Nghiên cứu hoá học và nhận dạng một số nhóm chất có trong cây đỏ ngọn (cratoxylum prunifolium kurtz)

Header Page of 16 I HC THI NGUYấN TRNG I HC S PHM - BI VN BèNH NGHIấN CU HO HC V NHN DNG MT S NHểM CHT Cể TRONG CY NGN (CRATOXYLUM PRUNIFOLIUM KURTZ) LUN V N TH C S HO HC THI NGUYấN - 2008 Footer Page of 16 Header Page of 16 I HC THI NGUYấN TRNG I HC S PHM - BI VN BèNH NGHIấN CU HO HC V NHN DNG MT S NHểM CHT Cể TRONG CY NGN (CRATOXYLUM PRUNIFOLIUM KURTZ) Chuyờn ngnh: Hoỏ hu c Mó s: 60.44.27 LUN V N TH C S HO HC Ngi hng dn khoa hc: PGS.TS PHM VN THNH THI NGUYấN - 2008 Footer Page of 16 Header Page of 16 DANH MC CC CH VIT TT DNG TRONG LUN VN SKLM : Sc kớ lp mng UV : Ultraviolet spectrocopy MS : Mass Spectroscopy EI-MS : Electron Impact Mass Spectroscopy LC-MS : Liqud chromatography - Mass Spectroscopy FT-IR : Fourier Transform Infrared Spectroscopy NMR : Nuclear Magnetic Resonance H-NMR : 13 C-NMR : H-Nuclear Magnetic Resonance 13 C- Nuclear Magnetic Resonance DEPT : Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer COSY : Correlated Spectroscopy HSQC : Heteronuclear Spectroscopy- Quantum Coherence HMBC : Heteronuclear multiple - Bond Correlation HIV : Human Immunodeficiency Virus U : Unit Footer Page 3Sofhúa 16.bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 16 M U Vit Nam nm vựng nhit i, giú mựa, ma thun giú ho nờn h thc vt rt phong phỳ, a dng ú l ngun ti nguyờn sinh hc quý giỏ thuc loi cú th tỏi to c Ngay t xa xa cha ụng ta ó bit khai thỏc ngun ti nguyờn quý bỏu ny lm n, thc phm, thuc cha bnh, vt liu xõy dng v nhiờn liu phc v cuc sng Trong th gii thc vt y cú nhng loi cung cp thc n cho chỳng ta, cú nhng loi cung cp vt liu, cú loi cung cp hng thm, qu ngt, cú nhiu loi c dựng lm thuc cha bnh, thuc tr sõu, cung cp nguyờn liu cho cỏc ngnh cụng nghip thc phm, m phm v dc phm Vit nam cú mt v trớ thun li v thiờn nhiờn nh vy nờn nn Y hc dõn tc c truyn phỏt trin t lõu i, chim v trớ c bit vic bo v sc kho nhõn dõn sut hng ngn nm u tranh dng nc v gi nc Tip thu truyn thng quý bỏu ca cỏc th h cha ụng, ngy ng v Nh nc ta ó xõy dng nhiu chớnh sỏch, nhiu hỡnh thc ng viờn nhm k tha v phỏt huy tt ngun ti nguyờn quý bỏu cú th tỏi to c phc v ngi cú hiu qu nht Nhiu cõy c ó c trng dựng lm thuc, nhiu loi dựng lm nguyờn liu cung cp tinh du cho cụng nghip dc phm v m phm nh bc h, hao hoa vng, hoa hi, cú loi c dựng lm thc phm chc nng ung nh cỏc loi tr, cỏc loi sõm v.v Trong s ú cú cõy ngn (Cratoxylum prunifolium) thuc loi cõy mc hoang di v ph bin khp cỏc vựng trờn lónh th nc ta c bit cõy ngn cú nhiu cỏc tnh nỳi phớa Bc, Tõy Nguyờn v Nam B S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 16 Cõy ngn ó v ang c dựng lm thuc v lm nc ung phm vi dõn gian mt cỏch khỏ ph bin cỏc nc chõu , Vit Nam c bit vựng ng bo dõn tc nỳi phớa Bc nc ta Gn õy ngi ta phỏt hin dch chit ca lỏ cõy ngn cú tỏc dng cha bnh gan, cú tỏc dng tt vi h thn kinh v tỏc dng ca nú khụng thua kộm gỡ cỏc thuc nhp ngoi Cõy ngn c dựng dõn gian ó cú t lõu, nghiờn cu hoỏ thc vt cõy ngn thỡ mi ch c cỏc nh khoa hc chỳ ý n mt s nm gn õy, gúp phn lm rừ thờm thnh phn hoỏ thc vt ca cõy ngn to thun li cho vic dựng, s dng cõy thuc ny lm dc liu v nguyờn liu cho cỏc mc ớch khỏc, chỳng tụi chn ti: Nghiờn cu húa hc v nhn dng mt s nhúm cht cú cõy ngn (Cratoxylum prunifolium) i tng nghiờn cu l cõy ngn mc hoang, thu hỏi vo thỏng 11 nm 2007 ti xó Thnh c thnh ph Thỏi Nguyờn S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 16 Chng TNG QUAN 1.1 Mụ t thc vt Theo ti liu v phõn loi thc vt, cõy ngn cũn gi l cõy thnh ngnh, lnh ngnh tu thuc vo tng a phng tờn khoa hc l Cratoxylum prunifolium Kurtz thuc h Ban Hypericaceae [1, 2, 5, 8, 11] Cõy ngn phõn b rng rói vựng Nhit i, Cn Nhit i, ễn i, ch yu vựng ụn i bỏn cu Bc Chi Cratoxylum Vit Nam cú loi: Cratoxylum maingayi Kurz cú tờn l lnh ngnh nh, phõn b Bc Trung B v Lõm ng; Cratoxylum prunifolium Kurz lnh ngnh lỏ hp phõn b vựng ụng Nam B trờn lónh th VIt Nam; Cratoxylum prunifolium Kurtz cõy ngn, cũn gi l thnh ngnh p mc ph bin vựng ụng Bc nc ta; Cratoxylum polyanthum Korth hay Cratoxylum ligustrinum Blume lnh ngnh; Cratoxylum cochinchinense Blumer cũn gi l lnh ngnh Nam B Hai loi cui ch yu mc Nam B song cng khỏ ph bin cỏc tnh ụng Bc B Cõy ngn - Cratoxylum prunifolium Kurtz thng thy mc t nhiờn hu ht cỏc tnh nỳi v trung du phớa Bc Vit Nam cú nhiu Xuõn Mai - Ba Vỡ, H Tõy, Sapa, Phỳ Th, Thỏi Nguyờn, Bc Cn, Lng Sn, Vnh Phỳ Cõy ngn cng phõn b ph bin cỏc nc Chõu nh: Trung Quc, Malaysia, Philippin, n , Indonexia, Myanma, Thỏi Lan c im sinh trng v phỏt trin ca cõy ngn: Cõy ngn l loi cõy nh, thõn g, cú gai gc (trong rng lõu nm cõy cú th cao v to) cnh non cú lụng t, mu nờn gi l ngn [11] Lỏ hỡnh mỏc di 12 - 13 cm, rng 3,5 - cm, mc i xng, cung ngn - mm Mt gõn chớnh mu n 1/3 lỏ non, gõn lỏ v lỏ cú mu n quỏ S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 16 na Hoa mc trờn nhng cnh k lỏ mu trng hoc hng cú lụng mu tớa Qu nang di 15mm, rng - 8mm Ht hỡnh trng di 6mm, rng 3mm Hỡnh 1.1 nh cõy ngn (Cratoxylum Prunifolium Kurt, Hypericaceae) 1.2 Mt s cụng dng ca chi Cratoxylum Hu ht cỏc loi thc vt thuc chi Cratoxylum u c nhõn dõn s dng lm cỏc bi thuc dõn gian cha bnh, chm súc v bi dng sc kho Cõy ngn Cratoxylum prunifolium mi thy dựng phm vi nhõn dõn, lm thuc kớch thớch tiờu hoỏ, n ngon hng ngy hoc sau au yu, sau sinh Kinh nghim cho thy ngy ung chng 15 - 30 g lỏ khụ di hỡnh thc sc hoc pha nh tr Cú phi hp vi lỏ vi nu nc ung cho tiờu cm ó em li hiu qu cao cho sc kho ngi [11] Nhõn dõn ta cỏc vựng ó thu hỏi lỏ cõy ngn vo dp tt oan Ng phi khụ nu nc ung mi cm thy c th mt mi S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 16 Trong nhng nm gn õy mt s tỏc gi ó nghiờn cu tỏc dng cha bnh ca dch chit ton phn lỏ v thõn cõy ngn Nhúm nghiờn cu ca Hc vin Quõn Y - H Ni cho bit cõy ngn ớt c, dnh chit ton phn ca lỏ v thõn cõy ngn cú tỏc dng chng ụxi hoỏ tt, hot tớnh t 69% tanakan ch t 48% [9] v cú tỏc dng hot huyt, lm lu thụng mỏu, gim