đánh giá mối quan hệ di truyền của một số mẫu dẻ và nghiên cứu bảo tồn nguồn gen dẻ trùng khánh - cao bằng bằng kỹ thuật nuôi cấy mô - tế bào thực vật

Header Page of 166 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM Nguyễn Minh Quế ĐÁNH GIÁ MỐI QUAN HỆ DI TRUYỀN CỦA MỘT SỐ MẪU DẺ VÀ NGHIÊN CỨU BẢO TỒN NGUỒN GEN DẺ TRÙNG KHÁNH - CAO BẰNG BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ - TẾ BÀO THỰC VẬT LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Thái Nguyên, năm 2009 Footer Page ofTrung 166.tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Số hóa1bởi http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 166 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM Nguyễn Minh Quế ĐÁNH GIÁ MỐI QUAN HỆ DI TRUYỀN CỦA MỘT SỐ MẪU DẺ VÀ NGHIÊN CỨU BẢO TỒN NGUỒN GEN DẺ TRÙNG KHÁNH - CAO BẰNG BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ - TẾ BÀO THỰC VẬT Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60.42.30 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN: TS NGUYỄN THỊ TÂM Thái Nguyên, năm 2009 Footer Page ofTrung 166.tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Số hóa2bởi http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 166 LỜI CẢM ƠN Để có kết này, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc, chân thành đến cô giáo - TS Nguyễn Thị Tâm tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện giúp đỡ hoàn thành công trình nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn kỹ thuật viên phòng Công nghệ tế bào thực vật, phòng Di truyền - Khoa Sinh - KTNN, trường Đại học Sư phạm, Đại học Thái Nguyên nhiệt tình giúp đỡ trình thực luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn toàn thể thầy cô giáo khoa Sinh - KTNN khoa Sau đại học trường Đại học Sư phạm Thái Nguyên tạo điều kiện giúp đỡ hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ gia đình bạn bè đồng nghiệp Mặc dù có nhiều cố gắng, song không tránh khỏi sai sót Tôi mong đóng góp ý kiến, bảo quý thầy cô bạn Thái Nguyên, ngày 25 tháng 08 năm 2009 Tác giả Footer Page ofTrung 166.tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Số hóa3bởi http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 166 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tôi, số liệu công trình hoàn toàn trung thực, xác Tôi xin chịu trách nhiệm hoàn toàn kết Tác giả Nguyễn Minh Quế Footer Page ofTrung 166.tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Số hóa4bởi http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 166 MỤC LỤC Trang MỞ ĐẦU Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đặc điểm hình thái hệ thống phân loại dẻ 1.2 Vai trò dẻ 1.3 Một số thành tựu nuôi cấy mô - tế bào thực vật nhân giống bảo tồn nguồn gen số trồng 1.4 Ứng dụng kỹ thuật RAPD đánh giá mối quan hệ di truyền 12 số loài thực vật Chƣơng 2: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Vật