BỘ CÔNG THƢƠNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP TP.HCM VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ THỰC PHẨM - - ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP THU NHẬN HỢP CHẤT PHENOLIC TỪ CỦ CẢI TRẮNG RAPHANUS SATIVUS L.VỚI SỰ HỖ TRỢ CỦA ENZYME CELLULASE GVHD: ThS Trƣơng Hoàng Duy ThS Ngụy Lệ Hồng SVTH: Nguyễn Lƣơng Phúc Duyên Trịnh Thúy Giàu Tp HCM, tháng năm 2016 12151621 12134661 Trƣờng Đại học Công nghiệp Tp HCM VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ THỰC PHẨM CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ THỰC PHẨM BỘ MÔN: HỌ VÀ TÊN: Nguyễn Lƣơng Phúc Duyên Trịnh Thúy Giàu MSSV: 12151621 12134661 NGÀNH: Công nghệ thực phẩm LỚP: DHTP8B Đầu đề luận án: Thu nhận hợp chất phenolic từ củ cải trắng Raphanus sativus L với hỗ trợ enzyme cellulase Nhiệm vụ: + Khảo sát tỉ lệ nguyên liệu:nƣớc + Khảo sát ảnh hƣởng thời gian ủ enzyme + Khảo sát ảnh hƣởng pH + Khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ ủ enzyme + Khảo sát nồng độ enzyme Tối ƣu hóa yếu tố kết trích ly có xử lý enzme hiệu Ngày giao nhiệm vụ luận án: 1/11/2015 Ngày hoàn thành nhi ệm vụ: 15/6/2016 Họ tên ngƣời hƣớng dẫn Phần hƣớng dẫn: ThS Trƣơng Hoàng Duy Nội dung yêu cầu LATN đƣợc thông qua Bộ môn Ngày … tháng … Năm ………… Ngƣời duyệt (chấm hồ CHỦ NHIỆM BỘ MÔN sơ): Đơn (Ký ghi rõ họ tên) PHẦN DÀNH CHO VIỆN vị: Ngày bảo vệ: Điểm tổng kết: Nơi lƣu trữ luận án: NGƢỜI HƢỚNG DẪN CHÍNH (Ký ghi rõ họ tên) NHẬN XÉT CỦA GIÁO VIÊN HƢỚNG DẪN Tp.HCM, ngày tháng năm 2016 Giáo viên hƣớng dẫn i NHẬN XÉT CỦA GIÁO VIÊN PHẢN BIỆN Tp.HCM, ngày tháng năm 2016 Giáo viên phản biện ii LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành đề tài đồ án tốt nghiệp cố gắng thành viên nhóm, chúng em nhận đƣợc nhiều quan tâm, giúp đỡ từ phía Nhà trƣờng gia đình Trƣớc hết chúng em xin bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc tới cô Nguyễn Thị Minh Nguyệt, thầy Trƣơng Hoàng Duy, cô Ngụy Lệ Hồng cô Phạm Thị Kim Ngọc hƣớng dẫn tận tình nhƣ hỗ trợ hóa chất, dụng cụ cho chúng em suốt thời gian thực đề tài đồ án Chúng em xin chân thành cảm ơn Thầy Cô Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm nói riêng Thầy Cô Trƣờng đại học Công nghiệp thành phố Hồ Chí Minh giảng dạy, bảo chúng em trình học tập để chúng em nắm vững kiến thức sở nhƣ chuyên ngành, tạo điều kiện áp dụng tốt kiến thức đề tài Qua chúng em xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè động viên, khích lệ giúp đỡ chúng em suốt thời gian qua Nhóm Sinh viên thực iii MỤC LỤC CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu củ cải 1.1.1 Phân loại đặc điểm hình thái 1.1.2 Thành phần hóa học củ cải 1.1.3 Ứng dụng củ cải 1.2 Hợp chất phenolic 1.2.1 Giới thiệu hợp chất phenolic 1.2.2 Phân loại phenolic 1.2.3 Hoạt tính hợp chất phenolic 1.3 Tổng quan enzyme cellulase 10 1.3.1 Định nghĩa 10 1.3.2 Phân loại 10 1.3.3 Cấu tạo enzyme cellulase 12 1.3.4 Cơ chế xúc tác .12 1.3.5 Các yếu tố ảnh hƣởng hoạt tính enzyme .14 1.4 Tổng quan tình hình nghiên cứu 16 1.4.1 Nghiên cứu nƣớc 16 1.4.2 Nghiên cứu nƣớc .19 CHƢƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Thời gian, địa điểm thực .21 2.2 Nguyên vật liệu .21 2.2.1 Nguyên liệu 21 2.2.2 Hóa chất .21 2.2.3 Trang thiết bị .22 2.3 Quy trình nghiên cứu bố trí thí nghiệm .23 iv 2.3.1 Quy trình nghiên cứu 23 2.3.2 Bố trí thí nghiệm 23 2.4 Phƣơng pháp phân tích 27 2.4.1 Xác định hàm lƣợng chất khô mẫu 27 2.4.2 Xác định hàm lƣợng tro 28 2.4.3 Xác định hàm lƣợng lipid 28 2.4.4 Xác định hàm lƣợng protein tổng 30 2.4.5 Xác định hàm lƣợng đƣờng khử .32 2.4.6 Xác định hàm lƣợng Phenolic tổng 33 2.4.7 Xác định hàm lƣợng flavonoid tổng 35 2.4.8 Khả khử gốc tự ABTS dịch chiết 36 2.5 Phƣơng pháp xử lí số liệu .38 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 39 3.1 Kết phân tích tiêu có mẫu .39 3.2 Kết khảo sát trình trích ly kết hợp với xử lí enzyme 39 3.2.1 Kết khảo sát tỉ lệ nguyên liệu: nƣớc có xử lí enzyme 39 3.2.2 Kết khảo sát thời gian xử lí enzyme .42 3.2.3 Kết khảo sát pH trình xử lí enzyme .44 3.2.4 Kết khảo sát nhiệt độ xử lí enzyme 47 3.2.5 Kết khảo sát nồng độ enzyme trình xử lí enzyme 50 3.2.6 Kết khảo sát tối ƣu 53 CHƢƠNG 4:KẾT LUẬN – KIẾN NGHỊ 57 4.1 Kết luận 57 4.2 Kiến nghị 57 PHỤ LỤC xvii v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT TPC (total phenolic contents): hàm lƣợng phenolic tổng TFC (total flavonoid contents): hàm lƣợng flavonoid tổng ABTS: 2, 2'-Azino-Bis-3-Ethylbenzothiazoline-6-Sulfonic Acid ROS: dẫn xuất dạng khử oxy phân tử RNS: dẫn xuất dạng khử nitơ phân tử vi DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần hóa học củ cải .2 Bảng 1.2 Phân loại hợp chất phenolic Bảng 2.1 Kết đo OD dung dịch acid galic nồng độ khác .34 Bảng 2.2 Kết đo OD dung dịch quecetin nồng độ khác .35 Bảng 2.3 Quá trình xây dựng đƣờng chuẩn với dung dịch trolox chuẩn 37 Bảng 3.1 Kết phân tích tiêu có mẫu .39 Bảng 3.2 Ảnh hƣởng tỉ lệ nguyên liệu/nƣớc trình xử lí enzyme đến TPC, TFC khả khử gốc tự ABTS 40 Bảng 3.3 Ảnh hƣởng thời gian trình xử lí enzyme đến TPC, TFC khả khử gốc tự ABTS 42 Bảng 3.4 Ảnh hƣởng pH trình xử lí enzyme đến TPC, TFC khả khử gốc tự ABTS 45 Bảng 3.5 