ụng nhng trng hp tng ụng [12] B mụn Dc hc quõn s - Hc Vin Quõn Y trờn c s nghiờn cu lõm sng dnh chit ca lỏ ngn Cratoxylum prunifolium trờn chut nht trng v th cú so sỏnh vi thuc tanakan hóng Beaufour Ipsen ca Phỏp sn xut ó a kt lun: Dch chit ton phn lỏ ngn v dch chit etylaxetat lỏ ngn u cú nh hng lờn hot ng ca h thn kinh cỏc mc khỏc nhau: - Dch chit etylaxetat v dch chit ton phn lỏ ngn, Tanakan u cú tỏc dng hot hoỏ h thn kinh thc vt, th hin s tng rừ hm lng Catecholamin mỏu ng vt thớ nghim sau ung cỏc thuc ny - Dch chit etylaxetat lỏ ngn cú tỏc dng tng ng Tanakan gõy hot hoỏ ng b cỏc t bo nóo th thc nghim, th hin lm gim thnh phn súng chm delta, tng thnh phn súng alpha trờn in nóo , cũn dch chit ton phn lỏ ngn khụng th hin rừ tỏc dng hot hoỏ h thn kinh trung ng - Dch chit etylaxetat lỏ ngn cú tỏc dng lm tt c hai quỏ trỡnh hng phn v c ch cú iu kin nóo b ng vt thớ nghim (thụng qua hot ng phn x cú iu kin), tng ng vi Tanakan v tt hn tỏc dng ny ca dch chit ton phn lỏ ngn - Mc nh hng lm tng cng chc nng h thn kinh trung ng ca cỏc cht theo th t gim dn: dch chit etylaxetat lỏ ngn, Tanakan, dch chit ton phn lỏ ngn [4] S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 16 i vi cao nc (cn tng) 30 - 80 mg/kg cú hot tớnh khỏng khun vi cỏc vi khun staphylococcus auresu, Escherichia coli, Salmonella typhi Dịch chiết tổng số từ Cratoxylum cochinchinense Thái Lan c ng-ời ta thử nghiệm cho thấy chúng có tác dụng chống nhim khun, chng ụxi hoỏ, nhng hot ng ca t bo [22, 23, 24] Singapo dch chit cõy Cratoxylum cochinchinense c s dng nhõn dõn cú tỏc dng chng cỏc gc t cha cỏc bnh liờn quan n s cng thng, mt mi [25] Ti Nht Bn, t r cõy ca mt s loi thuc chi Cratoxylum ngi ta bo ch thnh thuc lm tng trớ nh, chng lóo hoỏ, mt ng ngi gi Trung Quc, lỏ ca cõy ngn ngi ta ch bin thnh tr pha nc ung hng ngy v s dng mt cỏch rng rói T phn dch chit etylaxetat ca lỏ cõy ngn ó tỏch c cỏc xanthone cú tỏc dng khỏng u trựng ca mui gõy st da vng hn c cht rotenon, khụng nhng th cỏc cht ny cũn cú nhiu trin vng lm thuc chng mi [28] Phn dch chit etylaxetat ca Cratoxylum cochinchinense cú tỏc dng kỡm hm peroxit hoỏ lipit mng t bo gan, kỡm hóm s xut hin lipit ỏc tớnh gõy viờm gan v cú tỏc dng bo v gan tt [27] Theo cỏc lng y, cõy ngn cú v ngt, tớnh mỏt b phn dựng lỏ non, v cõy, v r Ngi b au bng n khụng tiờu, ung nc nu ca lỏ lnh ngnh giỳp tiờu hoỏ tt thng dựng 100g lỏ non nu mt lớt nc, thay nc ung hng ngy Khi b cm nng, st thỡ dựng lỏ non 50g nu vi lớt nc ung Trong dõn gian Vit Nam, cõy ngn mi thy dựng phm vi nhõn dõn lm thuc kớch thớch tiờu húa, phc hi sc kho m au, sinh , bo v thnh mch, chng lóo hoỏ, tng trớ nh ngi cao tui Ngi ta thu hỏi lỏ ngn vo dp Tt mng thỏng (Tt oan Ng) lm thc vt nu nc S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 10 of 16 ung hoc cú th sau ú em phi khụ mi dựng Gn õy cú mt vi tỏc gi Vit Nam ó nghiờn cu v cho thy lỏ ngn cú tỏc dng cha bnh, cú tỏc dng chng gc t do, bo v thnh mch, bo v t bo gan chng mự lo, chng ụxi