Nghiên cứu ảnh hưởng của một số elicitor lên khả năng tích lũy solasodine ở tế bào in vitro của cây cà gai leo

Theo số liệu thống kê ngành Y tế, năm Việt Nam tiêu thụ từ 30 50 loại dược liệu khác để sử dụng y học cổ truyền, làm nguyên liệu cho công nghiệp dược xuất Trong đó, 2/3 khối lượng khai thác từ nguồn thuốc mọc tự nhiên trồng trọt nước Khối lượng dược liệu thực tế bao gồm từ 200 loài khai thác đưa vào thương mại có tính phổ biến Bên cạnh đó, nhiều loài dược liệu khác thu hái, sử dụng chỗ cộng đồng chưa có số thống kê cụ thể [10] Cây cà gai leo (Solanum hainanense Hance) gọi cà quạnh, cà gai dây, cà quýnh, cà vạnh, chẻ nan (Tày), b’rongoon (Ba Na), có tên khoa học khác Solanum procumben Lour., thuộc họ Cà (Solanaceae) [18] Trong thành phần hóa học cà gai leo, solasodine hợp chất ch nh, đ y steroid alkaloid t m thấy khoảng 250 loài c y khác thuộc họ Cà, đ c biệt chi Solanum, ch ng thư ng tồn dạng glycoside Các nghiên c u trước đ y cho thấy solasodine có hoạt t nh kháng viêm bảo vệ gan, chống lại tế bào ung thư (đ c biệt ngăn ngừa ung thư da) Solasodine tiền chất để sản xuất loại corticosteroid, testosteroid thuốc tránh thai Ngoài ra, ch ng có tác dụng chống oxy hóa, ngăn ngừa xơ gan [14] Gần đ y, nghiên c u cho thấy solasodine có tác dụng bất hoạt virus gây bệnh mụn giộp ngư i Herpes simplex, H zoster H genitalis (Chating cs), bảo vệ chuột chống lại xâm nhiễm vi khuẩn Salmonella typhimurium, giảm lượng cholesterol máu… [64] Tuy nhiên, từ trước đến cà gai leo khai thác chủ yếu từ nguồn hoang dại, ch ng thư ng phân tán manh múm chất lượng không đồng đều, trữ lượng có giới hạn cạn kiệt bị thu hái bừa bãi Vì thế, nguồn nguyên liệu không đủ để đáp ng cho việc nghiên c u điều trị Nuôi cấy mô tế bào thực vật lĩnh vực ng dụng đạt nhiều thành công bật công nghệ sinh học thực vật Phương pháp với ưu điểm vượt trội mở tiềm lớn để tăng thu sinh khối th i gian ngắn, hàm lượng hợp chất th cấp (HCTC) cao, chủ động dễ điều khiển quy trình sản xuất tạo nguồn nguyên liệu phục vụ việc tách chiết hoạt chất sinh học quy mô công nghiệp, góp phần giải khó khăn nói [63] Elicitor định nghĩa chất mà đưa với nồng độ nhỏ vào hệ thống tế bào sống khởi động ho c cải thiện sinh tổng hợp HCTC tế bào [65] Elicitor thực vật báo hiệu việc hình thành HCTC, bổ sung elicitor vào môi trư ng nuôi cấy phương th c để thu sản phẩm HCTC có hoạt tính sinh học cách hiệu Sử dụng elicitor sinh học phi sinh học để kích thích hình thành HCTC nuôi cấy tế bào vừa rút ngắn th i gian lại đạt suất cao [42] Nghiên c u nuôi cấy tế bào huyền phù có bổ sung elicitor thực thành công số đối tượng c y nh n s m (Panax ginseng) [60], [99], rau má (Centella asiatica) [57], giây dác (Cayratia trifolia) [87], sen tuyết (Saussurea medusa) [106], [112], Pueraria tuberosa [80].… Các elicitor thư ng sử dụng nghiên c u methyl jasmonate (MeJA), salicylic acid (SA), dịch chiết nấm men (YE), jasmonic acid (JA), ethrel, chitosan [57], [62], [65] Hiện có số nghiên c u sản xuất glycoalkaloid toàn phần nói chung solasodine nói riêng từ cà gai leo, nhiên hiệu suất chưa cao Nghiên c u khả t ch lũy glycoalkaloid toàn phần callus cà gai leo cho thấy hàm lượng đạt cao 128,17 mg/g khối lượng khô sau tuần nuôi cấy [56] Các tác giả khảo sát khả t ch lũy solasodine tế bào cà gai leo kết cho thấy hàm lượng cao thu 121,01 mg/g khối lượng khô sau tuần nuôi cấy [59] Những nghiên c u thu kết hàm lượng glycoalkaloid toàn phần hay solasodine callus tế bào cao so với tự nhiên, nhiên hiệu suất chưa cao Sử dụng elicitor thực vật cải thiện vấn đề Xuất phát từ đó, ch ng tiến hành đề tài: Nghiên cứu ả số elicitor lên khả ă g ưởng c a lũy sol sod e t bào in vitro c a cà gai leo (Solanum hainanense Hance) p dụng phương pháp nuôi cấy tế bào huyền phù tạo nguồn nguyên liệu cho việc tách chiết solasodine, cung cấp nguồn dược chất tự nhiên cho nghiên c u lĩnh vực y học Các kết đề tài làm sở cho việc xây dựng qui trình sản xuất solasodine từ sinh khối tế bào để ng dụng lĩnh vực dược phẩm sau Xây dựng quy trình sản xuất solasodine hiệu suất cao từ nuôi cấy in vitro tế bào cà gai leo (Solanum hainanense Hance) g o Kết nghiên c u luận án cung cấp dẫn liệu khoa học có giá trị khả t ch lũy solasodine tế bào cà gai leo nuôi cấy có bổ sung elicitor Đồng th i luận án tài liệu tham khảo hữu ích cho nghiên c u giảng dạy lĩnh vực sản xuất hoạt chất sinh học đư ng nuôi cấy tế bào thực vật Đề tài hướng nghiên c u có tiềm ng dụng lĩnh vực sản xuất hoạt chất sinh học dùng làm dược liệu nuôi cấy tế bào thực vật, góp phần vào việc bảo vệ chăm sóc s c khỏe cộng đồng g gg l Đ y công tr nh Việt Nam nghiên c u ảnh hưởng số elicitor lên khả sinh tổng hợp solasodine nuôi cấy tế bào cà gai leo Kết luận án đáng tin cậy sử dụng để tiếp tục nghiên c u phát triển sản xuất solasodine quy mô lớn g ứ Các thí nghiệm tiến hành điều kiện in vitro Phòng thí nghiệm Hợp chất th cấp, Viện Tài nguyên, Môi trư ng Công nghệ sinh học, Đại học Huế từ tháng 11 năm 2011 đến tháng 11 năm 2014 C ươ g C C 1.1 C C Ừ C C Phương pháp nuôi cấy tế bào thực vật tr nh điều khiển phát sinh hình thái tế bào thực vật nuôi cấy tách r i điều kiện in vitro có định hướng thành cấu trúc biệt hóa hay chưa biệt hóa tế bào sở tính toàn tế bào thực vật [42] Nuôi cấy tế bào thực vật có tiềm lớn việc cải thiện khả tổng hợp HCTC có giá trị y dược, gia vị, hương liệu màu nhuộm mà sản xuất chúng từ tế bào vi sinh vật ho c tổng hợp phương pháp hóa học Sự phát triển HCTC quan trọng thương mại kết mong đợi lĩnh vực nghiên c u Ưu điểm kỹ thuật nuôi cấy tế bào thực vật cung cấp liên tục nguồn nguyên liệu để tách chiết tỷ lệ lớn lượng hoạt chất từ tế bào thực vật nuôi cấy [64] Một nhân tố quan trọng ảnh hưởng đến