Các qui trình phòng huyết thanh xét nghiệm tại

Các qui trình phòng huyết xét nghiệm Phòng huyết phòng quan trọng bậc khoa thực loạt xét nghiệm dùng để chẩn đoán, khẳng định theo dõi bệnh đặc biệt bệnh lây truyền qua đường tình dục HIV, giang mai, viêm gan B Ngoài ra, phòng làm số xét nghiệm tìm kháng thể kháng nhân ANA, kháng thể tự miễn ds DNA hay gặp bệnh Lupus ban đỏ hệ thống Nơi để giấy xét nghiệm Bàn lấy mẫu Gương đọc kết Kính hiển vi Máy ly tâm Phòng nhân viên Cửa vào Giường lấy bệnh phẩm R c Bể ấm tách huyết Bàn làm xét nghiệm Tủ lạnh lưu hóa chất Bàn sổ sách lưu thông tin Sơ đồ phòng huyết Máy tính kết nối mạng bệnh viện 3.1.1 Các kỹ thuật phát bệnh giang mai Bệnh giang mai bệnh nhiễm khuẩn kinh điển, tiến triển qua giai đoạn với triệu chứng lâm sàng như: săng, đào ban, mảng niêm mạc, sẩn , biểu lâm sàng gọi giang mai kín Bệnh xoắn khuẩn Treponema Pallidum gây nên, đường lây bệnh quan hệ tình dục mẹ truyền sang Để chẩn đoán bệnh giang mai phải dựa vào tiền sử quan hệ tình dục , biểu lâm sàng kết xét nghiệm Trên thực tế nhiều bệnh nhân biểu lâm sàng, tiền sử tình dục không rõ ràng kết xét nghiệm yếu tố định chẩn đoán Các xét nghiệm phát bệnh giang mai bao gồm xét nghiệm tìm xoắn khuẩn tổn thương, xét nghiệm có tính đặc hiệu cao đòi hỏi người làm phải có kinh nghiệm, có kính hiển vi đen phương pháp nhuộm riêng nên phương pháp khó thực tuyến , chẩn đoán giang mai phải dựa vào phản ứng huyết Các phản ứng huyết phát bệnh Giang mai có chung nguyên lý dùng kháng nguyên biết để phát kháng thể có huyết huyết tương người bệnh 3.1.1.1 Test nhanh chẩn đoán giang mai  Mục đích : phát kháng thể kháng giang mai có mặt huyết bệnh nhân  Nguyên lý : Dựa vào nguyên lý sắc ký miễn dịch chiều, kháng nguyên gắn màu gắn giếng phản ứng, nhỏ huyết bệnh nhân vào đó, có kháng thể xảy phản ứng KT – KN màu di chuyển ngược lên theo nguyên lý sắc ký Phức hợp bị giữ lại vạch T gắn sẵn KN giang mai Tại vạch C gắn sẵn kháng thể kháng giang mai nên luôn xảy phức hợp KT – KN màu Giếng nhỏ huyết Vạch phản ứng T Vạch chứng C  Quy trình xét nghiệm: o Dụng cụ, hóa chất:  Ống lấy máu chứa chất chống đông không  Kim lấy máu, dây garo, cồn  Giá đựng ống máu, bể ấm tách huyết  Pipet vi lượng, máy ly tâm  Hóa chất sinh phẩm hãng SD – Bioline gồm thử dung dịch Buffer o Tiến hành:  Sau lấy máu tĩnh mạch cho vào ống nghiệm, để vào bể ấm để tách huyết tự nhiên ly tâm  Lấy kit thử gồm que thử dung môi mẫu đặt lên mặt phẳng khô, thoáng  Ghi thông tin bệnh nhân lên que thử  Dùng pipet hút 10µl huyết nhỏ vào vùng phản ứng  Nhỏ thêm – giọt dung môi vào  Đọc kết từ 10 – 20 phút  Đọc kết quả: o Sau nhỏ huyết thanh, chờ đủ thời gian đọc kết o Phản ứng dương tính phản ứng xuất vạch T C o Phản ứng âm tính phản ứng có vạch C o Phản ứng không xuất vạch C kit thử bị hỏng, phải làm lại Test nhanh giang mai: dương tính (vị trí 3) âm tính ( vị trí 1, 2, 4) 3.1.1.2 Phản ứng RPR ( Rapid Plasma Reagin)  Mục đích: phát kháng thể kháng giang