Nghiên cứu thành phần loài và ảnh hưởng của một số yếu tố môi trường lên sự biến thái của ký sinh trùng perkinsus ký sinh trên một số loài động vật thân mềm hai mảnh vỏ ở việt nam

Nghiên cứu sự biến thái kí sinh trùng Perkinsus trong điều kiện tượng tự tự nhiên cho thấy bào tử nghỉ kí sinh trùng Perkinsus có thể chịu được điều kiện khắc nghiệt của môi trường tron

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG

NGUYỄN THỊ BẢO VÂN

NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM LOÀI VÀ PHƯƠNG THỨC

LÂY NHIỄM KST Perkinsus spp KÝ SINH TRÊN NHUYỄN

THỂ TẠI VIỆT NAM

iii

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của chính bản thân tôi thực hiện, được sự hướng dẫn của giáo viên hướng dẫn – Tiến sĩ Phạm Quốc Hùng Các số liệu được chú thích, trích dẫn rõ ràng Các số liệu trong luận văn là trung thực và lấy từ

một phần trong đề tài “Nghiên cứu đặc điểm loài và phương thức lây nhiễm của

KST Perkinsus spp ký sinh trên nhuyễn thể tại Việt Nam” của TS Phạm Quốc

Hùng

Học viên thực hiện

Nguyễn Thị Bảo Vân

iv

LỜI CẢM ƠN

Trong quá trình thực hiện và hoàn thành luận văn tốt nghiệp, ngoài sự nỗ lực của bản thân, đã nhận được rất nhiều sự giúp đỡ của các tổ chức và cá nhân Nhân đây tôi xin chân thành cảm ơn sự giúp đỡ quý báu đó

Trước tiên, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn đến TS Phạm Quốc Hùng - Viện Nuôi trồng thủy sản – Trường Đại học Nha Trang đã định hướng và chỉ bảo tận tình cho tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài này

Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến cô Hứa Thị Ngọc Dung – người trực tiếp giúp đỡ tận tình, quan tâm tôi trong suốt thời gian làm đề tài để tôi hoàn thành luận văn tốt nghiệp

Qua đây, tôi xin chân thành cảm ơn cô Đặng thị Đoan Trang, cô Nguyễn Thị Thùy Giang, thầy Lê Thành Cường và tập thể lãnh đạo, các cán bộ, chuyên viên của Viện Nuôi trồng thủy sản đã giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện đề tài

Xin cảm ơn Trung tâm thí nghiệm và phòng thực hành Bệnh học thủy sản – Đại học Nha Trang đã tạo điều kiện cơ sở vật chất giúp tôi hoàn thành luận văn tốt nghiệp

Tôi xin chân thành cảm ơn hai em Kiều Thị Ái Vân và Lương Thị Hải Yến lớp Nuôi trồng thủy sản khóa 53 đã giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài

Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn đến bạn bè, các đồng nghiệp và các em ở kí túc xá K5 giúp đỡ tôi trong thời gian thực tập

Cuối cùng tôi xin dành sự biết ơn to lớn đến gia đình, chồng và con gái đã luôn bên cạnh động viên giúp tôi vượt qua khó khăn trong suốt những năm học vừa qua

Nha Trang, tháng 10 năm 2015

Học viên thực hiện

Nguyễn Thị Bảo Vân

v

MỤC LỤC

LỜI CAM ĐOAN iii

LỜI CẢM ƠN iv

MỤC LỤC v

DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vii

DANH MỤC BẢNG viii

DANH MỤC HÌNH ix

TRÍCH YẾU LUẬN VĂN x

MỞ ĐẦU 1

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 4

1.1 Tổng quan về vùng nghiên cứu 4

1.1.1 Vị trí địa lý thủy văn của Bến Tre 4

1.1.2 Vị trí địa lý thủy văn của Vũng Tàu 5

1.1.3 Vị trí địa lý thủy văn của Khánh Hòa 6

1.1.4 Vị trí địa lý thủy văn của Cát Bà (Hải Phòng) 7

1.2.1 Hệ thống phân loại và phân bố 8

1.2.2 Hình thái cấu tạo 10

1.3 Các nghiên cứu về bệnh Perkinsiosis trên nhuyễn thể hai mảnh vỏ 11

1.3.1 Bệnh Perkinsiosis ở động vật nhuyễn thể 11

1.3.2 Những nghiên cứu về bệnh Perkinosis ở nhuyễn thể hai mảnh vỏ 14

CHƯƠNG 2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20

2.1 Địa điểm, thời gian và đối tượng nghiên cứu 20

2.2 Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu 21

2.3 Vật liệu nghiên cứu 21

vi

2.4 Phương pháp nghiên cứu 22

2.4.1 Xác định mức độ cảm nhiễm KST Perkinsus spp trên nghêu Bến Tre, nghêu lụa, tu hài và ngao dầu 22

2.4.2 Nghiên cứu sự biến thái của KST Perkinsus 25

2.4.2.1 Khảo sát sự biến thái KST Perkinsus từ thể dinh dưỡng sang bào tử nghỉ trong điều kiện tương tự tự nhiên 25

2.4.2.2 Khảo sát sự biến thái KST Perkinsus dưới tác động các yếu tố sinh thái 26

2.5 Phương pháp xử lý số liệu 27

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30

3.1 Nghiên cứu hình thái và mức độ cảm nhiễm KST Perkinsus spp trên ngao dầu, tu hài, nghêu lụa và nghêu Bến Tre 30

3.1.1 Hình thái bào tử Perkinsus sp sau khi nuôi cấy trong môi trường FTM 30

3.1.2 Mức độ cảm nhiễm KST Perkinsus trên tu hài, nghêu Bến Tre, ngao dầu và nghêu lụa 32

3.1.3 Nghiên cứu mô bệnh học 35

3.2 Nghiên cứu sự biến thái của KST Perkinsus 38

3.2.1 Khảo sát sự biến thái KST Perkinsus từ thể dinh dưỡng sang bào tử nghỉ trong điều kiện tương tự tự nhiên 38

3.2.2 Khảo sát sự biến thái KST Perkinsus dưới tác động các yếu tố sinh thái 39

Chương 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 46

4.1 Kết luận 46

4.2 Kiến nghị 46

PHỤ LỤC

vii

DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT

CĐCN Cường độ cảm nhiễm

ĐBSCL Đồng bằng sông Cửu Long

FAO Tổ chức Lương thực và Nông nghiệp Liên Hợp Quốc (Food and

Agriculture Oraganization of the United Nations) FTM Fluid Thioglycolate Medium

OIE Office International des Epizooties

PBS Phosphate Buffered Saline

PCR Polymerase Chain Reaction (Phản ứng khuếch đại gen)

