Các xét nghiệm quan trọng tại phòng vi sinh

Các xét nghiệm quan trọng phòng vi sinh Tại phòng vi sinh thực xét nghiệm quan trọng đặc biệt xét nghiệm liên quan đến bệnh lây qua đường tình dục Đây nơi thực kĩ thuật nuôi cấy làm kháng sinh đồ, góp phần định danh xác định kháng sinh điều trị phù hợp với bệnh Tủ lưu sổ sách Hốt vô trùng nuôi cấy định dang Bàn lấy bệnh phẩm nấm Bàn kính hiển vi Phòng nhân viên Bàn sổ sách ghi thông tin Cửa phụ Bàn lấy máu xét nghiệm Xếp giấy Máy tính kết nối mạng Bàn làm test chlam dụng cụ Giường lấy bệnh phẩm Tủ ấm Nhà vệ sinh Khu vực nhuộm soi Cửa Sơ đồ phòng vi sinh 3.2.1 Xét nghiệm chẩn đoán Chlamydia  Mục đích: Xác định kháng nguyên vỏ Lipopolysaccharide Chlamydia trachomatis  Nguyên lý: test nhanh dựa nguyên lý sắc ký miễn dịch o Kháng thể gắn màu gắn sẵn vùng phản ứng thử o Khi có kháng nguyên Chlammydi a tạo phức hơp KN – KT màu mao dẫn lên o Phức hợp bị bắt giữ vạch T tạo phức hợp KT – KN – KT màu màu o Tại vạch chứng C có màu tạo phức hợp KKT – KT màu  Quy trình xét nghiệm: o Dụng cụ, hóa chất:  Bộ kit thử hãng SD bioline gồm tăm bông, lọ hóa chất, congto hút thử  Đèn chiếu sáng  Mỏ vịt cỡ  Bàn phụ khoa( nữ) ghế ngồi( đói với nam)  Bút bi, bút  Găng tay, mũ, trang loại o Tiến hành xét nghiệm  Đối với bệnh nhân Nam - Yêu cầu bệnh nhân kéo quần dài xuống ngang đầu gối, ngỗi xuống ghế dùng tay mở lỗ miệng sáo - Cầm tăm đưa vào lỗ niệu đạo, ý lấy bệnh phẩm hố thuyền, nên để – 10s cho dịch thấm vào tăm - Rút tăm cho vào tube ghi sẵn tên tuổi từ trước  Đối với bệnh nhân nữ - Yêu cầu bệnh nhân cởi quần, treo lên mắc sau nằm lên bàn phụ khoa, chân gác lên cao - Dùng mỏ vịt mở âm đạo bệnh nhân cho bộc lộ cổ tử cung - Dùng tăm dài đưa vào ống cổ tử cung, để – 10s xoay để lấy bệnh phẩm - Cho vào tube ghi sẵn tên tuổi từ trước Phòng lấy bệnh phẩm Hộp đựng mỏ vịt  Quy trình chung: - Sau có bệnh phẩm cắm tube, nhỏ 300µl dung dịch A vào sau xoay tăm ngoáy vòng tròn 10 lần - Để sau phút cho tiếp 600µl dung dịch B, ngoáy tương tự sau ép tăm vào thành để tách hết dịch - Đậy nắp tube lại sau nhỏ – giọt vào vùng phản ứng thử - Thanh thử ghi rõ thông tin bệnh nhân đọc kết - Đọc kết sau 15 phút  Đọc kết quả: o Dương tính xuất vạch C T thử o Âm tính xuất vạch C o Test hỏng không thấy vạch C xuất 3.2.2 Soi tươi tìm trùng roi âm đạo Trichomonas Vaginalis  Mục đích: phát trực tiếp trùng roi kí sinh âm đạo bệnh nhân  Nguyên lý : bệnh phẩm dịch lấy đò sau âm đạo nhỏ nước muối sinh lý đem soi trực tiếp kính hiển vi để phát trùng roi  Quy trình xét nghiệm: o Dùng tăm vô trùng đưa sâu vào âm đạo lấy bệnh phẩm bên thành âm đạo (đối với trẻ em, chưa quan hệ tình dục, phụ nữ có thai) o Đưa mỏ vịt vào mở âm đạo xoay nhẹ định vị cổ tử cung, dùng tăm vô trùng lấy bệnh phẩm qua mỏ vịt đồ sau bên thành âm đạo o Bệnh phẩm lấy xong hoà lên lam kính ghi thông tin bệnh nhân có nhỏ sẵn giọt nước muối sinh lý vô khuẩn 0,9%, đậy kính soi vật kính hiển vi 10  Đọc kết : hình ảnh trùng roi cử động kính hiển vi cho kết dương tính 3.2.3 Nhuộm soi tìm lậu cầu, nấm, vi khuẩn khác  Mục đích : phát hình thể, tính chất bắt màu vi khuẩn nấm( có) bệnh phẩm  Nguyên lý : bệnh phẩm sau lấy đem