Các phương pháp phân tích lượng tồn dư clenbuterol trong sản phẩm thịt gia súc gia cầm

III Các phương pháp phân tích lượng tồn dư clenbuterol sản phẩm thịt gia súc gia cầm Tổng quan Clenbuterol Clenbuterol (Spiropent, Ventipulmin) chất thuộc nhóm Beta-2-agonist Đầu tiên, Clenbuterol dùng làm thuốc trị bệnh hen suyễn Liều dùng không vượt 200 mcgs (1 mcg = 1/1000 mg) điều trị phải giữ cho huyết áp 140/90 Ngoài ra, dung chất cho heo ăn làm cho heo nở mông, nở đùi, tăng trọng nhanh đặc biệt tiêu biến mỡ tăng tỉ lệ nạc Công thức cấu tạo Clenbuterol Cách thức hoạt động Clenbuterol giống với cách thức hoạt động nhóm Beta- agonist Cụ thể là: + Khi Beta- agonist kết dính vào thụ thể Beta-adrenergic tế bào mỡ, chúng làm hoạt hóa số emzyme, từ làm giảm tổng hợp tích lũy mô mỡ tế bào Ngoài huy động mô mỡ tế bào để phân giải mô mỡ nhằm cung cấp lượng cho thể đưa đến kết tỷ lệ mỡ tích lũy thể gia súc + Đối với mô có chưa thụ thể Beta-adrenergic bề mặt Sự tương tác Beta-agonist với thụ thể Beta-adrenergic làm gia tăng tổng hợp axit ribonucleic (RNA), từ làm gia tăng tổng hợp protein tế bào kết làm gia tăng kích thước tế bào Sự tăng trưởng xảy cách gia tăng chiều dài độ lớn sợi cách nhanh chóng (siêu nạc) không gia tăng số lượng tế bào Tuy nhiên gia tăng có hạn theo thời gian sử dụng kéo dài làm gia súc chết Tác hại Clenbuterol việc ăn phải thịt lợn chứa chất Clenbuterol lâu dài gây biến chứng ung thư, phù nề, co thắt phế quản, ngộ độc cấp tính, run cơ, đau tim, tim đập nhanh, tăng huyết áp, choáng váng… Clenbuterol gây tổn hại cho hệ thần kinh, hệ tuần hoàn, chí gây chết người Đối với gia súc lợn, vật ăn phải chất tồn nửa tháng phải giết mổ Clenbuterol chất có mặt danh mục chất kháng sinh, hóa chất bị cấm sử dụng chăn nuôi Tình hình sử dụng Clenbuterol giới Việt Nam a,Trên giới Việc sử dụng chất thuộc họ B- agonist, đặc biệt Clenbuterol chăn nuôi khởi xướng từ Mỹ vào năm 90, sau lan rộng khắp giới Những vụ ngộ độc ăn phải thịt heo bị nhiễm Clenbuterol - Thập niên 80, Mỹ cấm sử dụng Clenbuterol vào thức ăn gia súc Vào năm 1990, Trung Quốc cấm sử dụng Clenbuterol chăn nuôi gia súc Ở Tây Ban Nha, vào năm 1994, 140 người nhập viện sau ăn phải thịt heo bị nhiễm Clenbuterol Họ bị chóng mặt, tim đập nhanh, khó thở, run tay nhức đầu - Tháng 9/2006, 330 người Thượng Hải bị ngộ độc ăn thịt heo siêu nạc Tháng 2/2009, 70 người Quảng Đông bị ngộ độc ăn lòng heo có dư lượng Clenbuterol - Tại Thượng Hải (Trung Quốc), quan chức phát 18 vụ ngộ độc Clenbuterol liên quan đến thịt lợn, điển hình vào tháng 9/2006 có 330 người bị ngộ độc ăn thịt lợn siêu nạc - Tháng 3/2011, Bộ Nông nghiệp Trung Quốc mở đầu chiến dịch kéo dài năm để truy quét thức ăn chăn nuôi có chứa Clenbuterol, sau công ty tập đoàn Shuanghui (sản xuất thịt lớn TQ) bị phát Clenbuterol thịt heo công ty Tổng cộng có 72 người bị bắt bị cảnh sát giam giữ bị cáo buộc sản xuất, bán sử dụng thịt heo có Clenbuterol b,Tại Việt Nam Việc sử dụng Clenbuterol Việt Nam nằm tình trạng đáng báo động Cụ thể: - Cục chăn nuôi công bố: Năm 2006, khảo sát 114 công ty sản xuất thức ăn chăn nuôi cho lợn có công ty sản phẩm chứa dư lượng Clenbuterol - Trung tâm nghiên cứu tư vấn người tiêu dùng điều tra công bố 9/10 mẫu thịt lợn có tồn dư chất tạo nạc (đầu năm 2011) - Cục cảnh sát phòng chống tệ nạn mội trường chi cục thú y TP.HCM tìm thấy kho 1,4tấn sản phẩm chứa chất tạo nạc nhập từ Trung Quốc Các phương pháp phân tích Clenbuterol Có phương pháp phân tích Clenbuterol thường sử dụng là: Phương