Luận văn Ly trích mangiferin từ lá xoài (Mangifera Indica L.)

TRNG I HC CN TH KHOA S PHM TI: LY TRCH MANGIFERIN T L XOI (Mangifera Indica L.) Lun Vn Tt Nghip Ngnh: S PHM HO HC GV hng dn : ThS.GVC Nguyn Vn Hựng Sinh viờn: Trn Kim Tuyn Lp: S Phm Hoỏ Hc K 33 MSSV: 2072022 Cn Th, 2011 Lun tt nghip LI CM N Do õy l ln u tiờn thc hin mt ti nghiờn cu khoa hc nờn quỏ trỡnh thc hin tụi gp phi nhiu khú khn Tuy nhiờn thỏng thc hin ti, tụi ó hc hi c nhiu iu b ớch v tớch lu c nhiu kinh nghim quý bỏu hon thnh tt ti, ngoi s n lc c gng ca bn thõn tụi cũn nhn c s ng viờn v giỳp rt nhiu ca quớ thy cụ, gia ỡnh, bn bố v nhng ngi xung quanh Vỡ lớ ú, trang u lun ny tụi xin gi li cm n chõn thnh n: Thy Nguyn Vn Hựng, thc s, ging viờn chớnh B mụn H, Khoa S Phm, trng i Hc Cn Th ó trc tip hng dn, ch dy mt cỏch tn tỡnh v to mi iu kin tt nht tụi hon thnh tt ti Thy Nguyn Phỳc m, Cụ Thỏi Th Tuyt Nhung, Cụ Nguyn Th Thu Thy, Cụ Lờ Th Lc, Thy Nguyn in Trung v cỏc thy cụ khỏc b mụn Húa ó tn tỡnh giỳp v truyn th kin thc cho tụi sut nm hc tụi hon thnh tt lun Cha m, gia ỡnh ó ng h, ng viờn cho tụi v tinh thn v vt cht sut quỏ trỡnh thc ti Tp th lp S Phm Húa K33 ó ng viờn, giỳp tụi rt nhiu sut nm hc i hc Mt ln na xin chõn thnh cm n! Trang i Lun tt nghip NHN XẫT CA GIO VIấN HNG DN Trang ii Lun tt nghip NHN XẫT CA GIO VIấN PHN BIN Trang iii Lun tt nghip NHN XẫT CA GIO VIấN PHN BIN Trang iv Lun tt nghip IM KT LUN CA HI NG CHM LUN VN TT NGHIP Trang v Lun tt nghip MC LC LI CM N i NHN XẫT CA GIO VIấN HNG DN ii NHN XẫT CA GIO VIấN PHN BIN iii IM KT LUN CA HI NG CHM LUN VN TT NGHIP iv MC LC v DANH MC CC Kí HIU, CH VIT TT viii DANH MC CC BNG ix DANH MC CC HèNH x TểM TT NI DUNG TI xi M U Lí DO CHN TI MC TIấU V GII HN CA TI .2 CC PHNG PHP, PHNG TIN THC HIN TI 3.1 Phng phỏp 3.2 Phng tin CC BC THC HIN TI NI DUNG TNG QUAN .3 TNG QUAN V CY XOI 1.1 Gii thiu v cõy xoi 1.1.1 Mụ t 1.1.2 Mt s loi 1.1.3 Phõn b sinh thỏi 1.1.4 Cỏch trng 1.1.5 B phn dựng 1.2 Thnh phn húa hc ca cõy xoi 1.3 Tỏc dng dc lý ca cõy xoi .12 1.3.1 Tỏc dng trờn virus 12 1.3.2 Tỏc dng khỏng khun .12 Trang vi Lun tt nghip 1.3.3 Tỏc dng khỏng nm .12 1.3.4 Tỏc dng c ch thn kinh trung ng 12 1.3.5 c tớnh 12 1.6 Tớnh v, cụng nng 13 1.7 Cụng dng ca xoi 13 1.8 Bi thuc cú xoi 13 TèM HIU V MANGIFERIN 14 2.1 Thnh phn húa hc v cu trỳc ca mangiferin 14 2.2 Tớnh cht ca mangiferin 15 2.3 Tỏc dng dc lớ ca mangiferin 15 2.4 Mt s cụng trỡnh nghiờn cu v mangiferin .17 2.4.1 Mt s cụng trỡnh nghiờn cu ti Vit Nam .17 2.4.2 Mt s cụng trỡnh nghiờn cu trờn th gii 17 THC NGHIM 19 DNG C, HểA CHT 19 1.1 Dng c .19 1.2 Húa cht .19 LY TRCH V TINH CH MANGIFERIN 19 2.1 X lớ lỏ xoi 19 2.2 Quy trỡnh ly trớch v tinh ch mangiferin 20 2.3 Cỏc bc tin hnh ly trớch v tinh ch mangiferin 21 2.4 Kt qu ca quỏ trỡnh ly trớch v tinh ch mangiferin 22 NHN DANH V XC NH HM LNG .22 3.1 nh tớnh mangiferin 29 3.1.1 Phn ng mu c trng 29 3.1.2 Sc kớ bn mng .30 3.2 o nhit núng chy ca mangiferin tinh ch 29 3.2.1 Cỏc bc tin hnh 29 3.2.2 Kt qu 29 3.3 Kho sỏt cu trỳc hp cht bng ph IR 31 3.4 Kho sỏt cu trỳc hp cht bng NMR 24 Trang vii Lun tt nghip 3.5 Xỏc nh hm lng bng HPLC 31 KT LUN V KIN NGH 32 TI LIU THAM KHO 33 PH LC Trang viii Lun tt nghip DANH MC CC Kí HIU, CH VIT TT : Tn s dao ng (s súng) CTPT : Cụng thc phõn t d : doublet ( mi ụi) DMSO : Dimethylsulfuroxyde EtOAc : Ethyl acetat g : Gam Glu : Glucose HPLC : High performance kg : Kilogam KLPT : Khi lng phõn t IR : Infrared spectrum MeOH : Methanol mg : miligam g : microgam NMR : Nuclear Magnetic Resonance (cng hng t ht nhõn) PE : Petroleum Ether (Ether du ho) s : singlet (mi n) Stt : S th t t : triplet (mi ba) TCD50 : Tumour contron dose 50% (kim soỏt u liu 50%) TLC : Thin layer chormatography (sc kớ bn mng) UV : Ultra - violet Trang ix Lun tt nghip So sỏnh d liu ph NMR ca sn phm tinh ch c vi d liu ph ca mangiferin tham kho ta thu c kt qu nh sau: V trớ C/H H-NMR (DMSO, ppm) 13 C-NMR(DMSO, ppm) Sn phm Mangiferin Sn phm Mangiferin tinh ch tham kho tinh ch tham kho 161,8 161,8 107,6 107,6 163,8 163,9 93,4 93,3 4a 156,2 156,2 4b 150,9 150,9 102,5 102,6 154,2 154,3 143,6 143,3 108,0 108,0 8a 111,7 111,6 8b 101,4 101,3 C=O 179,1 179,1 73,1 73,1 70,6 70,7 79,0 79,0 70,2 70,2 81,5 81,6 61,4 61,5 1-OH 6,38 (s) 6,87 (s) 7,39 (s) 6,37 (s) 6,85 (s) 7,37 (s) 4,6 4,58 (d-J=10Hz) (d-J=9,8Hz) 4,06 4,04 (t-J=9,25Hz) (t-J=9,0Hz) H6a=3,69 H6a=3,68 (d-J=10,6) (d-J=11,3) 13,77(s) 13,77(s) Trang 24 Lun tt nghip Nhn xột: - Ph 13C-NMR(DMSO, ppm): + Cho 19 mi tớnh hiu caccbon phự hp vi s cacbon CTPT ca mangiferin + mi 179,1 ppm: cacbon ca nhúm C=O c trng cho khung xanthon - 1H-NMR (DMSO, ppm): + mi n 13,77: proton ca 1-OH + mi n khong 6,38-739 l tớn hiu proton ca vũng thm - So sỏnh d liu ph vi ti liu tham kho ta thy cú s phự hp khỏ ln Túm li: T cỏc thụng tin trờn cú th nhn danh sn phm ly trớch c l mangiferin Cú cu trỳc nh sau: OH 'C H O H 5' OH 4' O H 3' O O 4a 4b 8b 8a 1' 2' OH OH O OH OH 2-C- - D- Glucopyranosyl 1,3,6,7 tetrahydroxylxanthon 3.5 Xỏc nh tinh khit ca sn phm bng HPLC - Mu mangiferin tinh ch em xỏc nh tinh khit bng HPLC ti trung tõm phõn tớch cụng ngh cao Hon V + Mỏy HPLC Agilent 1100 / UV detector + Bc súng 254nm + Ct : XDB-C18 (150 x 4.6 mm, um) + Pha ng MeOH: NH4CH3COO 20mM/25:75 + Flow : 1ml/min Ta thu c kt qu mangiferin mu chim hm lng khỏ cao: 93,4% Trang 25 Lun tt nghip KT LUN V KIN NGH ti ly trớch mangiferin t lỏ xoi vi qui trỡnh n gin, khụng cn n mỏy múc hin i phự hp vi iu kin phũng thớ nghim em li kt qu ly trớch kh quan l ly trớch c mangiferin vi hiu sut khỏ cao v sn phm thu c khỏ sch Bờn cnh ú vic thc hin ti cng cũn nhiu hn ch nh: ch phõn tớch mangiferin bng ph IR, MNR v HPLC ti ch dng li vic sn xut mt lng nh mangiferin cha m rng quy mụ cụng nghip Chớnh vỡ vy cn tip tc nghiờn cu