TLCN Tỷ lệ cảm nhiễm

sp Loài chưa xác định được tên

ssp Nhiều loài chưa xác định được tên

viii

DANH MỤC BẢNG

Bảng 2.1: Các hóa chất môi trường sử dụng 22

Bảng 2.2: Các đối tượng nghiên cứu 24

Bảng 2.3: Cơ quan nghiên cứu của các đối tượng 24

Bảng 2.4: Thanh đánh giá mức độ nhiễm Perkinsus 28

Bảng 3.1: Đường kính bào tử Perkinsus trên vật chủ (400x) 31

Bảng 3.2: Thời gian thu mẫu các đối tượng thí nghiệm 32

Bảng 3.3: Một số chỉ tiêu sinh học và mức độ nhiễm Perkinsus 32

Bảng 3.4: Ngày xuất hiện bào tử nghỉ dưới ảnh hưởng của nhiệt độ 40

Bảng 3.5: Ngày xuất hiện bào tử nghỉ dưới ảnh hưởng của độ mặn 42

Bảng 3.6: Ngày xuất hiện bào tử nghỉ dưới ảnh hưởng của pH 44

ix

DANH MỤC HÌNH

Hình 1.1: Kí sinh trùng Perkinsus (40x) 11

Hình 1.2: Vòng đời của kí sinh trùng Perkinsus olseni trên nghêu T decussatus .12

Hình 1.3: Bản đồ phân bố các loài Perkinsus 13

Hình 1.4: Bào tử nghỉ KST Perkinsus (40x) 17

Hình 2.1: Địa điểm thu mẫu 20

Hình 2.2: Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu ……… 21

Hình 2.3: Quá trình xử lý mẫu 23

Hình 3.1: Bào tử nghỉ KST Perkinsus sp (40x) 30

Hình 3.2: Biểu hiện mô bệnh học trên cơ quan mang (400x) 36

Hình 3.3: Biểu hiện mô bệnh học ở cơ quan tiêu hóa (400x) 37

Hình 3.4: Biểu hiện mô bệnh học ở cơ chân bò (400x) 38

x

TRÍCH YẾU LUẬN VĂN

Nhuyễn thể hai mảnh vỏ là một trong những loài đóng một vài trò rất quan trọng trong nền kinh tế Việt Nam Tuy nhiên, nghề nuôi nhuyễn thể cũng đang gặp rất nhiều khó khăn về dịch bệnh, ô nhiễm môi trường, con giống, thị trường tiêu thụ Từ đầu năm 2003 cho đến nay, Việt Nam ghi nhận hiện tượng nhiều loài động vật hai mảnh

vỏ nuôi trong các mô hình bị chết liên tục trên phạm vi cả nước, gây thiệt hại nghiệm

trọng cho kinh tế, xã hội và môi trường của quốc gia Kí sinh trùng đơn bào Perkinsus

được ghi nhận gây thiệt hại nghiêm trọng nhất như gây ra tỷ lệ chết cao và thường xuyên cho các loài nhuyễn thể (hào, điệp, bào ngư, nghêu, vẹm, trai ngọc và sò huyết) nước mặn có giá trị ở tất cả các châu lục Hiện nay trên thế giới đã có 10 loài

Perkinsus công bố

Mẫu nghiên cứu được thực hiện trên một số loài nhuyễn thể: Ngao dầu, tu hài, nghêu lụa và nghêu Bến Tre thu tại tỉnh Hải Phòng, Khánh Hòa, Vũng Tàu và Bến Tre Nghiên cứu thực hiện theo nghiên cứu mô học của Howard et al (2004) và phương pháp định lượng của Ray (1992) được điều chỉnh theo Choi và ctv (1989) để xác định các yếu tố về mức độ cảm nhiễm, nhiệt độ, độ mặn, pH

Bào tử kí sinh trùng Perkinsus được nuôi cấy trong môi trường FTM có dạng

hình cầu, oval với lớp vỏ dầy đặc trưng, đường kính trung bình 72,96 ± 1,388 µm Bằng phương pháp nghiên cứu mô học và nuôi cấy trong môi trường FTM, mang là cơ quan đầu tiên mà kí sinh trùng xâm nhập Mức độ cảm nhiễm trên nghêu lụa là cao nhất, tiếp đó là nghêu Bến Tre, trên tu hài chỉ phát hiện kí sinh trùng trên mang, trên

cơ thịt không phát hiện và ngao dầu không phát hiện kí sinh trùng

Nghiên cứu sự biến thái kí sinh trùng Perkinsus trong điều kiện tượng tự tự nhiên cho thấy bào tử nghỉ kí sinh trùng Perkinsus có thể chịu được điều kiện khắc nghiệt

của môi trường trong một thời gian trong điều kiện thí nghiệm Nghiên cứu sự biến

thái kí sinh trùng Perkinsus trong điều kiện sinh thái thấy rằng khoảng nhiệt độ tối ưu

30 – 350C, khoảng độ mặn 15 - 30‰, pH 7,0

Vậy bào tử kí sinh trùng Perkinsus được nuôi cấy trong môi trường FTM có dạng

hình cầu, oval với lớp vỏ dầy đặc trưng, đường kính trung bình 72,96 ± 1,388 µm

xi

Mức độ cảm nhiễm trên nghêu lụa là cao nhất và trong điều kiện thuận lợi tối ưu cho quá trình biến thái: nhiệt độ 30 – 350C, độ mặn 15 - 25‰, pH 7,0

Từ khóa: Kí sinh trùng Perkinsus sp, nhuyễn thể hai mảnh vỏ

(Ký và ghi rỗ họ tên) (Ký và ghi rỗ họ tên)