việc sản xuất HCTC từ tế bào thực vật phân hóa hình thái Nhiều HCTC sản xuất suốt trình phân hóa tế bào, ch ng tìm thấy mô có khả ph n hóa cao rễ, hoa Do phân hóa hình thái trưởng thành không xuất nuôi cấy tế bào nên chất th cấp có khuynh hướng ngưng tạo thành trình nuôi cấy Tuy nhiên, tế bào không phân hóa nuôi cấy huyền phù thư ng tạo thành khối vài trăm tế bào, tế bào khối có tiếp xúc với môi trư ng khác tế bào bên nên phân hóa xuất m c độ khối để tạo thành HCTC [7] Nuôi cấy tế bào thực vật sinh trưởng chậm so với vi khuẩn, th i gian nh n đôi khoảng 24-72 gi Sự khác dẫn đến việc phải sử dụng điều kiện vô trùng tuyệt đối cho nuôi cấy tế bào thực vật Thông thư ng, tế bào nuôi cấy không quang hợp, phải bổ sung đư ng làm nguồn carbon Đ y nguồn lượng hiệu để sản xuất HCTC Nuôi cấy dịch huyền phù tế bào nhanh so với nuôi cấy callus hay mô, quan; thao tác dễ dàng có khả tương thích với thiết bị nuôi cấy tế bào sử dụng cho vi sinh vật [79] 1.1.1 C ươ g y o cv t 1.1.1.1 Nuôi cấy mẻ Nuôi cấy mẻ phương pháp nuôi cấy mà suốt th i gian nuôi cấy không thêm vào chất dinh dưỡng không loại bỏ sinh khối hay sản phẩm cuối tr nh trao đổi chất Do vậy, điều kiện môi trư ng thay đổi theo th i gian, mật độ tế bào tăng lên nồng độ chất giảm xuống Nuôi cấy mẻ xem hệ thống đóng, quần thể tế bào sinh trưởng phát triển theo số pha định với điều kiện đ c trưng [8] Trước nuôi cấy mẻ, cần thiết phải tiến hành cấy chuyển Quá trình nuôi cấy b nh tam giác, sau tế bào nuôi cấy đưa vào hệ lên men nhỏ, cấy chuyển vào hệ lên men lớn C tiếp tục đạt thể tích thích hợp Điều kiện bên hệ lên men thay đổi chu kỳ nuôi cấy mẻ, với sản phẩm nồng độ tế bào tăng chất dinh dưỡng cạn kiệt dần Nhưng thành phần bổ sung vào chu kỳ nuôi cấy Tất mẻ nuôi cấy thu hồi sản phẩm th cấp đạt giá trị cực đại [8] Các bình ch a mẫu đ t máy lắc với tốc độ 50-200 vòng/phút ho c nuôi cấy hệ lên men có cánh khuấy sục khí tạo thuận lợi cho trao đổi khí, lưu thông môi trư ng dinh dưỡng b nh nuôi gia tăng tiếp xúc tế bào nuôi cấy với môi trư ng Trong đó, nuôi cấy dịch huyền phù ch a tế bào khối tế bào sinh trưởng ph n tán môi trư ng lỏng Thư ng khởi đầu cách đ t khối callus dễ vỡ vụn môi trư ng lỏng chuyển động (lắc ho c khuấy) [8] Trong trình nuôi cấy, tế bào tách khỏi mẫu chuyển động xoáy môi trư ng Sau th i gian ngắn nuôi cấy, dịch huyền phù hỗn hợp tế bào đơn, cụm tế bào với k ch thước khác nhau, mảnh lại mẫu cấy tế bào chết Tuy nhiên, có dịch huyền phù hoàn hảo, ch a tỷ lệ cao tế bào đơn tỷ lệ nhỏ cụm tế bào M c độ tách r i tế bào nuôi cấy phụ thuộc vào đ c tính khối tế bào xốp điều chỉnh cách thay đổi thành phần môi trư ng [63] 1.1.1.2 Nuôi cấy mẻ đ ạn Phương pháp nuôi cấy mẻ hai giai đoạn áp dụng nhiều loại tế bào thực vật, thành công sản xuất hợp chất shikonin Trong phương pháp này, hai môi trư ng sử dụng Trong hệ lên men đầu tiên, điều kiện nuôi cấy tối ưu hóa cho sản xuất sinh khối tế bào Sau đó, tế bào tập trung đưa vào hệ lên men th hai ch a môi trư ng kích thích tổng hợp sản phẩm th cấp [8] 1.1.1.3 Nuôi cấy mẻ có cung cấp d dưỡng Đ y hình th c khác hệ thống nuôi cấy mẻ Sau tế bào nuôi cấy sinh trưởng cực đại, chất dinh dưỡng dần cạn kiệt, lúc chất dinh dưỡng cung cấp thêm vào hệ lên men mà không loại bỏ dịch nuôi cũ Trong hệ lên men này, có hệ thống điều khiển hàm lượng chất dinh dưỡng thêm vào giúp hạn chế hay tăng cư ng tốc độ sinh trưởng ho c t ch lũy HCTC Tuy nhiên, trư ng hợp thể tích dịch nuôi tăng lên, môi trư ng dinh dưỡng dạng đậm đ c sử dụng để hạn chế vấn đề Đ y gọi nuôi cấy mẻ toàn thể tích hệ lên men cuối thu hồi theo mẻ [8] 1.1.1.4 Nuôi cấy liên tục Nhược điểm nuôi cấy mẻ tốn th i gian khử trùng cấy chuyển Nuôi cấy liên tục phương pháp kinh tế giúp kéo dài th i gian nuôi cấy hay kéo dài pha log vài tháng Ở hệ thống này, dòng vào (môi trư ng mới) với dòng (môi trư ng + tế bào hợp chất trao đổi) để giữ thể tích không đổi, điều kiện hệ thống trì ổn định [79] Do vậy, phương pháp nuôi cấy liên tục k ch thước trung bình, trạng thái sinh lý tế bào mà môi trư ng nuôi cấy không đổi không phụ thuộc vào th i gian, điều m t tạo điều kiện nghiên c u sinh trưởng sinh lý tế bào, m t khác cải thiện trình sản xuất tế bào qui mô công nghiệp [8] Bản chất trình nuôi cấy liên tục trạng thái ổn định có thuận lợi dễ dàng điều chỉnh hệ lên men mẻ Trong suốt th i gian nuôi cấy mẻ, nhiệt lượng, sản xuất kiềm ho c acid, tiêu hao oxygen biến thiên từ tốc độ thấp lúc bắt đầu tới tốc độ cao suốt pha log muộn Vì vậy, điều chỉnh môi trư ng hệ thống khó nhiều so với trình liên tục trạng thái ổn định tốc độ sản xuất tiêu thụ số [79] Về lý thuyết, nuôi cấy liên tục phương pháp nuôi cấy đầy triển vọng để thu sản phẩm với nồng độ cao; Seki cs (1997), Phisalaphong Linden (1999) nghiên c u tăng hiệu suất paclitaxel nuôi cấy liên tục tế bào Taxus cuspidata sử dụng nuôi cấy bán liên tục tế bào T canadensis [94] Tuy nhiên, nhiều hạn chế nuôi cấy liên tục Các tế bào trạng thái sinh lý không đổi, t ch lũy HCTC thư ng diễn tế bào có tốc độ sinh trưởng thấp Vì vậy, kỹ thuật nên áp dụng cho sản phẩm trao đổi sản xuất tr nh sinh trưởng Nhược điểm th hai nuôi cấy liên tục th i gian nuôi cấy dài làm tăng khả dễ bị nhiễm vi sinh vật (Ramawat Merillon, 2004) Nuôi cấy mô tế bào thực vật tiêu biểu cho tiềm cải thiện sản xuất hoạt chất sinh học có giá trị Khả ng dụng phương pháp thể qua việc có nhiều công trình nghiên c u công bố Những năm gần đ y, phát triển HCTC quan trọng thương mại kết mong đợi lĩnh vực nghiên c u này, đ c biệt khả thay đổi nguồn lợi hoạt chất sinh học từ thực vật công nghệ nuôi cấy mô tế bào Ưu m t nguyên lý công nghệ cung cấp liên tục nguồn nguyên liệu để tách chiết tỷ lệ lớn lượng dược chất từ tế bào thực vật nuôi cấy [64] 1.1 ả ứ p ấ ấp Hiện tượng trao đổi chất th cấp công nhận từ giai đoạn sớm thí nghiệm thực vật đại Trong công trình xuất năm 1873, Julius Sachs, ngư i tiên phong sinh lý thực vật, mô tả sau: "Ch ng ta rõ sản phẩm phụ tr nh trao đổi chất hợp chất tạo trao đổi chất, ch ng không sử dụng cho việc hình thành tế bào Vai trò quan trọng khác hợp chất việc kiểm soát bên thực vật chưa biết đến" Sachs không đề cập đến ch c sản phẩm phụ mà ngày biết đến HCTC (dẫn theo Neumannn, 2009) [66] Các sản phẩm trao đổi th cấp thư ng chiếm lượng nhỏ (nhỏ 1% trọng lượng khô) độc lập cao th i kỳ sinh lý phát triển thực vật M c dù vai trò HCTC dư ng không thừa nhận việc trì trình sống thực vật - nơi mà ch ng tổng hợp, chúng lại có vai trò quan trọng tương tác thực vật với môi trư ng Nghiên c u chất trao đổi th cấp thực chất lĩnh vực hấp dẫn sinh lý học thực vật nói riêng hay thực vật học nói chung [66] Các HCTC có tác dụng dược lý ho c độc t nh đến ngư i động vật gọi hoạt chất sinh học thực vật Hoạt chất sinh học điển hình thực vật h nh thành HCTC [27] 1.1.2.2 Vai trò củ p ấ ấp HCTC sản xuất thể thực vật bên cạnh đư ng sinh tổng hợp chuyển hóa sơ cấp hợp chất đ ch tr nh sinh trưởng phát triển (như carbohydrate, amino acid, protein lipid) Ch ng xem sản phẩm hóa sinh "dự trữ" tế bào thực vật không cần thiết cho ch c hàng ngày Trong hệ thống phát sinh loài, hoạt chất sinh học th cấp thực vật tổng hợp cách ngẫu nhiên ch ng có vai trò định Một số chúng có khả nắm giữ vai trò quan trọng đ i sống thực vật Ví dụ, flavonoid bảo vệ chống lại gốc tự sinh trình quang hợp; terpenoid thu hút côn trùng thụ phấn, phát tán hạt, ho c c chế cạnh tranh loài thực vật; alkaloid giúp tránh công động vật ăn cỏ ho c loại côn trùng (phytoalexin) HCTC có tác dụng phát tín hiệu phân tử tế bào ho c mang ch c khác thể thực vật Việc sản xuất HCTC thực vật thư ng tuân theo quy luật Do đó, hầu hết loài thực vật, loài c y lương thực phổ biến có khả sản xuất loại hợp chất Tuy nhiên, loài thực vật có độc tính ho c dược t nh điển hình ch a hoạt chất sinh học mạnh với nồng độ cao so với loại c y lương thực [27] Tế bào thực vật sử dụng thành công nhà máy sản xuất lượng lớn HCTC điều kiện cụ thể [66] Sản xuất HCTC nuôi cấy tế bào thực vật giúp khắc phục khó khăn phương pháp truyền thống r t ngắn th i gian, giảm chi phí nhân công, vấn đề m t thu lượng lớn sản phẩm mong muốn Ngày nay, phương pháp ng dụng rộng rãi quy mô lớn ngày có nhiều nghiên c u chuyên sâu nhằm điều khiển để tăng hàm lượng HCTC t ch lũy tế bào thực vật nuôi cấy Các nghiên c u cho thấy nuôi cấy tế bào thực vật có khả sản xuất sản phẩm th cấp với hàm lượng lớn so với chất chiết từ tự nhiên (Bảng 1.1) [63] Ưu điểm chúng cung cấp sản phẩm cách liên tục đáng tin cậy dựa sở: - Tổng hợp HCTC có giá trị thực điểu khiển yếu tố môi trư ng nuôi cấy, độc lập với khí hậu thổ nhưỡng - Loại bỏ ảnh hưởng sinh học đến sản xuất HCTC tự nhiên - Chọn giống trồng cho nhiều loại HCTC với sản lượng cao - Với việc tự động hóa, điều khiển sinh trưởng điều hòa trình chuyển hóa tế bào, chi phí giảm lượng sản phẩm tăng lên - Kiểm soát chất lượng hiệu suất sản phẩm - Một số sản phẩm trao đổi chất từ dịch nuôi cấy huyền phù có chất lượng cao c y hoàn chỉnh [64] Bảng 1.1 Sản phẩm thứ c p từ nuôi c y t bào th c v t so sánh v i t nhiên [63] Hiệu su t (% dw) HCTC Loài th c v t Nuôi c y Cây t nhiên t bào Shikonin Lithospermum erythrorhizon 20,00 (s) 1,50 Ginsenoside Panax ginseng 27,00 (c) 4,50 Anthraquinones Morinda citrifolia 18,00 (s) 2,20 Ajmalicine Catharanthus roseus 1,00 (s) 0,30 Rosmarinic acid Coleus blumeii 15,00 (s) 3,00 Ubiquinone-10 Nicotiana tabacum 0,036 (s) 0,0003 Diosgenin Dioscorea deltoides 2,00 (s) 2,00 Berberine Thalictrurn minor 10,00 (s) 0,01 Berberine Coptis japonica 10,00 (s) 2,00-4,00 Anthraquinone Galium verum 5,40 (s) 1,20 Anthraquinone G aparbze 3,80 (s) 0,20 Nicotine N tabacum 3,40 (c) 2,00 Bisoclaurine Stephania cepharantha 2,30 (s) 0,80 Tripdiolide Tripterygium wilfordii 0,05 (s) 0,001 * Chú thích: (c): nuôi cấy callus; (s): nuôi cấy huyền phù 1.1 C g ứ sả ứ g y o Để sản xuất sản phẩm th cấp từ thực vật, mô thực vật ngoại sinh từ hoàn chỉnh nuôi cấy huyền phù điều kiện vô trùng Nhiều sản phẩm trao đổi chất sản xuất từ nuôi cấy dịch huyền phù có chất lượng cao hoàn chỉnh [42] Các HCTC không gia vị, chất tạo màu, tạo mùi mà hầu hết dược liệu Ở nước ta, số dược liệu nghiên c u tách chiết từ tế bào thực vật Chẳng hạn, vincristin, vinblastin từ tế bào dừa cạn, solasodine từ tế bào cà gai leo, curcumin từ tế bào nghệ đen, asiaticoside từ tế bào rau má … Cây dừa cạn (Catharanthus roseus) loài c y dược liệu 10 t ch lũy tối đa 0,143 µM [104] Sanschez cs (2005) nghiên c u tích lũy silymarin nuôi cấy tế bào cúc gai (Silybum marianum (L.) Gaertn) elicitor thực vật YE MeJA Hiệu thu mẫu có bổ sung MeJA cao gấp 10 lần, YE cao gấp lần so với mẫu không bổ sung MeJA YE [91] Ở chiều ngược lại, số công trình nghiên c u lại cho cảm ng tác nhân sinh học tốt tác nh n phi sinh học Goyal cs (2008) tăng cư ng t ch lũy isoflavonoid nuôi cấy tế bào Pueraria tuberose có bổ sung elicitor YE, MeJA SA Hàm lượng isoflavonoid thu mẫu có bổ sung 200 µg/L YE đạt cao gấp 12,4 lần so với mẫu không bổ sung YE Trong mẫu có bổ sung SA ho c MeJA, hàm lượng isoflavonoid thấp mẫu bổ sung YE cao mẫu đối ch ng từ 9,53-10,1 lần [45] 82 Ề NGHỊ K T LU K T LU N Sự sinh trưởng t ch lũy solasodine tế bào huyền phù cà gai leo đạt cao sau tuần nuôi cấy, sinh khối tươi đạt 4,98 g/bình, sinh khối khô đạt 0,45 g/b nh hàm lượng solasodine đạt 123,5 mg/g khối lượng khô, cao rễ tự nhiên khoảng 5,3 lần Ảnh hưởng elicitor đến khả t ch lũy solasodine tế bào in vitro cà gai leo: 2.1 