nhuộm gram soi kính hiển vi vật kính dầu để xác định  Quy trình xét nghiệm: o Lấy bệnh phẩm:  Bệnh nhân nam: cách lấy bệnh phẩm tương tự làm test Chlamydia bệnh phẩm dàn lên lâm kính khô, ghi rõ thông tin  Bệnh nhân nữ : lấy bệnh phẩm vị trí lỗ niệu đạo, cổ tử cung đồ sau Sau bệnh nhân nằm lên bàn phụ khoa, yêu cầu bệnh nhân kéo rộng bên mép âm hộ, dùng ăng cấy tiệt trùng đưa vào lỗ niệu đạo sau phết lên lam kính (vị trí 1) Dùng mỏ vịt mở rộng âm đạo để tìm vị trí cổ tử cung, lấy bênh phẩm ống cổ tử cung phết lên lam( vị trí thứ 2) cuối đồ sau âm đạo (vị trí thứ 3)  Sau dàn bệnh phẩm lên lam kính để khô tự nhiên, cố định nhiệt đem nhuộm Gram o Quy trình nhuộm Gram  Nhỏ dung dịch tím Gentian phủ kín bệnh phẩm, để phút  Rửa nước sau nhỏ Lugol để 30s  Rửa nước, tẩy cồn tùy thuộc độ dày mỏng bệnh phẩm  Rửa nước, sau nhỏ đỏ Fuchsin phút  Rửa nước, để khô soi vật kính dầu Bộ nhuộm Gram  Tuy nhiên thuốc nhuộm có nồng độ cao, đậm đặc nên k cần để đủ thời gian quy trình mà nhuộm nhanh  Đọc kết quả: sau nhuộm gram đem tiêu soi vật kính dầu đánh giá tiêu số lượng bạch cầu, vi khuẩn Lacto Bacillus, lậu cầu, nấm Hình ảnh lậu cấp, vi khuẩn nằm bạch cầu  Tế bào Clue ( Clue cells) tế bào đặc biệt xuất có xuất vi khuẩn lạ làm cân hệ vi khuẩn có lợi dẫn đén thay đổi pH Điển hình tế bào biểu mô âm đạo với vi khuẩn bám bề mặt màng tế bào bị tổn thương nham nhở bánh mỳ ăn dở Bệnh phẩm lấy đồ sau nhuộm Gram, soi tương tự tìm lậu cầu Clue cell 3.2.4 Nuôi cấy định danh làm kháng sinh đồ  Mục đích : xác định nguyên gây bệnh tìm kháng sinh phù hợp để định hướng điều trị cho bệnh nhân  Quy trình: o Bệnh phẩm : lấy tương tự cách lấy bệnh phẩm nhuộm soi Thường xét nghiệm nuôi cấy kèm với định nhuộm soi o Sau lấy bệnh phẩm cấy lên môi trường thạch máu(tủ ấm thường) thạch socola ( thạch socola để tủ ấm 37ºC, – % CO2) Đọc kết sau 18 – 24h o Sau khuẩn lạc mọc tiến hành đọc tính chất khuẩn lạc màu sắc, hình dáng, kích thước, mùi Trên thạch máu đọc tính chất tan máu o Thường viện Da Liễu chủ yếu gặp lậu cầu nhiều nên làm test định danh hướng đến lậu cầu, test oxidase test phân hủy đường nhanh  Ghi tên tuổi bệnh nhân, đánh mã số vào phiếu xét nghiệm, test thử bệnh phẩm  Lấy test hoá học để nhiệt độ phòng từ 10 - 15 phút  Test oxidase: lấy đầu ăng khuẩn lạc làm khiết sau 18 - 24h cho lên miếng giấy thấm, nhỏ giọt oxidase lên bề mặt khuẩn lạc Nếu khẩn lạc chuyển sang màu đen dương tính  Test phân huỷ đường nhanh: để test thử nhiệt độ phòng khoảng 15phút trước thử nghiệm - Lấy đầu ăng khuẩn lạc làm khiết sau 18 - 24h hoà vào lọ Suspension medium (có sẵn hộp test) - Dùng ống hút nhựa hút canh khuẩn nhỏ vào giếng test thử: CONT NEG - GLU - MAL - FRU - SAC giếng 100µl - Phủ giếng phiến nhựa (có sẵn test) - Đặt test thử vào tủ ấm 35 - 36oC - Sau 4h đọc kết Test oxidase Test phân huỷ đường nhanh (Neisseria - 4H) o Các nguyên vi khuẩn khác sau nuôi cấy thạch máu ( bắt hầu hết vi khuẩn) chọn khuẩn lạc nghi ngờ cấy lên môi trường Uriselect Đây môi trường có chất thị màu vi khuẩn mọc lên có màu đặc trung cho loại từ dễ dàng định danh vi khuẩn Thạch Uriselect  Khuẩn lạc màu hồng đỏ E.coli, màu xanh da trời Enterococus