b sung thờm vo quy trỡnh cú th hon thin hn v ng dng vo thc t Trong tng lai nu cú iu kin cho phộp s tip tc nghiờn cu ti ny rng v sõu hn: - Ly trớch bng phng phỏp khỏc - Ly trớch vi quy mụ ln cụng nghip Trang 26 Lun tt nghip TI LIU THAM KHO [1] Huy Bớch, ng Chung, Bựi Xuõn Chng, Nguyn Thng Dong, Trung m, Phm Vn Hin - Vin Dc Liu, V Ngc L, Phm Duy Mai, Phm Kim Món, on Th Nhu, Nguyn Tp, Trn Ton, nm 2004 Cõy thuc v ng vt lm thuc Vit Nam Nh Xut Bn khoa hc v k thut H Ni, Tp II, trang 1015 1020 [2] Nguyn Th , Nguyn Hu nh, nm 1999 ng dng mt s phng phỏp nghiờn cu cu trỳc phõn t Nh Xut Bn Giỏo Dc [3] Nguyn Kim Phi Phng, nm 2007 Phng phỏp cụ lp cht hu c Nh Xut Bn i hc Quc gia, Thnh ph H Chớ Minh [4] Nguyn Kim Phi Phng, nm 2003 Thc húa hu c Nh Xut Bn i hc Quc Gia, Thnh Ph H Chớ Minh [5] Nguyn Vit Tu, Phõn vin dc liu TP HCM Quy trỡnh cụng ngh chit xut mangiferin t lỏ xoi Tp dc liu 1, s 2/ 1996, trang 56 57 [6] Trng i hc Y Dc Thnh Ph H Chớ Minh, B mụn Dc Liu, nm 2005 Giỏo trỡnh phng phỏp nghiờn cu dc liu [7] Chul Young Kim, Mi-Jeong Ahn, and Jinwoong Kim, 2006 Preparative Isolation of Mangiferin from Anemarrhena asphodeloides Rhizomes by Centrifugal Partition Chormatography Jounal of Liquid Chormatography & Related Technologies, 29, p 869 875 [8] Dineshkumar, Analava Mitra, M Manjunatha, 2010 Studies on the anti-diabetic and hypolipidemic potentials of mangiferin (Xanthone Glucoside) in streptozotocin induced Tyde and Tyde diabetic model rats International Journal of Advances in Pharmaceutical Sciences 1, p 75-85 [9] Ian S E Bally, April 2006 Mangifera indica (mango) Species Profiles for Pacific Island Agroforestry, ver 3.1, p 1-5, htpt: www.traditionaltree.org [10] Julia F Morton, Miami, FL Fruits of warm climates Morton J , 1987 , p 221-239 Trang 27 Lun tt nghip [11] Hasbarinda Binti Hasan, 11-2008 Chemical constituents of the twigs of Magifera Indica (mangga telor) Bachelor of science (Hons) chemistry faculty of applied science university teechnology mara [12] KA Shah, MB Patel, RJ Patel, PK Parmar Mangifera Indica (Mango) Department of Pharmacognosy, K B Raval College of Pharmacy, Shertha, Gandhinagar, Gujarat, India, p 382- 324 [13] Muhammad Najumul IsLamKhan, 1992 Studies in the chemical constitents of flowers and root bark of mangifera indica L Department of chemistry university of Karach, Karachi, Pakistan, March, , p 35-75 [14] Nathalie Wauthoz, Aliou Balde, Elhadj Saùdou Balde, Marc Van Damme Pierre Duez, 2007 Ethnopharmacology of Mangifera indica L Bark and Pharmacological Studies of its Main C-Glucosylxanthone, Mangiferin International Journal of Biomedical and Pharmacological Sciences, Global Science Books, p112 -119 [15] S K Singh,Y Kumar, S Sadish Kumar, V K Sharma, K Dua, and A Samad- D J College of Pharmacy, 2009 MayJun, Antimicrobial Evaluation of Mangiferin Analogues Niwari road, Modinagar -201, India, ITS Paramedical College (Pharmacy), Muradnagar, Ghaziabad, J Pharm Sci, 71(3), p 328331 [16] Toshihiro Miura, Hiroyuki Ichiki, Itsuko Hashimoto, Naoki Iwamoto, Motoshi Kato, Masayoshi Kubo, Eriko Ishihara, Yasuhiro Komatsu, Minoru Okada, Torao Ishida and Keiichro Tanigawa Antidiabetic activity of a xanthone compound, mangiferin PhytomedicineVol 8(2), â Urban & Fischer Verlag 2001, pp 8587 [17] http:// www.wikipedia.com [18]http://www.vietpharm.com.vn/home.php?option=product&com=product_detail& product_id=10 Trang 28 Lun tt nghip PH LC MT S HèNH NH LM LUN VN Hỡnh 16: H thng Soxhlet Hỡnh 18: Mỏy xay Hỡnh 17: Mỏy cụ quay chõn khụng PL Lun tt nghip PH IR CA MANGIFERIN TINH CH PL Lun tt nghip PH 1H-NMR CA MANGIFERIN TINH CH PL Lun tt nghip PH 1H-NMR M RNG CA MANGIFERIN TINH CH PL Lun tt nghip PH 1H-NMR M RNG CA MANGIFERIN TINH CH PL Lun tt nghip PH 13C-NMR CA MANGIFERIN TINH CH PL Lun tt nghip PH 13C-NMR M RNG CA MANGIFERIN TINH CH PL Lun tt nghip PH 13C-NMR M RNG CA MANGIFERIN TINH CH PL Lun tt nghip PL Lun tt nghip PL 10 [...]... lần lượt dùng 4 dung mơi để ly trích mangiferin từ lá xồi: aceton, chloroform, n-butanol, dioxan Tuy nhiên phải sử dụng nhiều loại dung mơi đắt tiền Ở Việt Nam, cũng đã có nhiều đề tài nghiên cứu về việc ly trích mangiferin từ lá xồi nhưng chưa được phổ biến rộng rãi Việc chọn đề tài Ly trích mangiferin từ lá xồi” với mong muốn góp phần tìm ra nhiều loại dược phẩm có giá trị từ những cây cỏ có sẵn trong... 2 LY TRÍCH VÀ TINH CHẾ MANGIFERIN 2.1 Xử lí ngun liệu Lá xồi được thu hái ở Châu Phú, An Giang Thời gian thu hái vào buổi sáng, tháng 9 Chọn lá xồi có màu lá già có màu xanh thật đậm Lá được rửa thật sạch để loại tạp chất, sấy khơ trong tủ sấy ở 600C đến khi khối lượng khơng đổi, xay nhuyễn thành bột Trang 18 Luận văn tốt nghiệp Hình 4: Bột lá xồi khơ Hình 3: Lá xồi khi thu hái 2.2 Quy trình ly trích. .. làm ngun liệu để ly trích mangiferin, một loại xanthon glycoside Mangiferin có tác dụng chống viêm nhiễm, chống lại sự oxi hóa, giảm nguy cơ tiểu đường, trị các bệnh ngồi da Tuy hàm lượng mangiferin có trong thân vỏ là lớn nhất nhưng việc ly trích từ lá xồi mang lại hiệu quả kinh tế cao hơn Khảo sát thành phần hóa học cho thấy cây xồi chứa hợp chất hóa học khác nhau, đặc biệt là polyphenolic, flavonoid,... phương pháp ly trích này thu được sản phẩm mangiferin Đề tài đã ly trích thành cơng mangiferin theo một quy trình đơn giản, khơng cần đến máy móc thiết bị có kĩ thuật cao phù hợp với điều kiện phòng thí nghiệm Kết quả ly trích được mangiferin với hiệu suất tương đối cao và sản phẩm khá sạch Mong muốn có thể áp dụng qui trình này vào thực tiễn Sau đây là nội dung đề tài: Trang xii Luận văn tốt nghiệp... 