Hàm lượng solasodine t ch lũy cao tế bào cà gai leo xử lý 150 µM salicylic acid th i điểm bắt đầu nuôi cấy (245 mg/g khối lượng khô) 2.2 Khi bổ sung elicitor riêng lẽ hay phối hợp, solasodine tăng dần từ tuần th 2-3, đạt cực đại tuần th sau giảm dần từ tuần 5-7 Solasodine từ tế bào huyền phù cà gai leo có khả kháng viêm, thể qua khả c chế collagenase chúng Đề xuất quy trình sản xuất solasodine hiệu suất cao từ nuôi cấy in vitro tế bào cà gai leo có xử lý 150 µM salicylic acid từ nguồn tự nhiên Ề NGHỊ Tiếp tục nghiên c u cải thiện sản xuất solasodine từ tế bào cà gai leo hệ lên men bioreactor Tiếp tục nghiên c u chế tác động elicitor đến đư ng chuyển hóa solasodine tế bào cà gai leo 83 DANH M C C C C Ì ÃC Nguyen Hoang Loc, Nguyen Huu Thuan Anh, Le Thi Minh Khuyen, Ton Nu Thuy An (2014) Effects of yeast extract and methyl jasmonate on the enhancement of solasodine biosynthesis in cell cultures of Solanum hainanense Hance J BioSci Biotech 2014, 3(1): 1-6 Nguy n H u Thuần Anh, Tôn Nữ Thùy An, Lê Thị Hà Thanh, Võ Thị Viên Dung, Nguyễn Thuần Nho, Đinh Hồng Kim Cương, Nguyễn Ngọc Hiếu, Nguyễn Thanh Giang, Nguyễn Hoàng Lộc (2015) Nghiên c u ảnh hưởng methyl jasmonate dịch chiết nấm men lên sinh trưởng t ch lũy solasodine tế bào cà gai leo (Solanum hainanense Hance) Tạp chí Công nghệ sinh học 13(2A): 513519 Nguyen Huu Thuan Anh, Ton Nu Thuy An, Nguyen Thuan Nho, Vo Thi Vien Dung, Nguyen Hoang Loc (2016) Effect of salicylic acid on the biosynthesis of solasodine in cell suspension culture of Solanum hainanense Hance Plant Cell Biotechnology and Molecular Biology 17(1-2): 14-20 84 TÀI LI U THAM KH O Ti ng Việt Nguyễn Hữu Thuần Anh, Lê Thị Hà Thanh, Đoàn Hữu Nhật B nh, Trương Thị B ch Phượng, Nguyễn Hoàng Lộc (2007), Nghiên c u khả t ch lũy glycoalkaloid callus cà gai leo (Solanum hainanense Hance), Những vấn đề nghiên Khoa học sống, tr 229-232 Vũ Văn Hợp, Vũ Xu n Phương (2003), Các loài ch a alkaloid họ Cà (Solanaceae Juss.) Việt Nam, T p chí Sinh học, 24,(4), tr 27-31 Nguyễn Thị Minh Khai, Phạm Kim Mãn, Nguyễn B ch Thu, Vũ Kim Thu, Phạm Thanh Trúc, Lã Kim Oanh, Nguyễn Văn Mùi, Trịnh Thị Xuân Hòa, Nguyễn Anh Tuấn, Mão NĐ (2001), Nghiên c u điều chế thuốc Haina điều trị viêm gan B mạn hoạt động từ cà gai leo, T p chí Dược liệu, 6,(2+3), tr 68-71 Huỳnh Văn Kiệt, Cao Đăng Nguyên, Nguyễn Hoàng Lộc (2005), Ảnh hưởng số chất k ch th ch sinh trưởng lên tái sinh in vitro cà gai leo (Solanum hainanense Hance), Những vấn đề nghiên Khoa học sống NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, tr 602-605 Bùi Văn Lệ, Nguyễn Ngọc Hồng (2006), Ảnh hưởng chất điều hòa tăng trưởng thực vật đư ng saccharose lên dịch nuôi cấy huyền phù tế bào dừa cạn (Catharanthus roseus), T p chí Phát triển Khoa học Công nghệ, 9, tr 59-66 Nguyễn Hoàng Lộc, Đoàn Hữu Nhật B nh, Phan Đ c Lâm, Phan Thị Á Kim, Trương Thị B ch Phượng (2008), Nghiên c u khả t ch lũy asiaticoside mô sẹo rau má (Centella asiatica L Urban), T p chí Công nghệ Sinh học, 6,(4B), tr 873-881 Nguyễn Hoàng Lộc (2011), Nuôi cấy mô tế bào thực vật-Các khái niệm ứng d ng, NXB Đại học Huế Nguyễn Hoàng Lộc (2013), Sản xuất số hợp chấ dược phẩm nuôi cấy tế bào thực vật trồng chuyển gen, NXB Đại học Huế Phạm Kim Mãn, Nguyễn Bích Thu, Trần Văn Hanh (1999), Tác dụng chống ung thư cà gai leo, Thông báo T p chí Dược liệu, 3,(4), tr 126 85 10 Nguyễn Thị Thanh Nga (2012), Đ nh gi đ d ng di truyền số loài dược liệu Việt Nam thuộc chi Đảng Sâm (Codonopsis sp) kỹ thuật AND mã v ch, Trư ng Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội 11 Quách Ngô Diễm Phương, Hoàng Thị Thanh Minh, Hoàng Thị Thu, Bùi Văn Lệ (2010), Nuôi cấy mô sẹo dịch huyền phù tế bào c y bèo đất Drosera burmanni Vahl cho mục tiêu thu nhận quinone, T p chí Phát triển Khoa học Công nghệ, 13,(T2), tr 53-60 12 Quách Ngô Diễm Phương, Hoàng Thị Thanh Minh, Võ Thị Bích Thủy, Bùi Văn Lệ (2010), Thử nghiệm tăng sinh hàm lượng quinone Drosera burmanni Vahl in vitro phương pháp sử dụng tác nhân cảm ng (elicitor), T p chí Công nghệ Sinh học, 8,(3B), tr 1439-1444 13 Quách Ngô Diễm Phương, Hoàng Thị Thanh Minh, Lê Phi Yến, Nguyễn Kim Phi Phụng, Bùi Văn Lệ (2011), Sàng lọc thu nhận hợp chất có hoạt tính kháng oxy hóa từ dịch chiết Drocera indica L nuôi cấy in vitro, T p chí Phát triển Khoa học Công nghệ, 14,(T3), tr 30-36 14 Nguyễn Bích Thu, Nguyễn Minh Khai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Nhu (2000), Nghiên c u tác dụng cà gai leo (Solanum hainanense Hance) collagenase, T p chí Dược liệu, 5,(5), tr 149-152 15 Nguyễn Bích Thu, Phạm Kim Mãn (2000), Nghiên c u phương pháp định lượng glycoalkaloid Solanum hainanense Hance phương pháp acid màu, T p chí Dược liệu, 5,(4), tr 104-108 16 Nguyễn Bích Thu, Nguyễn Thị Quỳ, Do Young Yoon, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Nhu (2001), Bước đầu nghiên c u tác dụng c chế cà gai leo gen g y ung thư virus, T p chí Dược liệu, 6,(4), tr 118-121 17 Lê Thị Thủy Tiên, Bùi Trang Việt, Nguyễn Đ c Lượng (2010), Khảo sát vài yếu tố ảnh hưởng đến sinh tổng hợp taxol hệ thống tế bào Taxus wallichiana Zucc in vitro, T p chí Phát triển Khoa học Công nghệ, 13,(T3), tr 67-77 18 Viện Dược liệu (1993), Tài nguyên thuốc Việt Nam, NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội 86 19 Vũ Văn Vụ Sinh lý thực vật, NXB Giáo dục, Hà Nội Ti ng Anh 20 Ahlawat S, Saxena P, Alam P, Wajid S, Abdin MZ (2014), Modulation of artemisinin biosynthesis by elicitors, inhibitor, and precursor in hairy root cultures of Artemisia annua L, Journal of Plant Interactions, 9,(1), pp 811-824 21 Ahmed SA, Baig MMV (2014), Biotic elicitor enhanced production of psoralen in suspension cultures of Psoralea corylifolia L, Saudi