liệu 16 2.1.1 Vật liệu thực vật 16 2.1.2 Hoá chất thiết bị 16 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 19 2.2.1 Phƣơng pháp nghiên cứu nuôi cấy mô - tế bào 19 2.2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu mối quan hệ di truyền số mẫu 22 dẻ kỹ thuật RAPD Chƣơng 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 26 3.1 Kết đánh giá mối quan hệ di truyền số mẫu dẻ 26 kỹ thuật RAPD 3.1.1 Tách chiết tinh DNA từ mẫu dẻ 26 3.1.2 Kết phân tích điện di sản phẩm PCR - RAPD 27 3.1.3 Mối quan hệ di truyền mẫu dẻ nghiên cứu 31 3.2 Kết nhân giống vô tính dẻ Trùng Khánh - Cao Bằng 34 kỹ thuật in vitro 3.2.1 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng cồn 70 o javen 65% đến 34 khử trùng hạt Footer Page ofTrung 166.tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Số hóa5bởi http:www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 166 3.2.2 Ảnh hƣởng chất kích thích sinh trƣởng đến khả 35 nhân chồi dẻ Trùng Khánh ống nghiệm 3.2.3 Ảnh hƣởng NAA đến khả rễ dẻ 42 3.2.4 Kết đƣa môi trƣờng tự nhiên 44 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 48 DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH CÔNG BỐ CỦA TÁC GIẢ 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO 51 PHỤ LỤC 56 Footer Page ofTrung 166.tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Số hóa6bởi http:www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 166 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Thành phần môi trƣờng WPM 17 Bảng 2.2 Trình tự nucleotid 10 mồi RAPD sử dụng nghiên 19 cứu Bảng 3.1 Hàm lƣợng độ tinh DNA mẫu dẻ nghiên cứu 26 Bảng 3.2 Đa hình phân đoạn DNA đƣợc nhân 10 mồi ngẫu 27 nhiên Bảng 3.3 Hàm lƣợng thông tin tính đa hình (PIC) mẫu dẻ 28 Bảng 3.4 Giá trị tƣơng quan kiểu hình (r) theo cách tính hệ số tƣơng 32 đồng Bảng 3.5 Hệ số tƣơng đồng mẫu dẻ nghiên cứu 32 Bảng 3.6 Kết khử trùng hạt dẻ Trùng Khánh 34 Bảng 3.7 Ảnh hƣởng BAP đến khả phát sinh chồi 36 Bảng 3.8 Ảnh hƣởng tổ hợp kinetin BAP đến phát sinh chồi 39 Bảng 3.9 Ảnh hƣởng tổ hợp BAP NAA đến khả tạo cụm 41 chồi Bảng 3.10 Ảnh hƣởng NAA đến khả rễ dẻ 43 Bảng 3.11 Kết đƣa môi trƣờng tự nhiên 45 Footer Page ofTrung 166.tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Số hóa7bởi http:www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 166 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1 Các mẫu dẻ đƣợc sử dụng làm vật liệu nghiên cứu 16 Hình 3.1 Kết điện di DNA tổng số mẫu dẻ gel agarose 26 0,8% Hình 3.2 Hình ảnh điện di sản phẩm PCR-RAPD mẫu dẻ với mồi 29 TN03 DTN2 Hình 3.3 Hình ảnh điện di sản phẩm PCR-RAPD mẫu dẻ với mồi 30 DTN1 OPM5 Hình 3.4 Biểu đồ hình mẫu dẻ nghiên cứu theo hệ số 33 Jaccard kiểu phân nhóm UPGMA Hình 3.5 Các giai đoạn tạo nguyên liệu khởi đầu 35 Hình 3.6 Ảnh hƣởng BAP đến tạo chồi 37 Hình 3.7 Ảnh hƣởng BAP + kinetin đến tạo chồi 40 Hình 3.8 Ảnh hƣởng