Nghiên cứu thành phần lipid và các dạng phân tử của phospholipid từ một số loài san hô mềm ở việt nam (TT)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ …… ….***………… ĐẶNG THỊ PHƯƠNG LY “NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN LIPID VÀ CÁC DẠNG PHÂN TỬ CỦA PHOSPHOLIPID TỪ MỘT SỐ LOÀI SAN HÔ MỀM Ở VIỆT NAM” Chuyên ngành: Hóa học Hợp chất thiên nhiên Mã số: 62.44.01.17 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC HÀ NỘI – 2016 Công trình hoàn thành tại: Học viện Khoa học Công nghệ Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Người hướng dẫn: GS.TS Phạm Quốc Long – Viện Hóa học Hợp chất thiên nhiên – Viện HLKH&CN Việt Nam TSKH Andrey B Imbs – Viện Sinh vật biển Zhirmunsky – Phân viện Viễn Đông – LB Nga Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp Nhà nước Vào hồi ………giờ, ngày …… tháng …… năm 2016 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Quốc gia Việt Nam - Thư viện Học viện Khoa học Công nghệ I GIỚI THIỆU LUẬN ÁN Tính cấp thiết Rạn san hô có vai trò lớn việc trì cân sinh thái biển Lipid thành phần hóa học quan trọng, chiếm tới 40% sinh khối khô san hô, sở cấu trúc màng tế bào polip có vai trò dự trữ lượng Thành phần lipid, axit béo phản ánh đa dạng sinh hóa, nguồn dinh dưỡng, mối quan hệ cộng sinh, đường sinh tổng hợp vận chuyển theo chuỗi thức ăn dạng ban đầu lipid, sức khỏe san hô Nghiên cứu hóa học, hoạt tính sinh học lipid phức tạp, việc phân lập hợp chất lipid riêng biệt khó khăn,và sử dụng chúng làm sản phẩm dược phẩm gặp nhiều hạn chế lớp chất lipid hỗn hợp 50 đến 200 hợp chất hóa học riêng biệt (còn gọi “dạng phân tử”), giống đầu phân cực, khác mạch acyl alkyl phân tử Hiện nay, với thiết bị nghiên cứu đại, khoa học giới đạt tiến lớn việc phân tích thành phần hóa học dạng phân tử số lớp lipid không phân cực thực vật lipid phân cực số loài ruột khoang Cho tới thông tin thành phần dạng phân tử lớp chất phospholipid – lớp chất chứa đựng nhiều thông tin trình sinh tổng hợp lipid san hô hoàn toàn chưa công bố Việt Nam giới Trên sở đó, lựa chọn đề tài “Nghiên cứu thành phần lipid dạng phân tử phospholipid từ số loài san hô mềm Việt Nam” Mục tiêu nghiên cứu luận án - Thực nghiên cứu chuyên sâu lipid, axit béo và đặc biệt lớp chất phospholipid loài san hô mềm Việt Nam (Sinularia macropodia Xenia sp Capnella sp.) nhằm bổ sung thêm số liệu vào sở liệu lipid san hô Việt Nam - Phân tích số liệu thu nhằm tìm lipid đánh dấu, mối quan hệ hệ cộng sinh san hô vật chủ vi sinh vật cộng sinh, phân loại … loài nghiên cứu - Thu số liệu hoàn toàn dạng phân tử phospholipid từ đối tượng san hô Việt Nam, mở hướng nghiên cứu chuyên sâu lĩnh vực Nội dung nghiên cứu luận án • Phân tích hàm lượng lipid tổng thành phần, hàm lượng lớp chất lipid tổng loài san hô nghiên cứu • Phân tích thành phần hàm lượng axit béo lipid tổng, lớp chất lipid phân cực không phân cực loài san hô nghiên cứu • Phân tích thành phần, hàm lượng lớp chất phospholipid ba loài san hô nghiên cứu • Nghiên cứu dạng phân tử lớp chất phospholipid • Khảo sát hoạt tính sinh học lớp chất, phân lớp lipid phân lập từ mẫu san hô nghiên cứu Những điểm luận án Đây công trình nghiên cứu chi tiết thành phần hàm lượng lớp chất lipid, axit béo, phospholipid loài san hô mềm Sinularia macropodia, Xenia sp Capnella sp thu thập vùng biển Việt Nam Lần đầu tiên, dạng phân tử phosphlipid: phosphatidylcholine (PC), phosphatidylethanolamine (PE), phosphatidylserine (PS), ceramide aminoethylphosphonate (CAEP), phosphatidylinositol (PI), lyso phospholipids LPC, LPE, LPS loài san hô mềm xác định, bao gồm: 15 dạng phân tử PC dạng phân tử LPC, 25 dạng phân tử PE dạng LPE, dạng phân tử PS LPS, dạng phân tử CAEP, 32 dạng phân tử PI Lần phát có mặt axit béo mạch siêu dài nằm dạng phân tử PI 18:0/26:5 PI 18:0/26:6 có mặt mẫu san hô mềm Đã chứng minh cấu trúc hợp chất CAEP 16:0/18:2base lần phân lập từ đối tượng san hô mềm Đã đề xuất vai trò biomarker thành phần lipid axit béo san hô: - Dạng phân tử PC 16:0e/18:4 minh chứng cho vận chuyển axit béo từ vi sinh vật cộng sinh sang sang hô vật chủ - Axit béo mạch dài C24 đặc trưng sinh tổng hợp san hô vật chủ hệ cộng sinh san hô – zooxanthellae có mặt phần lớn phân lớp PS, PI Bố cục luận án Luận án gồm 120 trang, có 41 hình, 28 bảng, sơ đồ Bố cục luận án: Mở đầu (2 trang); Chương 1: Tổng quan (37 trang); Chương 2: Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu (6 trang), Chương 3: Thực nghiệm (14 trang); Chương 4: Kết thảo luận (48 trang); Kết luận kiến nghị (3 trang); Danh mục công trình công bố luận án (1 trang); Tài liệu tham khảo (11 trang); Ngoài có 29 trang phụ lục với hình phổ, kết phân tích TLC, GC-MS, HRMS, NMR II NỘI DUNG CỦA LUẬN ÁN MỞ ĐẦU Phần mở đầu đề cập đến ý nghĩa khoa học, tính thực tiễn, đối tượng nhiệm vụ nghiên cứu luận án