MỞ ĐẦU

Cùng với các đối tượng thủy sản chính của nước ta như tôm và cá da trơn, nhuyễn thể hai mảnh vỏ đóng một vài trò rất quan trọng trong nền kinh tế quốc dân So với năm 1998, sản lượng nhuyễn thể hai mảnh vỏ nuôi của Việt Nam đã tăng 95 lần đạt mức trên 180 triệu tấn năm 2010 và đứng thứ tám trong 10 nước dẫn đầu thế giới

về sản lượng nhuyễn thể [1] Nhiều đối tượng chủ lực như nghêu, hàu, trai ngọc, sò huyết, ốc hương, bào ngư, vẹm, tu hài đã và đang được nuôi rất phổ biến dưới nhiều hình thức nuôi tại các địa phương trong cả nước

Tuy nhiên, nghề nuôi nhuyễn thể cũng đang gặp rất nhiều khó khăn về dịch bệnh, ô nhiễm môi trường, con giống, thị trường tiêu thụ Đặc biệt, con giống được coi

là yếu tố quan trọng đối với nghề nuôi nhưng phần lớn giống nhuyễn thể 2 mảnh vỏ là nhập từ Trung Quốc nên khó kiểm soát chất lượng; trong khi, sản xuất giống trong nước chưa kiểm soát tốt đã ảnh hưởng không nhỏ đến sự phát triển của nghề nuôi…Từ đầu năm 2003 cho đến nay, Việt Nam ghi nhận hiện tượng nhiều loài động vật hai mảnh vỏ nuôi trong các mô hình bị chết liên tục trên phạm vi cả nước, gây thiệt hại nghiệm trọng cho kinh tế, xã hội và môi trường của quốc gia Theo báo cáo của Sở Nông nghiệp và Phát triển Nông thôn tỉnh Thái Bình gần 5 tấn nghêu chết vào tháng 05/2003 Sau đó nghêu chết cũng được báo cáo tại nhiều tỉnh thuộc khu vực đồng bằng sông Cửu Long như 100% nghêu chết trên 400 ha tại Tiền Giang; 900 ha nuôi nghêu của huyện Bình Đại - Bến Tre bị thiệt hại chết hàng chục tỷ đồng Hiện tượng nghêu chết không rõ nguyên nhân cũng được ghi nhận trên 800 ha nuôi nghêu tại Cần Giờ-Thành phố Hồ Chí Minh cuối năm 2007 [2] Cho đến thời điểm hiện tại, hiện tượng nghêu chết vẫn liên tục xảy ra và lan nhanh tại Hải Phòng, Nam Định, Thái Bình, Thanh Hoá và một số tỉnh ĐBSCL (Tiền Giang, Bến Tre, Bạc Liêu) Nghêu chết ở mọi kích cỡ (chủ yếu là cỡ 50-90 con/kg), tỷ lệ chết 20-80% (nhiều nhất là 50-60%) và thường xảy ra ở các quần thể nghêu ở vùng cao triều và ở mọi kích cỡ

Cho đến nay nguyên nhân chính gây ra dịch bệnh trên nhuyễn thể nuôi của Việt Nam là không được biết Tuy nhiên, các công bố bước đầu của các nhóm nghiên cứu cho thấy có rất nhiều nguyên nhân liên quan đến hiện tượng chết hàng loạt của nghêu,

tu hài ở Hải Phòng, Nam Định, Thái Bình, Thanh Hoá và một số tỉnh ĐBSCL [3] Các tác nhân sinh học như vi khuẩn, virus đã được phân lập với tỷ lệ cao trên các nhóm

động vật hai mảnh vỏ này, đồng thời các nguyên nhân từ môi trường như nắng gay gắt, nhiệt độ và độ mặn cao kéo dài trong nhiều ngày đã khiến các chỉ số COD, NH4 và

H2S đều vượt ngưỡng cho phép; chất rắn lơ lửng cũng cao hơn mức giới hạn (thậm chí

có nơi cao gấp 5-6 lần mức cho phép, khiến nước rất đục đều được nghi ngờ là nguyên nhân gây chết động vật hai mảnh vỏ nuôi [4]

Đặc biệt, một số nghiên cứu cho thấy có sự tồn tại của kí sinh trùng (KST)

Perkinsus trong các loài nhuyễn thể nuôi tại một số địa phương Khảo sát của Thảo (2008) trên đối tượng nghêu lụa (Paphia undulata) tại Hà Tiên-Kiên Giang và Bà Rịa-

Vũng Tàu cho thấy có sự hiện diện của KST có đặc điểm hình thái ở giai đoạn bào tử

nghỉ giống với Perkinsus sp Tại Bến Tre, tình trạng nghêu chết rải rác bắt đầu từ

khoảng giữa tháng 3 với diện tích khoảng 200 ha, nghêu chết có kích cỡ 60 - 65 con/kg chiếm 40%, kích cỡ 200 - 250 con/kg chiếm 60% phát hiện có sự hiện diện của

KST Perkinsus [5] Hiện nay, các kết luận về loài Perkinsus kí sinh trên động vật thủy

sản Việt Nam chủ yếu dựa vào các mô tả hình thái và vật chủ, chính vì vậy mà thông

tin chính xác về đặc điểm di truyền của các loài Perkinsus vẫn chưa được khẳng định

Hệ quả của thực tế này là việc xác định khả năng gây hại, mức độ gây hại của KST này đối với vật chủ là chưa được biết, gây nên những khó khăn trong công tác phòng ngừa và điều trị tác nhân này

Chính vì vây, nghiên cứu xác định thành phần loài, đặc điểm sinh thái, sinh lý,

hình thái và di truyền của mỗi giai đoạn của Perkinsus ở Việt Nam là rất cần thiết Do

đó, chúng tôi đề xuất thực hiện đề tài “Nghiên cứu thành phần loài và ảnh hưởng

của một số yếu tố môi trường lên sự biến thái của kí sinh trùng Perkinsus kí sinh

trên một số loài động vật thân mềm hai mảnh vỏ ở Việt Nam”