Journal of Biological Sciences, 21,(5), pp 499-504 22 Ajungla L, Patil PP, Barmuhk RB, Nikam TD (2009), Influence of biotic and abiotic elicitors on accumulation of hyoscyamine and scopolamine in root cultures of Datura metel L., Indian Journal of Biotechnology, 8, pp 317-322 23 Alvarez MA, Nigra HM, Giulietti AM (1993), Solasodine production by Solanum eleagnifolium Cav in vitro cultures: Influence of plant growth regulators, age and inoculum size Large-scale production., Natural Product Letters, 3,(1), pp 9-19 24 Alvarez MA, Talou JR, Paniego NB, Giulietti AM (1994), Solasodine production in transformed organ cultures (roots and shoots) of Solanum eleagnifolium Cav., Biotechnology Letters, 16,(4), pp 393-396 25 Angelova Z, Georgiev S, Roos W (2006), Elicitation of Plants, Biotechnology & Biotechnological Equipment, 20,(2), pp 72-83 26 Azeez THA, Ibrahim KM (2013), Effect of biotic elicitors on secondary metabolite production in cell suspensions of Hypericum triquetrifolium, Bulletin UASVM Horti, 70,(1), pp 26-33 27 Bernhoft A (2010), A brief review on bioactive compounds in plants, Bioactive compounds in plant - benefits and risk for man and animals, pp 11-17 28 Bhat MA, Ahmad S, Aslam J, Mujib A, Mahmooduzzfar (2008), Slinity Stress Enhances Production of Solasodine in Solanum nigrum L., Chemical and Pharmaceutical Bullentin, 56,(1), pp 17-21 87 29 Bhat MA, Mujib A, Junaid A, Mahmooduzzfar (2010), In vitro regeneration of Solanum nigrum with enhanced solasodine production, Biologia Plantarum, 54,(4), pp 757-760 30 Bhatnagar P, Bhatnagar M, Nath AK, Sharma DR (2004), Production of solasodine by Solanum laciniatum using plant tissue culture technique, Indian Journal of Experimental Biology, 42, pp 1020-1023 31 Bonfill M, Mangas S, Moyano E, Cusido R, Palazón J (2011), Production of centellosides and phytosterols in cell suspension cultures of Centella asiatica, Plant Cell Tiss Organ Cult, 104,(1), pp 61-67 32 Bota C, Deliu C (2012), Effect of some biotic elicitors on flavonoids production in Digitalis lanata cell cultures, Revista medico-chirurgicala a Societatii de Medici si Naturalisti din Iasi, 116,(2), pp 624-629 33 Bulgakov VP, Tchernoded GK, Mischenko NP, Khodakovskaya MV, Glazunov VP, Radchenko SV, Zvereva EV, Fedoreyev SA, Zhuravlev YN (2002), Effect of salicylic acid, methyl jasmonate, ethephon and cantharidin on anthraquinone production by Rubia cordifolia callus cultures transformed with the rolB and rolC genes, Journal of Biolotechnology, 97, pp 213-221 34 Byun SY, Kim C, Pederson H (1992), Elicitation of Alkaloid Production at different growth stages in Cell suspensions of of Eschscholtizia californica, Plant Tissue Culture Letter, 9,(3), pp 164-168 35 Cham BE (1994), Solasodine glycosides as anti-cancer agents: Preclinical and clinical studies, Asian Pacific Journal of Pharmacology, 9, pp 113-118 36 Cham BE (2008), Cancer Intralesion Chemotherapy with Solasodine Rhamnosyl Glycosides, Research Journal Biology Science, 3,(9), pp 1008-1017 37 Cheong J-J, Choi YD (2003), Methyl jasmonate as a vital substance in plants., TRENDS in Genetic, 19,(7), pp 409-413 38 Cho HY, Lee P, Carolyn WT, Yoon SY, Rhee HS, Park JM (2007), Enhanced benzophenanthridine alkaloid production and protein expression with combined elicitor in Eschscholtzia californica suspension cultures, Biotechnology Letter, 29,(12), pp 2001-2005 88 39 Chong TM, Abdullah MA, Lai OM, NorAini FM, Laijs NH (2005), Effective elicitation factors in Morinda elliptica cell suspension culture, Process Biochemistry, 40,(11), pp 3397-3405 40 Cousins MM, Adelberg J, Chen F, Rieck J (2010), Secondary metabolisminducing treatments during in vitro development of turmeric (Curcuma longa L.) rhizomes, Journal of Herbs, Spices & Medicinal Plants, 15,(4), pp 303-317 41 Devi BP, Vimala A, Sai I, Chandra S (2008), Effect of Cyanobacterial Elicitor on Neem Cell Suspension Cultures, Indian Journal of Science and Technology, 1,(7), pp 1-5 42 Dicosmo F, Misawa M (1995), Plant cell and tissue culture: Alternatives for metabolite production, Biotechnology Advance, 13,(3), pp 425-453 43 Dong J, Wan G, Liang Z (2010), Accumulation of salicylic acid-induced phenolic compounds and raised activities of secondary metabolic and antioxidative enzymes in Salvia miltiorrhiza cell culture, Journal of Biotechnology, 148,(2-3), pp 99-104 44 Frankfater CR, Dowd MK, Triplett BA (2009), Effect of elicitors on the production of gossypol and methylated gossypol in cotton hairy roots, Plant Cell Tissue Organism Culture, 98, pp 341-349 45 Goyal S, Ramawat KG (2008), Increased isoflavonoids accumulation in cell suspension cultures of Pueraria tuberosa by elicitors, Indian Journal of Biotechnology, 7,(3), pp 378-382 46 Hakkim FL, Kalyani S, Essa M, Girija S, Song H (2011), Production of rosmarinic in Ocimum sanctum cell cultures by the influence of sucrose, phenylalanine, yeast extract, and methyl jasmonate, International Journal of Biological and Medical Research, 2,(4), pp 1070-1074 47 Hamza MA (2013), Effect of yeast extract (biotic elicitor) and incubation periods on selection of Lupinus termis explant in vitro, Journal of Applied Sciences Research, 9,(7), pp 4186-4192 89 48 Jain A, Singh S (2015), Effect of growth regulators and elicitors for the enhanced production of solasodine in hairy root culture of Solanum melongena (L.), Journal of Indian Botanical Society, 94,(1-2), pp 23-39 49 Jiao J, Gai Q-Y, Fu Y-J, Ma W, Peng X, Tan S-N, Efferth T (2014), Efficient Production of Isoflavonoids by Astragalus membranaceus Hairy Root Cultures and Evaluation of Antioxidant Activities of Extracts, Journal of Agricultural