CHƯƠNG TỔNG QUAN Trong phần tổng quan, luận án giới thiệu khái niệm chung lipid, phân loại lipid phân cực tổng hợp số hoạt tính sinh học lipid sinh vật biển Qua tài tìm hiểu tài liệu tổng quan cho thấy, thành phần lipid, axit béo có vai trò đánh dấu sinh học (biomarker) san hô, thể nhiều khía cạnh khác nhau: đặc điểm dinh dưỡng, phân loại sinh thái, tính chất hệ cộng sinh, sức khỏe san hô phân loại chemotaxonomy Luận án nêu lên vai trò phương pháp phổ khối lượng phân tích lipid CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu San hô mềm Sinularia macropodia (Anthozoa, Octocorallia, Alcyonacea, Alcyoniidae);, Xenia sp (Anthozoa, Octocorallia, Alcyonacea, Xeniidae) Capnella sp (Anthozoa, Octocorallia, Alcyonacea, Nephtheidae), thu thập vùng biển Nha Trang, Việt Nam năm 2013-2014, định tên PGS TS Đỗ Công Thung cs., lưu trữ tiêu Viện Tài nguyên Môi trường biển, Viện Hàn lâm KH&CN Việt Nam 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp chiết lipid tổng Chiết lipid tổng theo phương pháp Folch J.F (1957), phương pháp thường quy sử dụng để chiết lipid với đối tượng san hô phòng thí nghiệm Viện Sinh vật biển, phân viện Viễn Đông, LB Nga 2.2.2 Phương pháp phân lập lớp chất, phân lớp lipid Sắc ký lớp mỏng (TLC) sắc ký lớp mỏng điều chế, sắc ký cột (CC), sắc ký lỏng cao áp (HPLC) 2.2.3 Phương pháp xác định thành phần hàm lượng lớp chất lipid, phospholipid - Thành phần hàm lượng lớp chất lipid: sử dụng TLC kết hợp với chương trình phân tích hình ảnh Sorbfil TLC Videodensitometer, Krasnodar, LB Nga - Thành phần lớp chất phospholipid: xác định TLC chiều, thuốc thử molybdate ninhydrin; quang phổ kế UV 1800 hãng Shimadzu (Kyoto, Nhật Bản) IBM-FEB-RAS 2.2.4 Xác định thành phần hàm lượng axit béo Hỗn hợp methyl ester axit béo phân tích máy sắc ký khí GC sắc ký khí kết nối khối phổ GC-MS, sử dụng thư viện phổ chuẩn NIST để so sánh 2.2.5 Phương pháp xác định dạng phân tử cấu trúc hợp chất phân lớp phospholipid a Dạng phân tử phospholipid từ mẫu san hô phân tích phương pháp phổ khối phân giải cao HRMS, ghi thiết bị Shimadz LCMS-IT-TOF, hãng Shimadzu (Kyoto, Nhật Bản) cung cấp b Phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều 1H NMR, 13C NMR chiều HSQC, HMBC, COSY ghi máy Bruker Avance DPX-700 (Karlsruhe, Germany) 700 125 MHz, sử dụng TMS chất chuẩn nội (CDCl3, 30oC), đo Viện Hóa sinh Hữu cơ, FEB, RAS) 2.2.6 Phương pháp phân tích thành phần (PCA) Trong luận án, phân tích PCA sử dụng phần mềm chương trình ”Statisticstica 5.1” (StatSoft, Inc., USA) 2.2.7 Phương pháp đánh giá hoạt tính sinh học Thử nghiệm hoạt tính kháng VSV kiểm định hoạt tính gây độc tế bào: thực phòng Sinh học thực nghiệm – Viện Hóa học hợp chất thiên nhiên CHƯƠNG THỰC NGHIỆM Sơ đồ nghiên cứu chung Phần miêu tả trình chiết lipid tổng, xác định thành phần hàm lượng lớp chất lipid phospholipid, phân tích thành phần hàm lượng axit béo lipid tổng, lipid trung tính lipid phân cực, phân lập phân lớp lipid để phân tích dạng phân tử, xác dịnh dạng phân tử chất chuẩn phospholipid phân lớp phospholipid phân lập dược, đánh giá hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định hoạt tính gây độc tế bào lipid tổng, lipid phân cực phân lớp phospholipid Sử dụng phổ khối phân giải cao phân tích chất chuẩn phospholipid mẫu nghiên cứu - Một số chất chuẩn phospholipid thực phân tích sử dụng phương pháp phổ khối phân giải cao IT-TOF/HRMS điều kiện ion hóa hóa học áp suất khí (APCI) ion hóa phun mù điện tử (ESI) Lipid phát phận phân tích khối kết hợp song song hai kỹ thuật bẫy ion thời gian bay phận thiết bị Shimadzu LCMS-IT-TOF (Kyoto, Japan), hoạt động đồng thời hai chế độ ion âm ion dương phân tích Các chất chuẩn phospholipid phân tích sử dụng liệu để so sánh: 1-O-hexadecyl-2-oleoyl-snglycero-3-phosphocholine (PC),1-O-(1Z-octadecenyl)-2-oleoyl-sn-glycero3-phosphoethanolamine (PE) (Avanti Polar Lipid, Inc Alabaster, Alabama, USA), hỗn hợp phospholipid từ đậu tương (L-α-Lecithin Type II-S from Soybean, PC hàm lượng 20 %, Sigma Chemicals Co., St Louis, MO, USA) - Các phân đoạn PE, PC, CAEP, PI, LPC, PS hòa tan MeOH, tiến hành phân tích dạng phân tử thiết bị LCMS-IT-TOF Các dạng phân tử phân lớp phospholipid phát HRMS xác định việc so sánh với phổ chất chuẩn hãng Shimadzu Solution với phần mềm xử lý v.3.60.361 Quá trình định lượng loại phân tử lớp chất lipit phân cực tính toán theo diện tích pic chất thu phổ ion âm ion dương Hằng số vật lý kiện phổ hợp chất phân lập từ loài Xenia sp Hợp chất CAEP phân lập từ mẫu san hô mềm Xenia sp sau tinh chế HPLC, tiến hành đo phổ NMR để làm rõ cấu trúc Đặc tính hóa lý liệu NMR: Dạng vô định hình màu trắng; 1H NMR (700 MHz, CDCl +CD OD)  ppm: 4.04 (1H, m, H-1a), 3 3.75 (1H, m, H-1b), 3.78 (1H, m, H-2), 3.96 (1H, t-like, J = 7.0 Hz, H-3), 5.36 (1H, dd, J = 15.4, 7.0 Hz, H-4), 5.61 (1H, dt, J = 15.4, 7.0 Hz, H-5), 1.93 (2H, dt, J = 6.0, 16.8 Hz, H-6), 1.95 (2H, dt, J = 5.6, 16.8 Hz, H-7), 5.27 (1H, m, H-8), 5.29 (1H, m, H-9), 1.84 (2H, dd, J = 14.3, 7.0 Hz, H-10), 1.10→1.15 (H-11→H-17), 0.76 (3H, t, 7.0 Hz, H-18), 2.05 (2H, t, J = 7.7 Hz, H-2ʹ), 1.47 (2H, m, H-3ʹ), 1.10→1.15 (H-4ʹ→H-15ʹ), 0.76 (3H, t, 7.0 Hz, H-16ʹ), 1.71 (2H, dt, J = 6.3, 16.1 Hz, H-1ʹʹ), 2.96 (2H, dt, 6.3, 16.5 Hz, H-2ʹʹ) C NMR (175 MHz, CDCl3+CD3OD)  ppm: 63.5 (C-1), 54.3 (C-2), 71.3 (C-3), 129.3 (C-4), 133.5 (C-5), 32.6 (C-6), 32.58 (C-7), 129.3 (C-8), 131.0 (C-9), 32.3 (C-10), 29.2→29.7 (C-11→C-15), 31.9 (C-16), 22.7 (C17), 14.0 (C-18), 174.5 (C-1ʹ), 36.6 (C-2ʹ), 26.0 (C-3ʹ), 29.2→29.7 (C-4ʹ → C-13ʹ), 31.9 (C-14ʹ), 22.7 (C-15ʹ), 14.0 (C-16ʹ), 24.3 (C-1ʹʹ), 35.7 (C-2ʹʹ) 13 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Hàm lượng lipid tổng Hàm lượng lipid tổng (% trọng lượng tươi) ba mẫu san hô S macropodia, Xenia sp., Capnella sp 1,88± 0,12%, 2,54±0,15%, 1,44±0,10 %, kết thống với kết nghiên cứu trước hàm lượng lipid tổng loài san hô mềm Việt Nam khác 4.2 Thành phần lớp chất lipid Bảng 4.2 Thành phần lớp chất lipid mẫu san hô nghiên cứu (n=3) TT Lớp chất PoL ST FFA TAG MADG WE Khác Sinularia macropodia 21,14 ±1,17 10,59 ± 0,75 5,37 ± 0,20 13,79 ± 0,45 25,87 ± 1,14 18,63 ± 1,39 4,61 ± 0,76 Xenia sp 36,79 ± 3,92 10,52 ± 1,22 3,18 ± 0,81 14,29 ± 1,94 7,7 ± 4,30 21,48 ± 1,82 5,74 ± 0,78 Capnella sp 24,91 ± 2,55 11,32 ± 0,10 3,37 ± 0,15 12,31 ± 0,70 26,15 ± 2,71 18,78 ± 0,80 3,16 ± 0,15 PoL: lipid phân cực; ST: sterol; FFA: axit béo tự do; TAG: triacylaglycerol; MADAG: monoalkyldiacylglycerol; WE: sáp Hàm lượng cao lipid tổng lớp chất PoL (cao Xenia sp 36,79% TL) MADAG (cao Capnella sp 26,15% TL) MADAG coi lớp chất đánh dấu cho san hô vật chủ hệ cộng sinh san hô – zooxanthellae Mẫu Xenia sp., hàm lượng lớp chất MADAG thấp so với hai mẫu lại, có 8,0%, thay vào hàm lượng cao vượt trội lớp chất PoL, chiếm tới 36,79% lipid tổng Lớp chất WE mẫu san hô mềm nghiên cứu chiếm hàm lượng lớn, khoảng 20% lipid tổng Hai lớp chất ST TAG có tỉ lệ đồng mẫu Hàm lượng ST loài san hô Sinularia macropodia, Xenia sp., Capnella sp 10,59%, 10,52% 11,32% Hàm lượng lớp chất TAG 13,79%, 14,29% 12,31% Hàm lượng lớp chất axit béo lipid tổng mẫu san hô khoảng 3-5% Như vậy, so với tài liệu nghiên cứu trước đây, thành phần hàm lượng lớp chất lipid tổng loài san hô nghiên cứu bao gồm hầu hết lớp chất biết PoL, ST, FFA, TAG, MADG, WE với hàm lượng PoL chiếm thành phần chủ yếu Ngoài ra, lipid tổng mẫu san hô xuất thêm lớp chất chưa xác định, chiếm tỉ lệ không lớn, loài san hô Sinularia macropodia 4,61%, Xenia sp.là 5,74% Capnella sp.là 3,16% 4.3 Thành phần axit béo mẫu san hô nghiên cứu Trong nghiên cứu này, thành phần hàm lượng axit béo lipid tổng (TL), lipid trung tính (NL) lipid phân cực (PoL) mẫu san hô mềm xác định Axit béo no phân bố phân đoạn NL cao PoL, hàm lượng cao 16:0 Các axit béo không no đa nối đôi PUFA phân bố chủ yếu phân đoạn PoL Trong loài, Xenia sp có tổng hàm lượng PUFA lipid tổng cao (57,01%) nằm chủ yếu phân đoạn PoL (64,28%) Trong TL loài san hô nghiên cứu có mặt axit béo đặc trưng cho san hô mềm có chứa vi sinh vật cộng sinh zooxanthellae Các axit béo 24:5n-6 24:6n-3 axit béo đánh dấu cho san hô mềm (san hô tám tia), cao TL loài Sinularria macropodia – 5,53% tổng axit béo, PoL cao loài Capnella sp., chiếm 9,38% axit béo phân đoạn Hầu hết loài thuộc Acyonacea hàm lượng 24:5n-6 cao 24:6n-3 Xác định có mặt axit béo 24:4n TL loài Xenia sp., chưa xác định vị trí nối đôi cấu trúc axit béo hàm lượng thấp Các axit béo đánh dấu cho VSV cộng sinh có mặt TL mẫu nghiên cứu với hàm lượng đáng kể 16:2n-7, 18:3n-6, 18:4n-3, 18:5n-3, 11 nhỏ Phân tích định lượng theo phương pháp Kostetsky, kết thu được trình bày Bảng 4.4 Bảng 4.4 Thành phần hàm lượng phân lớp phospholipid mẫu san hô mềm Sinularia macropodia, Xenia sp., Capnella sp Các phân lớp phospholipid Phosphatidylchonline (PC) Phosphatidylethanolamine (PE) Phosphatidylserine (PS) Ceramide aminoethylphosphonate (CAEP) + lysophosphatidylethanolamine (LPE) Phosphatidylinositol (PI) Khác** Hàm lượng (% tổng phospholipid) Sinularia Xenia sp Capnella sp macropodia 27,75 ± 3,45 39,51 ± 2,24 35,53 ±1,46 18,84 ± 1,60 20,84 ± 2,56 23,62 ± 2,05 26,73 ± 1,82 20,53 ± 1,75 21,13 ± 2,43 14,21 ± 1,25 (CAEP + LPE) 9,76 ± 1,04 (CAEP + LPE) 10,20 ± 1,67 (CAEP) 2,20 ± 1,10 10,27 ± 2,31 4,31 ± 0,78 5,35* ± 2,11 2,08 ± 0,70 7,45 ± 3,40 *: lysophosphatidylcholine **: lysophosphatidylinositol, lysophosphatidylserine, dạng oxy hóa phospholipid Ở loài san hô mềm hàm lượng cao lớp chất PC: 27,75%, 39,51% 35,53% tổng phospholipid ba mẫu Sinularia macropodia, Xenia sp., Capnella sp Tiếp theo PE PS chiếm xấp xỉ 20% cho phân lớp Phân lớp CAEP, PI phân lớp lysophospholipid