Nhiễm sắc thể người đồ nhiễm sắc thể người Nhiễm sắc thể người Năm 1956, J H Tjio A Levan xác định xác số lượng nhiễm sắc thể người là: 2n = 46 Sau nhờ kĩ thuật nhuộm màu giemsa quan sát hiển vi huỳnh quang phát vệt đặc trưng để xây dựng nên nhiễm sắc đồ Sử dụng máu làm tiêu quan sát nhiễm sắc thể: Nuôi cấy tế bào bạch cầu máu ngoại vi người bình thường người mắc bệnh áp dụng khoảng năm gần Nhưng phương pháp ứng dụng rộng rãi sau phát hợp chất polysacchyridprotid lấy từ hạt cô ve dùng làm chất gây ngưng kết không đặc hiệu hồng cầu Người ta dùng chất phytohemaglutinin với dung dịch nhược trương cho phép thu kết phân chia tế bào máu ngoại vi tốt Phương pháp nhóm nghiên cứu Moorhead sửa đổi áp dụng Cơ sở phương pháp người ta trộn lẫn huyết có lẫn bạch cầu vào môi trường dinh dưỡng với tỷ lệ định cho thêm vào hỗn hợp chất phytohemaglutinin, sau cho vào lọ trung tính nuôi cấy Ngoài chất phytohemaglutinin chiết từ đậu cô ve nhiều chất khác có tác dụng ngưng kết hồng cầu Trong trình nuôi cấy bạch cầu tiến hành quan sát chuyển hóa loại tế bào bạch cầu Sự phân chia tế bào bạch cầu làm sở cho nghiên cứu đặc điểm tế bào bạch cầu máu Trên sở nghiên cứu tế bào máu bình thường bệnh lý, phát trạng thái bệnh lý tế bào bạch cầu người động vật Kỹ thuật lai tế bào soma Đến năm 1960 xác định cách đáng tin cậy nhóm liên kết (mỗi nhóm có gen) nhiễm sắc thể thường gen nhiễm sắc thể X người, theo thống kê từ phả hệ, chưa biết nhiễm sắc thể Vào năm 1967, Mc Weiss H Green sử dụng kỹ thuật lai tế bào soma (somatic cell hybridisation) lần xác định gen TK mã hóa cho enzyme thymidin kinase nằm nhiễm sắc thể 17 Các dòng tế bào soma người động vật có vú, nuôi chung với diện virus Sendai dung hợp hay lai với Các tế bào dung hợp trình phân bào dần số nhiễm sắc thể tế bào cha mẹ Ví dụ, tế bào người dung hợp với tế bào chuột, tế bào phân chia, nhiễm sắc thể người bị nhanh Sau khoảng 30 hệ tế bào, dòng tế bào lai chuột nhắt người lại toàn nhiễm sắc thể chuột khoảng nhiễm sắc thể người số tế bào 1-2 nhiễm sắc thể người Sự xác định vị trí gen nhiễm sắc thể định vào tồn hay gen đối chiếu với diện hay văng mặt nhiễm sắc thể dòng tế bào Kỹ thuật giúp vượt qua khó khăn thống kê theo phả hệ nhờ mà gần trăm gen xác định vị trí 23 nhóm liên kết gen Trong trường hợp gen TK, dòng tế bào chuột TK- lai với tế bào người TK+ Sự dung hợp tạo tế bào lai chuột- người Mặc dù phần lớn nhiễm sắc thể người bị loại nhanh dòng tế bào lai, số dòng nhiễm sắc thể người Khi dòng tế bào nuôi môi trường có chất aminopterin, tế bào TK- sai hỏng hoạt tính thymidin kinase, không mọc khả chuyển hóa thymidine thành thymidylic acid cần cho tổng hợp ADN Do có tế bào lai có nhiễm sắc thể 17 người tạo dòng ổn định Chứng tỏ gen TK+ phải nằm nhiễm sắc thể Chứng xác nhận thêm thực cách chọn dòng môi trường có thêm chất bromodeoxyuridin riboside (BUDR) chất đồng đẳng với nitrogenous base chuyển hóa thymidin kinase (TK+) gắn vào ADN làm tế bào chết Hậu quả, nuôi môi trường có BUDR dòng tế bào sống gen TK+ tương ứng với điều đó, chúng nhiễm sắc thể 17 người Dựa vào phương pháp này, người ta lập đồ nhiễm sắc thể người sở có mặt sản phẩm gen tương ứng với có mặt nhiễm sắc thể tế bào - Điều kiện để thực việc lập đồ nhiễm sắc thể người nhờ phương pháp + Tính trạng nghiên cứu mã hóa gen nhiễm sắc thể người, mà phân biệt rõ ràng với tính trạng tương ứng chuột