Mục tiêu của đề tài

- Mục tiêu chung: Nghiên cứu hình thái và phương thức lây nhiễm của KST

Perkinsus kí sinh trên nhuyễn thể tại Việt Nam

- Mục tiêu cụ thể:

Nghiên cứu về mức độ cảm nhiễm và ảnh hưởng của một số yếu tố môi trường lên quá trình biến thái từ thể dinh dưỡng sang giai đoạn bào tử nghỉ của KST

Perkinsus spp kí sinh trên một số loài nhuyễn thể hai mảnh ỏ ở Việt Nam làm cơ sở

cho những nghiên cứu chuyên sâu hơn

Nội dung nghiên cứu

- Nghiên cứu hình thái và mức độ cảm nhiễm KST Perkinsus spp trên nghêu Bến Tre (Meretrix lyrata), nghêu lụa (Paphia undulata), tu hài (Lutraria rhynchaena) và ngao dầu (Meretrix meretrix)

- Nghiên cứu sự biến thái từ thể dinh dưỡng sang giai đoạn bào tử nghỉ của KST

Perkinsus spp kí sinh trên nhuyễn thể ở những điều kiện môi trường khác nhau

Ý nghĩa thực tiễn và khoa học

Ý nghĩa thực tiễn

- Cung cấp những thông tin ban đầu về đặc điểm hình thái của KST Perkinsus kí

sinh trên một số loài nhuyễn thể ở Việt Nam

Ý nghĩa khoa học

- Cung cấp những số liệu khoa học về mức độ cảm nhiễm và tác hại của KST

Perkinsus spp gây ra trên một số loài nhuyễn thể làm cơ sở đề xuất hướng phòng

tránh bệnh và nghiên cứu ứng dụng khác

- Là cơ sở khoa học vững chắc cho việc đề xuất các giải pháp và điều trị bệnh do

tác nhân Perkinsus gây ra trên động vật nhuyễn thể ở Việt Nam

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan về vùng nghiên cứu

1.1.1 Vị trí địa lý thủy văn của Bến Tre

Bến Tre là một tỉnh thuộc vùng đồng bằng sông Cửu Long, nằm cuối nguồn sông Cửu Long Điểm cực Nam nằm trên vĩ độ 9048’ Bắc, cực Bắc nằm trên vĩ độ 10020’ Bắc, cực Đông nằm trên kinh độ 106048’ Đông và điểm cực Tây nằm trên kinh độ

105057’ Đông Bến Tre tiếp giáp biển Đông với chiều dài đường biển khoảng 65 km

và các tỉnh Tiền Giang, Trà Vinh, Vĩnh Long Địa hình của Bến Tre bằng phẳng, có độ cao trung bình từ 1 – 2 m so với mực nước biển, thấp dần từ tây bắc xuống đông nam,

độ cao chênh lệch khá lớn, tối đa là 3,5 m Khí hậu nhiệt đới gió mùa, mùa mưa kéo dài từ tháng 5 đến tháng 10, các tháng còn lại là mùa khô Nhiệt độ trung bình năm từ

26 – 270C Lượng mưa trung bình năm từ 1.250 – 1.500 mm [6]

Bến Tre nằm ở hạ lưu sông MeKong, giáp với biển Đông, với mạng lưới sông ngòi chằng chịt có tổng chiều dài xấp xỉ 6.000 km, trong đó có sông Cổ Chiên dài 82

km, sông Hàm Luông dài 71 km, sông Ba Lai dài 59 km, sông Mỹ Tho dài 83 km Hệ thống sông ngòi ở Bến Tre rất thuận lợi về giao thông đường thủy, nguồn thủy sản phong phú, nước tưới cho cây trồng ít gặp khó khăn, tuy nhiên cũng gây trở ngại đáng

kể cho giao thông đường bộ, cũng như việc cấp nước vào mùa khô, khi thủy triều biển Đông đưa mặn vào sâu trong kênh rạch vào mùa gió chướng [6]

Hiện nay, toàn tỉnh Bến Tre có 8 hợp tác xã (HTX) nuôi nghêu gồm: Thạnh Lợi, Thạnh Phong, Thanh Bình (Thạnh Phú), Tân Thủy, Bảo Thuận, An Thủy (Ba Tri), Rạng Đông, Đồng Tâm (Bình Đại) Diện tích có khả năng nuôi nghêu toàn tỉnh là 15.000 ha, trong đó diện tích nuôi tính đến năm 2014 là 7.164 ha Diện tích có nghêu

là 3.043 ha, trong đó nghêu giống 482 ha, nghêu thịt 2.561 ha Tổng sản lượng đạt khoảng 4.489 tấn, trong đó nghêu thịt 3.848 tấn, nghêu giống 641 tấn Hiện tượng nghêu chết xảy ra cục bộ một số HTX như Bình Minh, Tân Thủy, Đồng Tâm, Rạng Đông, với tổng thiệt hại khoảng 290 ha Nghêu chết ở vùng cao triều lên tới 60%, vùng trung triều chết với tỷ lệ 20%, vùng thấp triều chưa xảy ra hiện tượng chết Mẫu

nghêu thu được có sự hiện diện của KST đơn bào nội kí sinh Perkinsus sp, Paramophrys sp và Copepod. Vào khoảng tháng 3/2011, người nuôi nghêu tại các huyện Ba Tri, Bình Đại và Thạnh Phú rất lo bởi tình trạng nghêu chết hàng loạt, làm thiệt hại về kinh tế và đời sống Do nhiệt độ và độ mặn tăng cao trong những tháng

mùa khô nên nghêu bị thiếu dinh dưỡng và suy yếu dần, tạo điều kiện cho mầm bệnh

ký sinh trùng Perkinsus sp phát triển gây chết nghêu hàng loạt Nghêu chết hàng loạt

cũng là vấn đề nhức nhối ở huyện Ba Tri, nơi có 100% diện tích nghêu chết vào tháng

Ba và tháng Tư năm 2011 Họ cũng cho rằng nguyên nhân xuất phát từ sự thay đổi hình thái thời tiết, sự gia tăng nhiệt độ bề mặt nước biển và độ mặn Hợp tác xã nghêu