có hàm lượng nhỏ nên phân tích định tính phải thực cộng gộp lớp chất gần để tính toán (như CAEP LPE) Kết tương đồng với công trình nghiên cứu trước thành phần phospholipid lipid loài san hô mềm có chứa VSV cộng sinh zooxanthellae Sự có mặt VSV cộng sinh san hô có tác động lên hàm lượng PC không ảnh hưởng nhiều đến lớp chất phospholipid khác 4.5 Xác định dạng phân tử phospholipid mẫu san hô mềm nghiên cứu Để xác định dạng phân tử phospholipid từ mẫu san hô mềm S macropodia, Xenia sp., Capnella sp., trước hết ghi phổ khối phân giải cao HRMS chất chuẩn phospholipid Trên sở liệu phân mảnh chất chuẩn kết phân tích định tính định lượng phân lớp phospholipid, tiến hành xác định dạng phân tử có mặt phân lớp phospholipid mẫu san hô mềm 12 nghiên cứu Hỗn hợp Et3N:AcOH sử dụng để giúp làm bền ion phân tử tăng độ nhạy tín hiệu ion lúc ghi nhận tín hiệu phổ ion âm ion dương 4.5.1 Phosphatidylcholine (PC) Hình 4.7 Phosphatidylcholine (PC) + Phổ khối phân giải cao hợp chất 1-O-hexadecyl-2-oleoyl-snglycero-3-phosphocholine (16:0e/18:1 PC) Hợp chất PC 16:0e/18:1 (e : ether) ion hóa dạng dẫn xuất acetyl phổ ion âm ESI-MS1 có tín hiệu [M+CH3COO]- m/z 804,6103, phổ ion dương có tín hiệu ion [M+H]+ m/z 746,6035 Công thức cấu tạo tương ứng [C44H87NO9P]- [C42H85NO7P]+ Trên phổ ion âm MS2, ion có tín hiệu m/z 804,6103 bị phân mảnh phân tử trung hòa C3H6O2 (methyl acetate) tạo thành ion có tín hiệu m/z 730,5762, tương ứng với ion mang điện tích âm phân tử lipid kết hợp với ion COO- Trên phổ MS3 ion có tín hiệu m/z 730,5762 xuất ion có m/z 281,2463 (ứng với [C18H33O2]−, giá trị tính toán 281,2486) tương ứng với anion axit béo 18:1n (Hình 4.8) có mặt phân tử PC Hình 4.8 Phổ khối phân giải cao hợp chất PC 16:0e/18:1 Như với phosphatidylcholine, quan sát đồng thời tín hiệu phổ ion dương-MS1 ion [M+H]+ tín hiệu ion [M+CH3COO]- 13 phổ ion âm tương ứng Ion [M+CH3COO]- lựa chọn để thực EIS-HRMS/MS (gọi tắt MS2) Trên phổ ion âm-MS2 ion [M+CH3COO]- xuất tín hiệu có cường độ mạnh ion mảnh [M+CH3COO-X]-, với X = CH3COOCH3 (C3H6O2), hình thành [M+CH3COO]- mảnh C3H6O2 [M+CH3COO-C3H6O2]- tiếp tục lựa chọn để thực phân tích MS3, thu mảnh ion nhỏ mang lại thông tin cấu trúc phân tử hợp chất PC cần xác định Trong phân tích ESI-HRMS phân lớp PC mẫu Sinularia macropodia, phổ ion âm tín hiệu với cường độ mạnh m/z 854,6134, công thức phân tử tương ứng C46H86NO7P (khối lượng phân tử tính toán 795,6142, số liên kết đôi 6) Từ công thức phân tử cho thấy, với nguyên tử O phân tử hợp chất PC dạng O-alkyl acylphosphatidylcholine chứa phân tử axit béo mạch dài Trên phổ ion âm-MS2 ion [M+CH3COO]- có xuất tín hiệu m/z 780,5691, tương ứng với ion [M+CH3COO-C3H6O2]- Trên phổ MS3, mảnh ion thu cho tín hiệu m/z 303,2319 tương ứng với anion axit béo C20H32O2 (C20:4n), cho thấy dạng phân tử phosphatidylcholine với tín hiệu m/z 854,6134 PC 18:0e/20:4 Đối với lớp chất LPC, công thức phân tử tương ứng tính toán từ số khối thu phổ ESI-MS1 chứa nguyên tử O, chứa O cho thấy mạch cacbon phân tử chúng O-alkyl alkenyl, không chứa axit béo phân tử, không thu tín hiệu đặc trưng cho anion axit béo phổ MS3 Trên phổ ion âm MS2 thu mảnh ion đặc trưng hợp chất PC [M+CH3COO-C3H6O2]- Kết phân tích dạng phân tử PC LPC mẫu san hô trình bày bảng 4.7 Từ loài san hô mềm, 15 dạng phân tử phosphatidylcholine (PC) dạng phân tử lysophosphatidylchonline (LPC) xác định Các dạng phân tử có hàm lượng cao phân lớp PC 18:0e/20:4, LPC 18:0e Cùng với kết phân tích thành phần axit béo lipid tổng cho thấy, axit béo có mặt phân lớp axit arachidonic 20:4n-6, 14 có PUFA C16 C18 Dạng phân tử PC 16:0e/18:4 minh chứng cho vận chuyển axit béo từ VSV cộng sinh sang san hô vật chủ, san hô vật chủ sử dụng axit béo để sinh tổng hợp lên lipid riêng chúng Bảng 4.7 Tổng hợp thành phần hàm lượng dạng phân tử phosphatidylcholine từ loài san hô mềm nghiên cứu TT Dạng phân tử 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 LPC 16:0e LPC 18:0e LPC 20:4 Diacyl PC 16:0/20:4 Diacyl PC 18:2/20:4 Diacyl PC 16:0/22:6 Diacyl PC 18:0/20:4 PC 16:0e/16:2 PC 16:0e/18:4 PC 16:0e/18:3 PC 16:0e/18:2 PC 18:0e/16:2 PC 16:0e/20:4 PC 18:0e/18:3 PC 18:0e/18:2 PC 18:0e/18:1 PC 18:0e/20:4 PC 19:1e/20:4 Chưa xác định Sinularia Xenia sp Capnella sp macropodia Hàm lượng phân lớp 7.0 77.5 1.3 0,51 0,78 0,75 3,62 0,78 4,81 8,07 2,31 5,50 6,82 0,90 4,75 6,76 7,78 6,05 23,92 15,80 22,03 9,73 5,49 4,86 1,74 1,49 29,57 51,93 36,73 5,70 4,14 22,23 21,93 4.5.2 Phosphatidylethanolamine (PE) Hình 4.10 Phosphatidylethanolamine (PE) + Phổ khối phân giải cao hợp chất 1-O-(1Z-octadecenyl)-2-oleoyl-snglycero-3-phosphoethanolamine (PE 18:0e/18:1) (chất chuẩn) Phân tử 18:1e/18:1 PE hình thành ion âm [M–H]- m/z 728,5587 ion dương [M+H+(C2H5)3N]+ với m/z 831,6927 tương ứng với công thức [C41H79NO7P]- [C47H96N2O7P]+ Trên