Đang tải... (xem toàn văn)
Bài 1. KYÕ THUAÄT ÑÒNH NHOÙM MAÙU HEÄ ABO Bài 2. NHÖÕNG KHOÙ KHAÊN VAØ CAÙCH GIẢÛI QUYEÁT Bài 3. KỸ THUẬT CHỨNG NGHIỆM PHÙ HỢP Bài 4. KỸ THUẬT LÀM TIÊU BẢN VÀ NHUỘM Bài 5. KỸ THUẬT LẤY MÁU MAO MẠCH Bài 6. KỸ THUẬT LẤY MÁU TĨNH MẠCH Bài 7. PHA CHẾ CÁC DUNG DỊCH NHUỘM Bài 8. PHA CHẾ DUNG DỊCH CHỐNG ĐÔNG Bài 9. PHA CHẾ DUNG DỊCH DÙNG TRONG XÉT NGHIỆM ĐÔNG MÁU Bài 10. PHA CHẾ DUNG DỊCH ĐẾM TẾ BÀO Bài 11. QUAN SÁT TẾ BÀO NGOẠI VI BÌNH THƯỜNG
Bài KỸ THUẬT ĐỊNH NHÓM MÁU HỆ ABO NHỮNG KHÓ KHĂN VÀ CÁCH GIẢÛI QUYẾT I.Đặt vấn đề: Hệ ABO hệ thống nhóm máu phát sớm Landsteiner (1900) Đây nhóm máu quan trọng nguyên nhân yếu tai biến truyền máu Do việc xác đònh xác nhóm máu hệ ABO cần thiết II.Kháng nguyên – kháng thể hệ ABO: 1.Kháng nguyên ABO Bắt đầu xuất bào thai 37 ngày tuổi Phát triển hoàn toàn lúc tuổi Kháng nguyên có cấu trúc gồm phần: + Một phần có chất Protein có khả sinh kháng thể + Một phần có chất Gluxit Lipit ( gọi Hapten ),có khả kết hợp kháng thể Tồn hầu hết tế bào thể ( ngoại trừ tế bào thần kinh, tế bào gan, tế bào Malpighi mô liên kết ) Kháng nguyên thường tồn suốt sống suy giảm, yếu già số trường hợp bệnh lý Kháng nguyên hệ ABO tuân theo đònh luật di truyền Mendel 2) Kháng thể ABO: - Bản chất kháng thể tự nhiên - Thông thường IgM, số trường hợp IgM + IgA hay IgM + IgG - Hoạt động tốt nhiệt độ từ 40C đến 200C môi trường NaCl 0,9% - Nồng độ thay đổi từ người sang người khác 3) Các hệ thống nhóm máu ABO: Dựa vào kháng nguyên màng hồng cầu kháng thể huyết ta có nhóm máu: Ngoài ta có nhóm máu phụ khác A1, A2, Ax, B3, Bm, A1B, A2B…… III.Kỹ thuật đònh nhóm máu hệ ABO 1.Nguyên lý: Dựa nguyên lý phản ứng ngưng kết Được xác đònh nhờ kháng nguyên màng hồng cầu kháng thể huyết Có phương pháp : hồng cầu mẫu huyết mẫu 2.Dụng cụ thuốc thử: Máy ly tâm ống thẳng Pipette loại Ống nghiệm thuỷ tinh Lam kiếng Bút quang hay bút chì kính Tủ lạnh bảo quản thuốc Bình đựng nước muối Giá đựng ống nghiệm Kính hiển vi Que thủy tinh Bông thấm Huyết mẫu: chống A, chống B, chống AB Hồng cầu mẫu: A, B, O Nước muối 0,9% Huyết máu AB 3.Tiến hành kỹ thuật 3.1) Đònh nhóm lam kính: 3.1.1) Phương pháp huyết mẫu: Trên lam kính: nhỏ giọt huyết mẫu chống A, chống B, chống AB vào vò trí khác Thêm giọt hồng cầu cần đònh nhóm 10 – 20% (được pha với NaCl 0,9%) Trộn que thủy tinh thành vòng tròn có đường kính – 3cm Lắc nhẹ liên tục vòng phút đọc kết 3.1.2) Phương pháp hồng cầu mẫu: trí Trên lam kính: nhỏ giọt huyết cần đònh nhóm vào vò khác Thêm giọt hồng cầu mẫu A, giọt hồng cầu mẫu B vào vò trí (hồng cầu mẫu pha 10 – 20% NaCl 0,9% ) Trộn lắc nhẹ liên tục vòng phút đọc kết 3.2) Đònh nhóm ống nghiệm 3.2.1) Phương pháp huyết mẫu: - Nhỏ vào ống nghiệm ống giọt huyết mẫu chống A, chống B, chống AB - Thêm giọt hồng cầu cần đònh nhóm – 5% ( pha NaCl 0,9% ) vào ống nghiệm - Lắc đều, quay ly tâm 1000 vòng/ phút/ phút - Nghiêng nhẹ thành ống nghiệm, đọc kết mắt thường kính hiển vi 3.2.2) Phương pháp hồng cầu mẫu: - Nhỏ giọt huyết cần đònh nhóm vào ống nghiệm - Thêm giọt hồng cầu mẫu A, giọt hồng cầu mẫu B – 5% vào ống nghiệm - Lắc đều, quay ly tâm 1000 vòng/ phút/ phút - Nghiêng nhẹ thành ống nghiệm, đọc kết mắt thường kính hiển vi - Nhỏ giọt hồng cầu cần đònh nhóm ( pha loãng thành 1% dung dòch Diluent có LISS ) vào giếng Anti A, Anti B, Anti