An Thủy ở Ba Tri vẫn đang gặp nhiều khó khăn do thiếu nguồn nghêu giống cho các

vụ nuôi tiếp theo Nghêu chết tập trung ở vùng cao triều là vào thời điểm thủy triều kém, thời gian phơi bãi trong ngày dài kết hợp với nắng nóng và mật độ tăng cao đột ngột Đặc biệt, tỷ lệ nghêu mang trứng và cường độ nhiễm ký sinh trùng Perkinsus sp cao và nghêu vào mùa sinh sản rất nhạy cảm với điều kiện sống biến động xấu.Ký sinh

trùng nội ký sinh Perkinsus sp ưa phát triển và gây hại trong điều kiện nhiệt độ cao, độ

mặn cao đã gây chết nghêu

1.1.2 Vị trí địa lý thủy văn của Vũng Tàu

Bà Rịa – Vũng Tàu thuộc vùng Đông Nam Bộ, nằm trong vùng trọng điểm kinh

tế phía Nam Lãnh thổ của tỉnh gồm 2 phần: đất liền và hải đảo Bà Rịa – Vũng Tàu có địa giới hành chính chung dài 16,33 km với thành phố Hồ Chí Minh ở phía Tây, 116,5

km với Đồng Nai ở phía Bắc, 29,26km với Bình Thuận ở phía Đông, Nam và Tây Nam

là biển Đông Chiều dài bờ biển là 305,4 km với trên 100.000 km2 thềm lục địa [7]

Bà Rịa – Vũng Tàu nằm trong vùng nhiệt đới gió mùa, chịu ảnh hưởng của đại dương Nhiệt độ trung bình khoảng 270C; sự thay đổi nhiệt độ của các tháng trong năm không lớn Số giờ nắng dao động trong khoảng 2.370 – 2.850 giờ và phân phối đều các tháng trong năm Lượng mưa trung bình hàng năm thấp (khoảng 1.600 mm) và phân

bố không đều theo thời gian, tạo thành hai mùa rõ rệt: mùa mưa từ tháng 5 đến tháng

11, chiếm 90% lượng mưa cả năm; và 10% tổng lượng mưa tập trung vào mùa khô là các tháng còn lại trong năm [7]

Diện tích nuôi nhuyễn thể trên địa bàn tỉnh Bà Rịa – Vũng Tàu 427,1 ha tập trung chủ yếu trên sông Chà Và, Dinh, Rạng, Rạch Tranh Trong đó, diện tích nuôi nghêu, sò là 177,6 ha tại cầu Cửa Lấp, cầu Sông Ray; nuôi trai ngọc khoảng 100 ha tại Côn Đảo Từ đầu năm 2015 đến nay, tại huyện Long Điiền diện tích nghêu chết lên đến trên 400 ha, gây thiệt hại rất lớn đến người dân Theo kết quả xét nghiệm mẫu nghêu, mẫu bùn cho thấy, các mẫu nước, bùn và mẫu nghêu có sự hiện diện của vi

khuẩn Vibrio alginolyticus và vi khuẩn Vibrio parahaemolytocus; có 1 mẫu nghêu cho

kết quả dương tính với ký sinh trùng Perkinsus spp, các mẫu còn lại đều âm tính vớiPerkinsus olseni Về kết quả xét nghiệm mẫu nước, kim loại, khí độc cho thấy các

mẫu nước có chỉ tiêu độ đục, COD (nhu cầu ô xy hóa học - Chemical Oxygen Demand) cao hơn ngưỡng cho phép Chỉ tiêu kim loại là sắt vượt ngưỡng từ 0,1 - 0,13mg/l so với ngưỡng cho phép, các chỉ tiêu khác đều bình thường ở trong mức cho phép Các loài vi khuẩn hiện diện trong các mẫu xét nghiệm không phải là nguyên nhân gây ra tình trạng nghêu chết hàng loạt, mà chỉ là tác nhân cộng hưởng với các nguyên nhân khác như: Mật độ nuôi quá dày; chỉ tiêu về độ đục, chỉ tiêu về nhu cầu oxy hóa học và chỉ tiêu kim loại là sắt đều vượt ngưỡng cho phép, từ đó dẫn đến giảm khả năng nguồn thức ăn tự nhiên của nghêu, ảnh hưởng đến khả năng hô hấp của thủy sinh vật nói chung Tổng hợp các yếu tố trên cộng với tình hình thời tiết bất lợi, môi trường biến đổi đột ngột, chênh lệch nhiệt độ giữa ngày và đêm lớn đã làm cho nghêu chết hàng loạt và kéo dài trong thời gian qua

1.1.3 Vị trí địa lý thủy văn của Khánh Hòa

Khánh Hòa là một tỉnh ven biển miền Trung và nằm trong khu vực nhiệt đới gió mùa, trong khoảng 11041’53’’ – 12052’10’’ vĩ độ Bắc và 108040’42’’ – 109030’00’’ kinh Đông Độ dài bờ biển xấp xỉ 200 km Khánh Hòa có khoảng 200 hòn đảo với tổng diện tích khoảng 600 km2 Các vịnh và đầm phá phân bố liên tục và dọc theo đường bờ biển của Khánh Hòa: Vũng Rô – Đại Lãnh, Vũng Bến Gói – Vịnh Vân Phong, Vịnh Bình Cang, Đầm Nha Phu và Đầm Thủy Triều – Vịnh Cam Ranh Hệ thống vịnh góp phần vào đặc trưng về địa mạo, trầm tích cũng như các yếu tố thủy động lực làm cho Khánh Hòa phức tạp, đa dạng và phong phú về nguồn lợi sinh vật [8], [9] Khí hậu Khánh Hòa mang tính gió mùa của Nam Trung Bộ Mùa mưa chính bắt đầu từ tháng 9 đến tháng 11 với lượng mưa đạt từ 250 – 350 mm, từ tháng 5 đến tháng

6 là thời kỳ mưa tiểu mãn (lượng mưa đạt từ 60 – 120 mm) Mùa khô kéo dài từ tháng

3 đến tháng 8 Chế độ gió mùa đã ảnh hưởng lớn đến chế độ dòng chảy ở đây Gió mùa Tây – Nam từ tháng 6 đến thàng 9 và gió mùa Đông Bắc từ tháng 11 đến tháng 3 năm sau [8], [9]

