Tóm tắt thực tập hóa sinh

Tóm tắt thực tập hóa sinh liên thông đại học lạc hồng. Thi thực hành hóa sinh. Tóm tắt thực tập hóa sinh liên thông đại học lạc hồng. Thi thực hành hóa sinh. Tóm tắt thực tập hóa sinh liên thông đại học lạc hồng. Thi thực hành hóa sinh. Tóm tắt thực tập hóa sinh liên thông đại học lạc hồng. Thi thực hành hóa sinh. Tóm tắt thực tập hóa sinh liên thông đại học lạc hồng. Thi thực hành hóa sinh.

Bài 1: Glucid

1 Phản ứng khử của Disaccarid

- Thuốc thử Fehling dùng để xác định các đường khử như: Lactose, Maltose,

Glucose, Fructose, Pentose (Arabinose, Ribose)…

- Fehling + đường khử  Cu2O (đỏ gạch).

- Không đun quá lâu, chỉ đun tới khi một ống có tủa đỏ gạch là được Khoảng

1 – 2 phút

- Saccarose không có tính khử sẽ không cho tủa đỏ gạch Nhưng nếu đun cách

thủy quá lâu Saccarose sẽ thủy phân thành Fructose và Glucose (hai đường

có tính khử)  cũng xuất hiện tủa đỏ  kết quả SAI

2 Thủy phân saccarose

- Khi thủy phân bằng acid, Saccarose cho ra Glucose và Fructose (hai đường

- Khi trung hòa bằng NaOH, không nên cho quá nhiều NaOH Cho nhiều

NaOH  kết quả SAI

3 Phản ứng Seliwanoff

- Phân biệt Aldose (Glucose) và Cetose (Fructose).

- Aldose: Arabinose, Ribose, Glucose, Galactose.

- Cetose: Fructose.

- Seliwanoff + fructose  dung dịch màu đỏ.

- Seliwanoff + glucose  không đổi màu

4 Phản ứng Bial

- Phân biệt đường Pentose và Hexose.

- Pentose (Arabinose): tạo màu xanh lá với thuốc thử Bial

Ống 2: Phản ứng SeliwanoffỐng 1: Phản ứng Fehling

Ống 1: Seliwanoff + fructose

Ống 1: Seliwanoff + glucose

5 Sự thủy phân tinh bột

- Khi thử với iod cho màu như sau:

- Fehling + dịch thủy phân (sau khi thủy phân được Glucose là đường khử) 

- Đơn vị: mg/dl.

- Glucose trong máu bình thường khoảng : 70 - 110 mg/dl

- Glucose tăng: Gặp trong đái đường tụy, cường tuyến thượng thận, u tuyến

yên, nhiễm độc tuyến giáp, choáng do chấn thương (gãy xương đùi, chấnthương sọ não …)

- Glucose giảm: Gặp trong đói kéo dài, u thân tụy (u adenoma, cardinoma),

thiểu năng các tuyến nội tiết: vỏ thượng thận, tuyến giáp, tuyến yên, tổnthương vùng dưới đồi; bệnh về gan (xơ gan nặng, …), nhiễm độc các chấtnhư Asen, CCl4, …

- Cho ít CuSO4 để có màu rõ

- Các chất cho phản ứng dương tính với Biuret là: Albumin (lòng trắng trứng),

Casein, Sữa, Gelatin

2 Phản ứng Ninhydrin

Ống 2: Biuret + Acid aminỐng 1: Biuret + Protein

- Những acid amin không phải  - acid amin cũng phản ứng với Ninhydrin tạo

phức hợp màu xanh tím nhưng không giải phóng CO2

3 Phản ứng Xanthoproteic

- Phản ứng Xanthoproteic dương tính với bất kì chất nào có OH - Phenol

- Xác đinh acid amin có vòng thơm như: Tryptophan, Phenylalanine,

Tyrosine

- Acid amin vòng thơm + HNO3 đđ Vàng (nếu có acid amin vòng sẽ xuất hiện màu vàng) + NaOH  Da cam

- Khi cho NaOH nên cho từ từ, quan sát khi nào có màu cam thì dừng lại Nếu

cho dư NaOH sẽ có màu vàng nhạt

Ninhydrin +  - acid amin

OH - Phenol

- Gelatin không cho phản ứng xanthoproteic

4 Phản ứng Adamkiewicz

- Xác định Tryptophan

- Nên dùng Fructose, phản ứng dễ xảy ra hơn.

- Sau khi đun nhẹ 3 - 5p lấy ra nhỏ ngay acid H2SO4 vào

- Khi cho H2SO4 để nghiêng ống nghiệm 45o nhỏ từ từ theo thành ống

- Cho từ từ từng giọt H2SO4  xuất hiện vòng đỏ giữa hai chất lỏng

- Không lắc ống nghiệm vì sẽ mất vòng đỏ giữa hai chất lỏng

5 Phản ứng tạo chì sulfur

- Xác định acid amin chứa lưu huỳnh như Cystein, Cystin

- Kết quả: Xuất hiện tủa màu xám

Ống 2: GelatinỐng 1: Protein

Ống 2: GelatinỐng 1: Protein

Tủa xám

6 Định lượng protein toàn phần bằng phương pháp Biuret (Phương pháp

đo điểm cuối)

a Acid vô cơ

- HNO3: có vòng vàng ngăn cách, dư HNO3: vòng vàng không tan, tạo kết tủavàng

- H2SO4: vòng vàng không tan, dư H2SO4, tủa tan

b Acid hữu cơ

- Ống có acid sulfosalicylic sẽ xuất hiện kết tủa trắng nhanh hơn

H2SO4

HNO3

Acid tricloacetic Acid sulfosalicylic

1.2 Kết tủa bằng kim loại nặng

- Nếu không có tủa cho thêm vài giọt protein để yên sẽ lắng kết tủa xuống

không cho thêm CuSO4

- Kết tủa ở dưới đáy ống, tủa màu xanh nhạt.

2 Phản ứng kết tủa trường hợp biến tính thuận nghịch

2.1 Kết tủa bằng phương pháp muối kết

- Tủa bằng NaCl: DD có màu xanh của CuSO4 do protein tủa hết nên dịch

lọc không còn peptid  không dương tính với phản ứng Biuret

- Tủa bằng amoni sulfat: tủa trắng

- Lọc lấy dịch (Lọc bỏ tủa): Xếp giấy lọc thành nhiều nếp như hình quạt.

- Lọc lấy tủa (Lọc bỏ dịch): Xếp giấy lọc thành hình V

Tủa xanh nhạt

Tủa bằng amoni sulfat Tủa bằng NaCl

2.2 Kết tủa bằng dung môi hữu cơ

- Kết quả: Xuất hiện tủa trắng.

3 Protein phức tạp

3.1 Cromoprotein – điều chế hem từ hemoglobin

- Lấy ít máu cho vào lam kính Tán thiệt mỏng giọt máu Có thể dùng lamelle

để tán Để khô

- Cho 1 giọt acid acetic đđ vào và đậy lại bằng lamelle, chú ý không để có bọt

khí

- Đun nóng cho tới khi thấy sôi lên dừng lại ngay để lâu cháy

- Quan sát ở vật kính 10 tìm nền có tinh thể vàng đậm rồi xem ở vật kính 40.

Tủa trắng

3.2 Phosphoprotein: Casein

- Làm lâu nên làm trước

- Chiết xuất casein từ sữa:

+ Đong sữa và nước cất bằng ống đong

+ Dư acid acetic tủa sẽ tan nên cho từ từ acid acetic đến khi xuất hiện tủa làngưng

+ Mỗi lần nhỏ acid acetic lắc đều dung dịch

+ Tủa thu được làm phản ứng thủy phân casein, phát hiện acid phosphorictrước Làm xong hết rồi tủa còn lại mới làm tiếp phản ứng Buret,Adamkiewicz…

- Thủy phân casein và phát hiện acid phosphoric:

+ Lấy nhiều tủa đem đun càng tốt và nhớ gắn ống sinh hàn

+ Khi trung hòa bằng acid nitric cho từ từ và thử với giấy quỳ tới khi giấyquỳ chuyển sang màu hơi hồng Nếu cho dư acid (màu giấy quỳ hồng đậm)thì làm không ra kết quả

- Phản ứng tìm acid phosphoric trong dịch thủy phân:

+ Kết quả: Tủa xanh rêu Nếu màu hơi vàng cho từng giọt ANSA vào.

Bài 4: Lipid

1 Lipid

1.1 Chiết xuất lecithin từ lòng đỏ trứng

- Lecithin tan trong alcol nhưng không tan trong aceton.