Ảnh hƣởng nhiệt độ trình xử lí enzyme đến TPC, TFC khả khử gốc tự ABTS 47 Bảng 3.6 Ảnh hƣởng nồng độ enzyme trình xử lí enzyme đến TPC, TFC khả khử gốc tự ABTS 50 Bảng 3.7 Các yếu tố dùng RSM 53 Bảng 3.8 Kế hoạch thực nghiệm theo RSM để tối ƣu hóa TPC 54 Bảng 3.9 Ảnh hƣởng biến đến hàm mục tiêu 55 vii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Củ cải trắng Hình 1.2 Thành phần enzyme cellulase chế loại 11 Hình 1.3 Sơ đồ chế tác dụng phức hệ cellulase lên mạch cellulose 12 Hình 1.4 Cơ chế thủy phân phân tử cellulose (A) phức hệ cellulose (B) 13 Hình 2.1 Nội dung nghiên cứu 23 Hình 2.2 Sơ đồ bố trí thí nghiệm 24 Hình Đồ thị thể phƣơng trình đƣờng chuẩn TPC 34 Hình 2.4 Đồ thị thể phƣơng trình đƣờng chuẩn TFC 36 Hình 2.5 Đƣờng chuẩn hoạt tính khử gốc tự ABTS 38 Hình 3.1 Biểu đồ thể TPC, TFC qua tỉ lệ nguyên liệu/nƣớc khác 40 Hình 3.2 Biểu đồ thể khả khử gốc tự ABTS qua tỉ lệ nguyên liệu/nƣớc khác 41 Hình 3.3 Biểu đồ thể TPC, TFC thời gian xử lí khác .43 Hình 3.4 Biểu đồ thể khả khử gốc tự ABTS qua thời gian xử lí enzyme khác .44 Hình 3.5 Biểu đồ thể TPC, TFC pH khác 45 Hình 3.6 Biều đồ thể khả khử gốc tự ABTS pH khác .46 Hình 3.7 Biểu đồ thể TPC, TFC nhiệt độ xử lí enzyme khác 48 Hình 3.8 Biểu đồ thể khẳ khử gốc tự ABTS cho nhiệt độ xử lí enzyme khác 49 Hình 3.9 Biểu đồ thể TPC, TFC nồng độ enzyme khác 51 viii Bảng phụ lục 1.2: Ảnh hƣởng ti lệ nguyên liệu/nƣớc trình xử lí enzyme đến TFC Khối Khối lượng lượng Mẫu mẫu khô (g) (g) OD TFC (ppm) Khối lượng TFC (mg quer.) Khối lượng TFC (mg quer/g) 1/55 0,998 0,93 0,006 17,5 3,5 3,7601 1/55 0,995 0,93 0,005 15 3,0 3,2326 1/55 1,009 0,94 0,007 20 4,0 4,2504 1/65 1,042 0,97 0,007 20 4,0 4,1158 1/65 1,003 0,94 0,007 20 4,0 4,2758 1/65 0,93 0,007 20 4,0 4,2886 1/75 0,992 0,93 0,008 22,5 4,5 4,8636 1/75 1,012 0,94 0,006 17,5 3,5 3,7080 1/75 1,001 0,93 0,007 20 4,0 4,2843 1/85 1,014 0,95 0,005 15 3,0 3,1721 1/85 1,001 0,93 0,005 15 3,0 3,2133 1/85 1,007 0,94 0,004 12,5 2,5 2,6618 xviii Giá trị trung bình Độ lệch chuẩn 3,748 0,509 4,227 0,096 4,285 0,578 3,016 0,307 Bảng phụ lục 1.3: Ảnh hƣởng ti lệ nguyên liệu/nƣớc trình xử lí enzyme đến ABTS Khối Khối lượng lượng Mẫu mẫu khô (g) (g) Cx OD ( TEAC/ml) Tổng mmol TEAC Mmol TEAC/g 1/55 0,998 0,93 0,193 0,2404 12,0676 12,9643 1/55 0,995 0,93 0,192 0,2550 12,7992 13,7917 1/55 1,009 0,94 0,194 0,2258 11,3361 12,0457 1/65 1,042 0,97 0,188 0,3133 15,7252 16,1803 1/65 1,003 0,94 0,189 0,2987 14,9937 16,0275 1/65 0,93 0,187 0,3278 16,4567 17,6442 1/75 0,992 0,93 0,182 0,4007 20,1143 21,7396 1/75 1,012 0,94 0,184 0,3715 18,6513 19,7600 