Thành phố Cam Ranh là địa phương có điều kiện thuận lợi để phát triển nghề nuôi tu hài Tu hài nuôi tại thành phố Cam Ranh chỉ mất khoảng 4 – 6 tháng là cho thu hoạch (các địa phương khác mất 8 – 12 tháng mới thu) Tu hài chủ yếu được nuôi tại

các phường Cam Nghĩa và Cam Phúc Bắc Từ năm 2012 đến nay, do môi trường nuôi ngày càng ô nhiễm, thời tiết diễn biến thất thường nên tu hài mới thả nuôi được vài tháng đã chết hàng loạt, gây thiệt hại nặng cho người nuôi Tu hài chết chủ yếu do môi trường ô nhiễm, vi khuẩn Vibrio và vi khuẩn khác có trong nước quá cao, vượt mức cho phép Thời tiết nắng nóng kéo dài kèm theo mưa trái mùa tạo điều kiện cho vi khuẩn phát triển mạnh, gây bệnh làm tu hài chết nhanh, hàng loạt

1.1.4 Vị trí địa lý thủy văn của Cát Bà (Hải Phòng)

Quần đảo Cát Bà cách Hải Phòng 45 km về phía Đông, cách thành phố Hạ Long 25km về phía Nam và cách Hà Nội khoảng 150 km về phía Đông Nam Phía Bắc giáp Vịnh Hạ Long, tỉnh Quảng Ninh, phía Tây giáp đảo Cát Hải, huyện Cát Hải, thành phố Hải Phòng, phía Đông và Nam là biển Đông trong khoảng tọa độ: Vĩ độ Bắc

20042’40’’ – 20052’45’’, kinh độ Đông 106054’11’’ – 107007’05’’ Tọa độ trung tâm

là 20047’42’’ vĩ độ Bắc, 107000’38’’ kinh độ Đông Tổng diện tích đất tự nhiên của khu dự trữ sinh quyển quần đảo Cát Bà là 26.240 ha, trong đó diện tích mặt đất (đảo) 17.040 ha và 9.200 ha mặt nước biển Quần đảo Cát Bà có rừng mưa nhiệt đới trên đảo

đá vôi, rừng ngập mặn, các rặng san hô, thảm rong - có biển, hệ thống hang động, tùng áng, là nơi hội tụ đầy đủ các giá trị bảo tồn đa dạng sinh học, bảo đảm các yêu cầu của khu dự trữ sinh quyển thế giới theo quy định của UNESCO [9]

Quần đảo Cát Bà nằm trong khu vực nhiệt dới gió mùa chịu ảnh hưởng của đại dương nên các chỉ số trung bình về nhiệt độ, độ ẩm, lượng mưa cũng tương đương như các khu vực xung quanh, tuy nhiên có đặc điểm là mùa đông thì ít lạnh hơn và mùa hè thì ít nóng hơn so với đất liền Cụ thể là lượng mưa: 1.700 – 1.800 mm/năm, dao động theo mùa Mùa mưa chủ yếu là tháng 7,8 Nhiệt độ trung bình: 25 – 280C, dao động theo mùa Về mùa hè có thể lên trên 300C, về mùa đông trung bình 15 – 200C nhưng

có thời điểm có thể xuống dưới 100C (khi có gió mùa đông bắc) Độ ẩm trung bình: 85% Dao động của thủy triều: 3,3 – 3,9 m [9]

Tại Hải Phòng, hiện tượng ngao chết xảy ra cả ở ngao giống và ngao thương phẩm, tỷ lệ chết lên tới 70-80%, xảy ra vào cuối tháng 3 và kéo dài trong khoảng một tháng Nguyên nhân của việc ngao chết hàng loạt là do thời tiết nắng nóng gay gắt xuất hiện sớm; vào thời điểm ngao chết, nhiệt độ môi trường có thể lên đến 40oC, độ mặn

33-37‰; chất lượng môi trường kém, chất rắn lơ lửng nhiều; vi khuẩn Vibrio cũng có

thể liên quan đến hiện tượng ngao chết trong thời gian vừa qua

1.2 Một số đặc điểm về các đối tượng nhuyễn thể hai mảnh vỏ nghiên cứu 1.2.1 Hệ thống phân loại và phân bố

Nghêu Bến Tre Meretrix lyrata (Sowerby, 1851)

Loài Meretrix lyrata (Sowerby, 1851)

Tên tiếng Anh: Clam

Tên tiếng Việt: Nghêu Bến Tre

- Phân bố

Vùng phân bố của nghêu ở vùng biển ấm Tây Thái Bình Dương, từ Đài Loan đến Việt Nam Nghêu phân bố ở các vùng cửa sông, vùng eo vịnh, các bãi triều Vùng sóng gió nhẹ, nước chảy lưu thông và có lượng nước ngọt nhất định chảy vào

Độ sâu: Phân bố ở độ sâu từ trung triều thấp đến độ sâu -2m so với số không hải đồ

Ở Việt Nam nghêu phân bố nhiều ở các bãi triều của các tỉnh Cần giờ (tp Hồ Chí Minh), Gò Công Đông (Tiền Giang), Bình Đại, Ba Tri, Thạnh Phú (Bến Tre), Cầu Ngang, Duyên Hải (Trà Vinh), Vĩnh Châu (Sóc trăng), Bạc Liêu, Vĩnh Lợi (Bạc Liêu), Ngọc Hiển (Cà Mau), trong đó ở Bến Tre nhiều nhất nên có tên gọi là Nghêu Bến Tre

Nghêu lụa Paphia undulata (Born, 1778)

Ngành Mollusca

Lớp Bivalvia Phân lớp Heterodonta

Bộ Veneroida

Họ Veneridae Giống Paphia

Loài Paphia undulata (Born, 1778)

- Phân bố

Nghêu lụa sống ở vùng đáy cát bùn ven bờ Khu vực phân bố ở Việt Nam: Hà Tiên, Rạch Giá (Kiên Giang), quanh đảo Bà Lụa (Bình Thuận)

Mùa vụ khai thác từ tháng 12 năm trước đến tháng 6 năm sau

Tu hài Lutraria rhynchaena (Jonas, 1844)