mai có mặt huyết bệnh nhân  Nguyên lý:kháng nguyên có tên Cardiolipin gắn than hoạt cho tiếp xúc với huyết người bị bệnh giang mai có tượng ngưng kết, lên  Quy trình: o Dụng cụ, hóa chất:  Sinh phẩm (01 hộp sinh phẩm hãng Biomerier): - 05 lọ kháng nguyên RPR lọ 2ml - 02 lọ huyết chứng dương - 02 lọ huyết chứng âm  Dụng cụ: - Kim lấy máu - Ống đựng máu - Giá đựng ống máu - Bìa phản ứng - Pipet nhựa, que dẹt để dàn huyết - Quả bóp cao su - Lọ nhựa có gắn kim phẳng  Máy: - Máy lắc tròn tốc độ 100 vòng/phút - Máy ly tâm tốc độ 2000 – 3000 vòng/phút - Tủ lạnh thường - Tủ lạnh sâu -200C o Bảo quản hoá chất:  Bảo quản kháng nguyên 2-8oC lọ thuỷ tinh, không để kháng nguyên lọ nhựa  Trước làm phản ứng: để hoá chất nhiệt độ phòng hết lạnh o Bảo quản bệnh phẩm:  Huyết tương , huyết để nhiệt độ phòng làm ngày  Nếu không làm ngay: - Bảo quản – 8oC ngày - Bảo quản – 20oC lâu o Chuẩn bị chất thử:  Kháng nguyên: - Để nhiệt độ phòng lắc trước dùng - Chuyển kháng nguyên từ lọ thuỷ tinh sang lọ nhựa - Sau ngày làm xong phản ứng: chuyển kháng nguyên từ lọ nhựa vào lọ thuỷ tinh để bảo quản, lọ nhựa rửa nước cất để khô o Cách làm phản ứng:  Lấy 2ml máu tĩnh mạch vào ống thuỷ tinh (hoặc ống nhựa) không chống đông (hoặc có chất chống đông)  Để co cục máu tự nhiên ly tâm để lấy huyết  Huyết thanh, huyết tương dùng làm phản ứng phải trong, không nhiễm trùng, không vỡ hồng cầu  Phản ứng RPR định tính: • Nhỏ 0,05ml huyết (hoặc huyết tương) vào vòng tròn bìa phản ứng (để giọt rơi tự do) • Huyết chứng dương chứng âm đồng thời thực • Dùng que dẹt dàn huyết giới hạn vòng tròn • Lắc nhẹ giọt kháng nguyên nhỏ giọt kháng nguyên vào vòng tròn có huyết (không khuấy trộn) • Lắc tốc độ 100 vòng/phút phút  Phản ứng RPR định lượng: • Thực phản ứng huyết pha loãng dần tới độ pha loãng lớn cho kết dương tính Pha loãng huyết tiến hành với lượng gấp đôi:1/2, 1/4, 1/8, 1/16 • Nhỏ 0,05ml NaCl 90/00 vào vòng tròn bìa phản ứng, nhỏ 0,05ml huyết bệnh nhân vào vòng tròn 1, trộn chuyển sang vòng tròn 2, trộn chuyển tiếp tới vòng tròn sau • Dàn huyết hết vòng tròn bìa phản ứng • Nhỏ giọt kháng nguyên lên vòng tròn có chứa huyết pha loãng • Lắc 100 vòng/phút phút  Đọc kết quả: o Đọc kết sau lắc xong o Đọc mắt thường nơi đủ ánh sáng o Kết âm tính thấy:  Đám than hoạt mịn tập trung vòng tròn  Màu xám đồng o Kết dương tính nhẹ: có hạt kết cụm màu đen bao quanh vòng tròn bìa phản ứng o Kết dương tính : có hạt kết cụm màu đen khắp vòng tròn bìa phản ứng o Phản ứng dương tính giả số bệnh như: bệnh phong, bệnh lupus đỏ, bệnh sốt rét trường hợp cần phải làm thêm phản ứng TPHA để xác định chẩn đoán  Ưu điểm ứng dụng: o Dùng để sàng lọc phát Giang mai o Độ nhậy cao, độ đặc hiệu ngang với VDRL BW o Đơn giản, dễ thực o Làm định tính định lượng dùng để theo dõi kết điều trị QUY TRÌNH THỰC HIỆN KỸ THUẬT RPR ĐỊNH TÍNH TT Nội dung - Đi găng vô trùng - Ghi mã số tên tuổi bệnh nhân lên ống - Lấy máu tĩnh mạch - Ly tâm để ống máu nhiệt độ phòng chờ tách huyết - Nhỏ 0,05ml huyết (hoặc huyết tương) bệnh nhân vào vòng tròn bìa phản ứng - Nhỏ đồng thời huyết chứng dương chứng âm vào vòng tròn bìa phản ứng - Dàn huyết hết vòng tròn bìa phản ứng - Lấy kháng nguyên sang lọ nhựa, bỏ giọt kháng nguyên - Nhỏ vòng tròn có huyết 01 giọt kháng nguyên - Lắc 100vòng/phút x 8phút 10 - Đọc kết sau lắc xong 11 - Đọc nơi đủ ánh sáng 12 - Khi kết nghi nghờ dương tính làm phản ứng định lượng Phản ứng RPR bìa cứng 3.1.1.3 Phản ứng TPHA(Treponema pallidum Hemagglutination) Phản ứng TPHA Tara Rathlev đề xuất năm 1965, kháng nguyên sử dụng xoắn khuẩn Giang mai đánh tơi siêu âm gắn lên bề mặt tế bào (là hồng cầu cừu,hồng cầu gà, hồng cầu chim ) kháng thể phát kháng thể kháng xoắn khuẩn  Nguyên lý: Tế bào gắn xoắn khuẩn bị ngưng kết cho tiếp xúc với huyết bệnh nhân Giang mai  Quy trình: o Dụng cụ hoá chất:  Sinh phẩm: (01 hộp hãng Biorad) - 01 lọ dung dịch pha loãng huyết - 01 lọ tế bào không gắn kháng nguyên - 01 lọ tế bào có gắn kháng nguyên - 01 lọ huyết chứngdương - 01 lọ huyết chứng âm  Dụng cụ: - Kim lấy máu - Ống đựng máu - Giá đựng ống máu - Phiến nhựa - Pipet vi lượng - Tip vàng 10 – 200àl - Gương đọc kết  Máy: - Máy lắc tròn tốc độ 100 vòng/phút - Máy ly tâm tốc độ 2000 – 3000 vòng/phút - Tủ lạnh thường - Tủ lạnh sâu -200C o Bảo quản hoá chất:  Bảo quản hoá chất 4oC  Trước làm phản ứng: để hoá chất nhiệt độ phòng hết lạnh  Lắc nhẹ nhàng dùng để tránh làm biến dạng tế bào o Bảo quản bệnh phẩm:  Huyết để nhiệt độ phòng làm ngày  Nếu không làm ngay: + Bảo quản – 8oC ngày + Bảo quản – 20oC lâu o Chuẩn bị chất thử:  Chuyển sinh phẩm từ nơi bảo quản nhiệt độ phòng để nhiệt độ phòng khoảng 15 – 20 phút  Lắc nhẹ lọ tế bào có gắn không gắn kháng nguyên o Cách làm phản ứng:  Lấy 2ml máu tĩnh mạch vào ống thuỷ tinh (hoặc ống nhựa) không chống đông  Để co cục máu tự nhiên ly tâm để lấy huyết  Huyết phải trong, không nhiễm trùng, không vỡ hồng cầu  Pha loãng huyết 1/20: • Nhỏ 190µl dung dịch pha loãng huyết vào giếng số • Nhỏ 10µl huyết vào giếng số 1, trộn • Huyết chứng dương chứng âm thực đồng thời  Phản ứng TPHA định tính: • Lấy 25µl huyết pha loãng 1/20 nhỏ vào giếng thứ thứ • Nhỏ 75µl tế bào gắn kháng nguyên vào giếng • Nhỏ 75µl tế bào không gắn kháng nguyên vào giếng • Trộn lắc nhẹ • Độ pha loãng cuối sau thêm dung dịch tế bào vào 1/80 • Ủ nhiệt độ phòng, đặt khay nhựa mặt phẳng rung động tối thiểu 45 phút  Phản ứng TPHA định lượng: • Huyết bệnh nhân pha loãng theo tỷ lệ 1/20, 1/40, 1/80, 1/160 • Nhỏ 25µl dung dịch pha loãng huyết vào giếng từ giếng trở • Lấy 25µl huyết pha loãng 1/20 nhỏ vào giếng trộn đều, chuyển 25µl huyết pha loãng sang giếng sau, tiếp tục hết • Đọc giếng nhỏ tế bào không gắn kháng nguyên trước: giếng âm tính biểu hiện: tế bào lắng tạo thành nút nhỏ đáy giếng • Đọc giếng nhỏ tế bào có gắn kháng nguyên: - Âm tính: thấy tế bào lắng tạo thành nút nhỏ đáy giếng - Dương tính mạnh: tế bào ngưng kết dàn mỏng toàn đáy giếng • Các kết dương