Luận văn Nghiên cứu công nghệ khử nghiễm aflatoxin trên ngô, lạc ở mức độ cao bằng 1 số chủng vi khuẩn và vi nấm

PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1.Đặt vấn đề Ngô, lạc hai loại nông sản ngành nông nghiệp nước ta Chúng không nguồn lương thực quan trọng cho đời sống ngưòi mà nguồn thức ăn quan trọng chăn nuôi gia súc gia cầm Không lạc đựơc xuất với số lượng lớn nước Vì việc nghiên cứu để bảo quản, nâng cao chất lượng nông sản thu hút tổ chức quốc tế quan khoa học lương thực thực phẩm giới Điều kiện khí hậu nhiệt đới nóng ẩm nước ta thuận lợi cho nấm mốc phát triển Các nông sản dạng hạt ngô, lạc nguồn chất lý tưởng cho phát triển nấm mốc Nấm mốc phát triển làm giảm giá trị dinh dưỡng hạt mà sinh độc tố khác gọi chung mycotoxin Trong độc tố nguy hiểm phải kể đến aflatoxin aflatoxin độc tố nấm Aspergillus flavus, Aspergillus parasiticus, Aspergillus nominus Ngô, lạc hai sản phẩm thường nhiễm aflatoxin mức độ cao Trên giới việc nghiên cứu để tìm biện pháp làm giảm lượng độc tố aflatoxin lương thực nói chung ngô, lạc nói riêng nhà khoa học quan tâm Ở nước ta từ năm 1970 Nguyễn Phùng Tiến cộng [8] nghiên cứu mức nhiễm nấm mốc thóc kho bảo quản lương thực miền Bắc Việt Nam số lương thực đậu, đỗ, lạc…Đặng Hồng Miên [2] nghiên cứu nhiễm nấm mốc aflatoxin lạc Nguyễn Thùy Châu cộng - 1997 [11] nghiên cứu tình hình nhiễm độc tố nấm mốc: aflatoxin, fumonixin, ochratoxin Alternaria, deoxynivalenol nivalenol… ngô, gạo, biện pháp phòng trừ Khoa Công nghệ Sinh học Một số công trình Đậu Ngọc Hào nhiễm nấm mốc aflatoxin thức ăn gia súc biện pháp khử độc tố aflatoxin B NH4OH nghiên cứu công bố [3] Nguyễn Thùy Châu cộng nghiên cứu khử aflatoxin ngô NH3 Ca(OH)2, kết cho thấy NH3 Ca(OH)2 có tác dụng khử rõ rệt aflatoxin ngô cho hiệu khử 90% Tuy nhiên việc khử nhiễm aflatoxin hóa chất NH có giá thành cao để lại mùi khó chịu cho nông sản bị xử lý Để khắc phục nhược điểm nhà khoa học tập trung nghiên cứu khử nhiễm aflatoxin biện pháp sinh học Góp phần vào việc nghiên cứu công nghệ khử nhiễm aflatoxin ngô lạc tiến hành nghiên cứu đề tài: “ Nghiên cứu công nghệ khử nghiễm aflatoxin ngô, lạc mức độ cao số chủng vi khuẩn vi nấm” 1.2 Mục tiêu nội dung nghiên cứu 1.2.1 Mục tiêu nghiên cứu - Tìm công nghệ khử nhiễm aflatoxin ngô, lạc số chủng vi khuẩn vi nấm 1.2.2 Nội dung nghiên cứu - Nghiên cứu khả khử nhiễm aflatoxin số chủng Rhizopusdelemar - Nghiên cứu khả khử nhiễm aflatoxin số chủng Flavobacterium aurantiacum - Nghiên cứu số yếu tố nhiệt độ, độ ẩm thời gian xử lý cho việc khử nhiễm aflatoxin ngô, lạc chủng Rhizopusdelemar có hoạt tính khử nhiễm cao Khoa Công nghệ Sinh học PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1.