BAP NAA đến khả tạo chồi dẻ 42 Hình 3.9 Cây dẻ rễ 44 Hình 3.10 Cây dẻ trồng môi trƣờng tự nhiên với giá thể 46 khác Hình 3.11 Cây dẻ trồng môi trƣờng tự nhiên sau 20 tuần Footer Page ofTrung 166.tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Số hóa8bởi 47 http:www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 166 MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Việt Nam quốc gia nằm khu vực khí hậu nhiệt đới gió mùa, thuận lợi cho phát triển thực vật nên rừng chiếm diện tích lớn Rừng cung cấp nguồn lâm sản, góp phần cân môi trường sinh thái điều hoà khí hậu Từ đầu kỉ XX, rừng bị tàn phá nặng nề phần chiến tranh phần tập quán du canh, di cư, đốt nương, làm rẫy, chặt phá rừng bừa bãi Nguồn tài nguyên rừng bị cạn kiệt gây ô nhiễm môi trường làm ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khoẻ người sinh vật sống trái đất Trong năm gần đây, Đảng nhà nước có nhiều sách khuyến khích trồng gây rừng, phủ xanh đất trống đồi núi trọc xoá đói giảm nghèo Dẻ loại rừng khuyến khích trồng dẻ có giá trị kinh tế cao [14] Các phận rễ, thân, lá, hoa, hạt sử dụng [4] Cây dẻ sống thích hợp điều kiện đất đồi núi khô hạn nghèo dinh dưỡng [3] Cách trồng dẻ chủ yếu phương pháp cắt cành bầu đất hệ số nhân chồi thấp nên lâu cho thu hoạch hiệu chưa cao Họ dẻ Việt Nam không lớn nên việc nhận biết không khó khăn Tuy nhiên, việc phân biệt chi họ lại khó việc định loại loài chi lớn lại khó khăn [4] Từ năm 80 kỷ XX trở lại đây, hàng loạt kỹ thuật sinh học phân tử như: PCR, AFLP, RAPD, RFLP, SSR ứng dụng vào lĩnh vực: Phân tích đánh giá hệ gen thực vật nhằm xác định thay đổi dòng chọn lọc mức độ phân tử; sử dụng thị phân tử hỗ trợ cho chọn giống trồng góp phần rút ngắn thời gian chọn tạo giống; đánh giá đa dạng di truyền loài; phân lập chuyển gen có giá trị kinh tế để nâng cao chất lượng khả chống chịu với -1- Footer Page ofTrung 166.tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Số hóa9bởi http://www.lrc-tn.edu.vn Header Page 10 of 166 điều kiện bất lợi cuả môi trường Thành công sinh học phân tử đại góp phần nâng cao suất chất lượng giống trồng [5], [12] Để đánh giá mối quan hệ di truyền số mẫu dẻ góp phần vào việc bảo tồn nguồn gen dẻ Trùng Khánh - Cao Bằng, chọn đề tài: "Đánh giá mối quan hệ di truyền số mẫu dẻ nghiên cứu bảo tồn nguồn gen dẻ Trùng Khánh - Cao Bằng kỹ thuật nuôi cấy mô - tế bào thực vật" Mục tiêu nghiên cứu - Phân tích mối quan hệ di truyền số mẫu dẻ kỹ thuật sinh học phân tử - Nghiên cứu môi trường quy trình nhân giống in vitro dẻ Trùng Khánh - Cao Bằng nhằm mục đích bảo tồn nguồn gen Nội dung nghiên cứu 3.1 Đánh giá mối quan hệ di truyền số mẫu dẻ kỹ thuật RAPD 3.2 Nghiên cứu bảo tồn nguồn gen dẻ Trùng Khánh - Cao Bằng kỹ thuật nuôi cấy in vitro - Khử trùng mẫu: Thăm dò nồng độ cồn, javen thời gian thích hợp để khử trùng hạt dẻ Trùng Khánh - Nhân chồi: Tìm hiểu môi trường tạo chồi