faecalis, màu xanh nước biển Klebsiella  Kháng sinh đồ: sau định danh vi khuẩn, tiến hành kamf kháng sinh đồ để đánh giá độ nhạy cảm vi khuẩn với kháng sinh o Với vi khuẩn lậu: cấy môi trường thạch Thayer Martin  Hút 2ml nước muối sinh lý 0,9% vào tube thuỷ tinh vô khuẩn  Lấy khuẩn lạc làm khiết 18 - 24h hoà với nước muối sinh lý, so với độ đục tiêu chuẩn Mc Farland  Dùng pipette Pasteur hút canh khuẩn láng lên bề mặt đĩa thạch, hút bỏ canh khuẩn thừa bề mặt đĩa thạch  Để khô mặt thạch KSĐ nhiệt độ phòng  Đặt khoanh giấy kháng sinh lên mặt đĩa thạch, đặt khoanh giấy đĩa, khoanh giấy cách thành đĩa thạch 2cm  Để khoảng 10 phút nhiệt độ phòng cho kháng sinh khuyếch tán  Đặt đĩa thạch đặt khoanh giấy KSĐ vào chuông, sau 18 - 24h đọc kết o Vi khuẩn khác: làm tương tự lậu lựa chọn môi trường thạch Muller Hilton cần đặt vào tủ ấm thường o Nhận định kết báo cáo  Đo đường kính vùng ức chế, kết tính mm so với bảng chuẩn,phân loại độ nhạy cảm chủng vi khuẩn lậu thành mức sở so sánh với bảng chuẩn: S (Susceptible) : nhạy cảm I (Intermediate) : trung gian R (Resistant) : đề kháng  Ghi kết vào sổ lưu kết giấy trả kết cho bệnh nhân Kháng sinh đồ thạch Muller Hilton Kháng sinh đồ vi khuẩn lậu 3.2.5 Các xét nghiệm khác Tại làm số xét nghiệm ngưng kết Latex tìm kháng thể kháng Liên cầu, xét nghiệm rạch da tìm vi khuẩn phong, nuôi cấy Mycoplasma kit thử Nuôi cấy Mycoplasma  Trong suốt thời gian thực tập phòng vi sinh, em có hội trực tiếp tham gia vào trình nhuộm soi bệnh phẩm, soi nhận định tiêu bản, làm test Chlamydia Ngoài ra, e kiến tập cách lấy bệnh phẩm đường sinh dục, bệnh phẩm rạch da, cách anh chị nuôi cấy,định danh làm kháng sinh đồ [...]... kết quả và giấy trả kết quả cho bệnh nhân Kháng sinh đồ thạch Muller Hilton Kháng sinh đồ vi khuẩn lậu 3.2.5 Các xét nghiệm khác Tại đây còn làm một số xét nghiệm như ngưng kết Latex tìm kháng thể kháng Liên cầu, xét nghiệm rạch da tìm vi khuẩn phong, nuôi cấy Mycoplasma trên bộ kit thử Nuôi cấy Mycoplasma  Trong suốt thời gian đi thực tập tại phòng vi sinh, em đã có cơ hội trực tiếp tham gia vào quá... đều với nước muối sinh lý, so với độ đục tiêu chuẩn Mc Farland  Dùng pipette Pasteur hút canh khuẩn láng đều lên bề mặt đĩa thạch, hút bỏ canh khuẩn thừa trên bề mặt đĩa thạch  Để khô mặt thạch KSĐ ở nhiệt độ phòng  Đặt các khoanh giấy kháng sinh lên mặt đĩa thạch, đặt 6 khoanh giấy trên 1 đĩa, khoanh giấy cách thành đĩa thạch 2cm  Để khoảng 10 phút ở nhiệt độ phòng cho kháng sinh khuyếch tán đều... sinh, em đã có cơ hội trực tiếp tham gia vào quá trình nhuộm soi bệnh phẩm, soi và nhận định tiêu bản, làm test Chlamydia Ngoài ra, e còn được kiến tập cách lấy bệnh phẩm đường sinh dục, bệnh phẩm rạch da, cách anh chị nuôi cấy,định danh và làm kháng sinh đồ ... Đặt đĩa thạch đã đặt khoanh giấy KSĐ vào chuông, sau 18 - 24h đọc kết quả o Vi khuẩn khác: làm tương tự như lậu nhưng sẽ lựa chọn môi trường là thạch Muller Hilton và chỉ cần đặt vào tủ ấm thường o Nhận định kết quả và báo cáo  Đo đường kính vùng ức chế, kết quả tính bằng mm và so với bảng chuẩn,phân loại độ nhạy cảm của chủng vi khuẩn lậu thành 3 mức trên cơ sở so sánh với bảng chuẩn: S (Susceptible)