Đại cương độc tố nấm mốc Độc tố nấm mốc (hay gọi mycotoxin) nhóm hợp chất có cấu trúc đa dạng, có khối lượng nhỏ, tạo trao đổi chất thứ cấp nấm mốc gây ngộ độc với động vật có vú, cá gia cầm [15] Sự sinh trưởng phát triển phụ thuộc nhiều vào điều kiện sinh thái (Moreau 1975) [6] Những điều kiện vùng sinh thái, khí hậu (nhiệt độ, độ ẩm), lượng nước có chất…Sự sản sinh độc tố nấm mốc kết tác động qua lại kiểu gen (genotype) điều kiện phát triển chúng Độc tố nấm sản phẩm thứ cấp tiết trình chuyển hóa số loài nấm mốc Quá trình trao đổi chất nấm gồm giai đoạn: trao đổi chất sơ cấp trao đổi chất thứ cấp Trao đổi chất sơ cấp hiểu phản ứng tạo thành chất cần thiết đảm bảo sống phát triển tế bào Trao đổi chất thứ cấp trình tạo thành chất mà vai trò sinh lý chúng chưa thật cần thiết cho tồn tế bào Quá trình trao đổi chất sơ cấp tế bào nhìn chung giống hệ thống sống, trình trao đổi chất thứ cấp phụ thuộc chặt chẽ vào đặc tính loài chủng nấm mốc.Thông thường trình xảy vào cuối giai đoạn phát triển tế bào nấm mốc Bệnh độc tố nấm mốc bắt đầu nghiên cứu sâu từ mà giới bị thức tỉnh việc phát bệnh X gà tây nước Anh vào năm 1960 Bệnh X làm chết hàng vạn gà tây ăn lạc bị nhiễm loài nấm mốc phổ biến A flavus Hầu tất sản phẩm thực vật chất cho phát triển nấm mốc tạo mycotoxin tiếp theo, có Khả nhiễm trực tiếp vào thực phẩm người Khi gia súc ăn thức ăn có Khoa Công nghệ Sinh học mycotoxin chúng không chịu tác dụng độc trực tiếp mà nguồn mang mycotoxin vào sữa, thịt tạo nhiễm mycotoxin vào người Những độc tính mycotoxin động vật thực nghiệm chứng minh lớn Các mycotoxin thu hút quan tâm nhà khoa học nhiều lĩnh vực khác nhau.Nó chứng tỏ nhiều hội nghị quốc tế hội thảo, tạp chí báo nghiên cứu dành cho vấn đề có tính cấp thiết [22] Cho đến có 300 loại độc tố nấm phát nghiên cứu Nhưng có 20 loại mycotoxin có thực phẩm mức độ nghiêm trọng thường liên quan đến an toàn thực phẩm, chúng tạo chi nấm Claviceps, Penillium, Apergilus, Fusarium, Alternaria Các độc tố Aspergillus: Aflatoxin (B1, B2, G1, G2, M1, M2), sterimatocystin, acid cyclopianzoic Các độc tố Penillium: Patulin, ochratoxin A, citrinin, penitremA, acid cyclopianzoic toxin, diacetocyscirpenol, fumonsin, moniliformin Các độc tố nấm Fusarium: Deoxynivalenol, nivalenol, zearelenon, T-2 toxin Các độc tố Alternaria: acid tenuazoic, alternarion,methyl ether alternarion Các độc tố Claviceps: Các alkanloid Ergot [14] 2.2.Độc tố aflatoxin Trong số mycotoxin aflatoxin độc tố phát sớm nghiên cứu đầy đủ phương diện 2.2.1.Tích chất hóa lý Các aflatoxin gồm bốn hợp chất nhóm bis-furanocoumarin, sản phẩm trao đổi chất tạo nấm A flavus A parasiticus đặt tên B1, B2, G1, G2 Các aflatoxin nhiễm sản phẩm thực vật Khoa Công nghệ Sinh học Các công thức cấu tạo số aflatoxin chất trao đổi liên quan đến aflatoxin B1,G1 aflatoxin B2, G2, dẫn xuất hydro hợp chất mẹ Các aflatoxin M1, M2 chất trao đổi hydroxilat hóa B1 B2 theo thứ tự Chúng có công thức cấu tạo sau: O O O Aflatoxin B1 O O O Aflatoxin O B2 O O OCH3 O O O Aflatoxin M1O O O OH OCH3 O O OCH3 O Aflatoxin M2 O OH O O O O OCH3 O O O O O Aflatoxin G2 Aflatoxin G1 OCH3 Khoa Công O nghệOSinh học O O OCH3 Bốn hợp chất phân biệt sở màu phát quang chúng B chữ viết tắt Blue (màu xanh nước biển), chữ G viết tắt Green (màu xanh