Tóm tắt thực tập hóa sinh

Tóm tắt thực tập hóa sinh liên thông đại học lạc hồng. Thi thực hành hóa sinh. Tóm tắt thực tập hóa sinh liên thông đại học lạc hồng. Thi thực hành hóa sinh. Tóm tắt thực tập hóa sinh liên thông đại học lạc hồng. Thi thực hành hóa sinh. Tóm tắt thực tập hóa sinh liên thông đại học lạc hồng. Thi thực hành hóa sinh. Tóm tắt thực tập hóa sinh liên thông đại học lạc hồng. Thi thực hành hóa sinh.

Bài 1: Glucid - Phản ứng khử Disaccarid Thuốc thử Fehling dùng để xác định đường khử như: Lactose, Maltose, - Glucose, Fructose, Pentose (Arabinose, Ribose)… Fehling + đường khử  Cu2O (đỏ gạch) Cu2O (đỏ gạch) - Không đun lâu, đun tới ống có tủa đỏ gạch Khoảng - – phút Saccarose tính khử không cho tủa đỏ gạch Nhưng đun cách thủy lâu Saccarose thủy phân thành Fructose Glucose (hai đường - có tính khử)  xuất tủa đỏ  kết SAI Thủy phân saccarose Khi thủy phân acid, Saccarose cho Glucose Fructose (hai đường - có tính khử) Phản ứng Fehling để xác định có mặt Glucose Fructose (đường - khử)  Cu2O (đỏ gạch) Phản ứng Seliwanoff để xác định Fructose  dung dịch màu đỏ Ống 2: Phản ứng Seliwanoff Ống 1: Phản ứng Fehling - Khi trung hòa NaOH, không nên cho nhiều NaOH Cho nhiều - NaOH  kết SAI Phản ứng Seliwanoff Phân biệt Aldose (Glucose) Cetose (Fructose) Aldose: Arabinose, Ribose, Glucose, Galactose Cetose: Fructose Seliwanoff + fructose  dung dịch màu đỏ Seliwanoff + glucose  không đổi màu Ống 1: Seliwanoff + glucose Ống 1: Seliwanoff + fructose - Phản ứng Bial Phân biệt đường Pentose Hexose Pentose (Arabinose): tạo màu xanh với thuốc thử Bial Ống 1: Bial + Arabinose - Sự thủy phân tinh bột Khi thử với iod cho màu sau: Ống 2: Bial + Glucose - Fehling + dịch thủy phân (sau thủy phân Glucose đường khử)  Cu2O (đỏ gạch) Định lượng glucose máu phương pháp so màu tác động - enzyme glucose oxidase Đơn vị: mg/dl Glucose máu bình thường khoảng : 70 - 110 mg/dl Glucose tăng: Gặp đái đường tụy, cường tuyến thượng thận, u tuyến yên, nhiễm độc tuyến giáp, choáng chấn thương (gãy xương đùi, chấn - thương sọ não …) Glucose giảm: Gặp đói kéo dài, u thân tụy (u adenoma, cardinoma), thiểu tuyến nội tiết: vỏ thượng thận, tuyến giáp, tuyến yên, tổn thương vùng đồi; bệnh gan (xơ gan nặng, …), nhiễm độc chất Asen, CCl4, … Bài 2: Protid - Phản ứng Biuret Phản ứng định tính Protein Xác định liên kết peptid (2 liên kết peptid trở lên) Protein + Biuret  Tím Cho CuSO4 để có màu rõ Các chất cho phản ứng dương tính với Biuret là: Albumin (lòng trắng trứng), Casein, Sữa, Gelatin Ống 1: Biuret + Protein - - Ống 2: Biuret + Acid amin Phản ứng Ninhydrin Xác định α - acid amin như: Glycin, Alanin, Serin, Methionin, Tyrosin, Tryptophan, Phenylalanin… Ninhydrin + α - acid amin  Xanh tím tím Prolin + Ninhydrin  Vàng Những acid amin α - acid amin phản ứng với Ninhydrin tạo phức hợp màu xanh tím không giải phóng CO2 Ninhydrin + α - acid amin - Phản ứng Xanthoproteic Phản ứng Xanthoproteic dương tính với chất có OH - Phenol - - Xác đinh acid amin có vòng thơm như: Tryptophan, Phenylalanine, OH - Phenol Tyrosine Acid amin vòng thơm + HNO3 đđ t Vàng (nếu có acid amin vòng xuất - màu vàng) + NaOH  Da cam Khi cho NaOH nên cho từ từ, quan sát có màu cam dừng lại Nếu - cho dư NaOH có màu vàng nhạt Gelatin không cho phản ứng xanthoproteic Ống 1: Protein Ống 2: Gelatin - Phản ứng Adamkiewicz Xác định Tryptophan Nên dùng Fructose, phản ứng dễ xảy Sau đun nhẹ - 5p lấy nhỏ acid H2SO4 vào Khi cho H2SO4 để nghiêng ống nghiệm 45o nhỏ từ từ theo thành ống Cho từ từ giọt H2SO4  xuất vòng đỏ hai chất lỏng Không lắc ống nghiệm vòng đỏ hai chất lỏng Ống 1: Protein - Ống 2: Gelatin Phản ứng tạo chì sulfur Xác định acid amin chứa lưu huỳnh Cystein, Cystin Kết quả: Xuất tủa màu xám Tủa xám Định lượng protein toàn phần phương pháp Biuret (Phương pháp - đo điểm cuối) Đơn vị: g/l Protein toàn phần huyết bình thường: 65-85 g/l Bài 3: Protid (tt) Phản ứng kết tủa trường hợp 1.1 Kết tủa acid mạnh biến tính không thuận nghịch - Acid vô HNO3: có vòng vàng ngăn cách, dư HNO3: vòng vàng không tan, tạo kết tủa - vàng H2SO4: vòng vàng không tan, dư H2SO4, tủa tan a HNO3 H2SO4 Acid hữu Ống có acid sulfosalicylic xuất kết tủa trắng nhanh b - Acid sulfosalicylic Acid tricloacetic 1.2 Kết tủa kim loại nặng - Nếu tủa cho thêm vài - giọt protein để yên lắng kết tủa xuống không cho thêm CuSO4 Kết tủa đáy ống, tủa màu xanh nhạt Tủa xanh nhạt Phản ứng kết tủa trường hợp biến tính thuận nghịch 2.1 Kết tủa phương pháp muối kết - Tủa NaCl: DD có màu xanh CuSO4 protein - tủa hết nên dịch lọc không peptid  không dương tính với phản ứng Biuret Tủa amoni sulfat: tủa trắng Tủa NaCl Tủa amoni sulfat - Lọc lấy dịch (Lọc bỏ tủa): Xếp giấy lọc thành nhiều nếp hình quạt - Lọc lấy tủa (Lọc bỏ dịch): Xếp giấy lọc thành hình V Kết 2.2 - tủa dung môi hữu Kết quả: Xuất tủa trắng Tủa trắng Protein phức tạp 3.1 Cromoprotein – điều chế hem từ hemoglobin - Lấy máu cho vào lam kính Tán thiệt mỏng giọt máu để tán Để khô Có thể dùng lamelle - Cho giọt acid acetic đđ vào đậy lại lamelle, ý không để có bọt - khí Đun nóng thấy sôi lên dừng lại để lâu cháy Quan sát vật kính 10 tìm có tinh thể vàng đậm xem vật kính 40 3.2 Phosphoprotein: Casein - Làm lâu nên làm trước - Chiết xuất casein từ sữa: + Đong sữa nước cất ống đong + Dư acid acetic tủa tan nên cho từ từ acid acetic