- Lấy hơn 20ml alcol etylic để khi đun alcol bay hơi bớt là vừa thể tích cần

1.3 Thủy phân lecithin

- Glycerol: Khi đốt nóng bằng đèn cồn thấy có sủi bọt

- Tạo thành acid béo tự do:

+ Ống có HCl: đục

+ Ống nước cất: trong

- Tạo thành muối calcium không tan: Xuất hiện tủa trắng

2 Định lượng triglycerid bằng phương pháp enzym

- Sau khi ly tâm xong, dùng thuốc thử là thuốc thử định lượng cholesterol

- Tính toán thì dùng một trong hai công thức: Tính nồng độ HDL với hệ số

(chỉ có OD thử và OD trắng) hoặc Tính nồng độ HDL với chuẩn

Nước cất + dịch thủy phânHCl + dịch thủy phân

Bài 5: Enzyme

1 Tính chất chung của enzyme

1.1 Ảnh hưởng của nhiệt độ đến hoạt động của enzym

- Làm cùng lúc 4 ống

- Khi cho nước bọt vào cũng phải cho cùng lúc và không nhấc ống nghiệm lên

khỏi thau đá hay nồi cách thủy vì sẽ làm chênh lệch nhiệt độ

- Ống 45oC nhạt màu nhất, tới ống 37oC, hai ống còn lại đậm màu Chủ yếuống 45oC vì ở nhiệt độ này enzyme hoạt động tốt nhất

- Thử với iod trên gạch men:

+ 0oC: có màu tím

+ 37oC: có màu đỏ hoặc cam (đậm hơn ống 45oC)

+ 45oC: có màu vàng nhạt (màu của iod)

+ 100oC: có màu xanh (phức tạo thành bởi iod và hồ tinh bột)

1.2 Tính đặc hiệu của enzyme

- Đun khi nào thấy có 1 ống chuyển đỏ là lấy ra liền Đó là ống chứa tinh bột

- Đun lâu cả hai ống đều có tủa đỏ  SAI

0 o C 37 o C 45 o C 100 o C

SaccaroseTinh bột

1.3 Ảnh hưởng của chất hoạt hóa và chất ức chế lên hoạt động của

1.4 Ảnh hưởng của pH lên hoạt động của enzyme

- Dung dịch đệm pH 6.8: cho màu nhạt nhất

- Lượng iod cho vào mỗi ống như nhau

2 Khảo sát enzyme catalase

- Nghiền gan bằng cối cho nát nhừ, càng nát càng tốt Nghiền chứ không giã.

- Nghiền xong cho 10ml nước cất vào Trộn đều

- Đong khoảng 6ml H2O2 hoặc bằng lượng dịch gan đã lấy cho vào ốngnghiệm Bịt miệng ống nghiệm ngay Lắc đều ống nghiệm Lắc chứ khônglộn ngược ống nghiệm qua lại để trộn

- Lắc xong lộn ngược ống nghiệm một cách dứt khoát cho vào chậu nước Bỏ

ngón tay ra Tay còn lại kéo thằng đứng ống nghiệm lên trên không kéonghiêng ống nghiệm vì làm vậy khí sẽ thoát ra ngoài

8.0 7.6

7.2 6.8

6.4 6.0

5.6

- Chuẩn bị hai cây nhang, một cây dùng đầu đỏ chọc màng nước ở miệng ống

nghiệm, cây còn lại đốt cháy cho vào đáy ống nghiệm sẽ thấy đóm sẽ cháybùng chứng tỏ có oxy

3 Định lượng GOT, GPT bằng phương pháp động học

- Đơn vị: U/L.

- Hút xong trộn đều cho vô máy hút đo liền không ủ

- Tập trung nhìn màn hình để đọc kết quả Khi hết 30s đầu sẽ là kết quả OD1.Khi đó màn hình bắt đầu đếm ngược từ 120s OD sẽ thay đổi liền nên phảichú ý đọc kết quả

- Nếu chỉ ghi được kết quả ở 50s thì dựa vào kết quả đó tính cho 1 phút:

3.1 Định lượng transaminase GOT

- GOT bình thường trong huyết tương:

+ Nam: 10 – 50 (U/L)

+ Nữ: 10 - 35 (U/L)

- GOT tăng chủ yếu trong các trường hợp: Nhồi máu cơ tim, bệnh nhu mô

gan, bệnh cơ xương, thiếu oxy mô…

Chuyển hóa hemoglobin và chuyển hóa acid nucleic

1 Định lượng Bilirubin toàn phần

- Đơn vị: mol/L

- Không có ống chuẩn Chỉ làm ống trắng và ống thử

- Mẫu huyết thanh có màu vàng.