1/75 1,001 0,93 0,177 0,4735 23,7719 25,4618 1/85 1,014 0,95 0,176 0,4881 24,5034 25,9088 1/85 1,001 0,93 0,186 0,3424 17,1883 18,4101 1/85 1,007 0,94 0,189 0,2987 14,9937 15,9639 xix Giá trị Độ trung lệch bình chuẩn 12,934 0,873 16,617 0,893 22,320 2,895 20,094 5,182 Thí nghiệm xác định ảnh hƣởng thời gian xử lí enzyme Bảng phụ lục 2.1: Ảnh hƣởng thời gian xử lý enzyme đến TPC OD TPC (ppm) Khối lượng TPC (mg galic) Khối lượng TPC (mg galic/g) 0,94 0,289 24,35 4,8694 5,2000 0,999 0,93 0,301 25,34 5,0678 5,4389 30 1,001 0,93 0,3 25,26 5,0512 5,4103 60 0,996 0,93 0,317 26,66 5,3322 5,7399 60 1,002 0,93 0,302 25,41 5,0843 5,4403 60 1,003 0,94 0,307 25,83 5,1669 5,5232 90 1,004 0,94 0,321 26,99 5,3983 5,7648 90 0,999 0,93 0,325 27,40 5,4810 5,8824 90 1,005 0,94 0,323 27,16 5,4314 5,7943 120 1,004 0,94 0,311 26,17 5,2331 5,5883 120 1,001 0,93 0,308 25,92 5,1835 5,5519 120 1,001 0,93 0,316 26,58 5,3157 5,6936 150 0,93 0,31 26,08 5,2165 5,5929 150 1,001 0,93 0,299 25,17 5,0347 5,3926 150 1,009 0,94 0,296 24,93 4,9851 5,2972 Mẫu Khối lượng mẫu (g) Khối lượng khô (g) 30 1,004 30 xx Giá trị trung bình Độ lệch chuẩn 5,349 0,130 5,568 0,155 5,814 0,061 5,611 0,074 5,428 0,151 Bảng phụ lục 2.2: Ảnh hƣởng thời gian xử lý enzyme đến TFC Khối Khối lượng lượng Mẫu mẫu khô (g) (g) OD V dịch chiết (ml) TFC (ppm) Khối lượng TFC (mg quer.) Khối lượng TFC (mg quer./g) 30 1,004 0,94 0,005 100 15 3,0 3,2037 30 0,999 0,93 0,006 100 17,5 3,5 3,7563 30 1,001 0,93 0,005 100 15 3,0 3,2133 60 0,996 0,93 0,007 100 20 4,0 4,3058 60 1,002 0,93 0,007 100 20 4,0 4,2801 60 1,003 0,94 0,007 100 20 4,0 4,2758 90 1,004 0,94 0,006 100 17,5 3,5 3,7376 90 0,999 0,93 0,007 100 20 4,0 4,2929 90 1,005 0,94 0,007 100 20 4,0 4,2673 120 1,004 0,94 0,006 100 17,5 3,5 3,7376 120 1,001 0,93 0,007 100 20 4,0 4,2843 120 1,001 0,93 0,006 100 17,5 3,5 3,7488 150 0,93 0,006 100 17,5 3,5 3,7525 150 1,001 0,93 0,005 100 15 3,0 3,2133 150 1,009 0,94 0,005 100 15 3,0 3,1878 xxi Giá trị trung bình Độ lệch chuẩn 3,391 0,316 4,287 0,016 4,099 0,313 3,924 0,312 3,385 0,319 Bảng phụ lục 2.3: Ảnh hƣởng thời gian xử lý enzyme đến ABTS Khối Khối lượng lượng Mẫu mẫu khô (g) (g) Cx OD ( TEAC/ml) Tổng mmol TEAC mmol TEAC/g 30 1,004 0,94 0,184 0,3588 18,0134 19,2362 30 0,999 0,93 0,189 0,2856 14,3385 15,3885 30 1,001 0,93 0,185 0,3442 17,2784 18,5066 60 0,996 0,93 0,18 0,4174 20,9533 22,5555 60 1,002 0,93 0,182 0,3881 19,4834 20,8475 60 1,003 0,94 0,178 0,4467 22,4233 23,9694 90 1,004 0,94 0,18 0,4174 20,9533 22,3757 90 0,999 0,93 0,178 0,4467 22,4233 24,0653 90 1,005 0,94 0,178 