THỬ NGHIỆM VI SINH VẬT

BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐH CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP HCM Môn: Phân Tích Vi Sinh Vật Thực Phẩm Đề tài: test sinh hóa chủ đề 5-8 GVHD: Phan Thị Kim Liên Thành viên nhóm      Nguyễn Thị Hải Yến Hoàng Thị Thu Hương Bạch Thị Thu Hằng Phạm Thị Hồng Diễm Lê Đức Tài  2005140749 2005140204 2005140136 2005140059 2005140485 Thử nghiệm decarboxylase • Thử nghiệm urease • Thử nghiệm gelatinase • IV III II I I THỬ NGHIỆM KHẢ NĂNG OXY HÓA- LÊN MEN  Nguyên tắc:  Mục đích: xác định vi sinh vật biến dưỡng carbohydrate làm nguồn lượng thông qua phương thức lên men hay oxi hóa I THỬ NGHIỆM KHẢ NĂNG OXY HÓA- LÊN MEN  Cơ sở sinh hoá I THỬ NGHIỆM KHẢ NĂNG OXY HÓA- LÊN MEN  Môi trường:  Oxidation/ Fermentation (Hugh- Leifson) chứa glucose nguồn carbon  Chất thị pH: Bromothymol Blue I THỬ NGHIỆM KHẢ NĂNG OXY HÓA- LÊN MEN I THỬ NGHIỆM KHẢ NĂNG OXY HÓA- LÊN MEN II THỬ NGHIỆM DECARBOXYLASE  Nguyên tắc:  Đánh giá hoạt tính enzyme vi sinh vật khử nhóm carboxyl acid amine tạo amine diamine CO2 điềề u kiện kỵ khí II THỬ NGHIỆM DECARBOXYLASE  Có loại decarboxylase quan trọng Lysine decarboxylase Ornithine decarboxylase Arginine decarboxylase (LDC) (ODC) (ADC) Các enzyme tổng hợp môi trường có tính acid chứa chấất cảm ứng đặc hiệu III THỬ NGHIỆM UREASE  + Môi trường thạch nghiềng Christensen urea: chứa thị phenol đỏ Pepton 1g Dextrose 1g Urea 20g Phenol đỏ 0.012g Agar 15-20g NaCl 5g K2HPO4 2g III THỬ NGHIỆM UREASE  - Phương pháp thực hiện: Bước 1: Chuẩn bị môi trường Bước 2: Cấấy sinh khôấ i vi sinh vật vào môi trường Bước 3: Ủ 37℃ 48h đôấ i với môi trường RSU 24h v ới môi tr ường Christensen Urea Bước 4: Quan sát ghi nhận kềất III THỬ NGHIỆM UREASE  Đọc kết quả:  A) Môi trường urea lỏng:  -Kiểm tra dương tính (+): Môi trường màu vàng chuyển thành màu tím đỏ  -Kiểm tra ấm tính (-): Môi trường không chuyển màu (màu vàng cam) III THỬ NGHIỆM UREASE (a)Proteus vulgaris (urease positive) (b) Escherichia coli (urease negative) III THỬ NGHIỆM UREASE        B) Môi trường thạch nghiềng: Dương tính (+): Màu đỏ tím trền bềềmặt môi trường thạch nghiềng ++++: Toàn thạch đổi màu +++: Chỉ mặt thạch đổi màu +: Mặt thạch đỉnh đổi màu, phấền môi trường lại không đổi màu (+) Nhanh: Đổi màu vòng 1-6 (+) Chậm: Đổi màu vòng 24 đềấn ngày ủ lấu IV THỬ NGHIỆM UREASE (a) Uninoculated (b) Proteus mirabilis (rapidly urease positive) (c) Klebsiella pneumoniae (delayed urease positive) (d) Escherichia coli (urease negative) IV THỬ NGHIỆM GELATINASE  Nguyên tắc:  Mục đích: Thử nghiệm khả phân giải gelatine gelatinase  Cơ sở sinh hóa: gelatinase Galatine polypeptide + acicd amine IV THỬ NGHIỆM GELATINASE  Môi trường: Nutrient gelatin stab medium  Môi trường sử dụng: Dạng ôấng nghiệm thạch sấu  Môi trường canh