hoỏ v dch invitro khỏ rừ [7] Ti c s sn xut kinh doanh thuc thnh phm, thc phm chc nng Y hc c truyn Thỏi Nguyờn, Bỏc s Hong Sm ó s dng dch chit ca lỏ ngn lm thc phm chc nng, thay chố lm nc ung, cha cỏc bnh nan y nh: nga, gh l, ronan thn kinh, mt ng, ming ng n khụng ngon, gim trớ nh 1.3 Tỡnh hỡnh nghiờn cu húa hc thc vt chi Cratoxylum 1.3.1 Cỏc hp cht cú khung triterpen Theo ti liu [19] t dch chit n-hexan ca thc vt Cratoxylum cochinchinense ó tỏch c ngoi cỏc triterpen cú vũng ngng t nhúm lupeol v -mangostin cũn phõn lp c cỏc triterpen cú hai vũng ngng t Sau tỏch bng cỏc phng phỏp sc kớ v da vo kt qu phõn tớch cỏc ph ca cỏc cht c tỏch ngi ta ngh cụng thc cu to ca hp cht triterpen hai vũng l: R I.a: (13E,17E)-polypoda-8 (26),13,17,21-tetraen-3-ol; (R= -OH) I.b: -polypodatetraene; (R= H) S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 10 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 97 of 16 94 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 97 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 98 of 16 95 Ph 13C NMR ca - Sitosterol S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 98 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 99 of 16 96 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 99 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 100 of 16 97 Ph DEPT ca - Sitosterol S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 100 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 101 of 16 98 Ph IR ca axit gallic S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 101 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 102 of 16 99 Ph UV ca axit gallic S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 102 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 103 of 16 100 Ph 1H NMR ca axit gallic S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 103 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 104 of 16 101 Ph 13C NMR ca axit gallic S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 104 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 105 of 16 102 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 105 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 106 of 16 103 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 106 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 107 of 16 104 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 107 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 108 of 16 105 MC LC M U Chng TNG QUAN 1.1 Mụ t thc vt 1.2 Mt s cụng dng ca chi Cratoxylum 1.3 Tỡnh hỡnh nghiờn cu húa hc thc vt chi Cratoxylum 1.3.1 Cỏc hp cht cú khung triterpen 1.3.2 Cỏc cht axit hu c 1.3.3 Cỏc cht cú khung xanthone 1.3.4 Mt s i din ca khung anthraquinon 15 1.3.5 Mt s i din ca khung flavonoit 16 1.4 Nhng nghiờn cu hoỏ thc vt loi Cratoxylum prunifolium 17 Chng PHN THC NGHIM 19 2.1 i tng v phng phỏp nghiờn cu 19 2.1.1 Thu mu cõy, xỏc nh tờn khoa hc v phng phỏp x lý mu 19 2.1.2 Phng phỏp phõn