cây) Aflatoxin B1 B2 sữa bò chuyển hóa gọi aflatoxin M1 aflatoxin M2 (M chữ viết tắt Milk) Trong bốn loại aflatoxin, aflatoxin M1 tìm thấy nồng độ cao nhất, sau G B2 G tồn nồng độ thấp Các aflatoxin phát quang mạnh ánh sáng cực tím sóng dài Điều cho phép phát hợp chất nồng độ cực thấp (0.5ng hay thấp vét sắc kí mỏng) Nó cung cấp điểm mặt thực hành cho tất phương pháp hóa lý cho việc phát định lượng Aflatoxin M1 nồng độ 0.02mg/l phát sữa lỏng Các aflatoxin hòa tan dung môi phân cực nhẹ chloroform metanol đăc biệt tan nhiều dimethysunfoxit (dung môi thường sử dụng phương tiện việc áp dụng aflatoxin vào động vật thực nghiệm) Tính tan aflatoxin nước dao động từ 1020mg/l Vì chất tinh khiết nên aflatoxin bền nhiệt độ cao, làm nóng không khí Tuy nhiên tương đối không bền để không khí tia cực tím phiến sắc kí mỏng đặc biệt hòa tan dung môi có độ phân cực cao Các aflatoxin không bị phá hủy điều kiện nấu bình thường làm nóng trùng Tuy nhiên, lạc rang giảm đặc biệt lượng aflatoxin bị phá hủy hoàn toàn amoniac hay hypochlorit Sự có mặt vòng lacton phân tử aflatoxin làm chúng nhạy cảm với việc thủy phân môi trường kiềm, đặc tính quan trọng trình chế biến thực phẩm, trình xử lý kiềm làm giảm nhiễm aflatoxin sản phẩm, có mặt pH, protein sản phẩm Khoa Công nghệ Sinh học thời gian xử lý thay đổi kết Tuy nhiên xử lý kiềm nhẹ việc axit hóa làm phản ứng ngược trở lại để tạo aflatoxin ban đầu Moreau cộng [6] nghiên cứu tích chất aflatoxin đưa kết sau: Bảng 2.1.Tích chất hóa lý số Aflatoxin Nhiệt độ nóng chảy Công thức phân tử Trọng lượng phân tử B1 C17H12O6 312 268-269 265-270 252-266 Xanh lam B2 C17H14O6 314 286-289 305-309 280-283 Xanh lam G1 C17H12O7 328 244-246 247-250 246-247 Xanh lục G2 C17H14O7 330 229-231 237-240 Xanh lục M1 C17H12O7 328 299 Xanh lam tím M2 C17H14O7 320 293 Tím Aflatoxin * ** *** Huỳnh quang Ghi chú: *: kết Townsend * *: kết Stubblefield * * *: kết Beljaas 2.2.2 Sự tạo aflatoxin nấm mốc Khả tạo aflatoxin thường thấy hai chủng A flavus A Parasiticus Khoa Công nghệ Sinh học Các chủng Aspergillus tạo aflatoxin phổ biến thường phân lập từ nguyên liệu khác Bảng (2.2) cho thấy chủng A flavus phân lập có khả tạo aflatoxin với tỷ lệ cao (từ 20-98%) Bảng 2.2 Các chủng tạo aflatoxin A flavus phân lập từ bốn loại hạt cốc Nguồn Số chủng phân lập Phần trăm chủng phân lập tạo aflatoxin (%) Lạc 100 98 3300 Hạt 59 81 3200 Gạo 127 20 1100 Lúa 63 24 3300 Sản lượng tạo aflatoxin (µ/kg) (Số liệu Schroder Boller 1976) Sản lượng aflatoxin thường tỷ lệ với trọng lượng hệ sợi nấm tạo thành nuôi cấy: số lượng hệ sợi nấm đạt giá trị tối ưu sản lượng aflatoxin lớn Độc tố giảm sút nhanh chóng hệ sợi nấm phân giải Sự sản sinh aflatoxin điều kiện nuôi cấy thông thường lúc hình thành quan mang bào tử đính A flavus, tăng dần giai đoạn sinh bào tử mạnh mẽ [6] 2.2.3 Điều kiện sinh độc tố Các nhiệt độ cực tiểu, tối thích cực đại cho tạo aflatoxin 12 oC, 27oC 40-42oC theo thứ tự Northolt nhiên cứu tác dụng hoạt tính nước nhiệt độ lên phát triển tạo aflatoxin A parasiticus đến kết luận rằng: aflatoxin tạo hoạt độ nhỏ 0.83 nhiệt độ Khoa Công nghệ Sinh học 10oC không phát [22] Tóm lại, khả sinh độc tố phụ thuộc vào nhiều yếu tố, chủng nấm mốc, nhiệt độ yếu tố môi trường Lượng aflatoxin sản sinh thay đổi phụ thuộc vào yếu tố Một số chủng sinh aflatoxin bị khả sau nhiều lần cấy truyền liên tiếp môi trường tổng hợp làm tăng tính độc chúng cấy truyền môi trường thích hợp Khi hệ sợi nấm phát nhiều khả sinh độc tố mạnh ngược lại Môi trường có bổ sung nấm men pepton acid amin với điều kiện pH, nhiệt độ thích hợp (pH=5-5.4, nhiệt độ 26-28oC) điều kiện tốt cho tạo thành độc tố aflatoxin Hàm ẩm chất yếu tố ảnh hưởng đến phát triển nấm mốc tạo mycotoxin cho thấy hàm ẩm 18.3% sở trọng lượng ẩm giới hạn phát triển A flavus ngô bóc vỏ Các nghiên cứu sâu điều kiện khống chế xác cho thấy hàm ẩm cân với độ ẩm tương đối 85% giới hạn phát triển A flavus tinh bột Ngoài vitamin nhóm B kích thích tạo thành aflatoxin Người ta xác định A flavus phát triển hạt lúa mì hàm lượng aflatoxin tạo giai đoạn phôi mầm nhiều hẳn giai đoạn phôi nhũ Việc thêm nước chiết từ lúa mì, lipit hay acid béo kích thích tốt tạo thành aflatoxin Điều khiến người ta nghĩ chất có vai trò quan trọng việc sinh tổng hợp aflatoxin phân hủy chúng tạo thành chất tiền sản phẩm tham gia vào vòng chuyển hóa sinh tổng hợp aflatoxin Khoa Công nghệ Sinh học 2.2.4 Sự nhiễm aflatoxin lương thực thực phẩm Các hạt lạc bị nhiễm A flavus trước thu hoạch bị nhiễm nhanh sau lạc nhổ lên làm khô sơ trước củ lạc lấy khỏi cây.Thời gian sau thu hoạch thời gian nhiễm độc cao tạo thành aflatoxin Các côn trùng gây thương tổn cho hạt yếu tố nhiễm A flavus 2.2.4.1.Tình hình nghiên cứu giới Sự gây thương tổn côn trùng ngô đồng kèm nhiễm A flavus tạo aflatoxin trước thu hoạch Theo ước tính tổ chức Nông lương quốc tế (FAO) có khoảng 25% nông sản giới chịu ảnh hưởng nghiêm trọng mycotoxin, chủ yếu aflatoxin Aflatoxin làm thiệt hại cho ngành trồng trọt chăn nuôi lớn [22] Mặc dù aflatoxin tìm thấy nhiều loại lương thực, thực phẩm khác hầu hết nhiễm tập trung lạc, hạt có dầu khác bông, ngô, sản phẩm chế biến từ chúng Hạt dẻ Braxin thường nhiễm Bên cạnh đó, lúa mạch Ấn Độ bị nhiễm aflatoxin Những nghiên cứu Ablas K cộng (2004) cho thấy nhiễm aflatoxin ngô nấm A flavus gây nên vấn đề nghiêm trọng vùng trồng ngô đồng Missisipi Mỹ Trong năm nghiên cứu từ 2000 đến 2002, tác giả nghiên cứu mức nhiễm A flavus đất xác định mức nhiễm A flavus đất trồng ngô bị ảnh hưởng vụ canh tác trước Mật độ A flavus cao 794 CFU/g, đất trồng ngô vụ 2001 so với 251 CFU/g đất trồng gối vụ năm 2000 457 CFU/g đất trồng lúa mì gối vụ năm 2002 Sự nhiễm A flavus ngô hạt năm 2000 dao động từ 0% đến 100% (trung bình 15% hạt ngô bị nhiễm), hàm lượng aflatoxin ngô dao động từ đến 1590 ppb (trung bình 57ppb) Khoa Công nghệ Sinh học 10 Các chủng lại có hoạt tính cho khử aflatoxin thấp đạt từ 58% đến 79% Đây kết quan trọng việc ứng dụng chủng F.aurantiacum để khử nhiễm aflatoxin mức độ cao lạc quy mô lớn 4.3.2 Nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến hiệu khử nhiễm aflatoxin lạc mức độ cao chủng Flavobacterium aurantiacum VS1 4.3.2.1 Ảnh hưởng yếu tố thời gian xử lý đến hiệu khử aflatoxin lạc chủng F.aurantiacum VS1 Khoa Công nghệ Sinh học 49 Bảng 13: Ảnh hưởng thời gian xử lý đến hiệu khử aflatoxin lạc chủng F aurantiacum VS1 Hàm lượng Hàm lượng Hiệu khử aflatoxin aflatoxin aflatoxin mẫu lạc trước mẫu lạc sau Thời gian xử lạc xử lý xử lý lý (ngày) chủng chủng chủng F.aurantiacum F.aurantiacum F.aurantiacum VS1 (%) VS1(ppp) VS1(ppb) Ngày thứ 200 200 Ngày thứ hai 200 194 3 Ngày thứ ba 184 Ngày thứ tư 200 200 174 13 Ngày thứ năm Ngày thứ sáu Ngày thứ bảy Ngày thứ tám Ngày thứ chín 200 200 200 200 200 168 80 56 40 26 16 60 72 80 87 STT Kết bảng 13 cho thấy hiệu giảm aflatoxin lạc chủng F.aurantiacumVS1 tăng dần theo thời gian Từ ngày thứ đến ngày thứ năm hàm lượng aflatoxin lạc trước xử lý 200ppb sau xử lý chủng F.aurantiacumVS1 giảm xuống 168ppb, hiệu khử aflatoxin không đáng kể (từ – 16%) Đến ngày thứ 6, hàm lượng aflatoxin lạc trước xử lý 200ppb sau xử lý chủng F.aurantiacumVS1 giảm xuống 80ppb, hiệu khử aflatoxin đạt 60% Đặc biệt sau chín ngày xử lý, hiệu giảm aflatoxin chủng F.aurantiacumVS1 đạt cao nhất, hàm lượng aflatoxin lạc trước xử lý 200ppb sau xử lý chủng F.aurantiacumVS1 giảm xuống Khoa Công nghệ Sinh học 50 26ppb , hiệu đạt 87% Kết cho thấy thời gian xử lý có ảnh hưởng lớn đến hiệu khử aflatoxin lạc chủng F.aurantiacumVS1 Động thái khử aflatoxin lạc chủng F.aurantiacumVS1 Khoa Công nghệ Sinh học 51 4.3.2.2 Ảnh hưởng yếu tố nhiệt độ Bảng 14: Ảnh hưởng yếu tố nhiệt độ đến hiệu giảm aflatoxin lạc chủng F.aurantiacumVS1 STT Nhiệt độ (oC) 22 24 26 28 30 Hàm lượng Hàm lượng aflatoxin aflatoxin Hiệu khử mẫu lạc trước mẫu lạc sau aflatoxin xử lý xử lý lạcbằng chủng chủng chủng F.aurantiacum F.aurantiacum F.aurantiacum VS1 (%) VS1(ppb) VS1 (ppb) 200 160 20 200 44 78 200 34 83 200 60 70 200 130 35 Kết bảng 14 cho thấy, với nhiệt độ 26 oC hàm lượng aflatoxin mẫu lạc trước xử lý 200ppb sau xử lý chủng F.aurantiacum VS1 giảm xuống 34ppb, hiệu khử aflatoxin lạc đạt 83% Với nhiệt độ 220C hàm lượng aflatoxin lạc trước xử lý 200 ppb sau xử lý chủng F.aurantiacumVS1 giảm xuống 160ppb, hiệu khử aflatoxin lạc đạt 20% Với nhiệt độ 24 oC, hàm lượng aflatoxin mẫu lạc trước xử lý 200ppb sau xử lý chủng F.aurantiacumVS1 giảm xuống 44ppb, hiệu khử aflatoxin lạc đạt 78% Như vậy, nhiệt độ 20oC, 25oC, 28oC, 30oC 35oC, thấy 24oC 26oC hiệu giảm aflatoxin lạc chủng F.aurantiacumVS1 cao Đặc biệt nhiệt độ 260C hiệu khử aflatoxin lạc chủng F.aurantiacumVS1 cao nhất, đạt 83% Còn nhiệt độ cao 280C thấp 240C không thuận lợi cho hiệu Khoa Công nghệ Sinh học 52 khử aflatoxin chủng F.aurantiacumVS1 Như vậy, yếu tố nhiệt độ có ảnh hưởng đến hiệu giảm aflatoxin lạc chủng F.aurantiacumVS1 Từ kết cho thấy hiệu khử aflatoxin chủng F.aurantiacum VS1 ngô cao lạc Ảnh