đến xuất tủa ngưng + Mỗi lần nhỏ acid acetic lắc dung dịch + Tủa thu làm phản ứng thủy phân casein, phát acid phosphoric trước Làm xong hết tủa lại làm tiếp phản ứng Buret, - Adamkiewicz… Thủy phân casein phát acid phosphoric: + Lấy nhiều tủa đem đun tốt nhớ gắn ống sinh hàn + Khi trung hòa acid nitric cho từ từ thử với giấy quỳ tới giấy quỳ chuyển sang màu hồng Nếu cho dư acid (màu giấy quỳ hồng đậm) - làm không kết Phản ứng tìm acid phosphoric dịch thủy phân: + Kết quả: Tủa xanh rêu Nếu màu vàng cho giọt ANSA vào Tủa xanh rêu - Lưu ý: + Làm thứ tự, tỷ lệ Nên đong thể tích ống đong hút pipet chia vạch Bài 4: Lipid Lipid 1.1 Chiết xuất lecithin từ lòng đỏ trứng - Lecithin tan alcol không tan aceton - Lấy 20ml alcol etylic để đun alcol bay bớt vừa thể tích cần dùng - Đun alcol trước, alcol sôi bếp cách thủy trộn trứng vào - Gạn không lọc 1.2 Nhũ tương hóa lecithin - Nhũ tương đục có bọt 1.3 Thủy phân lecithin - Glycerol: Khi đốt nóng - Tạo thành acid béo tự do: + Ống có HCl: đục + Ống nước cất: đèn cồn thấy có sủi bọt HCl + dịch thủy phân Nước cất + dịch thủy phân - Tạo thành muối calcium không tan: Xuất tủa trắng - Định lượng triglycerid phương pháp enzym Đơn vị: mg/dl Bình thường: < 150 mg/dl Định lượng cholesterol Đơn vị: mg/dl Định lượng HDL cholesterol huyết Đơn vị: mg/dl Bình thường: HDL: > 50 mg/dl LDL: < 100mg/dl Khi hút cho vào máy ly tâm (trước ly tâm) dùng thuốc thử thuốc thử - định lượng HDL Sau ly tâm xong, dùng thuốc thử thuốc thử định lượng cholesterol Tính toán dùng hai công thức: Tính nồng độ HDL với hệ số (chỉ có OD thử OD trắng) Tính nồng độ HDL với chuẩn Bài 5: Enzyme Tính chất chung enzyme 1.1 Ảnh hưởng nhiệt độ đến - Làm lúc ống hoạt động enzym - Khi cho nước bọt vào phải cho lúc không nhấc ống nghiệm lên - khỏi thau đá hay nồi cách thủy làm chênh lệch nhiệt độ Ống 45oC nhạt màu nhất, tới ống 37oC, hai ống lại đậm màu Chủ yếu ống 45oC nhiệt độ enzyme hoạt động tốt 0oC 37oC 45oC 100oC Thử với iod gạch men: + 0oC: có màu tím + 37oC: có màu đỏ cam (đậm ống 45oC) + 45oC: có màu vàng nhạt (màu iod) + 100oC: có màu xanh (phức tạo thành iod hồ tinh bột) 1.2 Tính đặc hiệu enzyme - Đun thấy có ống chuyển đỏ lấy liền Đó ống chứa tinh bột - Đun lâu hai ống có tủa đỏ  SAI - 1.3 - Ảnh hưởng chất hoạt hóa chất ức chế lên hoạt động Tinh bột Saccarose enzyme NaCl: Màu nhạt Màu vàng nhạt iod, để lâu màu  chất hoạt hóa - CuSO4: Màu xanh đậm (màu phức iod + hồ tinh bột)  chất ức chế - Nước cất: Tím đỏ 1.4 Ảnh hưởng pH lên hoạt động enzyme - Dung dịch đệm pH 6.8: cho màu nhạt - Lượng iod cho vào ống 5.6 - 6.0 6.4 6.8 7.2 7.6 8.0 Khảo sát enzyme catalase Nghiền gan cối cho nát nhừ, nát