AB, Ctl - Nhỏ giọt huyết cần đònh nhóm vào giếng Ctl, HC A, HC B - Quay ly tâm Card 10 phút - Đọc kết mắt thường máy đọc 3.3) Những nguyên nhân gây sai lầm đònh nhóm máu hệ ABO: - Tỷ lệ huyết mẫu hồng cầu mẫu không tương ứng - Đọc kết nhanh để lâu đọc kết - Mẫu máu đònh nhóm lấy không quy cách, bò nhiễm trùng - Thuốc thử bò hư, nhiễm trùng hay hạn - Tay nghề trình độ người làm kỹ thuật IV.Cách giải khó khăn - Việc xác đònh nhóm máu hệ ABO dựa vào kháng nguyên màng hồng cầu kháng thể huyết - Hai phương pháp huyết mẫu hồng cầu mẫu phải tiến hành đồng thời phải cho kết phù hợp - Tất khó khăn xảy phù hợp phương pháp Để giải ta tiến hành bước sau: + Rửa hồng cầu cần đònh nhóm hồng cầu O ( có đầy đủ kháng nguyên hệ hồng cầu ) NaCl 0,9% lần Pha thành hồng cầu 5% Chứng tự thân: Nhỏ vào ống nghiệm giọt huyết giọt hồng cầu cần đònh nhóm Lắc đều, quay ly tâm 1000 vòng/ phút/ phút Đọc kết mắt thường kính hiển vi + Chứng AB: Nhỏ vào ống nghiệm giọt huyết máu AB giọt hồng cầu cần đònh nhóm Lắc đều, quay ly tâm 1000 vòng/ phút/ phút Đọc kết mắt thường kính hiển vi Lưu ý: phản ứng âm tính phương pháp đònh nhóm huyết mẫu bảo đảm + Chứng đồng loài: Nhỏ vào ống nghiệm giọt huyết cần đònh nhóm giọt hồng cầu O Lắc đều, quay ly tâm 1000 vòng/ phút/ phút Đọc kết mắt thường kính hiển vi Lưu ý: phản ứng âm tính phương pháp đònh nhóm hồng cầu mẫu bảo đảm Dựa vào kết chứng, ta chia trường hợp khó khăn thành nhóm sau: 1/Khi chứng nói âm tính 2/Khi hay chứng nói dương tính Khi chứng nói âm tính 1.1) Trường hợp có kháng – kháng thể: Nhận xét: - Có thể có kháng – kháng thể chống A - Kháng – kháng thể xảy có bổ thể - Giải cách khử bổ thể huyết cần đònh nhóm 560C/ 30 phút - Đònh nhóm lại, có kháng – kháng thể sau khử bổ thể phản ứng trở bình thường sau: 1.2)Trường hợp chia thành quần thể hồng cầu: Nhận xét: - Nhóm máu A - Nhưng hồng cầu cần đònh nhóm ngưng kết với huyết mẫu chống A, chống AB không hoàn toàn, nhiều hồng cầu tự - Gặp trường hợp truyền máu, có nhóm máu yếu, hay có bệnh lý Leucemie, Đa u tuỷ xương… - Giải cách hỏi lại triệu chứng lâm sàng tiền sử truyền máu 1.3)Trường hợp kháng thể yếu Nhận xét: - Nhóm máu A - Gặp trẻ nhỏ kháng thể chưa hình thành đủ, người già > 70 tuổi - Các trường hợp thiếu hụt miễn dòch bẩm sinh hay mắc phải - Giải cách đònh lại nhóm máu sau thời gian, hay điều trò nguyên nhân gây thiếu hụt miễn dòch 2.Khi hay chứng nói dương tính 2.1) Trường hợp có kháng thể lạnh Nhận xét: - Có thể có kháng thể lạnh - Khi để hồng cầu cần đònh nhóm ủ 370C tượng ngưng kết dần - Giải cách rửa hồng cầu cần đònh nhóm NaCl 0,9% ấm 370C đònh nhóm ống nghiệm 370C 2.2) Trường hợp có kháng thể tự miễn: Nhận xét: - Có thể có kháng thể tự miễn - Các kháng thể thường cố đònh bề mặt hồng cầu - Giải cách xem lại chẩn đoán lâm sàng, rửa hồng cầu cần đònh nhóm NaCl 0,9% ấm 370Cvà đònh lại - Nếu cần thiết phải tiến hành kỹ thuật sâu 2.3) Trường hợp hồng cầu chuỗi tiền Nhận xét: - Có tăng bất thường Protein huyết - Có ngưng kết tầng nhanh phân tán nhanh ta nhỏ vào hồng cầu cần đònh nhóm giọt NaCl 0,9% - Giải cách rửa hồng cầu cần đònh nhóm NaCl 0,9%; đònh lại phương pháp huyết mẫu - Phương pháp hồng cầu mẫu pha loãng huyết cần đònh nhóm NaCl 0,9% nồng độ Protein huyết không đủ để kết tầng thành hình chuỗi tiền đònh lại V.Kết luận - Xác đònh nhóm máu hệ ABO khâu quan trọng - Phải kiểm tra đầy đủ thủ tục hành chánh - Đònh nhóm lần phương pháp - Đối chiếu kết quả: + Nếu kết phù hợp trả kết nhóm máu + Nếu kết không phù hợp, kiểm tra lại toàn bước, giải khó khăn ( có ) làm lại Bài KỸ THUẬT CHỨNG NGHIỆM PHÙ HỢP Ngun tắc Lựa chọn túi máu phù hợp Bảo đảm an toàn truyền máu Nền tảng phản ứng kháng ngun kháng thể Phản ứng thuận hợp ( phản ứng chéo ) xét nghiệm để tìm túi máu phù hợp cho bệnh nhân Các kỹ thuật trước truyền máu Kiểm tra tiền sử truyền máu bệnh nhân Xác định nhóm máu ABO, Rh bệnh nhân túi máu Sàng lọc kháng thể huyết bệnh nhân túi máu Định danh kháng thể huyết bệnh nhân ( có ) Phản ứng chéo Các loại phản ứng chéo Phản ứng chéo điện tử: + Sử dụng máy vi tính để phân tích liệu túi máu bệnh nhân: Nhóm máu ABO, Rh túi máu bệnh nhân Sàng lọc kháng thể bệnh nhân + Chỉ sử dụng trường hợp sàng lọc kháng thể bệnh nhân (-) + Khi liệu phù hợp máy vi tính in nhãn dán để dán lên túi máu Phản ứng chéo huyết học: + Trước truyền máu, hồng cầu túi máu kiểm tra với huyết bệnh nhân + Nếu huyết bệnh nhân có kháng thể chống lại kháng ngun tương ứng hồng cầu túi máu ngưng kết xuất + Điều thể khơng thuận hợp bệnh nhân túi máu + Nếu khơng có ngưng kết xảy ra, túi máu xem thuận hợp hay an tòan để truyền cho bệnh nhân Mục đích phản ứng chéo Đây bước kiểm tra cuối thuận hợp nhóm máu ABO Có thể phát diện kháng thể huyết bệnh nhân số trường hợp Quy trình phản ứng chéo Gồm bước: Kiểm tra thơng tin bệnh nhân: + Họ tên bệnh nhân phải đầy đủ, rõ ràng + Cần có mã số hồ sơ bệnh án, hay số nhập viện + Tiền sử truyền máu phản ứng truyền máu trước ( có ) 2) Kiểm tra mẫu máu bệnh nhân: + Phải đầy đủ họ tên, mã số bệnh nhân mẫu máu khớp với phiếu u cầu + Mẫu máu lấy tối đa vòng ngày + Kiểm tra tượng tán huyết, cục fibrin mẫu máu 3) Xác định lại nhóm máu ABO, Rh: + Định lại nhóm máu ABO phương pháp + Định lại nhóm máu Rh huyết mẫu D + Để xác định nhóm máu dùng lam kính ống nghiệm 4) Tiến hành phản ứng chéo Trang thiết bị + Nước muối sinh lý 0,9% + Lam kính thủy tinh + Ống nghiệm thủy tinh 10x75mm + Ống nghiệm nhựa 12x75mm + Chai nhựa đựng nước muối dùng để rửa + Pipette có chia độ + Thuốc thử: hồng cầu mẫu, AHG, LISS, hồng cầu cảm ứng + Card gel, dung dòch đệm ( có LISS ) + Máy quay ly tâm ống nghiệm, máy quay ly tâm Card gel + Máy rửa tự động ( có ) + Máy ủ Card gel, ống nghiệm + Kính hiển vi Kỹ thuật Phản ứng chéo sử dụng kỹ thuật ống nghiệm Phản ứng chéo sử dụng kỹ thuật Card gel Phản ứng chéo gồm phần: + Phần chính: phản ứng huyết bệnh nhân hồng cầu túi máu + Phần phụ: phản ứng huyết túi máu hồng cầu bệnh nhân Kỹ thuật ống nghiệm Pha lỗng hồng cầu túi máu từ – 4% nước muối sinh lý 0,9% ( thường 3% ) Cho 50L hồng cầu pha lỗng vào ống nghiệm Cho thêm 100µL huyết bệnh nhân vào ống nghiệm Trộn kỹ, quay ly tâm dung dịch tốc độ 3000 vòng/phút 15 giây Lắc nhẹ nhàng đọc kết kính hiển vi ( giai đoạn ) Thêm 100L LISS vào ống nghiệm Trộn kỹ, ủ dung dịch 370C 15 phút Sau ủ, quay ly tâm dung dòch tốc độ 3000 vòng/phút 15 giây, lắc nhẹ nhàng đọc kết ( cần thiết ) Rửa dung dịch 03 - 04 lần nước muối sinh lý 0,9% đổ bỏ hoàn toàn nước rửa cuối Thêm 100µL AHG, trộn kỹ quay ly tâm dung dịch tốc độ 3000 vòng/phút 15 giây Lắc nhẹ nhàng đọc kết kính hiển vi ( giai đoạn ) Nếu kết (-) cho thêm 50L hồng cầu cảm ứng, trộn kỹ quay ly tâm dung dịch tốc độ 3000 vòng/phút 15 giây Lắc nhẹ nhàng kiểm tra kết lại kính hiển vi Kỹ thuật Card gel Pha lỗng hồng cầu túi máu 1% dung dòch đệm Cho 50L hồng cầu 1% vào lỗ Card gel Thêm 25µL huyết bệnh nhân vào lỗ Card gel Ủ Card gel 370C 15 phút Sau ủ, quay ly tâm Card gel 10 phút Đọc ghi nhận kết Lưu ý: bước kỹ thuật cần tiến hành theo hướng dẫn nhà sản xuất Kỹ thuật tự chứng Cần tiến hành phản ứng chéo (+) Pha lỗng hồng cầu bệnh nhân nước muối sinh lý 0,9% Tiến hành bước kỹ thuật giống phản ứng chéo Đọc so sánh kết ống tự chứng với phản ứng chéo Lưu ý: nồng độ, tỷ lệ hồng cầu huyết cần tn theo kỹ thuật sử dụng Các ngun nhân (+) phản ứng chéo Khơng nhóm máu ABO Kháng thể miễn dòch huyết bệnh nhân Kháng thể tự sinh huyết bệnh nhân Hồng cầu túi máu tự ngưng kết Các bất thường huyết bệnh nhân Nhiễm trùng Sàng lọc kháng thể (-), phản ứng chéo giai đoạn (+): Khơng nhóm máu ABO túi máu bệnh nhân Hồng cầu túi máu tự ngưng kết Kháng thể chống A1 bệnh nhân A2 A2B Các kháng thể miễn dịch hoạt động nhiệt độ phòng Các kháng thể tự sinh loại lạnh 2) Sàng lọc kháng thể (-), phản ứng chéo giai đoạn (+): Hồng cầu túi máu ngưng kết Kháng thể huyết phản ứng với kháng ngun túi máu Các kháng thể truyền tiểu cầu khơng phù hợp nhóm máu ABO ( thường kháng thể chống A B ) 3) Sàng lọc kháng thể (+), phản ứng chéo (-): Kháng thể tự sinh -I Các kháng thể phụ thuộc vào số lượng kháng ngun 4) Sàng lọc kháng thể (+), phản ứng chéo (+), tự chứng (-): Kháng thể miễn dịch Hồng cầu túi máu ngưng kết 5) Sàng lọc kháng thể (+), phản ứng chéo (+), tự chứng (+): Kháng thể miễn dịch Kháng thể tự sinh loại lạnh Kháng thể tự sinh loại nóng Các vấn đề liên quan đến thuốc thử Các bước giải trường hợp (+) Kiểm tra nhóm máu ABO, Rh túi máu bệnh nhân Làm tự chứng Coombs trực tiếp Kiểm tra lại sàng lọc kháng thể bệnh nhân, định danh kháng thể ( có cần thiết ) Tiến hành thêm kỹ thuật khác Kỹ thuật trường hợp khẩn cấp,Cố gắng xác định nhóm máu ABO, Rh bệnh nhân Nếu khơng xác định được, sử dụng túi máu O- Ngay bệnh nhân truyền máu, phải tiếp tục tiến hành kỹ thuật phản ứng chéo Tài liệu tham khảo Technical manual, 15th edition Modern blood Banking and Transfusion Practices, 4th edition HealthAtoZ.com Redcross.org Nobelprize.org Bài KỸ THUẬT LÀM TIÊU BẢN VÀ NHUỘM I KỸ THUẬT LÀM TIÊU BẢN TIÊU BẢN MÁU DÀN: Chuẩn bi: Lam kính khơ sạch,lam kéo, bút đánh dấu tiêu Hóa chất cồn 700, 900 Bệnh phẩm máu lấy từ mao mạch I KỸ THUẬT LÀM TIÊU BẢN (TT) Tiến hành: Lấy giọt máu que diêm đặt nhẹ nhàng lên đầu lam kính( cách đầu lam khoảng 1cm ) Đặt lam kéo phía trước giọt máu Lùi lam kéo đến chạm giọt máu, để máu tràn hết chiều ngang cạnh lam kéo Để lam kéo góc khoảng 30-450 so với lam kính nằm ngang Từ từ đẩy ngược cho tay phía trước *Chú ý: đẩy nhanh tiêu dầy,đẩy chậm tiêu mỏng q thành lớp sóng khó xem I KỸ THUẬT LÀM TIÊU BẢN (TT) Kết quả: Máu tràn mỏng Lam có màu hồng tươi, nhìn xun qua lam đọc chữ Đi có hình lưỡi bò cưa Để khơ tự nhiên I KỸ THUẬT LÀM TIÊU BẢN (TT) TIÊU BẢN MÁU GIỌT DẦY: Chuẩn bi: Lam kính khơ sạch, que thủy tinh, bút đánh dấu tiêu Hóa chất cồn 700, 900 Bệnh phẩm máu lấy từ mao mạch I KỸ THUẬT LÀM TIÊU BẢN (TT) Tiến hành: Cho giọt máu lên đầu lam kính Dùng que thủy tinh góc lam kính khác ngốy nhẹ lên giọt máu theo vòng tròn rộng đến giọt máu có đường kính