3.1 Phương pháp, - Nghiên cứu lý thuyết: + Tìm tài liệu về: cây xồi, lá xồi, mangiferin + Tìm hiểu phương pháp cơ lập hợp chất hữu cơ, các dạng phổ + Tham khảo tài liệu có liên quan - Nghiên cứu thực nghiệm: + Phương pháp ly trích: ngâm dầm, soxhlet… + Phương pháp kết tinh phân đoạn bằng dung mơi thích hợp để ly trích Mangiferin từ lá xồi + Phân tích định tính : sắc kí bản mỏng, đo nhiệt độ nóng chảy,... ethanol cơ đặc Hình 7: Kết tinh trong ethanol – nước Hình 8: Dung dịch kết tinh lại Hình 9: Sản phẩm sau khi kết tinh Trang 20 Luận văn tốt nghiệp 2.2.5 Kết quả của q trình ly trích và tinh chế mangiferin - Lá tươi: 920 g lá - Bột lá xồi (khơ): 200 g - Cao ethanol: 21,6g Độ ẩm (lá) = mt  m k 920  200 x100  x100  78,26 (%) 920 mt Sản phẩm thu được như sau: Loại sản phẩm Sản phẩm thơ Sản phẩm sau kết... TÀI - Nhận đề tài, tham khảo tài liệu từ mọi nguồn để hồn thành đề cương chi tiết - Nghiên cứu phần lý thuyết, tìm phương pháp ly trích - Tiến hành làm thực nghiệm - Viết báo cáo, chỉnh sửa và hồn chỉnh luận văn tốt nghiệp Trang 2 Luận văn tốt nghiệp TỔNG QUAN 1 TỔNG QUAN VỀ CÂY XỒI 1.1 Giới thiệu về cây xồi [1], [9], [10] Hình 1: Cây xồi - Tên khoa học: Mangifera indica L - Tên khác: Mãng quả, mác moang... thể đạt 500 kg quả /năm Trang 6 Luận văn tốt nghiệp 1.2 Thành phần hóa học của cây xồi [1], [11] , [13] - Xồi chứa nhiều hợp chất hóa học khác nhau đặc biệt là polyphenolic, flavonoid, triterpenoids Trong đó, mangiferin một xanthon glycoside là thành phần chính có trong hầu hết các bộ phận của cây nhiều nhất trong thân vỏ 5-7%, lá 1-3% tuỳ chủng loại - Lá xồi: chứa mangiferin, taraxarol, friedelin,... đã tách chiết thành cơng hợp chất mangiferin từ cây Quần Đảo Bảo Chánh - Polialthia Evecta 2.4.2 Một số cơng trình nghiên cứu trên thế giới - Mangiferin đã được Garter (1992) và Wiechowski (1923) phân lập, Iseda (1957) và Ramanahan, Seshari (1960) đã nghiên cứu cấu trúc hồn chỉnh - Năm 1990, các nhà khoa học Nga đã lần lượt dùng 4 dung mơi để ly trích mangiferin từ lá xồi: aceton, chloroform, n-butanol,... có trong hầu hết các bộ phận của cây: nhiều nhất trong thân vỏ 5-7%, lá xồi 1-3% tuỳ chủng loại Phương pháp ly trích mangifein trong đề tài này sử dụng kĩ thuật chiết ngâm dầm với dung mơi ethanol 70% từ nguồn ngun liệu ban đầu là lá xồi Sau đó, cơ lập mangiferin từ dịch chiết và tinh chế bằng phương pháp kết tinh trong ethanol được mangiferin thơ, sau đó kết lại trong hỗn hơp ethanol - nước, rồi nhận ... .19 LY TRCH V TINH CH MANGIFERIN 19 2.1 X lớ lỏ xoi 19 2.2 Quy trỡnh ly trớch v tinh ch mangiferin 20 2.3 Cỏc bc tin hnh ly trớch v tinh ch mangiferin ... phỏp ly trớch ny thu c sn phm mangiferin ti ó ly trớch thnh cụng mangiferin theo mt quy trỡnh n gin, khụng cn n mỏy múc thit b cú k thut cao phự hp vi iu kin phũng thớ nghim Kt qu ly trớch c mangiferin. .. TèM HIU V MANGIFERIN 2.1 Thnh phn húa hc v cu trỳc ca mangiferin [14], [17] - Mangiferin mt C glucoside xanthon, cu to gm phn: phn ng v phn khụng ng thng gi l aglycon Phn aglycon l mt polyphenol