NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY SÓC XÉO, GLOCHIDION OBLIQUUM DECNE

 Mục đích nghiên cứu: Phân lập và xácđịnh một số thành phần hóa học của loài Glochidion obliquum Decne. Tìm hiểu, tham khảo các hoạt tính sinh học của các chất phân lập được.  Đối tượng nghiên cứu: Loài Glochidion obliquum Decne được thu hái ở Phúc Yên, Vĩnh Phúc.  Nhiệm vụ nghiên cứu của luận văn: Tổng quan nghiên cứu về chi Glochidion và loài Glochidion obliquum Decne. Phân lập và xác định cấu trúc các hoạt chất từ loài Glochidion obliquum Decne.

LỜI CẢM ƠN Luận văn hoàn thành Viện Hóa sinh biển, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam khuôn khổ đề tài Nafosted mã số 104.01-2012.24 Lời đầu tiên, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Đặng Ngọc Quang TS Vũ Kim Thư – hai thầy cô tận tình hướng dẫn giúp đỡ em suốt trình nghiên cứu hoàn thành luận văn Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới PGS.TS Phan Văn Kiệm toàn thể cán phòng Nghiên cứu cấu trúc – Viện Hóa sinh biển, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam nhiệt tình bảo, tạo điều kiện giúp đỡ em thời gian nghiên cứu Em xin gửi lời cảm ơn tới toàn thể thầy cô giáo khoa Hóa học thầy cô giáo Trường Đại học Sư phạm Hà Nội dạy dỗ dìu dắt em suốt trình học tập trường Em xin gửi lời cảm ơn tới Ban giám hiệu Trường THPT Vân Tảo (Thường Tín, Hà Nội) tạo điều kiện thuận lợi cho em có thời gian theo học khóa học Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn bè người thân bên động viên, giúp đỡ em trình em học tập nghiên cứu Hà Nội, tháng 09 năm 2015 Học viên Lê Thị Kiều Anh MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT 13 Kí hiệu C-NMR DEPT DMSO EC50 GI50 H-NMR IC50 HMBC HR-ESI-MS HSQC NAPH NOESY ORAC TLC Tiếng Anh Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer Dimethylsulfoxide Half maximal effective concentration 50% growth inhibition Diễn giải Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon 13 Phổ DEPT (CH3)2SO Hiệu tối đa 50% Ức chế tối đa 50% tăng sinh tế bào Proton Nuclear Magnetic Resonance Phổ cộng hưởng từ hạt Spectroscopy nhân proton Inhibitory concentratrion at 50% Nồng độ ức chế 50% đối tượng thử nghiệm Heteronuclear multiple Bond Phổ tương tác dị hạt nhân Connectivity qua nhiều liên kết High Resolution Electronspray Ionization Phổ khối lượng phân giải Mass Spectrum cao phun mù điện tử Heteronuclear Single- Quantum Phổ tương tác dị hạt nhân Coherence qua liên kết Hoạt tính oxi hóa Nuclear Overhauser Enhancement Phổ NOESY Spectroscopy Oxygen Radical Absorbance Capacity Khả hấp thu gốc oxy hóa Thin layer chromatography Sắc ký lớp mỏng TMS Tetramethylsilane Si(CH3)4 DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH LỜI MỞ ĐẦU Việt Nam nước nằm vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa nên có hệ thực vật đa dạng phong phú Theo dự đoán có khoảng 12.000 loài, biết khoảng 4.000 loài nhân dân ta dùng làm thảo dược [1], [2], [3] Do đó, việc nghiên cứu loài thảo dược dân gian sử dụng làm thuốc nhằm tìm kiếm hợp chất có hoạt tính cao