Bài Giảng Kỹ Thuật Bế Bào Gốc

XÁC ĐỊNH MỤC TIÊU TÁCH CHIẾT TỪ MƠ THU NHẬN THƠ - TINH KIỂM TRA NHIỀU BƯỚC LẬP LÝ LỊCH DỊNG TB BẢO QUẢN - SỬ DỤNG TBG Marker (mark): dấu, nhãn hiệu CD: Cluster Designation (cụm, định) Các marker ung thư Các marker TBG phơi Các marker TBG trung mơ Các marker TBG nội mơ Các marker TBG mơ Các marker TBG tạo máu … Thành phần Nồng độ Thành phần Nồng độ + Na 142 mEq/l -SO mEq/l mEq/l Glucose 90 mg/dl 2,4 mEq/l Acid amin 30 mg/dl 1,2 mEq/l Cholesterol 0,15 g/dl 103 mEq/l Phospholipid 0,15 g/dl HCO 28 mEq/l Mỡ trung tính 0,18 g/dl Phosphat mEq/l Protein g/dl K + ++ Ca Mg Cl ++ - (TÌM KIẾM - THU NHẬN) TÌM Ở ĐÂU ? 1- Ngân hàng (tế bào, mơ) 2- Phơi (người, động vật) 3- Mơ (người bệnh, người hiến) + Mềm (máu, tuỷ, dịch ối…) + Cứng (Mơ mỡ, khối u, mơ nhũ nhi, mơ khác…) 4- Biến đổi gen TB soma My - SC Hiến tặng Ngân hàng Động vật biến đổi gien Sinh phẩm sản (nhũ nhi) Thai bỏ (từ bệnh viện, viện thẩm mỹ ) Thu nhận mẫu mơ chứa TBG quan tâm Xử lí sơ mơ Tách tế bào thành tb đơn Thu nhận TBG từ huyền phù Tính bám dính PHÂN LẬP ASc Tính phân chia Marker chun biệt Các tính chất khác Phải tách rời tế bào ? Loại bỏ giá thể mơ Loại bỏ tín hiệu mơ TB SẴN SÀNG Loại bỏ vi mơi trường cũ CHO MỘT CƠ Tạo khơng gian CHẾ HOẠT Giải phóng protein bề mặt ĐỘNG MỚI Thu TB ứng viên Loại bỏ nhân tố tạp MƠ CỨNG Tách từ MƠ LỎNG HỘP NI TRƯỚC ĐĨ VK Hữu H2O Virus Thụ thể Protein G Thụ thể kênh ion Protein cầu Phospholipid Protein xoắn α Biệt hóa tạo tim CLIP 10 TẠO CÁC YẾU TỐ BIỆT HÓA TBG THEO HƯỚNG MONG MUỐN (directed differentiation) - Một số hormon, cytokine, 2+ vitamin, ion Ca … - Acid retinoic, DMSO, Acid ascorbic 5-Azacytidine Dexamethasone Trong nuôi cấy, chất tác động lên marker bề mặt TBG- qua hoạt hóa gen Chuột làm suy giảm miễn dòch CLIP 11 - Xung điện, - Các lực học xử lý nhiệt… Làm giảm nhiệt độ tế bào tim phôi chuột tăng biểu TGF-β Hệ chiến lược gen hoạt động đưa vào gen TBG sau kích hoạt biệt hoá Biệt hóa đồng nuôi cấy Các TBG nuôi cấy với Tb A quần thể tb (hay đang) biệt hoá Tb A chết TBG Hai loại tb tương tác dẫn đến truyền tín hiệu phân tử cách hiệu gây cảm ứng biệt hoá TBG thành kiểu tb quan tâm (trong in vivo: Tb A mô thể người bệnh) Tb cần thu nhận Làm lạnh thuỷ tinh hoá Tb huyền phù môi trường thích hợp (yếu tố phụ trợ đông lạnh thường DMSO) 0 Nguyên tắc bước: -40 C, -80 C, cuối -196 C nitơ lỏng ĐIỀU HỊA HOẠT ĐỘNG NGUN LÝ CHUNG CỦA CÁC CON ĐƯỜNG TRUYỀN TÍN HIỆU TẾ BÀO 94 Làm thay đổi tính thấm màng tb Kênh ion (Protein G) F R Màng tế bào Adenyl cylase ATP 3’,5’- cAMP + PP 5’- AMP Phospho-diesterase (Cơ chế thông tin nội bào) Hoạt hóa enzyme (thông tin nội bào) Các protein kinase F Màng tế bào E R cAMP ADP E’ + ATP Cơ chất A Cơ chất A bất hoạt hoạt động Tạo dòng thác E’ Phosphoryl hóa VÀO NHÂN TB E R F cAMP T F T + ATP Màng tế bào ARNm F Phosphoryl hóa Rn Rn Protein A( F M-ase Phiên mã ... DỤNG TBG Marker (mark): dấu, nhãn hiệu CD: Cluster Designation (cụm, định) Các marker ung thư Các marker TBG phơi Các marker TBG trung mơ Các marker TBG nội mơ Các marker TBG mơ Các marker TBG. .. (nhũ nhi) Thai bỏ (từ bệnh viện, viện thẩm mỹ ) Thu nhận mẫu mơ chứa TBG quan tâm Xử lí sơ mơ Tách tế bào thành tb đơn Thu nhận TBG từ huyền phù Tính bám dính PHÂN LẬP ASc Tính phân chia Marker... THU NHẬN TBG PHÔI Fertilization MEF Zygote Blastomere feeder layer Embryo (Blastocyst) ES - Phôi thường (EN) - Phôi ngân hàng (G & E-B) - Phôi hỗ trợ SS (ART) - Phôi nhân (E-cloning) TBG CHỈ CÓ