hưởng yếu tố thời gian, nhiệt độ xử đến hiệu khử aflatoxin chủng F.aurantiacumVS1 ngô cao lạc 3%, 2% Khoa Công nghệ Sinh học 53 Mặt phải khuẩn lạc F.aurantiacum Mặt phải khuẩn lạc Rhizopusdelemar Khoa Công nghệ Sinh học Mặt trái khuẩn lạc F.aurantiacum Măt trái khuẩn lạc Rhizopusdelemarr 54 Bào tử nấm Rhizopus delemar Bọng đỉnh giá Rhizopus delemar Hình thái F.aurantiacum Khoa Công nghệ Sinh học 55 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận Từ chủng Rhizopus delemar khảo sát tuyển chọn chủng Rhizopus delemarVS2 có khả khử nhiễm aflatoxin ngô, lạc mức độ cao Hiệu khử aflatoxin ngô đạt 87%, hiệu khử aflatoxin lạc đạt 83% - Từ chủng Flavobacterium aurantiacum khảo sát tuyển chọn chủng Flavobabacterium aurantiacumVS1 có khả khử nhiễm aflatoxin ngô, lạc mức độ cao Hiệu khử aflatoxin ngô đạt 85%, hiệu khử aflatoxin lạc đạt 83% - Các yếu tố, thời gian xử lý, nhiệt độ xử lý, độ ẩm xử lý có ảnh hưởng lớn đến hiệu khử nhiễm aflatoxin ngô, lạc mức độ cao chủng Rhizopus delemar Flavobacterium aurantiacum Chúng đề nghị: khử nhiễm aflatoxin chủng R.delemarVS2 độ ẩm 30%, nhiệt độ 90% thời gian xử lý ngày thứ 9, khử nhiễm aflatoxin chủng F.aurantiacum nhiệt độ 85% thời gian xử lý ngày thứ Đề nghị - Việc tuyển chọn chủng Rhizopusdelerma F.aurantiacum có khả khử aflatoxin nhiễm ngô, lac đạt hiệu cao có ý nghĩa quan trọng Tác dụng khử afllatoxin nhiễm ngô, lạc hai chủng Rhizopusdelerma F.aurantiacum đạt hiệu Do đó, ta nên đưa hai chủng vào trình khử aflatoxin nhiễm ngô, lạc Khoa Công nghệ Sinh học 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bùi Xuân Đồng, Nguyễn Huy Văn (2000) Vi nấm dùng công nghệ sinh học NXB Khoa học kỹ thuật Đặng Hồng Miên (1982) Nấm mốc số sản phẩm công nông nghiệp Phưong pháp khử biện pháp phòng chống NXB khoa học kỹ thuật Đậu Ngọc Hào (1992) “Thức ăn nhiễm nấm mốc độc tố Aflatoxin chúng với gà công nghiệp” Tạp chí nông nghiệp công nghệ thực phẩm Số Đậu Ngọc Hào (1993) Sử dụng hợp chất Amin NaHSO làm giảm hoạt tính Aflatoxin B1 ngô hạt khô dầu lạc bị nhiễm nấm mốc Kết nghiên cứu khoa học khoa chăn nuôi thú y Đậu Ngọc Hào, Nguyễn Thị Thuận, Đào Tú Khánh (1991) Một số loài nấm mốc phát thức ăn gia cầm Công trình nghiên cứu khoa học Viện Thú Y Quốc gia 1990 – 1991 Moreau Claude (1980) Nấm mốc độc thực phẩm Đặng Miên (dịch) NXB Khoa học kỹ thuật Nguyễn Lân Dũng (1983) Một số sản phẩm vi nấm, độc tố vi nấm NXB Khoa học kỹ thuật Nguyễn Phùng Tiến (1983) Nấm mốc số sản phẩm thực phẩm Luận án tiến sỹ sinh học Viện vệ sinh dịch tễ Hà Nội Nguyễn Thùy Châu (1996) Nghiên cứu mức độ nghiễm nấm mốc sinh độc tố (mycotoxin) ngô, gạo Việt Nam biện pháp phòng trừ Luận án phó tiến sĩ khoa học Bộ giáo dục đào tạo, Trường Đại học Khoa học tự nhiên Khoa Công nghệ Sinh học 57 10.Nguyễn Thùy Châu cộng (1995) Mức độ nhiễm Aflatoxin ngô số tỉnh Việt Nam Sử dụng kỹ thuật công nghệ sinh học để bảo quản chế biến nông sản thu hoạch NXB Nông nghiệp 11.Nguyễn Thùy Châu cộng (1997) Nghiên cứu mức độ nhiễm nấm