tính từ hiệu giá 80 biểu thị có mặt kháng thể Giang mai • Các mẫu huyết dương tính nghi ngờ không xác định phải làm phản ứng định lượng  Ưu điểm ứng dụng: o Độ nhạy độ đặc hiệu cao:  Phát trường hợp Giang mai không phản ứng với kháng nguyên không đặc hiệu  Xác định lại kết dương tính phản ứng không đặc hiệu o Nhậy cảm đặc hiệu ngang với FTA o Nhận định kết dễ dàng mắt thường o Có thể thực tuyến sở Gương đọc kết phản ứng TPHA QUY TRÌNH THỰC HIỆN PHẢN ỨNG TPHA ĐỊNH TÍNH TT Nội dung - Đi găng vô trùng - Ghi mã số tên tuổi bệnh nhân lên ống - Lấy máu tĩnh mạch - Ly tâm chờ tự tách huyết - Để sinh phẩm nhiệt độ phòng cho hết lạnh - Pha loãng huyết bệnh nhân 1/20 - Pha loãng huyết chứng 1/20 - Nhỏ huyết pha loãng 1/20 sang giếng 3, giếng 25µl - Nhỏ 75µl tế bào có gắn kháng nguyên vào giếng 10 - Nhỏ 75µl tế bào không gắn kháng nguyên vào giếng 11 - Đậy phiến nhựa lắc nhẹ 12 - Đặt phiến mặt phẳng không rung động 13 - Nhận định kết sau 45phút 14 - Khi phản ứngTPHA dương tính nghi ngờ làm phản ứng định lượng Ngoài xét nghiệm soi tươi tìm trực tiếp xoắn khuẩn Giang mai làm không phát 3.1.2 Test nhanh chẩn đoán viêm gan B ( HbsAg) Viêm gan siêu vi B nguyên nhân gây tử vong hàng thứ giới, có tới triệu bệnh nhân tử vong năm nhiễm siêu vi B.Việt nam thuộc vùng dịch tễ có tỷ lệ phần trăm nhiễm HBV cao (>8%) Lâm sàng: Thời gian ủ bệnh bệnh viêm gan B trung bình từ 60 – 90 ngày, biểu lâm sàng: - Vàng da (10 – 40%) - Biểu viêm tối cấp dẫn tới tử vong (0,5-1%) - Biểu viêm mạn tính (15-25%) Viêm gan B dấu ấn miễn dịch: - HBs Ag (+): virút viêm gan B tồn thể - Anti-HBs (+): Có miễn dịch với virút viêm gan B - HBe Ag (+): Virút viêm gan B nhân đôi - Anti-Hbe (+): Virút viêm gan B không chép Với điều trị Interfern (IFN) HBs Ag có khả (10-30%) Để phát nhiễm virút viêm gan B thường sử dụng kỹ thuật sau: - Kỹ thuật miễn dịch gắn men (ELISA) - Kỹ thuật miễn dịch sắc ký  Mục đích: phát kháng nguyên bề mặt virus viêm Gan B có mặt huyết bệnh nhân  Nguyên lý: o Dựa vào nguyên lý sắc ký miễn dịch chiều o Tại vùng phản ứng chứa kháng thể gắn màu kháng HbsAg Khi nhỏ huyết bệnh nhân, có kháng nguyên virus tạo thành phức hợp KN – KT màu o Phức hợp mao dẫn ngược lên màu vạch T chứa kháng thể kháng virus viêm gan B( kháng thể thứ 2) tạo phức hợp KT – KN – KT màu o Tại vạch C có gắn sẵn kháng KT nên lúc vạch màu tạo phức hợp kháng KT – KT màu trừ trường hợp test bị hỏng  Quy trình xét nghiệm: o Dụng cụ, hóa chất:  Ống lấy máu chứa chất chống đông không  Kim lấy máu, dây garo, cồn  Giá đựng ống máu, bể ấm tách huyết  Máy ly tâm  Hóa chất sinh phẩm hãng SD – Bioline o Tiến hành:  Sau lấy máu tĩnh mạch cho vào ống nghiệm, để vào bể ấm để tách huyết tự nhiên ly tâm  Cắm ống máu thẳng giá, sau cắm que thử vào cho huyết k ngập vạch Max  Đọc kết sau 15 phút  Đọc kết quả: o Phản ứng dương tính xuất vạch T C thử o Âm tính xuất vạch C thử o Phản ứng hỏng không xuất vạch C Test nhanh HBsAg 3.1.3 Các kỹ thuật phát HIV 3.1.3.1 Test