tốt Nghiền không giã Nghiền xong cho 10ml nước cất vào Trộn Đong khoảng 6ml H2O2 lượng dịch gan lấy cho vào ống nghiệm Bịt miệng ống nghiệm Lắc ống nghiệm Lắc không - lộn ngược ống nghiệm qua lại để trộn Lắc xong lộn ngược ống nghiệm cách dứt khoát cho vào chậu nước Bỏ ngón tay Tay lại kéo thằng đứng ống nghiệm lên không kéo - nghiêng ống nghiệm làm khí thoát Chuẩn bị hai nhang, dùng đầu đỏ chọc màng nước miệng ống nghiệm, lại đốt cháy cho vào đáy ống nghiệm thấy đóm cháy - bùng chứng tỏ có oxy Định lượng GOT, GPT phương pháp động học Đơn vị: U/L Hút xong trộn cho vô máy hút đo liền không ủ Tập trung nhìn hình để đọc kết Khi hết 30s đầu kết OD Khi hình bắt đầu đếm ngược từ 120s OD thay đổi liền nên phải - - ý đọc kết Nếu ghi kết 50s dựa vào kết tính cho phút: 120s ghi kết OD tương ứng: + OD1 – 120s + OD2 – 60s + OD3 – 0s Tính toán: ∆OD1 =  OD2 - OD1 ∆OD2 =  OD3 – OD2 3.1 Định lượng transaminase GOT - GOT bình thường huyết tương: - + Nam: 10 – 50 (U/L) + Nữ: 10 - 35 (U/L) GOT tăng chủ yếu trường hợp: Nhồi máu tim, bệnh nhu mô gan, bệnh xương, thiếu oxy mô… 3.2 Định lượng traansaminase GPT - GPT bình thường huyết tương: + Nam: 10 – 50 (U/L) + Nữ: 10 – 35 (U/L) - GPT tăng bệnh gan: viêm gan cấp, mạn, hoại tử gan, tắc mật … Bài 6: Chuyển hóa hemoglobin chuyển hóa acid nucleic - - Định lượng Bilirubin toàn phần Đơn vị: µmol/L Không có ống chuẩn Chỉ làm ống trắng ống thử Mẫu huyết có màu vàng Hút thuốc thử: theo thứ tự R1 tới R2: 500µl R1 + 500µl R2 Giá trị bình thường: + Bilirubin toàn phần huyết thanh: – 17 µmol/L + Bilirubin trực tiếp: – 13 µmol/L Bilirubin huyết tăng hội chứng vàng da: + Vàng da trước gan: Do phá hủy nhiều hồng cầu nguyên nhân: Tan máu di truyền bệnh lách, hồng cầu hình liềm Tan máu mắc phải truyền máu, thuốc gây tan máu, nhiễm độc chì Vàng da sinh lý trẻ sơ sinh + Vàng da gan: Khi tế bào gan bị tổn thương viêm gan virus, nhiễm độc + Vàng da sau gan gọi vàng da tắc mật: Thường gặp sỏi - mật, ung thư đường mật, ung thư tụy, đường mật bị hẹp Kết thầy: 23,6256 µmol/L Định lượng Bilirubin trực tiếp Đơn vị: µmol/L mg/dl Không có ống chuẩn Chỉ làm ống trắng ống thử Canh thời gian xác phút Bình thường: Bilirubin trực tiếp: – 13 µmol/L Sự thủy phân lipid lipase Cho Natri carbonat vào lượng hai ống Ống có dịch tụy màu nhạt Dịch tụy - Nước cất Định tính muối mật Ở mặt tiếp giáp hai chất lỏng có lớp màu đỏ Dịch mật + saccarose - Lớp đỏ Định lượng acid uric Đơn vị: mg/dl Kết thầy: 0,657 mg/dl H2SO4 Bình thường: Acid uric huyết thanh: + Nam: 3,4 – 7,0 mg/dl + Nữ: 2,4 – 5,7 mg/dl Bài 7: Hóa sinh máu - Định lượng calcium phương pháp đo màu trực tiếp o – cresolphtalein Đơn vị: mmol/L