phổ ion âm MS2 ion có m/z 728,5587 (hình 4.11) xuất tín hiệu m/z 281,2461 ([C18H33O2]-), 15 tương ứng với anion axit béo 18:1n Tín hiệu m/z 464,3140 (mất mảnh có khối lượng phân tử 264,2447) xuất phổ ion âm MS2 Tín hiệu tương ứng với ion [M–H]- mảnh [axit béo 18:1n – H2O] (C18H32O, khối lượng tính toán 264,2453) Hình 4.11 Phổ khối phân giải cao hợp chất PE 18:1e/18:1 Đối với PE, tín hiệu ion âm [M-H]- ion dương [M+H+Et3N]+ tương ứng quan sát đồng thời phổ ESI-HRMS Với PE phân lập từ loài san hô Xenia sp., phổ ion âm-MS1 tín hiệu có cường độ mạnh m/z 750,5305 Tín hiệu tương ứng ion dương-MS1 thu m/z 853,6804 Công thức cấu tạo tính toán C43H78NO7P Hình 4.13 Phổ ESI-MS1, MS2 MS3 dạng phân tử PE có tín hiệu ion âm m/z 750,5305 (PE 18:1e/20:4) Trên phổ ion âm-MS2 ion [M-H]- dạng phân tử có chứa ion mảnh với tín hiệu m/z 464,3150 tương ứng với ion phân tử mảnh trung hòa C20H30O (C20H31COOH-H2O) (tính toán 465,3219); m/z 303,2338 tương ứng với anion axit béo C20H31O2 (tính toán 304,2402); m/z 259,2360 tương ứng với mảnh ion có công thức phân tử C19H31 (tính 16 toán 260,2504) (hình 4.10) Theo thành phần nguyên tố tính toán thu giá trị khối lượng phân tử, dạng phân tử PE xác định alkenyl acyl PE 18:1e/20:4 chiếm hàm lượng cao phân lớp Theo tính toán, hàm lượng thành phần chiếm tới 83,5% tổng PE mẫu Xenia sp Bảng 4.8 Dạng phân tử phân lớp PE ba mẫu san hô mềm Dạng phân tử PE LPE 18:1e LPE 20:4 15:1e/16:2* 15:1e/20:4 18:1e/17:1 18:0e/17:1 16:1e/20:4 (31.1)* 18:1e/18:4 (1) 16:0e/20:4 (100) 18:1e/18:3 (10)** 18:0e/18:4 (1)** 18:1e/18:2 (9) 18:0e/18:3 (1) 18:0e/18:2 16:1/20:4 16:0/20:4 18:1e/20:5 18:1e/20:4 (99.9) 18:0e/20:5 (0.1)** 18:0e/20:4 18:1/20:4 18:0/20:5 19:1e/20:4 18:0/20:4 19:0/20:4 18:1e/24:5 18:0e/24:5 S macropodia [M-H]% m/z 464,3141 Xenia sp [M-H]% m/z 708,4948 0,03 Capnella sp [M-H]% m/z 500,2811 656,4614 0.9 714,5450 716,5572 0,22 0,33 722,5108 1,50 722,5046 3,93 722,5151 2.4 724,5256 2,41 724,5177 1,66 724,5281 0.6 726,5404 0,80 728,5545 736,4937 0,38 0,31 738,4930 748,5166 0,12 2,19 750,5305 83.5 764,5584 2.5 750,5444 56,0 750,5326 68,10 752,5554 16,68 752,5254 11,55 764,5243 17,11 764,5236 4,83 764,5489 766,5261 2,54 2,26 804,5796 806,5950 1,17 1,34 782,5460 1,27 *: tỉ lệ hai dạng phân tử ; **: xuất với mẫu Sinularia macropodia Tổng cộng 25 dạng phân tử PE dạng LPE nhận dạng mẫu san hô mềm Như vậy, phân lớp PE mẫu san hô mềm, nhiều dạng phân tử O-alkenyl PE, thực methyl hóa để phân tích thành phần axit béo, phổ GC/GC-MS quan sát thấy tín hiệu dimethylacetate (DMA) Dạng phân tử PE 18:1e/20:4 có hàm lượng cao loài san hô mềm 4.5.3 Phosphatidylserine (PS) Phosphatidylserine có công thức cấu tạo chung sau: 17 Hình 4.21 Ceramide aminoethylphosphonate (CAEP) (CAEP) + Phổ khối phân giải cao hợp chất 1-O-(1Z-octadecenyl)-2-oleoyl-snglycero-3-phosphoethanolamine Trên phổ ion âm ESI-HRMS1 phân lớp PS phân tập từ lipid đậu tương cho thấy ion [M–H]- có cường độ mạnh cho tín hiệu m/z 758,4924, công thức tính toán thu [C40H73NO10P]- Trên phổ ion dương không xuất tín hiệu ion tương ứng Trên phổ ion âm MS2, ion có m/z 758,4924 có phân mảnh sau: ion với tín hiệu m/z 671,4606 hình thành [M–H]- nhóm serine với khối lượng monoisotopic 87,0359 (tương ứng với công thức C3H5NO2, khối lượng tính toán 87,0320) Hình 4.15 Phổ khối phân giải cao hợp chất PS 16:0/18:2 Ngoài phổ ion âm MS2 có ion với cường độ nhỏ có tín hiệu m/z 391,2232 (mất mảnh có khối lượng 367,2692); 409,2330 (mất mảnh có khối lượng 349,2594); 415,2240 (mất mảnh có khối lượng 343,2684) Những tín hiệu ion mảnh hình thành từ ion [M–H]-, đặc điểm chung nhóm serine mảnh acyl Từ giá trị m/z chúng tương ứng với ion mảnh tạo thành ion [M–H]- loại bỏ ba mảnh trung hòa sau: C21H37NO4 (C3H5NO2 + C18H32O2, khối lượng tính toán 367,2723), C21H35NO3 (C3H5NO2 + C18H30O, khối lượng tính toán 349,2617), 18 C19H37O4 (C3H5NO2 + C16H32O2, khối lượng tính toán 343,2723) Từ đó, xác định dạng phân tử tử PS phân tích 1-palmitoyl-2linoleoyl-sn-glycero-3 phosphoserine (PS 16:0/18:2) Đối với hợp chất PS, phân mảnh ion [M-H]- phổ MS2 xuất ion mảnh tạo thành ion mẹ [M-H]- bị mảnh tương ứng với nhóm serine C3H5NO2 (khối lượng tính toán 87,0320) (Hình 4.16) Hình 4.16 Sự phân mảnh đặc trưng PS ESI-MS Bảng 4.12 Tổng hợp kết phân tích dạng phân tử lớp chất PS mẫu san hô mềm TT Dạng phân tử PS PS 16:0e/24:5 PS 18:0e/24:6 PS 18:0e/24:5 PS 18 :1e/24:4* PS 19:1e/24:5 LPS 24:5 LPS 18:0e Hàm lượng lớp chất Sinularia macropodia Xenia sp 0,85 15,27 7,5 83,88 67,6 Capnella sp 11,1 80,6 0,6 0,5 1,9 Tổng cộng loài san hô mềm, nhận dạng dạng phân tử PS LPS (bảng 4.12) Trong đó, chiếm hàm lượng cao phân lớp PS ba loài san hô mềm PS 18:0e/24:5 Axit béo có mặt phân lớp axit béo mạch dài C24 – đặc trưng sinh tổng hợp san hô vật chủ hệ cộng sinh san hô – zooxanthellae 