thông qua nghiên cứu ảnh hưởng riêng rẽ tổ hợp chất kích thích sinh trưởng thuộc nhóm cytokinin nhóm auxin - Tạo hoàn chỉnh: Tìm hiểu môi trường tạo rễ thông qua nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng thuộc nhóm auxin - Đưa môi trường tự nhiên: Nghiên cứu giá thể điều kiện thích hợp để đưa dẻ tạo qua nuôi cấy phòng thí nghiệm trồng môi trường -2- Footer Page 166 Số hóa10 bởiof Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tn.edu.vn Header Page 52 of 166 A B Hình 3.9 Cây dẻ rễ (sau tuần) A: α - NAA 0,4mg/l B: α - NAA 0,2mg/l 3.2.4 Kết đƣa môi trƣờng tự nhiên Với hầu hết nuôi cấy mô, đưa môi trường tự nhiên công đoạn khó môi trường thí nghiệm, chăm sóc tối ưu điều kiện dinh dưỡng chế độ nhiệt độ, ánh sáng, độ ẩm Cây điều kiện thí nghiệm không bị nhiễm loại nấm gây bệnh không tiếp xúc với loại sâu bệnh bên môi trường tự nhiên Sau nghiên cứu quy trình đưa môi trường số loại khác nhau, điều kiện đất đai vùng Trùng Khánh - Cao Bằng quy trình trồng dẻ người dân đây, trồng thử nghiệm dẻ Trùng Khánh loại giá thể khác (đất, trấu hun đất + trấu hun) Trước tiên, mở nút bình tam giác cho dẻ quen dần với điều kiện tự nhiên ngày Sau đó, lấy dẻ rửa thạch bám gốc rễ Trong tuần đầu, tưới cho dung dịch WPM pha loãng 10 lần Các tuần tiếp theo, dẻ tưới nước hàng ngày với lượng nước thấp bón lượng nhỏ phân tổng hợp NPK tuần thứ sau trồng chậu để đảm bảo dinh dưỡng cho Theo - 44 - Footer Page 166 Số hóa52 bởiof Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tn.edu.vn Header Page 53 of 166 dõi tỉ lệ sống chiều cao tuần Kết trình bày bảng 3.11 Kết đưa dẻ môi trường tốt với tỉ lệ sống đạt từ 72,09% đến 86,05% Cây dẻ có khả sống tốt giá thể đất + trấu hun (86,05% sống) Theo dõi chiều cao thời gian khác nhau, nhận thấy, tuần đầu, chưa quen với điều kiện môi trường nên tăng chiều cao chưa nhiều (tăng từ 3,07cm đến 3,34cm tuần đầu) Nhưng sau thích ứng dần với điều kiện sống tăng chiều cao mạnh (tăng từ 4,03cm đến 5,05cm tuần tiếp theo) Chiều cao tuần đầu tuần tăng nhanh giá thể đất + trấu hun (trung bình tuần đầu tăng 3,34 cm, tuần sau tăng 5,05cm) Khi quan sát hình thái cây, thấy giá thể đất + trấu hun, mập phát triển tốt giá thể lại Bảng 3.11 Kết đưa môi trường tự nhiên Giá thể Số Số Tỉ lệ sống Chiều cao (cm) đem sống (%) Cây Sau Sau trồng (sau (Sau tuần) trồng tuần tuần tuần) Đất 43 31 72,09±0,23 5,48±0,11 8,55±0,10 13,52±0,13 Trấu hun 43 34 79,07±0,15 5,35±0,18 8,44±0,17 12,47±0,21 Đất + trấu hun 43 37 86,05±0,21 5,45±0,17 8,79±0,13 13,84±0,27 Như vậy, giá thể đất + trấu hun giá thể thích hợp để đưa dẻ phòng thí nghiệm trồng môi trường tự nhiên - 45 - Footer Page 166 Số hóa53 bởiof Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tn.edu.vn Header Page 54 of 166 1A 1B 1C 2A 2B 2C 3A 3B 3C Hình 3.10: Cây dẻ trồng môi trường tự nhiên với giá thể khác 1: Cây dẻ trồng 2: Cây dẻ trồng môi trường sau