Thuốc thử: 500 µl R1 + 500 µl R2 Kết thầy: 2,045 - 2,32 mmol/L Định lượng sắt huyết (phương pháp nitro – paps) Đơn vị: µmol/L Kết thầy: 20,91 – 25,039 µmol/L Định lượng Clo huyết Đơn vị: mmol/L Kết qủa thầy: 85 – 88 mmol/L Định lượng hoạt độ men amylase huyết Phương pháp động học Đơn vị: U/L Không làm ống trắng Chỉ làm ống thử Kết thầy: 2650 – 2780 U/L Canh xác thời gian Hút xong trộn cho vô máy hút đo liền không ủ Tập trung nhìn hình để đọc kết Khi hết 30s đầu kết OD Khi hình bắt đầu đếm ngược từ 120s OD thay đổi liền nên phải - - ý đọc kết 120s ghi kết OD tương ứng: + OD1 – 120s + OD2 – 60s + OD3 – 0s Tính toán: ∆OD1 =  OD2 - OD1 ∆OD2 =  OD3 – OD2 Bài 8: Hóa sinh thận nước tiểu Xét nghiệm nước tiểu que nhúng - Xác định bệnh lý: + Nhóm 1: Bạch cầu (Leu), Nitrit (Nit), pH bất thường  Nhiễm trùng đường tiểu + Nhóm 2: Glucose (Glu), Ceton (Ket) bất thường  Tiểu đường + Nhóm 3: Bilirubin (Bil), Uroinogen (Uro) bất thường  Bệnh gan + Nhóm 4: Protein (Pro), Máu (Blo) bất thường  Bệnh thận viêm - ống thận, sỏi thận … Định lượng creatinin Đơn vị: mg/dl Kết thầy: 0,63 – 0,72 mg/dl Thuốc thử: 500 µl R1 + 500 µl R2 Creatinin máu tăng: Chức thận suy giảm (suy thận), viêm cầu thận, viêm ống thận, sỏi thận, ung thư tuyến tiền liệt, khối u bàng quang, ung - thư tử cung, suy tim Creatinin giảm: có thai, suy giảm khối lượng Định lượng ure phương pháp dùng enzym Đơn vị: mg/dl Kết thầy: 5,9 – 9,0 mg/dl Tập trung nhìn hình để đọc kết 60s ghi kết OD tương ứng: + OD1 – 60s + OD2 – 0s Tính toán: ∆OD =  OD2 - OD1 Định lượng amylase nước tiểu phương pháp Wohlgemuth Khi hút 1ml ống cho vào ống xong nhớ tráng ống hút Lần lượt với - ống khác Nhớ hút 1ml ống bỏ không cho vào ống Cách thủy 30 phút Cách tính: - - Với n số thứ tự ống cuối không màu Ví dụ: Ống ống cuối không màu  Hoạt độ amylase = đơn vị Wohlgemuth [...]... Hút xong trộn đều cho vô máy hút đo liền không ủ Tập trung nhìn màn hình để đọc kết quả Khi hết 30s đầu sẽ là kết quả OD 1 Khi đó màn hình bắt đầu đếm ngược từ 120s OD sẽ thay đổi liền nên phải - - chú ý đọc kết quả 120s ghi được 3 kết quả OD tương ứng: + OD1 – 120s + OD2 – 60s + OD3 – 0s Tính toán: ∆OD1 =  OD2 - OD1 ∆OD2 =  OD3 – OD2 Bài 8: Hóa sinh thận và nước tiểu 1 Xét nghiệm nước tiểu bằng... lượng traansaminase GPT - GPT bình thường trong huyết tương: + Nam: 10 – 50 (U/L) + Nữ: 10 – 35 (U/L) - GPT tăng trong các bệnh gan: viêm gan cấp, mạn, hoại tử gan, tắc mật … Bài 6: Chuyển hóa hemoglobin và chuyển hóa acid nucleic 1 - - Định lượng Bilirubin toàn phần Đơn vị: µmol/L Không có ống chuẩn Chỉ làm ống trắng và ống thử Mẫu huyết thanh có màu vàng Hút thuốc thử: theo thứ tự R1 rồi tới R2: 