4.5.4 Phosphatidylinositol (PI) Hình 4.18 Phosphatidylinositol (PI) 19 + Phổ khối phân giải cao 1-palmitoyl-2-linoleoyl-sn-glycero-3phosphoinositol (16:0/18:2 PI) (chất chuẩn) Phân lớp phosphotidylinositol phân lập từ hỗn hợp phospholipid lipid đậu tương HPLC đưa vào phân tích phổ khối phân giải cao Dạng phân tử phân lớp PI hình thành ion [M–H]- có tín hiệu phổ ion âm MS1 m/z 833,5203, tương ứng với công thức [C43H78O13P]- Hình 4.19 Phổ khối phân giải cao của hợp chất PI 16:0/18:0 Sự phân mảnh thực MS2 cho thấy có xuất tín hiệu tương ứng với phân mảnh ion đặc trưng hình thành từ ion [M-H]- Các ion cho tín hiệu m/z 255,2324 [C16H31O2]- 279,2331 [C18H31O2]- tương ứng với anion carboxylate 16:0 18:2n Việc mảnh 16:0 18:2n hình thành ion có tín hiệu m/z 577,2763 ([MH-C16H32O2]-, khối lượng tính toán 577,2783) 553,2773 ([M–H– C18H32O2]-, khối lượng tính toán 553,2783) Khi mảnh [C18H32O2 – H2O] dẫn đến hình thành ion m/z 571,2867 ([M–H–C18H30O]-, giá trị tính toán 571,2889) Sự xuất tín hiệu m/z 297,0426 (giá trị tính toán 297,0381) tạo đồng thời axit béo C16H32O2 C18H32O2 Ion có m/z 315,0464 (giá trị tính toán 315,0487) tạo đồng thời mảnh [C16H32O2] [C18H32O2 – H2O] Khi nhóm inositol acyl, ion [M–H–(C6H10O5+C18H32O2)]- (giá trị tính toán 391,2255), [M–H–(C6H10O5+C16H32O2]- (giá trị tính toán 415,2255) thể tín hiệu m/z 391,2275 415,2275 tương ứng Với mảnh ion đặc trưng vậy, dạng phân tử với ion [M–H]- có tín hiệu m/z 833,5203 xác định 1-palmitoyl-2-linoleoyl-sn-glycero-3phosphoinositol (PI 16:0/18:2) (Hình 4.19) 20 Phổ MS2 ion [M–H]- cho nhiều tín hiệu ion mảnh đặc trưng hình thành từ ion mẹ mảnh như: phân tử axit béo, phân tử axit béo loại H2O, đồng thời phân tử axit béo inositol (C6H10O5), phổ MS2 xuất tín hiệu anion axit béo có mặt phân tử PI Bảng 4.14 Kết dạng phân tử phân lớp PI mẫu san hô mềm TT Dạng phân tử PI 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 18:0/20:3 18:0/20:4 16:0/22:6 18:0/22:5 16:0/24:5 16:0/22:6 16:1/22:6 18:0/20:3 18:0/20:4 18:0/22:4 18:0/22:5 + 16:0/24:5 18:0/22:6 18:0/24:5 18:0/24:6 18:0/26:5 18:0/26:6 18:1/22:6 17:1e/16:2 16:1e/18:4 16:0e/18:3 18:0e/16:2 16:0e/18:1 18:0e/18:4 18:0e/18:3 18:0e/18:2 18:0e/20:5 18:0e/20:4 17:0e/22:6 18:1e/22:5 18:0e/22:4 18:0e/24:6 18:0e/24:5 Hàm lượng phân lớp S macropodia Xenia sp Capnella sp 0,70 1,60 5,39 3,75 5,99 1,25 13,5 1,5 0,8 2,0 20,09 25,23 33,1 8,0 8,0 6,1 62,96 42,65 10,96 16,1 8,48 0,05 0,21 1,4 0,97 0,10 0,26 0,22 0,15 0,53 0,18 0,64 0,10 5.1 3,83 0,06 0,15 1,21 0,23 1,7 1,43 Trong ba loài san hô mềm, tổng cộng 32 dạng phân tử PI xác định Trong đó, chiếm hàm lượng cao phân lớp PI 18:0/22:4, PI 18:0/24:5, PI 16:0/22:6 Phát có mặt axit béo mạch siêu dài nằm dạng phân tử PI 18:0/26:5 PI 18:0/26:6, 21 chưa xác định vị trí nối đôi mạch axit béo Đây lần axit béo C26 xác định có mặt lipid mẫu san hô 4.5.5 Ceramide aminoethylphosphonate (CAEP) CAEP có công thức cấu tạo chung sau: Hình 4.21 Ceramide aminoethylphosphonate (CAEP) Phân lớp CAEP loài Xenia sp có thành phần chính, tín hiệu ion phân tử [M-H]- m/z 641,5040 (tương ứng với CTPT [C36H70N2O5P]-, giá trị tính toán 641,5028) Đối với loài S macropodia Capnella sp., dựa vào phổ ESI-MS1 phân lớp CAEP xác định thành phần với tín hiệu ion [M-H]- phổ ion âm m/z 641,5011/641,5044 (đều tương ứng với CTPT [C36H71N2O5P]-) 643,5129/643,5155 (tương ứng với CTPT [C36 H73N2O5P]-) Phân tích liệu phổ MS2 MS3 thu được, xác định loài san hô S macropodia Capnella p., phân lớp CAEP có dạng phân tử CAEP 16:0/18:2base CAEP 16:0/18:1base, loài Xenia sp có dạng phân tử CAEP 16:0/18:2base 4.6 Xác định cấu trúc CAEP Theo kết phân tích dạng phân tử lớp chất phospholipid, lớp chất CAEP từ mẫu Xenia sp gồm có dạng phân tử CAEP16:0/18:2 Chúng tiến hành đo phổ NMR nhằm làm rõ cấu trúc hợp chất Phổ 1H-, 13C-, DEPT-NMR hợp chất CAEP cho thấy sphingophospholipipid Ngoài ra, phổ 1H- 13C-NMR hợp chất CAEP cho biết chuỗi mạch dài (chuỗi sphingoid) có nhóm liên kết đôi, kết hợp với phân tích phổ cộng hưởng từ chiều COSY HMBC cho thấy, liên kết đôi thứ thuộc vị trí C4=C5, liên kết đôi thứ hai nằm vị trí C8=C9 Các giá trị thu xác minh chuỗi sphingoid ceramide acid béo không no có nối đôi phân tử (C18:2n-9) (hình 4.25) 22 Hình 4.26 Các tương tác (1H‒1H) COSY (1H→13C) HMBC CAEP 4.7 Kết thử nghiệm hoạt tính sinh học Trong số mẫu TL, PoL phân lớp phospholipid phân lập từ san hô mềm tiến hành thử hoạt tính kháng VSV kiểm định, TL thể hoạt tính kháng vi khuẩn S aureus nấm A niger, CAEP thể hoạt tính kháng vi khuẩn E coli B Subtillis, LPE thể hoạt tính kháng B Subtillis (bảng 4.17) Bảng 4.17 Kết hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định lipid tổng, phân đoạn lipid phân cực phân lớp phospholipid Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC, g/ml) KH mẫu Vi khuẩn Gr(-) Vi