tuần 3: Cây dẻ trồng môi trường tự nhiên sau tuần A: Trồng đất B: Trồng trấu hun C: Trồng đất + trấu hun - 46 - Footer Page 166 Số hóa54 bởiof Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tn.edu.vn Header Page 55 of 166 Hình 3.1 Cây dẻ phát triển môi trường tự nhiên (sau 20 tuần) - 47 - Footer Page 166 Số hóa55 bởiof Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tn.edu.vn Header Page 56 of 166 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận Phân tích mối quan hệ di truyền mẫu dẻ kỹ thuật RAPD, kết thu sau: 1.1 Phân tích RAPD với DNA mẫu dẻ với 10 mồi ngẫu nhiên có 5/10 mồi cho tính đa hình 1.2 Các mẫu dẻ lấy từ khu vực khác huyện Trùng Khánh - Cao Bằng mẫu dẻ từ Vân Nam - Trung Quốc có hệ số tương đồng di truyền đạt 100% Mẫu dẻ Bắc Giang có tương đồng di truyền với mẫu dẻ nghiên cứu 69,6% 1.3 Các mẫu dẻ TK1, TK2, TK3 TQ thuộc loài Castanea molissima Blum (dẻ Trùng Khánh, dẻ Cao Bằng, dẻ Pố Tấu) thuộc chi CASTANEA Mill.1754 (Dẻ Trùng Khánh) Mẫu dẻ Bắc Giang, có sai khác so với mẫu lại tới 30,4% (1- 0,696) Mẫu thuộc loài Castanopsis boisii Hickel & Camus, 1992 (dẻ gai Yên Thế, dẻ gai Bắc Giang) chi CASTANOPSIS Quy trình nhân giống dẻ Trùng Khánh - Cao Bằng kĩ thuật nuôi cấy in vitro: 2.1 Công thức tốt cho khử trùng hạt dẻ Trùng Khánh là: Cồn 70o phút, khử trùng tiếp javen 65% 25 phút, tráng nước cất vô trùng 2.2 Môi trường kết hợp BAP 0,5mg/l + NAA 0,2mg/l cho khả tạo đa chồi cao đạt 5,5 chồi/mô chiều cao trung bình chồi 4,19cm sau tuần 2.3 Môi trường có thành phần: WPM + agar 8,5g/l + đường sucrose 25g/l + nước dừa 200ml/l + NAA 0,2mg/l có ảnh hưởng tôt đến rễ - 48 - Footer Page 166 Số hóa56 bởiof Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tn.edu.vn Header Page 57 of 166 chồi dẻ ống nghiệm, chồi rễ đạt 100%, trung bình 7,17 rễ/chồi, chiều dài rễ đạt 7,15cm 2.4 Giá thể tốt để đưa dẻ Trùng Khánh môi trường tự nhiên đất + trấu hun với tỉ lệ sống đạt 86,05% chiều cao sau tuần trung bình 13,84 cm, cao trồng đem trồng 253,94% Đề nghị Do hạn chế thời gian, nghiên cứu mối quan hệ di truyền số mẫu dẻ kỹ thuật RAPD với 10 mồi ngẫu nhiên Để có kết luận xác hơn, cần tiến hành nghiên cứu với nhiều mồi sử dụng kết hợp với phương pháp khác - 49 - Footer Page 166 Số hóa57 bởiof Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tn.edu.vn Header Page 58 of 166 CÔNG TRÌNH CÔNG BỐ CỦA TÁC GIẢ Nguyễn Minh Quế, Nguyễn Thị Tâm (2009), “Đánh giá mối quan hệ di truyền số giống dẻ kĩ thuật RAPD”, Tạp chí Kinh tế Sinh thái, số 30/2009, tr 15 - 22 Nguyễn Thị Tâm, Nguyễn Minh Quế (2009), “Nghiên cứu quy trình bảo tồn nguồn gen dẻ Trùng Khánh - Cao Bằng kỹ thuật In vitro”, Hội nghị Công nghệ sinh học toàn quốc - 50 - Footer Page 166 Số hóa58 bởiof Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tn.edu.vn Header Page 59 of 166 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Quang Thạch, Từ Thị Hoài Thu (1999), "Nghiên cứu phương thức nhân nhanh số giống hoa cúc chùm Hà Lan", Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, Nxb KH&KT Hà Nội, tr.735 - 739 [2] Nguyễn Thế Anh, Trần Văn Minh (2007), “Vi nhân giống pơmu (Forkienia hodginsii (Dunn) A Henry & H H Thomas)”, Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, Nxb KH&KT Hà Nội, tr.647 - 649 [3] Nguyễn Tiến Bân (2003), Danh mục loài thực vật Việt Nam, Nxb Nông nghiệp Hà Nội, Tập II, tr.227 - 269 [4] Nguyễn Tiến Bân (2004), “Cơ sở phân loại họ dẻ - Fagaceae Durmort Việt Nam”, Tạp chí Sinh học, Tập 26 (4A), tr.2 - 10 [5] Lê Trần Bình, Hồ Hữu Nhị, Lê Thi Muội (1997), Công nghệ sinh học cải tiến giống trồng, Nxb Nông nghiệp Hà Nội [6] Ngô Xuân Bình, Bùi Bảo Hoàn, Nguyễn Thuý Hà (2003), Giáo trình Công nghệ sinh học, Nxb Nông nghiệp Hà Nội [7] Nguyễn Việt Cƣờng, Phạm Đức Tuấn (2007), “Ứng dụng thị phân tử (RAPD DNA lục lạp) nghiên cứu đa dạng di truyền xây dựng vườn giống cóc hành”, Tạp chí NN & PTNT, số 19, tr.69 - 75 [8] Võ Văn Chi, Dƣơng Đức Tiến (1978), Phân loại thực vật, thực vật bậc cao, NXB Đại học Trung học chuyên nghiệp Hà Nội [9] Nguyễn Thị Dung, Nguyễn Văn Thiết, Nguyễn Hoàng Tỉnh (2005), “Sử dụng kỹ thuật RAPD AFLP để nghiên cứu quan hệ di truyền giống vải thiều vải chua”, Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, Nxb KH&KT Hà Nội, tr.1160 - 1162 - 51 - Footer Page 166 Số hóa59 bởiof Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tn.edu.vn Header Page 60 of 166 [10] Trần Văn Định, Trần Văn Minh (2007), “Nghiên cứu kỹ thuật nuôi cấy đỉnh sinh trưởng bảo tồn phát triển nguồn gen thông đỏ (Taxus wallichiana Zucc.)”, Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, Nxb KH & KT Hà Nội, tr.679 - 681 [11] Trịnh Nguyên Đức, Trần Văn Minh (2007), “Vi nhân giống lim xanh (Erythrophloeum fordii Oliv.)”, Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, Nxb KH&KT Hà Nội, tr.689 - 691 [12] Nguyễn Nhƣ Hiền, Nguyễn Nhƣ Ất (2001), Công nghệ sinh học ứng dụng vào nông nghệp phát triển nông thôn, Nxb Thanh niên [13] Trần Trung Hiếu, Nguyễn Xuân Thƣơng, Kiều Phƣơng Nam, Bùi Văn Lệ (2003), “Bước đầu nhân nhanh giống thông Caribe (Pinus caribeae) phương pháp nuôi cấy in vitro”, Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, Nxb KH&KT Hà Nội , tr.880 - 884 [14] Ngô Xuân Hoàng (2008), “Thực trạng giải pháp chủ yếu nhằm phát triển sản xuất hạt dẻ tỉnh Cao Bằng”, Tạp chí Khoa học Công nghệ - Đại học Thái Nguyên, số (47), Tập 1, tr.40 - 45 [15] Nguyễn Hữu Hổ, Phan Tƣờng Lộc, Lê Tấn Đức, Phạm Đức Trí, Nguyễn Thị Thanh (2007), “Tái sinh in vitro cúc (Dadrenthema morifolium L.)”, Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, Nxb KH&KT Hà Nội, tr.715 - 718 [16] Nguyễn Ngọc Huệ, Trần Danh Sửu, Trịnh Hồng Kiên (2005), “Đánh giá đa dạng nguồn gen xoài Việt Nam (Mangifera)”, Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, Nxb