Ngành Mollusca

Lớp Bivalvia Lớp phụ Heterodonta

Bộ Venerida

Họ Mactridae

Giống Lutralia

Loài Lutraria rhynchaena (Jonas, 1844)

Tên tiếng Anh: Clam

Tên tiếng Việt: Tu hài

- Phân bố

Tu hài phân bố ở vùng triều có độ mặn từ 20 - 34‰, nhiệt độ 18 – 330C, chất đáy

là cát, sỏi có pha ít bùn và mảnh động vật thân mềm Tu hài sống vùi trong đáy, lỗ của chúng thường sâu 20 – 50 cm Để tránh kẻ thù ban ngày tu hài thụt ống thoát hút nước vào bên trong vỏ hoặc chỉ thò 1/3 ra ngoài, ban đêm chúng vươn dài ống thoát hút nước để hút lọc thức ăn trong môi trường Ống thoát hút nước tu hài rất nhạy cảm chỉ cần chạm nhẹ hoặc gặp kẻ thù chúng co ống thoát hút nước lại rất nhanh và chui sâu vào lỗ Đây là bản năng tự vệ giúp tu hài tránh được kẻ thù

Ở Việt Nam, tu hài phân bố tập trung ở miền Bắc (Quảng Ninh, Hải Phòng), hầu hết các tỉnh miền Trung từ Thanh Hóa đến Bình Thuận, ở Khánh Hòa tu hài phân bố ở vịnh Vân Phong, Cam Ranh, Nha Trang

Ngao dầu Meretrix meretrix (Linnaeus, 1758)

Ngành Mollusca

Lớp Bivalvia

Lớp phụ Heterdonta

Bộ Venerida

Họ Veneridae

Giống Meretrix

Loài Meretrix meretrix (Linnaeus, 1758)

Tên tiếng Anh: Clam

Tên tiếng Việt: Ngao dầu

1.2.2 Hình thái cấu tạo

Cấu tạo ngoài

Các loài hai mảnh vỏ nghiên cứu có cơ thể dẹp, đối xứng hai bên Vỏ gồm 2 mảnh, che kín 2 bên thân và dính với nhau nhờ bản lề mặt lưng Khác với các loài khác, tu hài khép vỏ trước sau đều không kín

Cấu tạo trong

Màng áo: Nằm tiếp giáp với vỏ, gồm 2 phiến từ lưng kéo dài xuống 2 bên bao bọc lấy nang nội tạng Phần giữa màng áo rất mỏng, xung quanh mép màng áo dày Màng áo của nghêu có 2 điểm kết hợp nên có 3 lỗ hút nước vào ra Tu hài có sự khác biệt, phần cuối màng áo tu hài phát triển tạo thành ống thoát hút nước

Hệ hô hấp: Các loài này hô hấp chủ yếu bằng mang Mang nằm trong xoang mang, gồm các đôi lá mang đối xứng nhau, bao gồm đôi lá mang trong và đôi lá mang ngoài Mỗi mang gồm hai tấm mang, trên mỗi tấm mang có nhiều sợi mang, trên sợi mang có các sợi tiêm mao

Hệ tiêu hóa: Hệ thống tiêu hóa gồm mang, xúc biện, miệng, thực quản, dạ dày, manh mang tiêu hóa, sợi keo, ruột…

Hệ sinh dục: Tuyến sinh dục bao gồm túi sinh dục, ống sinh dục, ống dẫn sản phẩm sinh dục

Một số đặc điểm sinh học khác

Phương thức dinh dưỡng: Phương thức bắt mồi hoàn toàn bị động, bắt mồi theo hình thức lọc thức ăn nhiều lần Thức ăn thay đổi theo giai đoạn phát triển của cơ thể Giai đoạn ấu trùng phù du chúng ăn sinh vật phù du kích thước nhỏ Giai đoạn trưởng thành, chúng ăn sinh vật phù du Cơ quan bắt mồi (mang, xúc biện) không có khả năng lựa chọn chủng loại thức ăn Tất cả các loại mà vừa miệng đều được nuốt hết, do đó trong dạ dày ta thường thấy có nhiều vật không tiêu hóa được

1.3 Các nghiên cứu về bệnh Perkinsiosis trên nhuyễn thể hai mảnh vỏ

Vòng đời

Các loài Perkinsus có vòng đời tương tự nhau vói nhiều giai đoạn Tuy nhiên, tùy

theo loài mà thời gian phát triển vòng đời của chúng khác nhau

Vòng đời của Perkinsus thường trải qua 3 giai đoạn biến thái chính, bao gồm: thể

dinh dưỡng – Trophozoite, bào tử nghỉ - Hypnospore và bào tử động – Zoospore Giai đoạn đầu tiên – Trophozoite xảy ra trong các mô của vật chủ Nó là một tế bào hình cầu với một không bào lệch tâm choáng chỗ phần lớn trong tế bào, và có một vòng tròn nhiều ngoại vi nên được gọi là tế bào nhẫn (signet ring) Thể dinh dưỡng tăng sinh trong mô vật chủ và tiến hành phân chia bên trong tế bào vật chủ Khi thành tế bào bị

vỡ cho phép giải phóng các tế bào con hình cầu hoặc thể dinh dưỡng chưa trưởng thành Những cá thể dinh dưỡng chưa trưởng thành sau đó sẽ dần dần mở rộng, tạo thành một không bào bên trong và trở thành một thể tự dưỡng hoàn chỉnh

Những mô của vật chủ bị nhiễm Perkinsus được ủ trong dung dịch FTM (Fluid

Thioglycolate Medium) thể dinh dưỡng của chúng mở rộng, thành tế bào phát triển dày lên, hình thành một giai đoạn phát triển mới gọi là bào tử nghỉ Khi bào tử nghỉ được sản sinh trong FTM sẽ được phân lập và chuyển vào trong môi trường nước biển,

và quá trình hình thành bào tử động bắt đầu Hàng trăm bào tử động sẽ hình thành và được phóng thích ra môi trường ngoài thông qua hai ống nhỏ Hai ống này sẽ xuất hiện trên mỗi bào tử nghỉ trước khi quá trình phân chia tế bào hình thành bào tử động bên trong diễn ra Bào tử động mới sẽ sử dụng roi để di chuyển vào vật chủ và lặp lại chu

kỳ sống của chúng Vòng đời của Perkinsus được khái quát qua hình 1.2

Hình 1.2: Vòng đời của kí sinh trùng Perkinsus olseni trên nghêu

T decussatus [10]