and Food Chemistry, 62,(52), pp 12649-12658 50 Keng CL, Wei AS, Bhatt A (2010), Elicitation effect on cell biomass and production of alkaloids in cell suspension culture of the tropical tree Eurycoma longifolia, Research Journal of the Costa Rican Distance Education University, 2,(2), pp 239-244 51 Khosroushahi YA, Valizadeh M, Ghasempour M, Khorowshahli M, Naghdibadi H, Dadpour MR, Omidi Y (2006), Improved Taxol production by combination of inducing factors in suspension cell culture of Taxus baccata, Cell biology International, 30, pp 262-269 52 Kittipongpatana N, Hock RS, Porter JR (1998), Production of solasodine by hairy root, callus, and cell suspension cultures of Solanum aviculare Forst., Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 52, pp 133-143 53 Li P, Mao Z, Lou J, Li Y, Mou Y, Lu S, Peng Y, Zhou L (2011), Enhancement of diosgenin production in Dioscorea zingiberensis cell cultures by oligosaccharides from its endophytic fungus Fusarium oxysporum Dzf17, Molecules, 16,(12), pp 10631-10644 54 Loc N, Giang N (2012), Effects of elicitors on the enhancement of asiaticoside biosynthesis in cell cultures of centella (Centella asiatica L Urban), Chemical Papers, 66,(7), pp 642-648 55 Loc NH, An TTT (2010), Asiaticoside production from cell culture of centella (Centella asiatica L Urban), Biotechnol Bioprocess Engineering, pp 1065-1070 56 Loc NH, Anh NHT, Binh DHN, Yang M-s, Kim T-g (2010), Production of glycoalkaloids from callus cultures of Solanum hainanense Hance, Journal of Plant Biotechnology, 37, pp 96-101 90 57 Loc NH, Giang NT (2012), Effects of elicitors on the enhancement of asiaticoside biosynthesis in cell cultures of centella (Centella asiatica L Urban), Chemical Papers, 66,(7), pp 642-648 58 Loc NH, Kiet HV (2011), Micropropagation of Solanum hainanense Hance Annals of Biological Research, 2,(2), pp 394-398 59 Loc NH, Thanh LTH (2011), Solasodine production from cell culture of Solanum hainanense Hance, Biotechnology and Bioprocess Engineering, 16,(3), pp 581-586 60 Lu MB, Wong HL, Teng WL (2001), Effects of elicitation on the production of saponin in cell culture of Panax ginseng, Plant Cell Report, 20, pp 674-677 61 Mann JD (1979), Production of Solasodine for the Pharmaceutical industry, Academic Press, Inc 62 Mathew R, Sankar P (2012), Effect of methyl jasmonate and chitosan on growth characteristics of Ocimum basilicum L., Ocimum sanctum L and Ocimum gratissimum L cell suspension cultures, African Journal of Biotechnology, 11,(21), pp 4759-4766 63 Misawa M (1994), Plant tissue culture: An alternative for production of useful metabolite, FAO Agricultural services bulletin, 108, pp 64 Mulabagal V, Tsay H (2004), Plant cell cultures - an alternative and efficient soucre for the production of biologycally important secondary metabolites, International Journal of Applied Science and Engineering, 2, pp 29-48 65 Namdeo AG (2007), Plant Cell Elicitation for Production of Secondary Metabolites: A Review, Pharmacognosy Reviews, 1,(1), pp 69-79 66 Neuman KH, Kumar A, Imani J (2009), Plant Cell and Tissue Culture-A Tool in Biotechnology, Springer Verfag Berlin Heidelberg 67 Nigra HM, Alvarez MA, Giulietti AM (1989), The influence of auxins, light and cell differentiation on solasodine production by Solanum eleagnifolium Cav calli, Plant Cell Reports, 8, pp 230-233 91 68 Nigra HM, Alvarez MA, Giulietti AM (1990), Effect of carbon and nitrogen source on growth and solasodine production in batch suspension cultures of Solanum eleagnifolium Cav., Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 21, pp 55-60 69 Nigra HM, Caso OH, Giulietti AM (1987), Production of solasodine by calli from different parts of Solanum eleagnifolium Cav plants, Plant Cell Reports, 6, pp 135-137 70 Nopo-Olazabal C, Condori J, Nopo-Olazabal L, Medina-Bolivar F (2014), Differential induction of antioxidant stilbenoids in hairy roots of Vitis rotundifolia treated with methyl jasmonate and hydrogen peroxide, Plant Physiology and Biochemistry, 74, pp 50-69 71 Ogata A, Tsuruga A, Matsuno M, Mizukami H (2004), Elicitor-induced rosmarinic acid biosynthesis in Lithospermum erythrorhizon cell suspension cultures: activities of rosmarinic acid synthase and the final two cytochrome P450catalyzed hydroxylations, Plant Biotechonology, 21,(5), pp 393-396 72 Parsons J, Marconi P, Giulietti AM, Alvarez MA (2001), Solasodine production by protoplasts derived from Solanum eleagnifolium Cav cell suspension cultures, International Journal of Experimental Botany, pp 159-163 73 Pereira PS, Ticli FK, Franca SC, Breves CMS, Lourenco MV (2007), Enhanced triterpene production in Tabernaemontana catharinensis cell suspension cultures in response to biotic elicitors, Quim Nova, 30,(8), pp 1849-1852 74 Pirian K, Piri K (2013), Influence of yeast extract as a biotic elicitor on noradrenaline production in hairy root culture of Portulaca oleracea L., International Journal of Plant Production, 4,(11), pp 2960-2964 75 Pise M, Rudra J, Begde D, Bundale S, Nashikkar N, Upadhyay A (2013), Elicitor induced production of shatavarín in the cell cultures of Asparagus recemosus, Indian Journal of Plant Sciences, 2,(2), pp 100-106 76 Pitta-Alvarez SI, Spollansky TC, Guilietti AM (2000), The influence of different biotic and abiotic elicitors on the production and profile of tropane alkaloids in hairy root cultures of Brugmansia candida, Enzyme and Microbial Technology, 26, pp 252-258 92 77 Prakash G, Srivastava AK (2008), Statistical elicitor optimization studies for the enhancement of azadirachtin production in bioreactor Azadirachta indica cell cultivation, Biochemical