ND thềm 10% gelatin  Chú ý: Gelatin dạng răấn ủ 200C thấấ p dạng lỏng ủ 350C lớn Gelatin chuyển từ dạng (trạng thái răấ n) thành dạng lỏng ủ 280C Vì thềấ , nềấ u ôấ ng gelatin ủ 350C lớn chúng phải đặt vào tủ lạnh hay tủ mát trước đọc kềất IV THỬ NGHIỆM GELATINASE  Phương pháp thực hiện: Bước 1: Chuẩn bị môi trường Bước 2: Cấy sinh khối vi sinh vật vào môi trường Bước 3: Ủ 37℃ 24h môi trường canh ND 24h Bước 4: Quan sát ghi nhận kết IV THỬ NGHIỆM GELATINASE Đọc kết  (+) : Môi trường tan chảy (positive) (A):Aeromonas Hidrophila  (-) : Môi trường không tan ch ảy (negative) (B): E.Coli CÂU HỎI TRẮẮ C NGHIỆM Cấu 1: Hình thể vi sinh vật biềấ n dưỡng carbohydrate theo phương thức lền men? A B C CÂU HỎI TRẮẮ C NGHIỆM Cấu 2: Chỉ thị sử dụng thực nghiệm oxi hoá- lền men gì? A B C D Bromoserol purple Phenol đỏ Bromothymol blue Tấất đềều Cấu 3: Môi trường sử dụng thực nghiệm decarboxylase ? E F G H Môi trường Hugh- leifson Môi trường Christensen urea Môi trường Nutrient gelatin stab medium Môi trường Decarboxylase basal medium CÂU HỎI TRẮẮ C NGHIỆM Cấu 4: Urea bị thuỷ phấn xúc tác enzyme urease tạo thành? A B C D NH3 CO2 NH3 NH3 H2O NH3 O2 Cấu 5: Thực nghiệm Urease phấn biệt hai loại vi sinh vật nào? E F G H Proteus mirabilis vs Escherichia coli Proteus vulgaris vs Escherichia coli Pseudomonas vs Escherichia coli Aeromonas Hidrophila vs Escherichia coli CÂU HỎI TRẮẮ C NGHIỆM Cấu 6: Mục đích thử nghiệm gelatinase gì? A Phấn biệt sôấvi sinh vật có khả tổng hợp nhóm enzyme ga Cám ơn cô bạn lắẮng nghe! [...]...II THỬ NGHIỆM DECARBOXYLASE  2 Cơ sở sinh hóa II THỬ NGHIỆM DECARBOXYLASE 3 Môi trường: Môi trường được sử dụng là môi trường Decarboxylase Basal Medium, ch ứa ch ỉ th ị bromocresol purple,pH 6,0.Chỉ thị này có màu thay đổi t ừ vàng thành tím với vùng chuyển màu là pH 5,2-6,8 II THỬ NGHIỆM DECARBOXYLASE 4 Đọc kết quả:   Thử nghiệm là (+) môi trường có màu tím Thử nghiệm là (-) khi... trường Bước 2: Cấy sinh khối vi sinh vật vào môi trường Bước 3: Ủ ở 37℃ trong 24h đối với môi trường canh ND và trong 24h Bước 4: Quan sát và ghi nhận kết quả IV THỬ NGHIỆM GELATINASE 5 Đọc kết quả  (+) : Môi trường tan chảy (positive) (A):Aeromonas Hidrophila  (-) : Môi trường không tan ch ảy (negative) (B): E.Coli CÂU HỎI TRẮẮ C NGHIỆM Cấu 1: Hình nào dưới đấy thể hiện vi sinh vật biềấ n dưỡng carbohydrate... và CO2 NH3 NH3 và H2O NH3 và O2 Cấu 5: Thực nghiệm Urease có thể phấn biệt được hai loại vi sinh vật nào? E F G H Proteus mirabilis vs Escherichia coli Proteus vulgaris vs Escherichia coli Pseudomonas vs Escherichia coli Aeromonas Hidrophila vs Escherichia coli CÂU HỎI TRẮẮ C NGHIỆM Cấu 6: Mục đích của thử nghiệm gelatinase là gì? A Phấn biệt một sô vi sinh vật có khả năng tổng hợp nhóm enzyme ga Cám... có màu tím Thử nghiệm là (-) khi môi trường