mốc Aflatoxin ngô - Biện pháp khử độc tố Kết nghiên cứu khoa học nông nghiệp 1994 – 1995 NXB Nông Nghiệp, Bộ Nông Nghiệp phát triển nông thôn 12 Tiêu chuẩn Việt Nam 5617 – 1991 Phương pháp xác định Aflatoxin ngũ cốc Tiếng Anh 13 AOAC (1990) Official methods of analysis 14 Carnaghan, R.B.A., Hartlay, R.D., and Okelly “Toxicity and fluorescence properties of the Aflatoxin” J Nature (London) 200, pp 1101 15 FAO Food and Nutrition Paper (1980) Manual of food quality control Addititives contaminant techniques Rome 16 Goto, T., Kawasugi S., Tsuzuta O., Okazaki H., Siriacha P., Buangsawon D., and Manabe M (5/1986) “ Aflatoxin contamination of maize in Thailand Aflatoxin contammition of maize harvested in the raining seasons of 1984 and 1985” Proc Jpn Assoc Mycotoxicol, 24, pp.53 17 Doronina, O and Makshimenko, K (1984) Analytical methods of detection, identification, quantitive determination of aflatoxin in foodstuff and fodder, FAO/UNEP/USSR International training course “ Training activities on food contamination control and monitoring with special reference to mycotoxin ” Moscon 18 Kawamura, O.,et al (1989) “ A sentitive enzyme linked immunosorbent assay of ochratoxin A based on monoclonal antibodies” Toxicol, 27, pp.887-897 Khoa Công nghệ Sinh học 58 19 Norio Kimura, Makototono Prevention of Aflatoxin contamination in cereals and nuts by Applying Inturin A the Australian patent office, AUA _39235/89 20 Krogh, P (1984) Microbial nature and biological properties of ochratoxin, FAO/UNEF/USSR International Training Course “Training activities on food contamination control and monitoring with special referene to Mycotoxin”, pp.1-14, Moscow 21 Liiehoj, E.B.,Fennell, D.I.,Kwoler, V.E (1996), “ A.flavus and aflatoxin in corn before harvest ”Science.193, pp.495-496 22 Nelson, P.E., Platter, R.D (1992), “FumonisinB1 production by Fusarium Special other than F.moniliforme in section Liseola and some related Species”, Appl Evinson Microbiol,120, pp.984-989 23 Widstson N.W., Wilson D.M.,Mc Millian W (1981) “Aflatoxin contamination of preharvest corn as influenced by timing and method of inoculation”, Environmental microbiology, 27, pp 249-251 24 Wogan.G.N (1973) Aflatoxin carcinogenisis New York, academic pres,pp.309-304 (1997) 25.World Health Organigation (1997) Mycotoxin, Published under the joint sponrship of United Nations Enviroment Programme and World health organigation Tài liệu từ internet 26 Vệ sinh an toàn thực phẩm (2006) Độc tố aflatoxin http:// www.nutifood.com.vn Khoa Công nghệ Sinh học 59 Lời cảm ơn Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Thuỳ Châu nguyên trưởng phòng vi sinh Viện điện Nông Nghiệp Công nghệ sau thu hoạch tận tình hướng dẫn em suốt thời gian em làm khoá luận Em xin cảm anh chị phòng vi sinh tạo điều kiện giúp đỡ cho em học tập làm việc phòng Em xin chân thành cảm ơn thầy, cô giáo Khoa Công nghệ sinh học Viện đại học Mở Hà Nội dậy dỗ năm qua Cuối em xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè động viên giúp đỡ để em hoàn thành khoá luận Em xin chân thành cảm ơn ! Hà Nội, tháng 5/2008 Sinh viên Vũ Thị Phương Anh Khoa Công nghệ Sinh học 60 Khoa Công nghệ Sinh học 61 MỤC LỤC PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1.Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nội dung nghiên cứu 1.2.1 Mục tiêu nghiên cứu 1.2.2 Nội dung nghiên cứu PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1.Đại cương độc tố nấm mốc 2.2.Độc tố aflatoxin 2.2.1.Tích chất hóa lý .4 2.2.2 Sự tạo aflatoxin nấm mốc 2.2.3 Điều kiện sinh độc tố .8 2.2.4 Sự nhiễm aflatoxin lương thực thực phẩm 10 2.2.5 Độc tính Aflatoxin 12 2.2.6 Giới hạn Aflatoxin cho phép 14 2.3 Vấn đề khử nhiễm mycotoxin 15 2.3.1 Vấn đề phòng ngừa 16 2.3.2 Các phương pháp khử độc tố hóa chất 17 2.3.3 Giảm hàm lượng aflatoxin biện pháp sinh học 18 2.3.6 Biện pháp phân tách vật lý 21 PHẦN 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 3.1.Đối tượng nghiên cứu 23 3.1.1 Vật liệu 23 3.1.2 Các hóa chất dùng cho phân tích độc tố aflatoxin B1 23 3.1.3 Dụng cụ thí nghiệm 23 3.2 Phương pháp chiết xuất aflatoxin 24 Khoa Công nghệ Sinh học 62 3.2.7 Phương pháp xác định hiệu khử nhiễm aflatoxin ngô, lạc mức độ cao chủng Rhizopus delemar 28 3.2.8 Phương pháp xác định hiệu khử nhiễm aflatoxin ngô, lạc mức độ cao chủng Flavobacterium aurantiacum 28 PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 4.1 Xác định khả khử aflatoxin nhiễm ngô chủng Rhizopus delemar 29 4.1.1.Nghiên cứu số yếu tố ảnh hưởng đến hiệu khử aflatoxin nhiễm ngô mức độ cao chủng R.delemaVS2 30 4.1.2 Ảnh hưởng nhiệt độ xử lý đến hiệu khử aflatoxin ngô chủng R delemar VS2 32 4.1.3 Ảnh hưởng độ ẩm xử lý đến hiệu khử aflatoxin ngô chủng R.delemar VS2 34 4.2 Xác định khả khử aflatoxin nhiễm lạc chủng R.delemar 35 4.2.1 Nghiên cứu số yếu tố ảnh hưởng đến hiệu khử aflatoxin nhiễm lạc chủng R.delemaVS2 .36 4.3 Xác định khả khử aflatoxin nhiễm ngô hủng Flavobacterium aurantiacum 42 4.3.1 Nghiên cứu số yếu tố ảnh hưởng đến hiệu khử aflatoxin ngô chủng F aurantiacumVS1 .43 4.3 Xác định khả khử aflatoxin nhiễm lạc chủng F.aurantiacum 47 4.3.2 Nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến hiệu khử nhiễm aflatoxin lạc mức độ cao chủng Flavobacterium aurantiacum VS1 48 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO 56 Khoa Công nghệ Sinh học 63 ... ngô, lạc mức độ cao số chủng vi khuẩn vi nấm 1. 2 Mục tiêu nội dung nghiên cứu 1. 2 .1 Mục tiêu nghiên cứu - Tìm công nghệ khử nhiễm aflatoxin ngô, lạc số chủng vi khuẩn vi nấm 1. 2.2 Nội dung nghiên. .. nghiên cứu khử nhiễm aflatoxin biện pháp sinh học Góp phần vào vi c nghiên cứu công nghệ khử nhiễm aflatoxin ngô lạc tiến hành nghiên cứu đề tài: “ Nghiên cứu công nghệ khử nghiễm aflatoxin ngô,. .. ngô mức độ cao chủng R.delemaVS2 Để nghiên cứu công nghệ khử nhiễm ngô mức độ cao, khảo sát số yếu tố công nghệ thời gian xử lý, nhiệt độ xử lý, độ ẩm ngô trình xử lý Khoa Công nghệ Sinh học 31