nhanh sàng lọc HIV  Mục đích: phát kháng thể kháng virus HIV có mặt huyết bệnh nhân  Nguyên lý: sắc ký miễn dịch định tính o Tại vùng phản ứng que thử gắn sẵn KN màu o Khi nhỏ huyết bệnh nhân vào huyết có kháng thể kháng HIV xuất phức hợp KT – KN màu o Phức hợp di chuyển cách mao dẫn tạo màu vạch T xuất phức hợp KN – KT – KN màu o Tại vạch C luôn xuất phức hợp KN màu – KT nên lúc có màu  Quy trình xét nghiệm: o Dụng cụ,hóa chất:  Ống lấy máu chứa chất chống đông không  Kim lấy máu, dây garo, cồn  Giá đựng ống máu, bể ấm tách huyết  Pipet vi lượng, máy ly tâm  Hóa chất sinh phẩm hãng SD – Bioline gồm thử dung dịch Buffer o Tiến hành:  Sau lấy máu tĩnh mạch cho vào ống nghiệm, để vào bể ấm để tách huyết tự nhiên ly tâm  Lấy kit thử gồm que thử dung môi mẫu đặt lên mặt phẳng khô, thoáng  Ghi thông tin bệnh nhân lên que thử  Dùng pipet hút 10µl huyết nhỏ vào vùng phản ứng  Nhỏ thêm – giọt dung môi vào  Đọc kết từ 10 – 20 phút  Đọc kết o Kết âm tính : xuất vạch phản ứng C que thử o Xuất vạch gồm vạch chứng C vạch màu cho dương tính với HIV – o Xuất vạch gồm vạch chứng C vạch màu cho dương tính với HIV – o Xuất đồng thời vạch: vạch chứng C, vạch vạch  Nếu cường độ màu vạch đậm vạch nhận định dương tính với HIV –  Nếu cường đọ màu vạch đậm vạch thi nhận định dương tính với HIV – o Nhiễm đồng thời HIV xảy cá thể o Trường hợp không xuất vạch C test bị hỏng 3.1.3.2 Xét nghiệm khẳng định HIV  Tại phòng huyết khẳng định nhiễm HIV để khẳng định phải tiến hành xét nghiệm phương pháp với nguyên lý khác hãng khác Xét nghiệm khẳng định phản ứng serodia ELISA Test nhanh HIV dương tính ( số 3) âm tính ( ) 3.1.4 Các xét nghiệm khác Phòng huyết làm số xét nghiệm đặc biệt ELISA tìm kháng thể kháng nhân ANA kháng thể tự miễn dsDNA Tuy nhiên xét nghiệm làm nên chúng em kiến tập nội dung không trực tiếp làm [...]... hỏng 3.1.3.2 Xét nghiệm khẳng định HIV  Tại phòng huyết thanh còn được khẳng định nhiễm HIV nhưng để khẳng định thì phải tiến hành xét nghiệm bằng 3 phương pháp với 3 nguyên lý khác nhau và của 3 hãng khác nhau Xét nghiệm khẳng định ở đây là phản ứng serodia và ELISA Test nhanh HIV dương tính ( số 3) và âm tính ( 1 và 2 ) 3.1.4 Các xét nghiệm khác Phòng huyết thanh còn làm một số xét nghiệm đặc biệt... không gắn kháng nguyên o Cách làm phản ứng:  Lấy 2ml máu tĩnh mạch vào ống thuỷ tinh (hoặc ống nhựa) không chống đông  Để co cục máu tự nhiên hoặc ly tâm để lấy huyết thanh  Huyết thanh phải trong, không nhiễm trùng, không vỡ hồng cầu  Pha loãng huyết thanh 1/20: • Nhỏ 190µl dung dịch pha loãng huyết thanh vào giếng số 1 • Nhỏ 10µl huyết thanh vào giếng số 1, trộn đều • Huyết thanh chứng dương và chứng... Gương đọc và kết quả phản ứng TPHA QUY TRÌNH THỰC HIỆN PHẢN ỨNG TPHA ĐỊNH TÍNH TT Nội dung 1 - Đi găng vô trùng 2 - Ghi mã số hoặc tên tuổi bệnh nhân lên ống 3 - Lấy máu tĩnh mạch 4 - Ly tâm hoặc chờ tự tách huyết thanh 5 - Để sinh phẩm ở nhiệt độ phòng cho hết lạnh 6 - Pha loãng huyết thanh