khuẩn Gr(+) Nấm mốc Nấm men Nhận xét E coli P aeruginosa B subtillis S aureus A niger F oxysporum S cerevisiae C albicans TL - - - 100 200 - - - LPE - - 200 - - - - - CAEP 200 - 200 - - - - - Kháng VSVKĐ Kháng VSVKĐ Kháng VSVKĐ Với hoạt tính gây độc tế bào, PoL ức chế hai dòng bào Hep-G2 LU-1, thể hoạt tính mạnh dòng Hep-G2, TL thể hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào LU-1 PI thể hoạt tính dòng tế bào Hep-G2 (bảng 4.18) Bảng 4.18 Kết hoạt tính gây độc tế bào Nồng độ KH mẫu đầu (g/ml) DMSO Chứng (+) TL PoL PI Nồng độ ức chế 50% Phần trăm tế bào sống sót (CS%) Dòng t bào Hep-G2 Dòng t bào LU-1 100,00,0 100,00,0 2,21,5 50 50 50 97,310,7 23,491,8 (IC50, g/ml) Dòng Hep-G2 - - Âm tính Dương tính 3,40,7 19,241,1 34,671,9 97,451,8 Kết luận Dòng LU-1 8,12 32,13 24,8 37,1 - Dương tính dòng TB Dương tính dòng TB Dương tính dòng TB 23 KẾT LUẬN Lần khảo sát thành phần lipid của loài san hô mềm Việt Nam Sinularia macropodia, Xenia sp., Capnella sp Hàm lượng lipid tổng dao động từ 1,44 đến 2,54% trọng lượng khô, 8,15 đến 16,90% trọng lượng tươi Xác định thành phần hàm lượng lớp chất lipid loài san hô mềm nghiên cứu, gồm lớp chất lipid phân cực, sterol, axit béo tự do, triacylglycerol, monoalkyl diacylglycerol, sáp với hàm lượng lipid phân cực chiếm thành phần lớn (từ 21,14 đến 36,79%) Kết ghiên cứu thành phần hàm lượng axit béo loài san hô cho thấy tất có mặt axit béo đánh dấu san hô mềm (các axit béo 24:5n-6 24:6n-3) axit béo đặc trưng cho có mặt VSV cộng sinh zooxanthellae (16:2n-7, 18:3n-6, 18:4n-3, 18:5n-3, 20:4n-3, 20:5n-3, 22:5n-3, 22:6n-3) Phép phân tích PCA sử dụng số liệu lipid ba mẫu san hô nghiên cứu với số liệu công bố loài san hô khác nhấn mạnh tầm quan trọng VSV cộng sinh lên yếu tố ảnh hưởng tới chemotaxonomy san hô Kết phân tích phân lớp phospholipid ba mẫu san hô mềm S macropodia, Xenia sp., Capnella sp cho thấy phospholipid phosphatidylcholine, phosphatidylethanolamin, phosphatidylserine, phosphatidylinositol phosphonolipid chủ yếu ceramide aminoethylphosphonate Lần dạng phân tử phân lớp phospholipid loài san hô mềm xác định, bao gồm: - 15 dạng phân tử phosphatidylchonline (PC) dạng phân tử lyso phosphatidylcholine (LPC) xác định, hàm lượng cao phân lớp LPC 18:0e, PC 16:0e/20:4, PC 18:0e/20:4 Dạng phân tử PC 16:0e/18:4 minh chứng cho vận chuyển axit béo từ VSV cộng sinh sang san hô vật chủ - 25 dạng phân tử phosphatidylethanolamine (PE) dạng lyso phosphatidyl ethanolamine (LPE), có mặt nhiều dạng phân tử 24 O-alkenyl PE Dạng phân tử PE có hàm lượng cao loài san hô mềm PE 18:1e/20:4 - dạng phân tử phosphatidylserine (PS) lyso phosphatidylserine (LPS), chiếm hàm lượng cao phân lớp PS ba loài san hô mềm PS 18:0e/24:5 Axit béo có mặt phân lớp axit béo mạch dài C24 – đặc trưng sinh tổng hợp san hô vật chủ hệ cộng sinh san hô – zooxanthelae - 32 dạng phân tử phosphatidylinositol, chiếm hàm lượng cao phân lớp PI 18:0/22:4, PI 18:0/24:5, PI 16:0/22:6 Phát có mặt axit béo mạch siêu dài nằm dạng phân tử PI 18:0/26:5 PI 18:0/26:6, chưa xác định vị trí nối đôi mạch axit béo Đây lần phát có mặt axit béo C26 lipid san hô - Ở loài san hô Sinualaria macropodia Capnella p., phân lớp CAEP có dạng phân tử CAEP 16:0/18:2base CAEP 16:0/18:1base, loài Xenia sp có dạng phân tử CAEP 16:0/18:2base CAEP biết đặc trưng lipid ngành động vật ruột khoang - Đã chứng minh cấu trúc hợp chất CAEP 16:0/18:2base Về nghiên cứu hoạt tính sinh học: - Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định: TL thể hoạt tính kháng vi khuẩn S aureus nấm A niger, CAEP thể hoạt tính kháng vi khuẩn E coli B Subtillis, LPE thể hoạt tính kháng B Subtillis - Hoạt tính gây độc tế bào: PoL ức chế hai dòng bào Hep-G2 LU-1, thể hoạt tính mạnh dòng Hep-G2, TL thể hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào LU-1 PI thể hoạt tính dòng tế bào Hep-G2 KIẾN NGHỊ - Đây công trình nghiên cứu dạng phân tử lớp chất lphospholipid đối tượng san hô mềm Việt Nam Kết thu mở hướng nghiên cứu mới, chuyên sâu dừng lại bước đầu, cần tiếp tục thực loài khác khác nhằm thu liệu đầy đủ lĩnh vực lipid san hô DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ Đặng Thị Phương Ly, Phạm Quốc Long, Hà Việt Hải, Nguyễn Văn Sơn, Imbs A B (2013); Khảo sát thành phần hàm lượng lớp chất lipit tổng số loài san hô Việt Nam, Tạp chí Khoa học Công nghệ Biển; Tập 13(3): tr 257-262 Đặng Thị Phương Ly, Imbs Andrey Borisovich, Nguyễn Thị Nguyệt, Phạm Quốc Long (2014); Nghiên cứu thành phần hàm lượng lớp chất lipid phospholipid số loài san hô Việt Nam; Tạp chí Khoa học công nghệ, 52(5A): tr.123-130 Andrey B.Imbs, Ly P.T.Dang, Viacheslav G Rybin, Vasily I Svetashev (2015); Fatty acid, lipid class, and phospholipid molecular species composition of the soft coral Xenia sp, (Nha Trang Bay, Vietnam) Lipids, V 50(6): p 575-589 (SCI) Andrey B Imbs, Viacheslav G Rybin, Vladimir I Kharlamenko1, Ly P.T Dang, Nguyet T Nguyen, Quan M Pham, Long Q Pham (2015); Polyunsaturated molecular species of galactolipid-markers of zooxanthellae in a symbiotic association of the soft coral Capnella sp Russian Journal of Marine Biology, V.41(6): p 461-463 (SCIE) Andrey B Imbs, Ly P T Dang, Viacheslav G Rybin, Nguyet T Nguyen, Long Q Pham (2015) Distribution of Very-Long-Chain Fatty Acids between Molecular Species of Different Phospholipid Classes of Two Soft Corals Biochemistry and Analytical Biochemistry, V.4, I 4, 1000205, p 1-3 (Impact Factor 2,63) [...]