pháp ELISA Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao HPLC Phương pháp sắc ký khí khối phổ GC/MS a, Phương pháp ELISA *Nguyên tắc: Phương pháp ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) có nhiều dạng mà đặc điểm chung dựa kết hợp đặc hiệu kháng nguyên kháng thể, kháng thể gắn với enzyme Khi cho thêm chất thích hợp (thường nitrophenol phosphate) vào phản ứng, enzyme thủy phân chất thành chất có màu Sự xuất màu chứng tỏ xảy phản ứng đặc hiệu kháng thể với kháng nguyên thông qua cường độ màu mà biết nồng độ kháng nguyên hay kháng thể cần phát * Ưu điểm nhược điểm phương pháp ELISA xác định Clenbuterol Ưu điểm Đơn giản, dễ thực Tính chọn lọc cao Nhược điểm Xác định bán định lượng Có thể cho kết dương tính giả b Kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao HPLC với detectơ UV *Nguyên tắc: Sắc ký lỏng hiệu cao kỹ thuật dùng để tách, nhận biết, định lượng thành phần hỗn hợp Kỹ thuật dựa hệ thống bơm để đẩy dung môi lỏng áp suất cao, dung môi có chứa hỗn hợp mẫu, qua cột sắc ký Cột sắc ký đổ vật liệu hấp phụ rắn Mỗi thành phần mẫu tương tác tương đối khác với vật liệu hấp phụ, nên tốc độ dòng thành phần khác khác nhau, dẫn tới phân tách thành phần khí mà chúng chảy khỏi cột * Ưu điểm nhược điểm phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao Ưu điểm Độ nhạy đạt 3,16 ppb Khả định lượng tốt Nhược điểm Độ đặc hiệu không cao Giới hạn phát Clenbuterol lớn so với phương pháp GC/MS c Kỹ thuật GC/MS (sắc ký khí ghép khối phổ) Sắc ký khí ghép khối phổ (GC/MS_Gas Chromatography Mass Spectometry) phương pháp sắc ký đại với độ nhạy độ đặc hiệu cao sử dụng nghiên cứu phân tích kết hợp Thiết bị GC/MS cấu tạo thành phần: phần sắc ký khí (GC) dùng để phân tích hỗn hợp chất tìm chất cần phân tích, phần khối phổ (MS) mô tả hợp phần riêng lẻ cách mô tả số khối Sử dụng thiết bị GC/MS/MS để đo khối phổ lần (MS) đo khối phổ lần (MS/MS) Ưu điểm: Có giới hạn phát Clenbuterol (LOD) dạng vết nên định tính định lượng tồn dư Clenbuterol xác gần tuyệt đối nguyên liệu thực phẩm thịt lợn Do đó, tiến hành nghiên cứu định lượng Clenbuterol sản phẩm thịt lợn phương pháp sắc ký khối phổ IV Kiểm định Clenbuterol sản phẩm thịt gia súc phương pháp GC-MS Mục đích - Xác định thông số đặc trưng để xây dựng quy trình định lượng Clenbuterol thịt lợn phương pháp sắc kí khối phổ nhiều lần - Đánh giá dư lượng Clenbuterol số mẫu thịt lợn thị trường 2.Vị trí lấy mẫu Đối tượng: Lấy mẫu thịt lợn tươi chợ siêu thị Hà Nội Địa điểm thực hiện: Tại Labo hóa - độc thực phẩm, khoa Thực phẩm Vệ sinh an toàn thực phẩm, Viện Dinh Dưỡng, Bộ Y Tế 3.Kích thước mẫu - Lấy 30 mẫu thịt lợn chợ siêu thị Hà Nội - Mẫu thịt lợn tươi thu mua từ 8h -10h sáng, mẫu lấy tối thiểu 300g, bảo quản lạnh đưa PTN không 3h - Tại PTN, mẫu xay nhuyễn máy đến mịn đồng nhất, sau cân lấy lượng mẫu phân tích hàng ngày, mẫu lại bảo quản tủ âm sâu -20 đến -25ºC ... thấy kho 1,4tấn sản phẩm chứa chất tạo nạc nhập từ Trung Quốc Các phương pháp phân tích Clenbuterol Có phương pháp phân tích Clenbuterol thường sử dụng là: Phương pháp ELISA Phương pháp sắc ký lỏng... phương pháp sắc ký khối phổ IV Kiểm định Clenbuterol sản phẩm thịt gia súc phương pháp GC-MS Mục đích - Xác định thông số đặc trưng để xây dựng quy trình định lượng Clenbuterol thịt lợn phương pháp. .. phát Clenbuterol (LOD) dạng vết nên định tính định lượng tồn dư Clenbuterol xác gần tuyệt đối nguyên liệu thực phẩm thịt lợn Do đó, tiến hành nghiên cứu định lượng Clenbuterol sản phẩm thịt lợn phương