bệnh nhân 1/20 7 - Pha loãng huyết thanh chứng 1/20 8 - Nhỏ huyết thanh đã pha loãng 1/20 sang giếng 2 và 3,... thể kháng virus HIV có mặt trong huyết thanh bệnh nhân  Nguyên lý: sắc ký miễn dịch định tính o Tại vùng phản ứng của que thử đã gắn sẵn KN màu o Khi nhỏ huyết thanh bệnh nhân vào nếu trong huyết thanh có kháng thể kháng HIV sẽ xuất hiện phức hợp KT – KN màu o Phức hợp này sẽ di chuyển bằng cách mao dẫn và sẽ tạo màu ở vạch T vì xuất hiện phức hợp KN – KT – KN màu o Tại vạch C luôn luôn xuất hiện phức... lúc nào cũng có màu  Quy trình xét nghiệm: o Dụng cụ,hóa chất:  Ống lấy máu chứa chất chống đông hoặc không  Kim lấy máu, dây garo, bông cồn  Giá đựng ống máu, bể ấm tách huyết thanh  Pipet vi lượng, máy ly tâm  Hóa chất sinh phẩm hãng SD – Bioline gồm thanh thử và dung dịch Buffer o Tiến hành:  Sau khi lấy máu tĩnh mạch cho vào ống nghiệm, để vào bể ấm để tách huyết thanh tự nhiên hoặc ly tâm... Nguyên lý: Tế bào đã gắn xoắn khuẩn sẽ bị ngưng kết khi cho tiếp xúc với huyết thanh bệnh nhân Giang mai  Quy trình: o Dụng cụ và hoá chất:  Sinh phẩm: (01 hộp của hãng Biorad) - 01 lọ dung dịch pha loãng huyết thanh - 01 lọ tế bào không gắn kháng nguyên - 01 lọ tế bào có gắn kháng nguyên - 01 lọ huyết thanh chứngdương - 01 lọ huyết thanh chứng âm  Dụng cụ: - Kim lấy máu - Ống đựng máu - Giá đựng ống... mạch cho vào ống nghiệm, để vào bể ấm để tách huyết thanh tự nhiên hoặc ly tâm  Cắm ống máu thẳng trên giá, sau đó cắm que thử vào sao cho huyết thanh k ngập quá vạch Max  Đọc kết quả sau 15 phút  Đọc kết quả: o Phản ứng dương tính khi xuất hiện 2 vạch T và C trên thanh thử o Âm tính khi xuất hiện 1 vạch C trên thanh thử o Phản ứng hỏng khi không xuất hiện vạch C Test nhanh HBsAg 3.1.3 Các kỹ thuật... bộ đáy giếng • Các kết quả dương tính từ hiệu giá 80 mới biểu thị sự có mặt của kháng thể Giang mai • Các mẫu huyết thanh dương tính hoặc nghi ngờ hoặc không xác định thì phải làm phản ứng định lượng  Ưu điểm và ứng dụng: o Độ nhạy và độ đặc hiệu cao:  Phát hiện các trường hợp Giang mai không phản ứng với các kháng nguyên không đặc hiệu  Xác định lại những kết quả dương tính của các phản ứng không... B( kháng thể thứ 2) và tạo phức hợp KT – KN – KT màu o Tại vạch C có gắn sẵn kháng KT nên lúc nào vạch này cũng hiện màu vì tạo phức hợp kháng KT – KT màu trừ trường hợp test bị hỏng  Quy trình xét nghiệm: o Dụng cụ, hóa chất:  Ống lấy máu chứa chất chống đông hoặc không  Kim lấy máu, dây garo, bông cồn  Giá đựng ống máu, bể ấm tách huyết thanh  Máy ly tâm  Hóa chất sinh phẩm hãng SD – Bioline... phút  Phản ứng TPHA định lượng: • Huyết thanh bệnh nhân được pha loãng theo tỷ lệ 1/20, 1/40, 1/80, 1/160 • Nhỏ 25µl dung dịch pha loãng huyết thanh vào mỗi giếng từ giếng 4 trở đi • Lấy 25µl huyết thanh pha loãng 1/20 nhỏ vào giếng 4 trộn đều, chuyển 25µl huyết thanh pha loãng sang giếng sau, tiếp tục như vậy cho tới hết • Đọc giếng nhỏ tế bào không gắn kháng nguyên trước: giếng này âm tính biểu