KH&KT Hà Nội, tr.1250 - 1253 [17] Dƣơng Công Kiên (2003), Nuôi cấy mô thực vật, Nxb Quốc gia thành phố Hồ Chí Minh - 52 - Footer Page 166 Số hóa60 bởiof Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tn.edu.vn Header Page 61 of 166 [18] Đinh Đoàn Long, Lê Huy Hàm, Đỗ Năng Vịnh, Hà Thị Thuý, Bernd Bueter (2004), “Nhân giống vô tính in vitro dòng Kava (Pipe methusticum G Forster) có hoạt tính sinh học cao”, Những vấn đề nghiên cứu Khoa học sống, Nxb KH&KT Hà Nội, tr.536 50 [19] Đoàn Thị Mai, Lê Sơn, Lƣơng Minh Hoan, Lê Trần Bình, Đinh Thị Phòng, Lê Thị Muội (2003), “Nhân giống số loài trồng có suất, chất lượng cao phương pháp nuôi cấy mô”, Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, Nxb KH & KT Hà Nội, tr.910 914 [20] Chu Văn Mẫn (2000), Ứng dụng tin học sinh học, Nxb Đại học Quốc Gia Hà Nội [21] Chu Hoàng Mậu, Nguyễn Thị Hoa Lan (2005), “Đa dạng di truyền số giống lạc trồng (Archis hypogaea L.)”, Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, Nxb KH&KT Hà Nội, tr.1304 - 1307 [22] Chu Hoàng Mậu, Nguyễn Thị Ngọc Lan, Nguyễn Vũ Thanh Thanh, Nguyễn Thị Vân Anh (2007), “Sự đa dạng kiểu gen kiểu hình chịu hạn số giống lúa cạn địa phương miền núi”, Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, Nxb KH & KT, tr.759 762 [23] Khƣu Hoàng Minh, Trần Văn Minh (2007), “Vi nhân giống trai Nam Bộ (Fagarea cochinchinensis A chev)”, Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, Nxb KH&KT Hà Nội, tr.763 - 765 [24] Trần Văn Minh (1997), Công nghệ tế bào thực vật, Nxb Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh [25] Trần Văn Minh, Bùi Thị Tƣờng Thu (2003), “Ứng dụng công nghệ tế bào thực vật nhân nhanh loài gỗ quý giá ty (Tectona Grandis - 53 - Footer Page 166 Số hóa61 bởiof Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tn.edu.vn Header Page 62 of 166 Linn F)”, Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, Nxb KH & KT Hà Nội, tr.352 - 357 [26] Trần Văn Minh, Lê Hữu Thƣơng (2007), “Ứng dụng công nghệ phôi soma dòng hoá keo lai (Acacia sp.) in vitro”, Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, Nxb KH&KT Hà Nội, tr.766 - 768 [27] Hoàng Thị Sản (2003), Phân loại học thực vật, Nxb Giáo dục [28] Nguyễn Thị Thanh, Võ Phan Misa (2007), “Nghiên cứu hệ thống tái sinh in vitro ứng dụng cho chuyển gen hồ tiêu (Piper nigrum L.)”, Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, Nxb KH&KT, tr.820 - 823 [29] Nguyễn Đức Thành (2000), Nuôi cấy mô tế bào thực vật nghiên cứu ứng dụng, Nxb Nông nghiệp Hà Nội [30] Nguyễn Đức Thành, Phạm Duy Toản, Nguyễn Hoàng Anh (2000), “Ứng dụng thị phân tử RAPD STS nghiên cứu đa dạng di truyền chọn giống lúa”, Những vấn đề nghiên cứu sinh học, Nxb Đại học quốc gia Hà Nội, tr.149 - 152 [31] Bùi Văn Thắng, Hà Văn Huân, Nguyễn Văn Việt, Hồ Văn Giảng (2007), “Xây dựng hệ thống tái sinh xoan ta (Melia azedarach L.) phục