Engineering Journal, 40, pp 218-226 78 Quadri LEN, Giulietti AM (1993), Effect of elicitation on the accumulation of solasodine by immobilized cells of Solanum eleagnifolium Cav., Enzyme and Microbial Technology, 15, pp 1074-1077 79 Ramawat K, Merillon J (2004), Biotechnology Secondary Metabolites, Science Publishers, UK 80 Ramawat KG, Goyal S (2008), Increased isoflavonoids accumulation in cell suspension cultures of Pueraria tuberosa by elicitors, Indian Journal of Biotechnology, 7, pp 378-382 81 Ramawat KG, Merillon JM (2008), Bioactive Molecules and Medicinal Plants, Springer 82 Rao B, Kumar V, Amrutha N, Jalaja N, Vaidyanath K, Rao A, Polavarap S, Kishor P (2008), Effect of growth regulators, carbon source and cell aggregate size on berberine production from cell cultures of Tinospora cordifolia Miers, Current Trends in Biotechnology and Pharmacy, 2,(2), pp 269-276 83 Rao SR, Ravishanka GA (2002), Plant cell culture: chemical factories of secondary metabolites, Biotechnology Advance, 20, pp 101-153 84 Raomai S, Kumaria S, Tandon P (2014), Plant regeneration through direct somatic embryogenesis from immature zygotic embryos of the medicinal plant, Paris polyphylla Sm, Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 118,(3), pp 445-455 85 Rezaei A, Ghanati F, Dehaghi MA (2011), Stimulation of taxol production by combined salicylic acid elicitation and sonication in Taxus baccata cell culture, International Conference on Life Science and Technology, Singapore, 3, pp 193197 86 Rhee HS, Cho H-Y, Son SY, Yoon HS-Y, J.M JMP (2010), Enhanced accumulation of decursin and decursinol angelate in root cultures and intact roots of Angelica gigas Nakai following elicitation, Plant Cell Tissue Organ Culture, 101, pp 295-302 93 87 Roat C, Ramawat KG (2009), Elicitor-induced accumulation of stilbenes in cell suspension cultures of Cayratia trifolia (L.) Domin, Plant Biotechnology Report, 3, pp 135-138 88 Roddick JG (1989), The acetylcholinesterase inhibitory activity of steroidal glycoalkaloids and their aglycones, Phytochemistry, 28, pp 2631-2634 89 Roddick JG (1996), Steroidal glycoalkaloids: Nature and consequences of bioactivity, Advance in Experimental Medicine and Biology, 404, pp 277-295 90 Rodríguez-Monroy M, Trejo-Espino JL, Jimenez-Aparicio A, Luz MM, Villarreal ML, Trejo-Tapia G (2004), Evaluation of morphological properties of Solanum chrysotrichum cell cultures in a shake flask and fermentor and rheological properties of broths, Food Technology Biotechnology, 42,(3), pp 152-158 91 Sanschez MA, Fernández-Tárago J, Corchete P (2005), Yeast extract and methyl jasmonate-induced silymarin production in cell cultures of Silybum marianum (L.) Gaertn, Journal of Biotechnology, 119,(1), pp 60-69 92 Sato F, Takeshihta N, Fujiwara H, Katagiri Y, Huan L, Yamada Y (1994), Characterization of Coptis japonica cells with different alkaloids productivities, Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 38, pp 249-256 93 Sharma M, Sharma A, Ashwani K, Kumar BS (2011), Enhancement of secondary metabolites in cultured plant cells through stress stimulus, American Journal of Plant Physiology, 6,(2), pp 50-71 94 Sheper T (2001), Advances in biochemical engineering biotechnology - Plant cells, Springer-Verlag, Berlin Heideberg 95 Sudha G, Ravishankar GA (2003), Influence of methyl jasmonate and salicylic acid in the enhancement of capsaicin production in cell suspension cultures of Capsicum frutescens Mill Current Science, 85,(8), pp 1212-1217 96 Sutkovic J, Ler D, Gawwad MRA (2011), In vitro production of solasodine alkaloid in Solanum nigrum under salinity stress, Journal of Phytology, 3,(1), pp 43-49 97 Taguchi G, Yazawa T, Hayashida N, Okazaki M (2001), Molecular cloning and heterologous expression of novel glucosyltransferases from tobacco cultured cells 94 that have broad substrate specificity and are induced by salicylic acid and auxin, Journal of Biochemistry, 268, pp 4086-4094 98 Thai NP, Trung LV, Hai NK, Huynh L (1998), Protective efficacy of Solanum hainanense Hance during hepatotoxicity in male mice with prolonged and small oral doses of trinitrotoluene, Journal of Occupational Health, 40, pp 276-278 99 Thanh NT, Murthy HN, Yu KW, Hahn EJ, Peak KY (2005), Methyl jasmonate elicitation enhanced synthesis of ginsenoside by cell suspension culture of Panax ginseng in 5L balloon type bubble bioreactor, Apply Microbiology Biotechnology, 67, pp 197-201 100 Vaddadi S, Parvatam G (2015), Impacts of biotic and abiotic stress on major quality attributing metabolites of coffee beans, Journal of Environmental and Biology, 36,(2), pp 377-382 101 Vakil MMA, Mendhulkar VD (2013), Enhanced synthesis of andrographolide by Aspergillus niger and Penicillium expansum elicitors in cell suspension culture of Andrographis paniculata (Burm f.) Nees, Botanical Studies, 54,(2), pp 1-8 102 Veerashree V, Anuradha CM, Vadlapudi K (2012), Elicitor-enhanced production of gymnemic acid in cell suspension cultures of Gymnema sylvestre R Br., Plant Cell Tissue Organism Culture, 108, pp 27-35 103 Vijaya SN, Aswani KY, Ravi BB, Phani KY, Vijay VM (2010), Advancements in the production of secondary metabolites, Journal of Natural Products, 3, pp 112-123 104 Wang YD, Yuan YJ, Wu JC (2004), Induction studies of methyl jasmonate and salicylic acid on taxane production in suspension cultures of Taxus chinensis var mairei, Biochemical Engineering Journal, 19, pp 259-265 105 Weissenberg M (2001), Isolation of solasodine and other steroidal alkaloids and sapogenis by direct hydrolysis-extraction of Solanum plants or glycosides therefrom, Phytochemistry, 58, pp 501-508 106 Xu C, Zhao