trong có màu vàng III THỬ NGHIỆM UREASE  1 Nguyên tắc:  -Mục đích: Thử nghiệm khả năng của vi sinh vật tổng hợp enzyme urease xúc tác sự thủy phấn urea tạo thành hai phấn tử NH3 và CO2 làm tăng pH của môi trường và có thể được theo dõi qua sự thay đổi màu của chấấ t chỉ thị pH III THỬ NGHIỆM UREASE  2 Cơ sở khoa học- Cơ chế urease (NH2)2CO +H2O 2NH3... ngày ủ hoặc lấu hơn IV THỬ NGHIỆM UREASE (a) Uninoculated (b) Proteus mirabilis (rapidly urease positive) (c) Klebsiella pneumoniae (delayed urease positive) (d) Escherichia coli (urease negative) IV THỬ NGHIỆM GELATINASE  1 Nguyên tắc:  Mục đích: Thử nghiệm khả năng phân giải gelatine bởi gelatinase  2 Cơ sở sinh hóa: gelatinase Galatine polypeptide + acicd amine IV THỬ NGHIỆM GELATINASE  3 Môi... Dextrose 1g Urea 20g Phenol đỏ 0.012g Agar 15-20g NaCl 5g K2HPO4 2g III THỬ NGHIỆM UREASE  - 4 Phương pháp thực hiện: Bước 1: Chuẩn bị môi trường Bước 2: Cấấy sinh khôấ i vi sinh vật vào môi trường Bước 3: Ủ ở 37℃ trong 48h đôấ i với môi trường RSU và trong 24h v ới môi tr ường Christensen Urea Bước 4: Quan sát và ghi nhận kềất quả III THỬ NGHIỆM UREASE  5 Đọc kết quả:  A) Môi trường urea lỏng:  -Kiểm... lỏng:  -Kiểm tra dương tính (+): Môi trường màu vàng chuyển thành màu tím đỏ  -Kiểm tra ấm tính (-): Môi trường không chuyển màu (màu vàng cam) III THỬ NGHIỆM UREASE (a)Proteus vulgaris (urease positive) (b) Escherichia coli (urease negative) III THỬ NGHIỆM UREASE        B) Môi trường thạch nghiềng: Dương tính (+): Màu đỏ tím trền bềềmặt môi trường thạch nghiềng ++++: Toàn bộ thạch đổi màu... B C CÂU HỎI TRẮẮ C NGHIỆM Cấu 2: Chỉ thị được sử dụng trong thực nghiệm oxi hoá- lền men là gì? A B C D Bromoserol purple Phenol đỏ Bromothymol blue Tấất cả đềều đúng Cấu 3: Môi trường sử dụng trong thực nghiệm decarboxylase ? E F G H Môi trường Hugh- leifson Môi trường Christensen urea Môi trường Nutrient gelatin stab medium Môi trường Decarboxylase basal medium CÂU HỎI TRẮẮ C NGHIỆM Cấu 4: Urea bị... Tăng pH môi trường Làm đổi màu chỉ thị đỏ phenol (pH từ 6.8-8.4)) III THỬ NGHIỆM UREASE  3 Môi trường:  + Môi trường urea lỏng (Rustigian-Stuart’s Urea Broth): chứa chỉ thị phenol đỏ, chuyển màu từ vàng sang đỏ (vùng chuyển màu là pH 6,8-8,4) Urea 20g Cao nấấ m men 0.1g NA2HPO4 9.5g K2HPO4 9.1g Phenol đỏ 0.01g Nước cấấ t 1L III THỬ NGHIỆM UREASE  + Môi trường thạch nghiềng Christensen urea: chứa chỉ... trường sử dụng: Dạng ôấng nghiệm thạch sấu  Môi trường canh ND thềm 10% gelatin  Chú ý: Gelatin ở dạng răấn khi ủ ở 200C hoặc thấấ p hơn và dạng lỏng khi ủ ở 350C hoặc lớn hơn Gelatin chuyển từ dạng (trạng thái răấ n) thành dạng lỏng khi ủ ở 280C Vì thềấ , nềấ u ôấ ng gelatin được ủ ở 350C hoặc lớn hơn thì chúng phải được đặt vào tủ lạnh hay tủ mát trước khi đọc kềất quả IV THỬ NGHIỆM GELATINASE  4