vụ cho chuyển gen”, Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, Nxb KH&KT, tr.815 - 819 [32] Nguyễn Văn Thiết, Lê Thị Lan Oanh (2001), “Nghiên cứu đa dạng sinh học nhãn trồng Việt Nam kỹ thuật RAPD”, Tạp chí Nông nghiệp Phát triển nông thôn, Số 7, tr.444 - 446 [33] Lò Thị Mai Thu, Chu Hoàng Mậu, Nguyễn Thị Ngọc Lan, Nguyễn Vũ Thanh Thanh, Nguyễn Thị Bình (2008), “Nghiên cứu đa dạng - 54 - Footer Page 166 Số hóa62 bởiof Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tn.edu.vn Header Page 63 of 166 di truyền số giống lúa cạn có khả chịu hạn khác nhau”, Tạp chí Khoa học & Công nghệ - Đ ại học Thái Nguyên, Số 3(47), tr.57 - 62 [34] Nguyễn Xuân Thụ, Lê Thị Lan Oanh, Nguyễn Thị Dung (1998), “Sử dụng dấu chuẩn RAPD để nhận dạng số giống chuối trồng Việt Nam”, Tạp chí di truyền ứng dụng, Số 3, tr.20 - 25 [35] Đỗ Năng Vịnh (2002), Công nghệ sinh học trồng, Nxb Nông nghiệp Hà Nội [36] Vũ Văn Vụ, Vũ Thanh Tâm, Hoàng Minh Tấn (1998), Sinh lý học thực vật, Nxb Giáo dục [37] Nguyễn Thị Kim Uyên, Trần Văn Minh (2007), “Dòng hoá hao (Artemisia annua L.) in vitro”, Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, Nxb KH&KT Hà Nội, tr.872 - 875 [38] http://www.caobang.gov.vn [39].http://vi.Wikipedia.org/wiki/K%E1%BB%B9_thu%E1%BA% ADt_RAPD Tiếng Anh [40] Doyle J.J and Doyle J.L (1990), "Isolation of Plant DNA from fresh tissue", Focus, 12, p.13 - 15 [41] Nei M and Li WH (1979), "Mathematical model for studying genetic variation in terms of restriction end nucleases", Proc Natl Acad Sci USA 76, p.5269 - 5273 [42] O L Gamborg G C Phillips Eds, Plant cell tissue and organ culture, Fundamental Methods - 55 - Footer Page 166 Số hóa63 bởiof Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tn.edu.vn Header Page 64 of 166 PHỤ LỤC Hình Cây dẻ Trùng Khánh - Cao Bằng Hình Cây dẻ gai Bắc Giang - 56 - Footer Page 166 Số hóa64 bởiof Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tn.edu.vn Header Page 65 of 166 Xác nhận giáo viên hướng dẫn Nguyễn Thị Tâm - 57 - Footer Page 166 Số hóa65 bởiof Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tn.edu.vn Header Page 66 of 166 - 58 - Footer Page 166 Số hóa66 bởiof Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tn.edu.vn ... Quế ĐÁNH GIÁ MỐI QUAN HỆ DI TRUYỀN CỦA MỘT SỐ MẪU DẺ VÀ NGHIÊN CỨU BẢO TỒN NGUỒN GEN DẺ TRÙNG KHÁNH - CAO BẰNG BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ - TẾ BÀO THỰC VẬT Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: ... số mẫu dẻ góp phần vào việc bảo tồn nguồn gen dẻ Trùng Khánh - Cao Bằng, chọn đề tài: "Đánh giá mối quan hệ di truyền số mẫu dẻ nghiên cứu bảo tồn nguồn gen dẻ Trùng Khánh - Cao Bằng kỹ thuật nuôi. .. Cao Bằng nhằm mục đích bảo tồn nguồn gen Nội dung nghiên cứu 3.1 Đánh giá mối quan hệ di truyền số mẫu dẻ kỹ thuật RAPD 3.2 Nghiên cứu bảo tồn nguồn gen dẻ Trùng Khánh - Cao Bằng kỹ thuật nuôi cấy