B, Ou Y, Wang X, Wang Y (2007), Elicitor-enhanced syringin production in suspension cultures of Saussurea medusa, World Journal of Microbiology and Biotechnology, 23, pp 965-970 95 107 Yogananth N, Bhakyaraj E, Chanthuru A, Parvathi S, Palanivel S (2009), Comparative analysis of solasodine from in vitro and in vivo cultures of Solanum nigrum Linn., Kathmandu University Journal of Science, Enginerring and Technology, 5,(1), pp 99-103 108 Yousefzadi M, Sharifi M, Behmanesh M, Ghasempour A, Moyano E, Palazon J (2010), Salicylic acid improves podophyllotoxin production in cell cultures of Linum album by increasing the expression of genes related with its biosynthesis, Biotechnol Lett, 32,(11), pp 1739-1743 109 Yu LJ, Lan WZ, Qin WM, Xu HB (2001), Effects of salicylic acid on fungal elicitor-induced membrane-lipid peroxidation and taxol production in cell suspension cultures of Taxus chinensis, Process Biochemistry, 37,(5), pp 477-482 110 Yu ZZ, Fu CX, Han YS, Li YX, Zhao DX (2005), Salicylic acid enhances jaceosidin and siringin production in cell cultures of Saussurea medusa, Biotechnol Lett, 28,(13), pp 1027-1031 111 Zhang CH, Mei XG, Liu L, Yu LJ (2000), Enhanced paclitaxel production induced by the combination of elicitors in cell suspension cultures of Taxus chinensis, Biotechnology Letters, 22, pp 1561-1564 112 Zhao D, Xing J, Li M, Lu D, Zhao Q (2001), Optimization of growth and jaceosidin production in callus and cell suspension cultures of Saussurea medusa, Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 67, pp 227-234 96 [...]... Hình 2.1 Cây cà gai leo in vitro 2 C 2.2.1 Xác định khả năng sinh trưởng và t ch lũy solasodine của tế bào cà gai leo 2.2.2 Nghiên c u ảnh hưởng của elicitor đến khả năng sinh trưởng và t ch lũy solasodine của tế bào cà gai leo: - Ảnh hưởng của MeJA: nồng độ: 25-250 µM sau đó chọn nồng độ tốt nhất tiếp tục nghiên c u th i gian nuôi cấy 7 tuần và th i điểm cảm ng từ 7-21 ngày - Ảnh hưởng của YE: nồng... như vinblastin, vincristin và chữa cao huyết áp như ajmalicin, serpentin Tuy nhiên, hàm lượng của những chất này trong cây tự nhiên rất thấp Bùi Văn Lệ và Nguyễn Ngọc Hồng (2006) đã nghiên c u khảo sát sơ bộ ảnh hưởng của một số chất kích thích sinh trưởng lên quá trình tạo sinh khối tế bào và t ch lũy alkaloid toàn phần có trong dịch nuôi cấy [5] Solasodine là một hợp chất chính trong cây cà gai leo. .. phối hợp tốt nhất tiếp tục nghiên c u th i gian nuôi cấy 7 tuần và th i điểm cảm ng từ 7-21 ngày 2.2.3 Khảo sát sơ bộ hoạt tính sinh học của dịch chiết solasodine lên khả năng c chế collagenase 2.2.4 Xây dựng quy trình sản xuất solasodine hiệu suất cao từ tế bào in vitro của cây cà gai leo 2 C 2 .1 ươ g y o 2.3.1.1 Nuôi cấy cây in vitro Các đoạn thân có mắt lá của cây cà gai leo ngoài tự nhiên rửa sạch... để khảo sát mối tương tác giữa protein sinh ung thư (oncoprotein-E6, E6AP và E7) với sản phẩm gen c chế ung thư p53 và Rb đã gi p phát hiện dịch chiết từ cà gai leo có tác dụng chống ung thư do virus như ung thư cổ tử cung, ung thư gan g y bởi các virus HPV, HBV… [16] Nguyễn Hoàng Lộc và cs (2005) đã nghiên c u ảnh hưởng của một số chất k ch th ch sinh trưởng lên khả năng tái sinh in vitro cây cà gai. .. lượng solasodine t ch lũy tăng hơn so với đối ch ng không xử lý NaCl [96] Yogananth và cs (2009) tiến hành phân lập so sánh solasodine từ nuôi cấy in vitro và in vivo của cây S nigrum nhận thấy, solasodine t ch lũy trong phần lá non của cây in vivo (0,0798 mg/g) thấp hơn trong callus in vitro Callus in vitro nuôi trong môi trư ng bổ sung k ch th ch sinh trưởng khác nhau thì sự t ch lũy solasodine cũng... tăng 32% [100] 1.3 CÂY C 1 .1 s 1 ố p ố Cây cà gai leo (Solanum hainanense Hance) thuộc họ Cà (Solanaceae), còn có tên khoa học khác là Solanum procumbens Ngoài ra, cà gai leo còn có nhiều tên gọi địa phương khác như: cà quánh, cà quạnh, cà quýnh, cà bò, cà cạnh, cà hải nam, cà gai dây [2] Cà gai leo mọc rải rác ven rừng, lùm bụi, bãi hoang, ven đư ng, ở độ cao dưới 300 m Phân bố ở Bắc Giang (Yên Thế),... nghiên c u ảnh hưởng của elicitor đến việc t ch lũy solasodine trong tế bào S eleagnifolium Chủng nấm thuộc loài Alternaria sp phân lập từ các điểm bệnh trên bề m t quả chín của cây S eleagnifolium hoang dại được sử dụng như elicitor Các dòng tế bào 14 ngày tuổi được xử lý elicitor trong 48-72 gi , kết quả nhận thấy hàm lượng solasodine tăng khoảng 65% trong nuôi cấy dịch huyền phù [78] Ảnh hưởng của. .. tăng sinh tổng hợp của benzopheanthridine alkaloid sanguinarine lên 26 lần khi sử dụng elicitor trong nuôi cấy huyền phù tế bào Papaver somniferum Sự cảm ng sinh tổng hợp isoflavonoid ở huyền phù tế bào Pueraria lobata bằng elicitor sinh học (dịch chiết nấm men) hay elicitor phi sinh học (CuCl2) đã được nghiên c u, đ c biệt ở m c độ phân tử Elicitor tạo điều kiện để nghiên c u ở m c phân tử của con... t ch lũy glycoalkaloid toàn phần trong tế bào cà gai leo trong nuôi cấy tế bào huyền phù Kết quả cho thấy hàm lượng glycoalkaloid toàn phần t ch lũy cao nhất trong tế bào sau 4 tuần nuôi cấy trong môi trư ng và điều kiện tối ưu gấp 5,9 lần so với rễ c y 1 năm tuổi ngoài tự nhiên [59] 34 C ươ g C C 2.1 Tế bào cà gai leo (Solanum hainanense Hance) nuôi cấy in vitro từ callus được tạo ra từ cây in vitro. .. chấp nhận bởi tế bào thực vật (các hóa học theo đư ng nội sinh tạo thành các enzyme, các mảnh thành tế bào) elicitor sinh học - Được tạo thành bởi hoạt động của vi sinh - Tia UV, Windfall vật trên tế bào thực vật (các đoạn pectin) - Các protein biến tính (Rnase) - Được tạo thành bởi hoạt động của enzyme - Đông và rã đông thực vật trên các thành tế bào vi khuẩn - Các thành phần không thiết yếu của môi