khoảng 1-1,5cm Lắc khơ để khơ tự nhiên Khơng cần cố định mà nhuộm Ngồi làm tiêu bản: soi tươi, tiêu tủy đồ, làm tiêu dịch II.KỸ THUẬT NHUỘM Có nhiều cách nhuộm huyết học thường nhuộm Giemsa Dụng cụ: Giá nhuộm, ống đong cốc có vạch pipet Hóa chất: Giemsa mẹ, cồn cố định, nước cất, nước thường Tiêu máu Tiến hành: Cố định tiêu cách cho 1-2 giọt cồn tuyệt đối lên tiêu Và lăn cho cồn chảy khắp tiêu Để khơ tự nhiên Pha thuốc nhuộm Giemsa tỉ lệ 1/10 Đặt lam cần nhuộm lên giá Phủ lên khắp tiêu dd Giemsa 1/10 Để 15 phút, rửa nước thường cho hết cặn Để khơ giá đỡ thẳng đứng Và đọc cần thiết Bài KỸ THUẬT LẤY MÁU MAO MẠCH I CHUẨN BỊ: Dụng cụ: Kim chích, bơng thấm, dây garo Hóa chất: Cồn 700 - Bệnh nhân: + Để bệnh nhân ngồi nằm thoải mái + Chọn vị trí lấy máu đầu ngón tay 3,4(người lớn) gót chân, đầu ngón chân trẻ en nhỏ II TIẾN HÀNH: Sát khuẩn nơi định lấy máu bơng tẩm cồn 700 Để khơ tự nhiên Garo đầu ngón tay Dùng kim tiệt khuẩn chích sâu độ 1-1,5 mm Lau bỏ giọt máu đầu bơng khơ Lấy máu để xét nghiệm từ giọt thứ trở Sau lấy đủ máu, ta tháo dây garo, lau máu nơi chích cho bệnh nhân III CHÚ Ý Trước lấy máu phải đối chiếu họ, tên, tuổi, chẩn đốn, định xét nghiệm bệnh nhân Khơng lấy máu nơi nghi tắc mạch, phù nề, viêm nhiễm Khơng bóp nặn q nhiều Bài 6: KỸ THUẬT LẤY MÁU TĨNH MẠCH I CHUẨN BỊ: Dụng cụ: Bơm kim tiêm, dụng cụ chứa máu, bơng khơ, dây garo Hóa chất: Cồn 700 - Bệnh nhân: + Nếu làm phòng xét nghiệm cho bệnh nhân ngồi cạnh bàn riêng lấy máu + Nếu làm giường bệnh cho bệnh nhân nằmngay ngắn, đầu gối cẩn thận II TIẾN HÀNH: Chọn vị trí lấy máu: thường tĩnh mạch khuỷu tay Sát khuẩn da lần thứ bơng tẩm cồn 700 Garo phía nơi chích để vài phút cho TM lên Sát khuẩn da lần Cầm bơm kim tiêm lòng bàn tay phải,ngón trỏ tỳ vào đốc kim Đặt hướng TM lên, đầu vát kim hướng lên Đặt kim tiêm so với cánh tay góc khoảng 300 Tỳ ngón tay vào đốc kim chọc qua da với động tác dứt khốt II TIẾN HÀNH (TT) Luồn kim vào TM Khi kim vào TM nới dây garo rút máu cho đủ số lượng cần thiết Tháo dây garo, đặt miếng bơng tẩm cồn lên chỗ tiêm chích, rút kim với động tác nhanh, bảo bệnh nhân ép lên chỗ lấy máu khoảng 5p Tháo kim cho vào thùng hủy kim, bơm đủ số lượng máu vào lọ chứa mẫu III CHÚ Ý Trước lấy máu phải đối chiếu họ, tên, tuổi, chẩn đốn, định xét nghiệm bệnh nhân Khơng lấy máu nơi nghi tắc mạch, phù nề, viêm nhiễm Khơng lấy máu q lâu Khi bơm vào ống nhớ lắc trộn Bài PHA CHẾ CÁC DUNG DỊCH NHUỘM DUNG DỊCH GIEMSA ĐẬM ĐẶC - Giemsa bột : 0,75 g - Glycerin : 35 ml - Cồn Methylic : 65 ml Cho Giemsa bột vào cối sứ, cho từ từ Glycerin vào dùng chầy sứ nghiền thật mịn, tiếp tục cho cồn vào hòa Sau dùng lọ màu đựng dung dịch, dùng nút lọ thật kín, Bọc lọ giấy đen để chỗ tối, ngày lắc lần ngày liền Giemsa mẹ để tháng dùng tốt DUNG DỊCH WRIGHT ĐẬM ĐẶC - Wright bột : 0,75 g - Glycerin : ml - Cồn Methylic : 97 ml Cho Wright bột vào cối sứ, cho từ từ Glycerin vào dùng chầy sứ nghiền thật mịn, tiếp tục cho cồn vào hòa Sau dùng lọ màu đựng dung dịch, dùng nút lọ thật kín, Bọc lọ giấy đen để chỗ tối, ngày lắc lần ngày liền Wright mẹ để tháng dùng tốt DUNG DỊCH NHUỘM HỒNG CẦU LƯỚI 3.1 Dung Dịch Xanh Cresyl 1%: - Xanh Cresyl : 1g - Natri Citrat 3% : 20 ml - NaCl 0,9% : 80 ml ml Lắc cho tan lọc Chỉ dùng tháng 3.2 Dung Dịch Xanh Cresyl cồn: - Xanh Cresyl ánh : 1g - Cồn tuyệt đối : 100 ml DUNG DỊCH NHUỘM PEROXYDAZA: + Dung dịch A: - Benzidin : 0,25g - Cồn Ethylic 95% : 100 ml + Dung dịch B: - Nitroprussiate sodium : 25g - Nước cất : 100 ml + Dung dịch C: - Dung dịch A : 100 ml - Dung dịch B : ml + Dung dịch D - Nước oxy già 3% : 3ml - Nước cất : 100ml + Dung dịch Giemsa 10% DUNG DỊCH NHUỘM SOUDAN NOIR + Dung dịch A: - Soudan Noir : 0,3g - Cồn Ethylic tuyệt đối : 100ml + Dung dịch B: -Tinh thể Phenol : 16g - Disodic Phosphat : 0,3g - Cồn Ethylic tuyệt đối : 30ml - Nước cất : 100ml + Dung dịch C: - Dung dịch A : 60ml - Dung dịch B : 40ml + Cồn Ethylic 70 + Dung dich Giemsa 10% DUNG DỊCH NHUỘM RNA TRONG NGUN SINH CHẤT: 6.1 Dung dịch cố định: - Cồn Ethylic tuyệt đối : 60ml - Chloroform : 30ml - Acid Acetic : 10ml 6.2 Dung dịch đệm walpole ( PH = 4.8 ) - Dung dịch Acid Acetic 0,6g/100ml : 80ml - Dung dịch Acetat sodium 0,8/100ml : 120ml 6.3 Dung dịch nhuộm: + Dung dịch A: - Vert methy 2g - Nước cất 100ml + Dung dịch B: - Pyrinin G 2g - Nước cất 100ml + Dung dịch C: - Dung dịch A 4ml - Dung dịch B 6ml Cồn Ethylic Tuyệt đối 2ml DD đệm walpole 100ml Bài PHA CHẾ DUNG DỊCH CHỐNG ĐƠNG DUNG DỊCH EDTA : Muối dipotassic acid ethylen diamin tetra acetic : 1,5g - Nước cất vừa đủ : 100ml DUNG DỊCH NATRI CITRAT 3,8% - Natri Citrat : 3,8 g - Dung dịch NaCl (0,85%) : 100ml DUNG DỊCH HEPARIN - Heparin ngun chất : 5000đơn vị - Nước cất vừa đủ : 10ml Hoặc: - Heparin : 10mg - NaCl 0,9% : 0,25ml DUNG DỊCH ACD: - Acid Citric : 0,8g - Citrat natri : 2,2g - Gluco : 2,2g - Nước cất : 100ml DUNG DỊCH CPD: - Acid citric : 0,32g - Citrat natri : 2,63g - Phosphat : 0,25g - Destroze : 2,32g - Nước cất : 100ml DUNG DỊCH WINTROBE - Amoni oxalat : 1,2g - Kali oxalat : 0,8g - Nước cất : 100ml Pha xong lọc qua giấy lọc bơng, dùng dần Bài PHA CHẾ DUNG DỊCH DÙNG TRONG XÉT NGHIỆM ĐƠNG MÁU 1.DUNG DỊCH CANXICLORUA 0,1M: - Canxiclorua khan : 11,1g - Nước cất vừa đủ : 1000ml Điều chỉnh PH = Bảo quản 4oC, dùng tuần DUNG DỊCH CANXICLORUA 0,025M - Dung dịch Canxiclorua 0,1M : - Nước cất thể tích : thể tích Chỉnh PH = Chỉ pha dùng DUNG DỊCH THROMBOPLASTINCANXI: - Bột hoạt chất Thromboplastin : 50mg - NaCl 0,9% : 1ml Để vào nồi cách thủy, khuấy liên tục đũa thủy tinh 30phút Li tâm 3-4 phút để lắng nhiệt độ phòng thí nghiệm Thu phần dịch sang ống nghiệm khác Pha Thromboplastincanxi: Cứ thể tích Thromplastin thêm thể tích canxiclorua 0,025M Trộn đều, để vào bình cách thủy dùng phòng xét nghiệm PHA CÁC DUNG DỊCH KHÁC 1.DUNG DỊCH ĐO SỨC BỀN HỒNG CẦU: Dung dịch NaCl 0,7% Hoặc NaCl có dung dịch đệm phosphat (PH=&) + NaCl 90g + Phosphatdisodic 13,65 g + Phosphat monosodic 2,43g 1000ml + Nước cất vừa đủ Bảo quản hàng tháng DUNG DỊCH NGÂM RỬA DỤNG CỤ THỦY TINH:: 2.1 Dung dịch sunfocromic đậm đặc: - Kalibicromat : 40g - Nước : 180ml - Acid sunfuric ngun chất : 180ml 2.2 Dung dịch Sunfocromic loại thường: - Kalibicromat : 50g - Acidsunfuric ngun chất : 50ml - Nước cất 1000ml : PHA LỖNG VÀ BẢO QUẢN CỒN: 3.1 Pha lỗng cồn theo phương pháp Lowi: Cho vào ống đong chia độ số lượng mililit cồn dùng để pha lỗng số độ cồn cần pha Thêm nước cất vào đến khối lượng chung số độ cồn trước pha 3.2 Cách bảo quản cồn tuyệt đối: Cứ 1000ml cồn tuyệt đối Thêm 50g Kalicarbonat 50g đồng sunfat khan Sẽ giữ đơn cồn thời gian dài Bài 10 PHA CHẾ DUNG DỊCH ĐẾM TẾ BÀO DUNG DỊCH ĐẾM