lp cỏc hp cht t cỏc dch chit 19 2.1.3 Phng phỏp kho sỏt v xỏc nh cu trỳc hoỏ hc cỏc hp cht 20 2.2 Dng c, hoỏ cht v thit b nghiờn cu 20 2.2.1 Dng c v hoỏ cht 20 2.2.2 Thit b nghiờn cu 21 2.3 Cỏc dch chit t cõy ngn (Cratoxylum prunifolium Kurtz) 21 2.3.1 Cỏc dch chit 21 2.3.2 Kho sỏt nh tớnh cỏc dch chit 23 2.3.3 Th hot tớnh sinh hc 23 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 108 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 109 of 16 106 2.4 Chit sut, phõn lp v tinh ch cỏc cht t cõy ngn 25 2.4.1 Dch chit clorofom 26 2.4.1.1 Taraxeron (Friendoolean - 14- en-3-on) (C1) 26 2.4.1.2 Stigmast- 5,22- ien-24R-3-ol 27 2.4.1.3 - Sitosterol 27 2.4.2 Dch chit etylaxetat (E) 28 Chng THO LUN KT QU NGHIấN CU 29 3.1 Nguyờn tc chung 29 3.2 Phõn tớch nh tớnh v phỏt hin cỏc nhúm cht 30 3.3 Phõn lp v nhn dng cỏc hp cht cú cỏc dch chit khỏc ca cõy ngn 30 3.3.1 Taraxeron ( hay Frendoolean-14-en-3-on) (C-1) 30 3.3.2 Stingmast -5,22-dien-24R-3-ol (C-2) 38 3.3.3 -sitosterol (C-3) 44 3.3.4 Axit gallic (E-1) 50 3.4 Th hot tớnh sinh hc 56 KT LUN 57 KIN NGH 57 TI LIU THAM KHO 58 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 109 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 110 of 16 107 DAN H MC C C B N G Bng 2.1 Khi lng cht tng s c chit tng phõn on lỏ cõy ngn (Cratoxylum prunifolium Kurtz) 22 Bng 2.2 Phỏt hin cỏc nhúm cht cõy ngn 23 Bng 2.3 Kt qu th hot tớnh sinh hc ca dch chit thụ t lỏ cõy ngn (Cratoxylum prunifolium) 25 Bng 3.1 Ph 13C-NMR v 1H-NMR ca taraxeron (C-1) t lỏ ngn 33 Bng 3.2 Ph 13C-NMR ca cỏc cht C-2 v stingmasterol [16] 39 Bng 3.3 Ph 13C-NMR ca cỏc cht C-3 v -sitosterol [16] 45 Bng 3.4 S liu ph NMR ca E-1 v s liu ph NMR phn mm ACD/NMR ca axit gallic 50 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 110 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 111 of 16 108 DAN H MC C C H èN H Hỡnh 1.1 nh cõy ngn (Cratoxylum Prunifolium Kurt, Hypericaceae) Hỡnh 2.1 nh c gõy c ch xung quanh ging thch 24 Hỡnh 3.1 34 Hỡnh 3.2 35 Hỡnh 3.3 36 Hỡnh 3.4 37 Hỡnh 3.5 40 Hỡnh 3.6 41 Hỡnh 3.7 42 Hỡnh 3.8 43 Hỡnh 3.9 46 Hỡnh 3.10 47 Hỡnh 3.11 48 Hỡnh 3.12 49 Hỡnh 3.13 52 Hỡnh 3.14 53 Hỡnh 3.15 Ph 1H-NMR ca cht axit gallic 54 Hỡnh 3.16 Ph 13C-NMR ca cht axit gallic 55 DAN H MC C C S S 2.1 Quy trỡnh ngõm chit 22 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 111 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn ... PHM - BI VN BèNH NGHIấN CU HO HC V NHN DNG MT S NHểM CHT Cể TRONG CY NGN (CRATOXYLUM PRUNIFOLIUM KURTZ) Chuyờn ngnh: Hoỏ hu c Mó s: 60.44.27 LUN V N TH C S HO HC Ngi hng dn khoa... hoa hi, cú loi c dựng lm thc phm chc nng ung nh cỏc loi tr, cỏc loi sõm v.v Trong s ú cú cõy ngn (Cratoxylum prunifolium) thuc loi cõy mc hoang di v ph bin khp cỏc vựng trờn lónh th nc ta... trờn mỏy Bruker 500MHz ni chun TMS, dung mụi CDCl3, MeOD 2.3 Cỏc dch chit t cõy ngn (Cratoxylum prunifolium Kurtz) 2.3.1 Cỏc dch chit Lỏ cõy ngn ó sy khụ, nghin nh c ngõm chit kit bng etanol