0,4467 22,4233 23,9217 120 1,004 0,94 0,18 0,4174 20,9533 22,3757 120 1,001 0,93 0,178 0,4467 22,4233 24,0173 120 1,001 0,93 0,178 0,4467 22,4233 24,0173 150 0,93 0,184 0,3588 18,0134 19,3132 150 1,001 0,93 0,182 0,3881 19,4834 20,8683 150 1,009 0,94 0,184 0,3588 18,0134 19,1409 xxii Giá trị Độ trung lệch bình chuẩn 17,710 2,044 22,458 1,563 23,454 0,937 23,470 0,948 19,774 0,952 Thí nghiệm xác định ảnh hƣởng pH xử lý enzyme Bảng phụ lục 3.1: Ảnh hƣởng pH xử lý enzyme đến TPC Khối Khối lượng lượng Mẫu mẫu khô (g) (g) OD TPC (ppm) Khối lượng TPC (mg galic) Khối lượng TPC (mg galic/g) 0,998 0,93 0,263 22,2 4,4397 4,7696 1,007 0,94 0,253 21,37 4,2744 4,5509 1,006 0,94 0,267 22,53 4,5058 4,8021 1,01 0,94 0,31 26,08 5,2165 5,5376 1,01 0,94 0,322 27,07 5,4149 5,7481 1,007 0,94 0,319 26,83 5,3653 5,7124 0,93 0,324 27,24 5,4479 5,8410 1,002 0,93 0,33 27,74 5,5471 5,9355 1,008 0,94 0,333 27,98 5,5967 5,9529 1,005 0,94 0,29 24,43 4,8860 5,2124 1,008 0,94 0,285 24,02 4,8033 5,1090 0,93 0,281 23,69 4,7372 5,0790 0,994 0,93 0,277 23,36 4,6711 5,0384 1,049 0,98 0,27 22,78 4,5554 4,6559 1,02 0,95 0,272 22,94 4,5884 4,8231 xxiii Giá trị trung bình Độ lệch chuẩn 4,708 0,137 5,666 0,113 5,909 0,060 5,134 0,070 4,839 0,192 Bảng phụ lục 3.2: Ảnh hƣởng pH xử lý enzyme đến TFC Khối Khối lượng lượng Mẫu mẫu khô (g) (g) OD V dịch chiết (ml) TFC (ppm) Khối lượng TFC (mg quer.) Khối lượng TFC (mg quer./g) 0,998 0,93 0,369 100 17,5 3,5 3,7601 1,007 0,94 0,38 100 15 3,0 3,1941 1,006 0,94 0,377 100 15 3,0 3,1973 1,01 0,94 0,364 100 17,5 3,5 3,7154 1,01 0,94 0,371 100 17,5 3,5 3,7154 1,007 0,94 0,373 100 17,5 3,5 3,7265 0,93 0,324 100 20 4,0 4,2886 1,002 0,93 0,33 100 17,5 3,5 3,7451 1,008 0,94 0,333 100 20 4,0 4,2546 1,005 0,94 0,29 100 25 5,0 5,3341 1,008 0,94 0,285 100 22,5 4,5 4,7864 0,93 0,281 100 22,5 4,5 4,8247 0,994 0,93 0,277 100 12,5 2,5 2,6966 1,049 0,98 0,27 100 15 3,0 3,0662 1,02 0,95 0,272 100 15 3,0 3,1534 xxiv Giá trị trung bình Độ lệch chuẩn 3,384 0,326 3,719 0,006 4,096 0,304 4,982 0,306 2,9721 0,243 Bảng phụ lục 3.3: Ảnh hƣởng pH xử lý enzyme đến ABTS Khối Khối lượng lượng Mẫu mẫu khô (g) (g) Cx OD ( TEAC/ml) Tổng mmol TEAC mmol TEAC/g 0,998 0,93 0,192 0,3444 17,2885 18,5731 1,007 0,94 0,189 0,3867 19,4129 20,6690 1,006 0,94 0,188 0,4008 20,1210 21,4442 1,01 0,94 0,187 0,4149 20,8292 22,1110 1,01 0,94 0,182 0,4855 24,3698 25,8696 1,007 0,94 0,185 0,4431 22,2454 23,6848 0,93 0,189 0,3867 19,4129 20,8136 1,002 0,93 0,187 0,4149 20,8292 22,2875 1,008 0,94 0,184 0,4572 22,9536 24,4145 1,005 0,94 0,193 0,3303 16,5803 17,6883 1,008 