SỐ LƯỢNG HỒNG CẦU : DUNG DỊCH HAYEM : - Natri clorua : 1g - Natri sulfat : 5g - Sublimat : 1,5g - Nước cất : 200 ml DUNG DỊCH MARCANO : - Natri sulfat : 50 g - Formol 40 % : ml - Nước cất : 1000ml DUNG DỊCH NƯỚC MUỐI SINH LÝ - NaCl : 8,5 g - Nước cất : 1000 ml II DUNG DỊCH ĐẾM SỐ LƯỢNG BẠCH CẦU DUNG DỊCH LAZARUS : - Acid Acetic : 50 ml - Xanh Methylen 1% : 20 giọt - Nước cất vừa đủ : 1000 ml DUNG DỊCH TURK : - Acid Acetic : ml - Gentian violet : giọt - Nước cất : 98 ml DUNG DỊCH XANH ACETIC : - Acid Acetic : 10 ml - Xanh Toludin o,25% : 10 ml - Nước cất : 1000ml DUNG DỊCH ĐẾM SỐ LƯỢNG TIỂU CẦU : DUNG DỊCH MARCANO : DUNG DỊCH URE : - Ure ngun chất : 0,7 g - NaCl 0,9% : ml - Nước cất : ml DUNG DỊCH NOVOCAIN: - Novocain chlohydrat : 30 g - Natri clorua : 2g - Nước cất vừa đủ : 1000 ml DUNG DỊCH MAGNESIUM SULFAT 14% : - Magnesium sulfat : 14 g - Nước cất vừa đủ : 100 ml DUNG DỊCH PHA LỖNG NƯỚC NÃO TỦY ĐỂ ĐẾM TẾ BÀO MÁU : - Acid acetic : 10 ml - Crystal violet : 0,1 ml - Nước cất : 90 ml Lọc kỹ trước dùng V DUNG DỊCH ĐỊNH LƯỢNG HUYẾT SẮC TỐ DUNG DỊCH ACID CLOHYDRIC 0.1N Acid clohydric ngun chất (HCL) : 8,6 ml Nước cất vừa đủ : 1000ml Bài 11 QUAN SÁT TẾ BÀO NGOẠI VI BÌNH THƯỜNG I ĐẾM SỐ LƯỢNG HỒNG CẦU 1.Ngun tắc: Đếm hồng cầu tươi, trực tiếp qua kính hiển vi, Trên loại buồng đếm biết kích thước với máu pha lỗng pipet xác Kết đếm tính theo mm3 và/lít máu 2.Chuẩn bị: Pipet xác pha lỗng hồng cầu Buồng đếm Kính hiển vi, máy bấm tay, bơng thấm Phương tiện lấy máu mao mạch 2.Chuẩn bị(TT) Hóa chất: dd pha lỗng HC Bệnh nhân 3.Tiến hành: Hút máu vạch 0,5, lau máu dính đầu ống, hút tiếp dung dịch pha lỗng ( marcano) đến vạch 101, vừa hút vừa lắc xoay tròn ống Bịt đầu pipet đầu ngón tay Trỏ trái, giữ pipet đầu ngón ngón trái Phần đầu pipet sau tháo dây Lắc trộn: phút cách đập bàn tay phải cầm pipet ngón ngón vào bàn tay trái nắm Lại 3.Tiến hành (TT) Cho vào buồng đếm: + Gắn kính lên buồng đếm + Bỏ 3-5 giọt đầu pipet + Đặt nghiêng pipet 450 vào lam lamen + Để hỗn dịch chảy từ từ vào buồng đếm đến lan tỏ khắp kính thừa quanh bờ Đếm HC: + Đặt buồng đếm lên kính hiển vi + Để 2-3 phút cho HC lắng + Lấy vi trường vật kính 10, chuyển sang 40 3.Tiến hành (TT) + Đếm HC 80 vng nhỏ khu vực Của HC ( Smic Neubauer, Thoma, Goriaep): đếm khu góc khu + Ở khu đếm HC nằm kẻ HC nằm đường cạnh hình vng đếm HC cạnh cạnh trái Ghi số HC khu Giữa khu khơng chênh lệch q 10 Tính Kết quả: + Sau đếm số lượng HC 80 vng tức 80/4000mm3 + Nhân với độ pha lỗng 200 lần + Tính 1mm3 = SLHC/5khu x 10.000 [...]... Glycerin : 35 ml - Cn Methylic : 65 ml Cho Giemsa bt vo ci bng s, cho t t Glycerin vo v dựng chy bng s nghin tht mn, tip tc cho cn vo hũa u Sau ú dựng l mu ng dung dch, dựng nỳt l tht kớn, Bc l bng giy en hoc ch ti, ngy lc 3 ln trong 4 ngy lin Giemsa m 6 thỏng mi dựng l tt nht 2 DUNG DCH WRIGHT M C - Wright bt : 0,75 g - Glycerin : 3 ml - Cn Methylic : 97 ml Cho Wright bt vo ci bng s, cho t t Glycerin... ng V c khi cn thit Bi 5 K THUT LY MU MAO MCH I CHUN B: Dng c: Kim chớch, bụng thm, d y garo Húa cht: Cn 700 - Bnh nhõn: + bnh nhõn ngi hoc nm thoi mỏi + Chn v trớ ly mỏu u ngún tay 3,4(ngi ln) hoc gút chõn, u ngún chõn cỏi i vi tr en nh II TIN HNH: Sỏt khun ni nh ly mỏu bng bụng tm cn 700 khụ t nhiờn Garo u ngún tay Dựng kim tit khun chớch sõu 1-1,5 mm Lau b git mỏu