phòng chữa bệnh nhiệm vụ đặc biệt quan trọng nhà khoa học nước quan tâm Các hoạt chất có nguồn gốc thiên nhiên thể ưu điểm so với chất tổng hợp, có độc tính thấp khả dung nạp cao thể sinh vật Do việc nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học loại thảo dược có ý nghĩa to lớn nhằm giải thích ý nghĩa khoa học tác dụng chữa bệnh thuốc góp phần tạo sở phát triển loại thuốc chữa bệnh phục vụ chăm sóc sức khỏe cho người [4], [7], [6], [9] Thầu dầu (Euphorbiaceae) họ lớn Thực vật có hoa, gồm khoảng 240 chi khoảng 6.000 loài, có chi Glochidion [44] Đến nay, nhà khoa học phát 260 loài chi Glochidion Nhưng phần lớn loài chi chưa nghiên cứu sâu thành phần hoạt chất nghiên cứu sơ Các công bố có cho thấy, thành phần hóa học chủ yếu chi Glochidion hợp chất thuộc loại triterpenoid, triterpenoid glycoside, flavonoid, steroid alkaloid Trong y học cổ truyền nhiều nước, loài thực vật có chứa hợp chất triterpenoid phần lớn sử dụng để điều trị viêm nhiễm số bệnh khác [18] Ở Việt Nam, có nhóm tác giả Vũ Kim Thư nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học loài Glochidion eriocarpum Champ phân lập xác định cấu trúc hóa học 21 hợp chất có hợp chất nhiều chất có hoạt tính gây độc tế bào tốt, điển hình hợp chất Glochierioside A ức chế dòng tế bào ung thư với giá trị IC 50 từ 0,54 ÷ 1,95 µg/ml Tiếp nối kết dựa vào tác dụng chữa bệnh ghẻ Glochidion obliquum dân gian [2] lựa chọn đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học Sóc xéo, Glochidion obliquum Decne.”  Mục đích nghiên cứu: - Phân lập xác định số thành phần hóa học loài Glochidion obliquum Decne - Tìm hiểu, tham khảo hoạt tính sinh học chất phân lập  Đối tượng nghiên cứu: Loài Glochidion obliquum Decne thu hái Phúc Yên, Vĩnh Phúc  Nhiệm vụ nghiên cứu luận văn: - Tổng quan nghiên cứu chi Glochidion loài Glochidion obliquum Decne - Phân lập xác định cấu trúc hoạt chất từ loài Glochidion obliquum Decne CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Thông tin chi Glochidion Việt Nam 1.1.1 Đặc điểm thực vật phân loại Thầu dầu (Euphorbiaceae) họ lớn Thực vật có hoa, gồm khoảng 240 chi khoảng 6.000 loài, có chi Glochidion [44] Đến nay, nhà khoa học phát 264 loài chi Glochidion [44] Các loài thuộc chi Glochidion phân bố vùng nhiệt đới châu Á, đảo Thái Bình Dương, phần vùng nhiệt đới châu Mỹ châu Phi [29] G rubrum G lanceolarium G ferdinandi G zeylanicum G littorale G lobocarpum Hình Hình ảnh số loài chi Glochidion Theo GS Phạm Hoàng Hộ, Việt Nam có khoảng 25 loài thuộc chi Glochidion (bảng 1) [1], [4] Bảng Danh sách loài thuộc chi Glochidion Việt Nam TT Tên khoa học Tên tiếng Việt Sóc thon; bòn bọt G lanceolarium to; bọt ếch lưỡi (Roxb.) Voigt mác Bọt ếch biển; trâm G littorale Blume bột G obliquum Decne Ghẻ; Sóc xéo G zeylanicum A.Juss Sóc Tichlan G coccineum (Buch.Sóc đỏ Ham.) Muell - Arg G talmyanum Beille Sóc Talmy Nơi sống phân bố Rừng hỗn hợp đến 800m: từ Hải Ninh đến Tây Ninh Dựa rạch, ruộng, từ Bắc đến Nam Rừng, Lạng Sơn, Giá Ray, Phú Quốc Rừng từ Lạng Sơn, Chợ Gành đến Thủ Dầu Một Đất ẩm rừng đến 450 