0,94 0,195 0,3021 15,1641 16,1292 0,93 0,189 0,3867 19,4129 20,8136 0,994 0,93 0,195 0,3021 15,1641 16,3564 1,049 0,98 0,193 0,3303 16,5803 16,9463 1,02 0,95 0,197 0,2739 13,7478 14,4508 xxv Giá trị Độ trung lệch bình chuẩn 20,229 1,485 23,889 1,888 22,505 1,810 18,210 2,385 15,918 1,304 Thí nghiệm xác định ảnh hƣởng nhiệt độ ủ enzyme Bảng phụ lục 4.1: Ảnh hƣởng nhiệt độ ủ enzyme đến TPC Khối Khối lượng lượng Mẫu mẫu khô (g) (g) OD V dịch chiết (ml) TPC (ppm) Khối lượng TPC (mg galic) Khối lượng TPC (mg galic/g) 40 0,93 0,32 100 26,91 5,3818 5,7701 40 0,998 0,93 0,313 100 26,33 5,2661 5,6574 40 1,001 0,93 0,299 100 25,17 5,0347 5,3926 50 1,004 0,94 0,322 100 27,07 5,4149 5,7825 50 1,002 0,93 0,325 100 27,32 5,4645 5,8471 50 1,004 0,94 0,329 100 27,65 5,5306 5,9060 60 0,93 0,322 100 27,07 5,4149 5,8056 60 0,999 0,93 0,315 100 26,50 5,2992 5,6872 60 1,02 0,95 0,315 100 26,50 5,2992 5,5701 70 1,003 0,94 0,305 100 25,67 5,1339 5,4879 70 1,002 0,93 0,299 100 25,17 5,0347 5,3872 70 1,012 0,94 0,3 100 25,26 5,0512 5,3515 xxvi Giá trị trung bình Độ lệch chuẩn 5,607 0,194 5,845 0,062 5,688 0,118 5,409 0,071 Bảng phụ lục 4.2: Ảnh hƣởng nhiệt độ ủ enzyme đến TFC Khối Khối lượng lượng Mẫu mẫu khô (g) (g) OD V dịch chiết (ml) TFC (ppm) Khối lượng TFC (mg quer.) Khối lượng TFC (mg quer/g) 40 0,93 0,006 100 17,5 3,5 3,7525 40 0,998 0,93 0,005 100 15 3,5 3,2229 40 1,001 0,93 0,005 100 15 3,0 3,2133 50 1,004 0,94 0,006 100 17,5 3,5 3,7376 50 1,002 0,93 0,008 100 22,5 4,5 4,8007 50 1,004 0,94 0,007 100 20 4,0 4,2715 60 0,93 0,008 100 22,5 4,5 4,8247 60 0,999 0,93 0,007 100 20 4,0 4,2929 60 1,02 0,95 0,007 100 20 4,0 4,2045 70 1,003 0,94 0,006 100 17,5 3,5 3,7413 70 1,002 0,93 0,006 100 17,5 3,5 3,7451 70 1,012 0,94 0,004 100 12,5 2,5 2,6486 xxvii Giá trị trung bình Độ lệch chuẩn 3,396 0,309 4,270 0,532 0,335 4,441 3,3783 0,632 Bảng phụ lục 4.3: Ảnh hƣởng nhiệt độ ủ enzyme đến ABTS Khối Khối lượng lượng Mẫu mẫu khô (g) (g) Cx OD ( TEAC/ml) Tổng mmol TEAC mmol TEAC/g 40 0,93 0,32 0,3567 17,9065 19,20 40 0,998 0,93 0,313 0,2865 14,3819 15,45 40 1,001 0,93 0,299 0,3146 15,7917 16,91 50 1,004 0,94 0,322 0,4831 24,2507 25,90 50 1,002 0,93 0,325 0,4129 20,7262 22,18 50 1,004 0,94 0,329 0,4269 21,4311 22,89 60 0,93 0,322 0,4831 24,2507 26,00 60 0,999 0,93 0,315 0,3286 16,4967 17,70 60 1,02 0,95 0,315 0,4129 20,7262 21,79 70 1,003 0,94 0,305 0,2444 12,2671 13,11 70 1,002 0,93 0,299 0,2444 12,2671 13,13 70 1,012 0,94 0,3 0,3286 16,4967 17,48 xxviii Giá trị Độ trung lệch bình chuẩn 17,188 1,889 23,653 1,975 21,830 4,148 14,572 2,516 Thí nghiệm