u bng bụng khụ Ly mỏu xột nghim... kim vo TM cú th ni d y garo ra v rỳt mỏu sao cho s lng cn thit Thỏo d y garo, t ming bụng tm cn lờn ch tiờm chớch, rỳt kim ra vi ng tỏc nhanh, bo bnh nhõn ộp lờn ch ly mỏu khong 5p Thỏo kim ra cho vo thựng hy kim, bm s lng mỏu vo l cha mu III CH í Trc khi ly mỏu phi i chiu h, tờn, tui, chn oỏn, ch nh xột nghim ca bnh nhõn Khụng c ly mỏu ni nghi do tc mch, phự n, viờm nhim Khụng ly mỏu quỏ lõu Khi... Húa cht cn 700, 900 Bnh phm l mỏu ly t mao mch I K THUT LM TIấU BN (TT) Tin hnh: Ly 1 git mỏu bng que diờm t nh nhng lờn 1 u ca lam kớnh( cỏch u lam khong 1cm ) t lam kộo ngay phớa trc git mỏu Lựi lam kộo n chm git mỏu, mỏu trn ht chiu ngang ca cnh lam kộo lam kộo 1 gúc khong 30-450 so vi lam kớnh nm ngang T t y ngc cho u tay v phớa trc *Chỳ ý: y nhanh tiờu bn s dy ,y chm tiờu bn s mng quỏ hoc thnh... dựng chy bng s nghin tht mn, tip tc cho cn vo hũa u Sau ú dựng l mu ng dung dch, dựng nỳt l tht kớn, Bc l bng giy en hoc ch ti, ngy lc 3 ln trong 4 ngy lin Wright m 6 thỏng mi dựng l tt nht 3 DUNG DCH NHUM HNG CU LI 3.1 Dung Dch Xanh Cresyl 1%: - Xanh Cresyl : 1g - Natri Citrat 3% : 20 ml - NaCl 0,9% : 80 ml ml Lc cho tan u ri lc Ch dựng trong 1 thỏng 3.2 Dung Dch Xanh Cresyl trong cn: - Xanh Cresyl... ly mỏu, ta thỏo d y garo, lau sch mỏu ni ó chớch cho bnh nhõn III CH í Trc khi ly mỏu phi i chiu h, tờn, tui, chn oỏn, ch nh xột nghim ca bnh nhõn Khụng c ly mỏu ni nghi do tc mch, phự n, viờm nhim Khụng búp nn quỏ nhiu Bi 6: K THUT LY MU TNH MCH I CHUN B: Dng c: Bm kim tiờm, dng c cha mỏu, bụng khụ, d y garo Húa cht: Cn 700 - Bnh nhõn: + Nu lm ti phũng xột nghim cho bnh nhõn ngi cnh bn riờng ly... Magnesium sulfat : 14 g - Nc ct va : 100 ml DUNG DCH PHA LONG NC NO TY M T BO MU : - Acid acetic : 10 ml - Crystal violet : 0,1 ml - Nc ct : 90 ml Lc k trc khi dựng V DUNG DCH NH LNG HUYT SC T DUNG DCH ACID CLOHYDRIC 0.1N Acid clohydric nguyờn cht (HCL) : 8,6 ml Nc ct va : 1000ml Bi 11 QUAN ST T BO NGOI VI BèNH THNG I M S LNG HNG CU 1.Nguyờn tc: m nhng hng cu ti, trc tip qua kớnh hin vi, Trờn 1 loi bung... Bung m Kớnh hin vi, m y bm tay, bụng thm Phng tin ly mỏu mao mch 2.Chun b(TT) Húa cht: dd pha loóng HC Bnh nhõn 3.Tin hnh: Hỳt mỏu ỳng vch 0,5, lau sch mỏu dớnh u ng, hỳt tip dung dch pha loóng ( marcano) n vch 101, va hỳt va lc xoay trũn ng Bt u pipet bng u ngún tay Tr trỏi, gi pipet bng u ngún cỏi v ngún gia trỏi Phn u pipet sau ú thỏo d y Lc trn: trong 3 phỳt bng cỏch p bn tay phi ang cm pipet gia... ỏnh : 1g - Cn tuyt i : 100 ml 4 DUNG DCH NHUM PEROXYDAZA: + Dung dch A: - Benzidin : 0,25g - Cn Ethylic 95% : 100 ml + Dung dch B: - Nitroprussiate sodium : 25g - Nc ct : 100 ml + Dung dch C: - Dung dch A : 100 ml - Dung dch B : 2 ml + Dung dch D - Nc oxy gi 3% : 3ml - Nc ct : 100ml + Dung dch Giemsa 10% 5 DUNG DCH NHUM SOUDAN NOIR + Dung dch A: - Soudan Noir : 0,3g - Cn Ethylic tuyt i : 100ml + Dung... - Cn Ethylic tuyt i : 100ml + Dung dch B: -Tinh th Phenol : 16g - Disodic Phosphat : 0,3g - Cn Ethylic tuyt i : 30ml - Nc ct : 100ml + Dung dch C: - Dung dch A : 60ml - Dung dch B : 40ml 0 + Cn Ethylic 70 + Dung dich Giemsa 10% 6 DUNG DCH NHUM RNA TRONG NGUYấN SINH CHT: 6.1 Dung dch c nh: - Cn Ethylic tuyt i : 60ml - Chloroform : 30ml - Acid Acetic : 10ml 6.2 Dung dch m walpole ( PH = 4.8 ) - Dung dch