m Rừng thứ sinh, nơi ẩm đến 1000 m: Yên Báo, Chợ Gành, Lang Hanh G assamicum (Muell.Rừng dày hay bán thay lá, đến Sóc Asam Arg.) Hook f 1000 m: Hà Côi, Quảng Ninh G balansae Beille Sóc Balansa Thử Pháp, Hà Sơn Bình Rừng thay lá, rừng thông, G daltonii (Muell.10 Sóc Dalton dầu: Lạng Sơn, Bắc Giang, Arg.) Kurz Đà Lạt Phân bố phổ biến hầu G eriocarpum Champ Bòn bọt; bọt ếch hết tỉnh thuộc vùng núi 11 ex Benth lông thấp (dưới 1000 m), trung du đồng 12 G fagifolium Miq Sóc dẽ Nha Trang, Cà Ná, Côn Sơn Rừng thưa: miền Bắc đến 13 G velutinum Wight Bọt ếch; Sóc lông Lâm Đồng 14 G gamblei Hook.f Sóc Gamble Vùng vôi, Cao Lạng G hongkongense 15 Sóc Hồng Kông Vùng Đà Lạt Muell.-Arg G hypoleucum (Miq.) Sóc mốc; Sóc Hải Vân, Hòn Tre (Nha 16 Boerl trắng Trang), Ninh Thuận G glomerulatum Đất lầy, rừng còi đến dựa biển: 17 Sóc chụm (Miq.) Boerl Mường Thon đến Hòa Bình G laevigatum Muell.18 Sóc láng Arg G hirsutum (Roxb.) Sóc lông Voigt 19 G molle Hook & Arn Sóc mềm 20 G obscurum Bl Sóc che G pilosum (Lour.) Sóc nam; Merr nguội G rigidum Muell.22 Sóc cứng Arg 21 Đồi vôi, Chợ Gành Cây ưa ẩm sáng, thường mọc dọc suối rừng miền Bắc cơm Đà Nẵng, Nha Trang, Phan Rang Từ bình nguyên đến 1100m: Sóc đỏ; muối ăn 23 G rubrum Bl từ Bắc đến Sài Gòn, Phú trái Quốc G sphaerogynum Rừng dày hay bán thay lá, 24 Sóc cái-tròn (Muell.-Arg.) Kurz 1000 – 1200m 25 G triloculare Merr Sóc ba buồng Chợ Gành 1.1.2 Các tác dụng chữa bệnh dân gian Trong số 264 loài thuộc chi Glochidion biết có số loài sử dụng dân gian Ấn Độ, Xri Lanca, Trung Quốc, Lào, Campuchia, Thái Lan, Việt Nam để làm thuốc chữa bệnh (Bảng 2) [29] Bảng Một số loài chi Glochidion sử dụng làm thuốc chữa bệnh TT Tên khoa học Bộ phận sử dụng Tác dụng chữa bệnh theo kinh nghiệm dân gian Thuốc hạ sốt, chất lọc máu, chữa lỵ, ỉa chảy, thoát vị, ho, … G puberum Cả G oblatum Thân rễ G eriocarpum Cả Chứng mày đay, viêm vú, đau răng, chứng rong kinh, lỵ, eczema chàm, viêm ruột non, ung thư G velutinum Cả Đái tháo đường, ung thư, chữa vết thương G zeylanicum Cả Ho, viêm phổi, đau bụng, chấn thương, làm mát, thuốc bổ, bệnh ghẻ G hohenackeri Vỏ phần mặt đất Dạ dày, giảm đau, chống virut, hạ huyết áp, giảm đường huyết Chữa bệnh lỵ G sphaerogynum Vỏ phần mặt đất G hirsutum G ramiflorum Lá Ngăn ngừa thụ thai 10 G littorale Lá Sắc lấy nước chữa đau dày 11 G lanceolarium Lá Sắc lấy nước chữa đau dày 12 G assamicum Cả Giảm đường huyết 13 G fagifolium Cả Giảm đau, giảm huyết áp 14 G heyneanum Cả Giảm đau, lợi tiểu, chống ung thư 15 G nilgherrense Cả Giảm huyết áp, lợi tiểu Lá rễ Tác nhân chữa ung thư, cúm, eczema, giảm đau, hạ huyết áp Thấp khớp, viêm phổi đau Trong số 25 loài thuộc chi Glochidion Việt Nam có số loài dân gian dùng làm thuốc chữa bệnh, liệt kê bảng [3] 10 Phụ lục phổ 1.6 Phổ HMBC giãn hợp chất G1 Phụ lục phổ 1.7 Phổ NOESY hợp chất G1 71 Phụ lục 2.1-2.4: CÁC PHỔ CỦA HỢP CHẤT G2 Phụ lục phổ 2.1 Phổ 1H-NMR hợp chất G2 Phụ lục phổ 2.2 Phổ 1H-NMR giãn hợp chất G2 72 Phụ lục phổ 2.3 Phổ 13C-NMR hợp chất G2 Phụ lục phổ 2.4 Phổ DEPT hợp chất G2 73 Phụ lục 3.1-3.4: CÁC PHỔ CỦA HỢP CHẤT G3 Phụ lục phổ 3.1 Phổ 1H-NMR hợp chất G3 Phụ lục phổ 3.2 Phổ 13C-NMR hợp chất G3 74 Phụ lục phổ 3.3 Phổ 13C-NMR giãn hợp chất G3 Phụ lục phổ 3.4 Phổ DEPT hợp chất G3 75 Phụ lục 4.1-4.8: CÁC PHỔ CỦA HỢP CHẤT G4 Phụ lục phổ 4.1 Phổ 1H-NMR hợp chất G4 Phụ lục phổ 4.2 Phổ 1H-NMR giãn hợp chất G4 76 Phụ lục phổ 4.3 Phổ 13C-NMR hợp chất G4 Phụ lục phổ 4.4 Phổ DEPT hợp chất G4 77 Phụ lục phổ 4.5 Phổ HSQC hợp chất G4 Phụ lục phổ 4.6 Phổ HSQC giãn hợp chất G4 78 Phụ lục phổ 4.7 Phổ HMBC hợp chất G4 Phụ lục phổ 4.8 Phổ HMBC giãn hợp chất G4 79 Phụ lục 5.1-5.6: CÁC PHỔ CỦA HỢP CHẤT G5 Phụ lục phổ 5.1 Phổ 1H-NMR hợp chất G5 Phụ lục phổ 5.2 Phổ 1H-NMR giãn hợp chất G5 80 Phụ lục phổ 5.3 Phổ 13C-NMR hợp chất G5 Phụ lục phổ 5.4 Phổ DEPT hợp chất G5 81 Phụ lục phổ 5.5 Phổ HSQC hợp chất G5 Phụ lục phổ 5.6 Phổ HMBC hợp chất G5 82 Phụ lục 6.1-6.6: CÁC PHỔ CỦA HỢP CHẤT G6 Phụ lục phổ 6.1 Phổ 1H-NMR hợp chất G6 Phụ lục phổ 6.2 Phổ 1H-NMR giãn hợp chất G6 83 Phụ lục phổ 6.3 Phổ 13C-NMR hợp chất G6 Phụ lục phổ 6.4 Phổ DEPT hợp chất G6 84 Phụ lục phổ 6.5 Phổ HSQC hợp chất G6 Phụ lục phổ 6.6 Phổ HMBC hợp chất G6 85 [...]... Đồng Nai, Kiên Giang Cây mọc ở rừng thưa, rừng thứ sinh Có quả tháng 12 [5] 1.2.2 Tác dụng trong dân gian Theo Võ Văn Chi, người ta dùng lá của loài Glochidion obliquum vò ra ngâm vào nước dùng để trị ghẻ [3] 1.2.3 Tổng quan những nghiên cứu về thành phần hoá học và hoạt tính sinh học loài Glochidion obliquum Trên thế giới, chưa có công bố nghiên cứu nào về loài Glochidion obliquum Decne Ở Việt Nam, năm... cho thấy rotundic acid thể hiện mạnh khả năng kháng nấm sợi và nấm men [18] 1.2 Loài Glochidion obliquum Decne Tên thường gọi: bọt ếch, cây ghẻ, sóc xéo Tên khoa học: Glochidion obliquum Decne. , thuộc họ Thầu dầu (Euphorbiaceae) ở Việt Nam 1.2.1 Đặc điểm thực vật Hình 2 Ảnh cây sóc xéo (Glochidion obliquum Decne. ) Cây gỗ nhỏ, cao 7 – 11m, nhánh dẹp không lông Lá dài, không lông, hình trái xoan – mũi... trị đau ruột, đau dạ dày, trị lỵ 1.1.3 Thành phần hoá học đặc trưng Cho đến nay mới có khoảng 11 loài trong chi Glochidion được nghiên cứu về thành phần hóa học Các nghiên cứu này cho thấy lớp chất từ các loài trong chi 11 Glochidion gồm triterpene, flavonoid, megastigmane, lignan, secquiterpene, butenolide, phenolic, tannin và một số nhóm chất khác Trong đó, thành phần chính là triterpene Tên gọi của... 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Mẫu thực vật Lá sóc xéo (Glochidion obliquum Decne) được thu hái tại Vĩnh Yên, Vĩnh Phúc vào tháng 12 năm 2012 Mẫu cây được TS Nguyễn Thế Cường, Viện Sinh thái và Tài nguyên Sinh vật - Viện Hàn lâm KH&CN Việt Nam giám định Mẫu tiêu bản (GO1212) được lưu giữ tại Viện Hoá sinh biển - Viện Hàn lâm KH&CN Việt Nam Mẫu cành và lá cây sóc xéo Mẫu tiêu bản thực vật... tác giả Zhao, Quancheng (Trung Quốc) còn công bố nghiên cứu về thử nghiệm rotundic acid trong việc dùng làm thuốc để điều hòa mỡ máu [43] 16 Một nghiên cứu khác về khả năng kháng vi sinh vật kiểm định của nhóm tác giả Haraguchi Hiroyuki (Trường Đại học