xác định ảnh hƣởng nồng độ enzyme Bảng phụ lục 5.1: Ảnh hƣởng nồng độ enzyme TPC Khối Khối lượng lượng Mẫu mẫu khô (g) (g) OD TPC (ppm) Khối lượng TPC (mg galic) Khối lượng TPC (mg galic/g) 0,5 1,003 0,94 0,315 26,50 5,2992 5,6645 0,5 0,998 0,93 0,309 26,00 5,2000 5,5864 0,5 1,002 0,93 0,305 25,67 5,1339 5,4933 0,999 0,93 0,318 26,74 5,3488 5,7404 0,999 0,93 0,325 27,32 5,4645 5,8646 1,006 0,94 0,326 27,40 5,4810 5,8414 1,5 0,998 0,93 0,329 27,65 5,5306 5,9415 1,5 1,001 0,93 0,317 26,66 5,3322 5,7113 1,5 1,001 0,93 0,323 27,16 5,4314 5,8175 2,0 1,002 0,93 0,32 26,91 5,3818 5,7586 2,0 0,93 0,321 26,99 5,3983 5,7879 2,0 1,009 0,94 0,317 26,66 5,3322 5,6660 2,5 1,011 0,94 0,324 27,24 5,4479 5,7775 2,5 0,93 0,321 26,99 5,3983 5,7879 2,5 0,998 0,93 0,31 5,2165 5,6041 26,08 xxix Giá trị trung bình Độ lệch chuẩn 5,581 0,086 5,816 0,066 5,823 0,115 5,738 0,064 5,723 0,103 Bảng phụ lục 5.2: Ảnh hƣởng nồng độ enzyme TFC Khối Khối lượng lượng Mẫu mẫu khô (g) (g) OD TFC (ppm) Khối lượng TFC (mg galic) Khối lượng TFC (mg galic/g) 0,5 1,003 0,94 0,006 17,5 3,5000 3,7413 0,5 0,998 0,93 0,005 15 3,0000 3,2229 0,5 1,002 0,93 0,005 15 3,0000 3,2100 0,999 0,93 0,008 22,5 4,5000 4,8295 0,999 0,93 0,007 20 4,0000 4,2929 1,006 0,94 0,007 20 4,0000 4,2630 1,5 0,998 0,93 0,008 22,5 4,5000 4,8344 1,5 1,001 0,93 0,007 20 4,0000 4,2843 1,5 1,001 0,93 0,007 20 4,0000 4,2843 2,0 1,002 0,93 0,007 20 4,0000 4,2801 2,0 0,93 0,007 20 4,0000 4,2886 2,0 1,009 0,94 0,008 22,5 4,5000 4,7817 2,5 1,011 0,94 0,007 20 4,0000 4,2420 2,5 0,93 0,007 20 4,0000 4,2886 2,5 0,998 0,93 0,005 15 3,0000 3,2229 xxx Giá trị trung bình Độ lệch chuẩn 3,391 0,303 4,462 0,319 4,468 0,318 4,450 0,287 3,918 0,602 Bảng phụ lục 5.3: Ảnh hƣởng nồng độ enzyme đến ABTS Khối Khối lượng lượng Mẫu mẫu khô (g) (g) Cx OD ( TEAC/ml) Tổng mmol TEAC mmol TEAC/g Giá trị trung bình Độ lệch chuẩn 1,291 0,5 1,003 0,94 0,192 0,3567 17,9065 19,1411 0,5 0,998 0,93 0,192 0,3567 17,9065 19,2370 19,934 0,5 1,002 0,93 0,189 0,3988 20,0212 21,4230 0,999 0,93 0,195 0,3848 19,3163 20,7308 0,999 0,93 0,191 0,4269 21,4311 23,0005 22,441 1,006 0,94 0,186 0,4410 22,1360 23,5917 1,5 0,998 0,93 0,185 0,4550 22,8409 24,5381 1,5 1,001 0,93 0,185 0,4550 22,8409 24,4646 23,986 1,5 1,001 0,93 0,187 0,4269 21,4311 22,9545 2,0 1,002 0,93 0,184 0,4690 23,5458 25,1944 2,0 0,93 0,185 0,4550 22,8409 24,4890 24,152 2,0 1,009 0,94 0,178 0,4269 21,4311 22,7725 2,5 1,011 0,94 0,189 0,3988 20,0212 21,2323 2,5 0,93 0,188 0,4129 20,7262 22,2217 20,645 2,5 0,998 0,93 0,193 0,3427 17,2016 18,4797 1,510 0,894 1,246 1,939 xxxi