500µl... da trước gan: Do phá hủy quá nhiều hồng cầu bởi những nguyên nhân: Tan máu di truyền bệnh về lách, hồng cầu hình liềm Tan máu mắc phải do truyền máu, do thuốc gây tan máu, nhiễm độc chì Vàng da sinh lý ở trẻ sơ sinh + Vàng da tại gan: Khi các tế bào gan bị tổn thương trong viêm gan virus, nhiễm độc + Vàng da sau gan còn gọi là vàng da do tắc mật: Thường gặp nhất do sỏi 2 3 - mật, ung thư đường mật,... đỏ Dịch mật + saccarose 5 - Lớp đỏ Định lượng acid uric Đơn vị: mg/dl Kết quả của thầy: 0,657 mg/dl H2SO4 Bình thường: Acid uric trong huyết thanh: + Nam: 3,4 – 7,0 mg/dl + Nữ: 2,4 – 5,7 mg/dl Bài 7: Hóa sinh máu 1 2 3 4 - Định lượng calcium bằng phương pháp đo màu trực tiếp o – cresolphtalein Đơn vị: mmol/L Thuốc thử: 500 µl R1 + 500 µl R2 Kết quả của thầy: 2,045 - 2,32 mmol/L Định lượng sắt trong huyết... thấy có 1 ống chuyển đỏ là lấy ra liền Đó là ống chứa tinh bột - Đun lâu cả hai ống đều có tủa đỏ  SAI - 1.3 - Ảnh hưởng của chất hoạt hóa và chất ức chế lên hoạt động của Tinh bột Saccarose enzyme NaCl: Màu nhạt nhất Màu vàng nhạt của iod, để lâu mất màu  chất hoạt hóa - CuSO4: Màu xanh đậm (màu của phức iod + hồ tinh bột)  chất ức chế - Nước cất: Tím đỏ 1.4 Ảnh hưởng của pH lên hoạt động của enzyme... nghiệm, cây còn lại đốt cháy cho vào đáy ống nghiệm sẽ thấy đóm sẽ cháy 3 - bùng chứng tỏ có oxy Định lượng GOT, GPT bằng phương pháp động học Đơn vị: U/L Hút xong trộn đều cho vô máy hút đo liền không ủ Tập trung nhìn màn hình để đọc kết quả Khi hết 30s đầu sẽ là kết quả OD 1 Khi đó màn hình bắt đầu đếm ngược từ 120s OD sẽ thay đổi liền nên phải - - chú ý đọc kết quả Nếu chỉ ghi được kết quả ở 50s thì... tuyến tiền liệt, khối u bàng quang, ung 4 - thư tử cung, suy tim Creatinin giảm: có thai, suy giảm khối lượng cơ Định lượng ure bằng phương pháp dùng enzym Đơn vị: mg/dl Kết quả của thầy: 5,9 – 9,0 mg/dl Tập trung nhìn màn hình để đọc kết quả 60s ghi được 2 kết quả OD tương ứng: + OD1 – 60s + OD2 – 0s Tính toán: ∆OD =  OD2 - OD1 Định lượng amylase trong nước tiểu bằng phương pháp Wohlgemuth Khi hút 1ml ... tủa đỏ  SAI - 1.3 - Ảnh hưởng chất hoạt hóa chất ức chế lên hoạt động Tinh bột Saccarose enzyme NaCl: Màu nhạt Màu vàng nhạt iod, để lâu màu  chất hoạt hóa - CuSO4: Màu xanh đậm (màu phức iod... 35 (U/L) - GPT tăng bệnh gan: viêm gan cấp, mạn, hoại tử gan, tắc mật … Bài 6: Chuyển hóa hemoglobin chuyển hóa acid nucleic - - Định lượng Bilirubin toàn phần Đơn vị: µmol/L Không có ống chuẩn... hồng cầu hình liềm Tan máu mắc phải truyền máu, thuốc gây tan máu, nhiễm độc chì Vàng da sinh lý trẻ sơ sinh + Vàng da gan: Khi tế bào gan bị tổn thương viêm gan virus, nhiễm độc + Vàng da sau