Fukuyama, Fukuyama, Nhật Bản) đối với hợp chất rotundic acid (17) (một thành phần có trong loài G obliquum [12]) cho thấy rotundic acid thể hiện mạnh... và hoạt tính sinh học loài Glochidion obliquum Trên thế giới, chưa có công bố nghiên cứu nào về loài Glochidion obliquum Decne Ở Việt Nam, năm 2012, tác giả Lê Thị Mai Hoa nghiên cứu thành phần hoá học từ cây bọt ếch (Glochidion obliquum) ở Việt Nam Dịch chiết được cất thu hồi dung môi, sau đó chiết lần lượt với hexan, clorofom, butanol và bằng các phương pháp sắc ký cột phân lập được 12 hợp chất trong... còn thể hiện các hoạt tính như chống đau nhức [17], chống viêm [13], [31], [34], kháng nấm [18],… Năm 1999, nhóm tác giả Jahromi, M A (khoa hóa dược, đại học Banaras Hindu, Ấn Độ) đã công bố nghiên cứu về hợp chất pedunculoside ( 9) (một thành phần có trong cây G obliquum [12]) thể hiện mạnh hoạt tính giảm cholesterol-huyết khi được thử nghiệm làm thuốc uống cho chuột bạch nhiễm mỡ cao [20] Trong thử... nóng chảy 164 - 165oC; = +73o (c = 1,0, CHCl3); CTPT C30H46O (M = 422); 1 H-NMR (CDCl3, 500 MHz) và 13C-NMR (CDCl3,125 MHz): xem bảng 10 3.3 Phân lập các hợp chất từ cây Glochidion obliquum Decne Để có thể thu được các hợp chất từ cây sóc xéo, đầu tiên áp dụng phương pháp chiết lỏng/rắn Sử dụng dung môi chiết có độ phân cực trung bình là metanol với mục đích khảo sát cả các hợp chất có độ phân cực ít... luôn được kiểm tra bằng TLC Đối với phần dịch hexane, sau khi kiểm tra TLC thấy rằng hầu hết là các dầu béo và một phần lớn có Rf thấp hơn lại trùng với dịch dichloromethane nên không tiến hành nghiên cứu Cũng tương tự như vậy, phần dịch nước sau khi kiểm tra bằng TLC cho kết quả là đa số các hợp chất trùng với phần dịch ethyl acetat Ngoài ra trên bản TLC dịch nước, phần các hợp chất có độ phân cực cao... tách được, do vậy cũng không được lựa chọn để nghiên cứu tiếp Chính vì vậy, việc phân lập các chất chỉ tập trung vào phần dịch dichloromethane và ethyl acetat Kết quả nghiên cứu đã phân lập được 06 hợp chất, điều này một lần nữa khẳng định việc định hướng lựa chọn các dung môi và chất hấp phụ trong quá trình phân lập là khá tốt 26 3.4 Xác định cấu trúc hóa học của các hợp chất 3.4.1 Hợp chất G1: 5β ,6β ... 3 -[ (O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)O-β-D-glucopyranosyl)oxy ]-1 6β-benzoyloxy-olean12-ene-21β,23,28-triol 15 puberoside A / 3 -[ (O-β-D-glucopyranosyl(1→3)-O-α-L-arabinopyranosyl)oxy ]-2 2αbenzoyloxy-olean-12-ene-16α,28-diol 16 puberoside B / 3 -[ (O-β-D-glucopyranosyl-(1→... O-α-L-arabinopyranosyl)oxy ]-1 6β-benzoyloxyolean-12-ene-21β,23,28-triol) 13 glochidioside N / 3 -[ (O-β-D-glucopyranosyl)oxy]16β-benzoyloxy-olean-12-ene-21β,23,28-triol 14 glochidioside Q / 3 -[ (O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)O-β-D-glucopyranosyl)oxy ]-1 6β-benzoyloxy-olean12-ene-21β,23,28-triol... lup-20(29)-ene lup-20(29)-ene-1α,23-diol epi-lupeol Glochidonol Glochidiol lup-20(29)-ene-1β,3β-diol Glochidone lup-20(29)-ene-3α,23-diol Triterpene khung oleane-12-ene 3β,19α,23α-trihydroxy-12-oleanen-28-oic