... CAEP và LPE) Kết quả này tương đồng với các công trình nghiên cứu trước đó về thành phần phospholipid trong lipid các loài san hô mềm có chứa VSV cộng sinh zooxanthellae Sự có mặt của VSV cộng sinh trong san hô có tác động lên hàm lượng PC nhưng không ảnh hưởng nhiều đến các lớp chất phospholipid khác 4.5 Xác định các dạng phân tử phospholipid của các mẫu san hô mềm nghiên cứu Để xác định các dạng phân. .. phân tử của phospholipid từ các mẫu san hô mềm S macropodia, Xenia sp., Capnella sp., trước hết chúng tôi ghi phổ khối phân giải cao HRMS của các chất chuẩn phospholipid Trên cơ sở các dữ liệu về sự phân mảnh của các chất chuẩn này và kết quả phân tích định tính định lượng các phân lớp phospholipid, chúng tôi tiến hành xác định các dạng phân tử có mặt trong các phân lớp phospholipid của 3 mẫu san hô mềm. .. này và thiên về vùng các mẫu có hàm lượng cao axit béo 16:0 Phân tích này nhấn mạnh tầm quan trọng của VSV cộng sinh lên các yếu tố ảnh hưởng tới chemotaxonomy của các mẫu nghiên cứu và các loài san hô mềm khác Hình 4.2 Kết quả phép phân tích thành phần chính (PCA) dựa trên thành phần các lớp chất lipid của các mẫu san hô làm các biến Hình 4.5 Phân tích thành phần chính (PCA) sử dụng thành phần và hàm... lượng các axit béo trong các mẫu san hô mềm làm các biến 4.4 Phân tích định tính, định lượng thành phần phospholipid trong các mẫu san hô mềm nghiên cứu So sánh với chất chuẩn trên TLC 1 chiều và 2 chiều với nhiều hệ dung môi khác nhau và kết hợp với các tài liệu tham khảo đã công bố về các lớp chất phospholipid của san hô, chúng tôi xác định, trong lipid phân cực của 3 loài san hô mềm S macropodia và. .. arachidonic 20:4n-6, ngoài 14 ra còn có các PUFA C16 và C18 Dạng phân tử PC 16:0e/18:4 là minh chứng cho sự vận chuyển axit béo từ VSV cộng sinh sang san hô vật chủ, và san hô vật chủ sử dụng các axit béo đó để sinh tổng hợp lên các lipid của riêng chúng Bảng 4.7 Tổng hợp thành phần và hàm lượng các dạng phân tử phosphatidylcholine từ 3 loài san hô mềm nghiên cứu TT Dạng phân tử 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13... quả phân tích dạng phân tử của PC và LPC của 3 mẫu san hô được trình bày trong bảng 4.7 Từ 3 loài san hô mềm, 15 dạng phân tử của phosphatidylcholine (PC) và 3 dạng phân tử lysophosphatidylchonline (LPC) đã được xác định Các dạng phân tử có hàm lượng cao trong phân lớp là PC 18:0e/20:4, LPC 18:0e Cùng với kết quả phân tích thành phần axit béo trong lipid tổng cho thấy, axit béo chính có mặt trong phân. .. H73N2O5P]-) Phân tích các dữ liệu phổ MS2 và MS3 thu được, xác định ở loài san hô S macropodia và Capnella p., phân lớp CAEP có 2 dạng phân tử là CAEP 16:0/18:2base và CAEP 16:0/18:1base, ở loài Xenia sp thì chỉ có một dạng phân tử là CAEP 16:0/18:2base 4.6 Xác định cấu trúc CAEP Theo kết quả phân tích dạng phân tử của các lớp chất phospholipid, lớp chất CAEP từ mẫu Xenia sp chỉ gồm có 1 dạng phân tử là... giữa hai dạng phân tử ; **: chỉ xuất hiện với mẫu Sinularia macropodia Tổng cộng 25 dạng phân tử PE và 2 dạng LPE đã được nhận dạng trong 3 mẫu san hô mềm Như vậy, trong phân lớp PE của 3 mẫu san hô mềm, rất nhiều dạng phân tử là các O-alkenyl PE, khi thực hiện methyl hóa để phân tích thành phần axit béo, trên phổ GC/GC-MS sẽ quan sát thấy tín hiệu của các dimethylacetate (DMA) Dạng phân tử PE 18:1e/20:4... dòng TB 23 KẾT LUẬN 1 Lần đầu tiên khảo sát thành phần lipid của của 3 loài san hô mềm Việt Nam Sinularia macropodia, Xenia sp., Capnella sp Hàm lượng lipid tổng dao động từ 1,44 đến 2,54% trọng lượng khô, 8,15 đến 16,90% trọng lượng tươi Xác định được thành phần và hàm lượng các lớp chất lipid của 3 loài san hô mềm nghiên cứu, gồm các lớp chất chính là lipid phân cực, sterol, axit béo tự do, triacylglycerol,... thức phân tử C19H31 (tính 16 toán 260,2504) (hình 4.10) Theo các thành phần nguyên tố tính toán thu được và giá trị của khối lượng phân tử, dạng phân tử PE được xác định là alkenyl acyl PE 18:1e/20:4 và chiếm hàm lượng cao nhất trong phân lớp Theo tính toán, hàm lượng của thành phần này chiếm tới 83,5% tổng PE trong mẫu Xenia sp Bảng 4.8 Dạng phân tử phân lớp PE trong ba mẫu san hô mềm Dạng phân tử PE