và 14 giờ

- Hàm lượng đạm tổng số (TAN): được xác định bằng bộ test TAN trước khi sử dụng men vi sinh và sau khi sử dụng 24 giờ, 1 lần/tuần

- NO2-: được xác định bằng bộ test NO2- trước khi sử dụng men vi sinh

và sau khi sử dụng 24 giờ, 1 lần/tuần

3.3.5 Thu và phân tích mẫu vi khuẩn

Mẫu nước được thu bằng chai thủy tinh 100 ml sau khi sử dụng men vi sinh 24 giờ, trữ lạnh và chuyển vào phòng phân tích Dùng phương pháp pha loãng và cấy trên môi trường agar NA+ và TCBS để xác định mật độ vi khuẩn

tổng cộng và vi khuẩn Vibrio spp (phương pháp của phòng thí nghiệm Bệnh

học thủy sản - Khoa Thủy sản - Đại học Cần Thơ) Các bước tiến hành:

- Lắc đều mẫu nước

- Chuẩn bị 2 ống nghiệm chứa 9 ml dung dịch NaCl 0,85% Dùng pipet hút 1 ml mẫu nước cho vào ống nghiệm 1, lắc đều rồi dùng pipet hút ra 1ml cho vào ống nghiệm 2

- Lấy 0,1 ml từ mẫu nước ban đầu cho vào đĩa môi trường NA+ và TCBS, que thủy tinh trải đều ra và đánh dấu Làm lại tương tự đối với các mẫu nước pha loãng Mỗi nồng độ pha loãng lặp lại 2 lần

- Mẫu được ủ trong tủ ấm 24 giờ và đem ra đọc kết quả Các thao tác được thực hiện trong điều kiện vô trùng

- Những đĩa có số khuẩn lạc từ 25-250 được chọn để tính kết quả theo công thức:

Số tế bào/ml (CFU/ml) = Số khuẩn lạc*độ pha loãng*10 (CFU: Colony Forming Unit)

3.4 Phương pháp xử lý số liệu

Số liệu được xử lý bằng chương trình Excell và chương trình thống kê Anova 1 nhân tố (phép thử Duncan SPSS)