- Hút thuốc thử: theo thứ tự R1 rồi tới R2: 500l R1 + 500l R2

- Giá trị bình thường:

+ Bilirubin toàn phần trong huyết thanh: 3 – 17 mol/L

+ Bilirubin trực tiếp: 0 – 13 mol/L

- Bilirubin trong huyết thanh tăng trong hội chứng vàng da:

+ Vàng da trước gan: Do phá hủy quá nhiều hồng cầu bởi những nguyênnhân: Tan máu di truyền bệnh về lách, hồng cầu hình liềm Tan máu mắcphải do truyền máu, do thuốc gây tan máu, nhiễm độc chì Vàng da sinh lý ởtrẻ sơ sinh

+ Vàng da tại gan: Khi các tế bào gan bị tổn thương trong viêm gan virus,nhiễm độc

+ Vàng da sau gan còn gọi là vàng da do tắc mật: Thường gặp nhất do sỏimật, ung thư đường mật, ung thư tụy, đường mật bị hẹp.

- Kết quả của thầy: 23,6256 mol/L.

2 Định lượng Bilirubin trực tiếp

- Đơn vị: mol/L hoặc mg/dl.

- Không có ống chuẩn Chỉ làm ống trắng và ống thử

- Canh thời gian chính xác 5 phút

- Bình thường: Bilirubin trực tiếp: 0 – 13 mol/L.

3 Sự thủy phân lipid bằng lipase

- Cho Natri carbonat vào cùng một lượng ở hai ống

- Ống có dịch tụy màu nhạt hơn

4 Định tính muối mật

- Ở mặt tiếp giáp giữa hai chất lỏng có lớp màu đỏ.

Dịch mật + saccarose

H2SO4Lớp đỏ

Nước cấtDịch tụy

- Bình thường: Acid uric trong huyết thanh:

+ Nam: 3,4 – 7,0 mg/dl

+ Nữ: 2,4 – 5,7 mg/dl

Bài 7: Hóa sinh máu

1 Định lượng calcium bằng phương pháp đo màu trực tiếp o – cresolphtalein

- Đơn vị: mmol/L.

- Thuốc thử: 500 l R1 + 500 l R2

- Kết quả của thầy: 2,045 - 2,32 mmol/L.

2 Định lượng sắt trong huyết thanh (phương pháp nitro – paps)

- Đơn vị: mol/L

- Kết quả của thầy: 20,91 – 25,039 mol/L.

3 Định lượng Clo trong huyết thanh

- Đơn vị: mmol/L.

- Kết qủa của thầy: 85 – 88 mmol/L

4 Định lượng hoạt độ men amylase trong huyết thanh

- Phương pháp động học.

- Đơn vị: U/L

- Không làm ống trắng Chỉ làm ống thử

- Kết quả của thầy: 2650 – 2780 U/L.

- Canh chính xác thời gian.

- Hút xong trộn đều cho vô máy hút đo liền không ủ

- Tập trung nhìn màn hình để đọc kết quả Khi hết 30s đầu sẽ là kết quả OD1.Khi đó màn hình bắt đầu đếm ngược từ 120s OD sẽ thay đổi liền nên phảichú ý đọc kết quả

- 120s ghi được 3 kết quả OD tương ứng:

Bài 8: Hóa sinh thận và nước tiểu

1 Xét nghiệm nước tiểu bằng que nhúng

- Xác định bệnh lý:

+ Nhóm 1: Bạch cầu (Leu), Nitrit (Nit), pH bất thường  Nhiễm trùngđường tiểu

+ Nhóm 2: Glucose (Glu), Ceton (Ket) bất thường  Tiểu đường

+ Nhóm 3: Bilirubin (Bil), Uroinogen (Uro) bất thường  Bệnh gan

+ Nhóm 4: Protein (Pro), Máu (Blo) bất thường  Bệnh về thận như viêmống thận, sỏi thận …

2 Định lượng creatinin

- Đơn vị: mg/dl

- Kết quả của thầy: 0,63 – 0,72 mg/dl.

- Thuốc thử: 500 l R1 + 500 l R2.

- Creatinin trong máu tăng: Chức năng thận suy giảm (suy thận), viêm cầu

thận, viêm ống thận, sỏi thận, ung thư tuyến tiền liệt, khối u bàng quang, ungthư tử cung, suy tim

- Creatinin giảm: có thai, suy giảm khối lượng cơ.

3 Định lượng ure bằng phương pháp dùng enzym

4 Định lượng amylase trong nước tiểu bằng phương pháp Wohlgemuth

- Khi hút 1ml ở ống 1 cho vào ống 2 xong nhớ tráng ống hút Lần lượt với các

 Hoạt độ amylase = 25x 2=64 đơn vị Wohlgemuth.

Ống 5 là ống cuối cùng không màu