Giai đoạn nhân bản vô tính (Vegetative multiplication stage) trong mô vật chủ, nơi xảy ra sự nhân lên của hàng trăm thể dinh dưỡng (Schizogony), làm suy giảm sức

đề kháng của tế bào vật chủ, dẫn đến sự hình thành của các u nang và u hạt

Giai đoạn tăng trưởng xảy ra khi vật chủ chết, tạo ra môi trường yếm khí thích hợp cho sự biến đổi từ thể dinh dưỡng sang giai đoạn tiền bào tử động Theo như quan sát, các mô sắp chết cung cấp môi trường ki khí gần tương đồng với những thông số môi trường trong môi trường FTM

Giai đoạn tăng sinh trong nước biển là nơi mà các tiền bào tử động trưởng thành

và tiến hành nguyên phân, dẫn đến sự giải phóng của hàng trăm bào tử động thông qua ống phóng

Giai đoạn lây nhiễm xảy ra khi các bào tử động tự do di chuyển trong nước bằng

2 roi Các con nghêu khỏe có thể bị lây nhiễm trong quá trình lọc thức ăn từ nước biển khi ăn phải các bào tử động này, chúng sẽ biến thành các thể dinh dưỡng và lặp lại chu

Châu Mỹ: Virginia, Maryland (vịnh Chesapeake), Mỹ

Châu Úc: Giải đá ngầm, phía Nam Úc

Hình 1.3: Bản đồ phân bố các loài Perkinsus [11]

Bệnh Perkinosis

Dấu hiệu bệnh lý

Nhuyễn thể hai mảnh vỏ bị bệnh Perkinosis với cường độ nhiễm cao sẽ xuất hiện những nốt sần màu trắng trên mặt của màng áo, mang và chân bò Quan sát tiêu bản

mô ta thấy Perkinsus thường xuất hiện từng đám trên màng áo, mang, mô liên kết

tuyến tiêu hóa, mô liên kết tuyến sinh dục Những đám bào tử này gây tổn thương và xung huyết trên mang sẽ làm giảm hiệu quả lọc thức ăn Kết quả làm giảm sinh trưởng, mở vỏ và chết hàng loạt đối với vật chủ [12], [13]

Điều kiện lây nhiễm

KST lan truyền trực tiếp từ cá thể này sang cá thể khác khi chúng sống trong

nước có mặt Perkinsus Quá trình phân hủy xác chết của động vật thân mềm đã nhiễm Perkinsus phóng thích nhiều KST này Những động vật thân mềm bị nhiễm nhưng còn

sống cũng phóng thích số lượng nhỏ KST này thông qua phân của chúng Tuy nhiên

con đường xâm nhập và các điều kiện môi trường để Perkinsus hình thành các giai

đoạn tiếp theo trong tự nhiên vẫn chưa được biết

Việc tăng sinh của tất cả các giống loài Perkinsus cũng liên quan đến sự ấm lên

của nhiệt độ nước, khi đó sự tăng thêm về dấu hiệu lâm sàng và tỷ lệ chết của vật chủ cao nhất Chính vì vậy, bệnh trên nghêu nói riêng và hai mảnh vỏ nói chung xuất hiện nhiều vào mùa hè, hạn hán hay thời gian phơi bãi triều kéo dài Bên cạnh đó, độ mặn

cũng ảnh hưởng đến cường độ và tỷ lệ nhiễm Perkinsus spp Nhóm KST này kém phát

triển ở nhiệt độ < 200C và độ mặn <15‰ Tỷ lệ mắc bệnh và tỷ lệ tử vong của nhuyễn thể hai mảnh vỏ giảm trong thời kỳ độ mặn thấp, ở các cửa sông ít bị ảnh hưởng nhưng bênh vẫn xuất hiện ở độ mặn 5‰ khi nuôi hàu với mật độ cao [14]

Phương pháp chuẩn đoán bệnh

Bệnh KST Perkinosis có thể được phát hiện dựa vào dấu hiệu bệnh lý, nuôi trong

môi trường Ray (Fluid Thioglycollate Medium – FTM), mô bệnh học, kính hiển vi điện tử, phương pháp sinh học phân tử Polymerase Chain Reaction (PCR)

1.3.2 Những nghiên cứu về bệnh Perkinosis ở nhuyễn thể hai mảnh vỏ

Thế giới

KST đơn bào Perkinsus được ghi nhận gây thiệt hại nghiêm trọng nhất về mặt

kinh tế trên phạm vi toàn cầu KST nội kí sinh này đã được báo cáo gây ra tỷ lệ chết cao và thường xuyên cho nhiều loài nhuyễn thể (hào, điệp, bào ngư, nghêu, vẹm, sò

huyết và trai ngọc) nước mặn có giá trị ở tất cả các châu lục [14] Cho đến nay, 10 loài

Perkinsus khác nhau đã được công bố, tuy nhiên chỉ có 7 loài là có giá trị và được

chấp nhận do sự khác biệt một số đặc điểm chính như: cấu trúc di truyền, độc lực, sự biến đổi vòng đời, phạm vi địa lý phân bố của KST và các dạng vật chủ [15] Do

những nguy cơ nghiêm trọng cho thương mại thủy sản toàn cầu, Perkinsus marinus và

P olseni là hai tác nhân đã được tổ chức Thú y Thế giới đưa vào danh mục các bệnh

bắt buộc phải công bố và kiểm dịch trên nhuyễn thể xuất [16]

Perkinsus olseni (=Perkinsus atlanticus) là kí sinh gây bệnh trên nhiều loài

nhuyễn thể nhất với hơn 40 loài đã được báo cáo cảm nhiễm tự nhiên và nhân tạo với

tác nhân này So với các loài trong cùng một giống, P.olseni có phân bố địa lý rộng

lớn nhất bao gồm các vịnh thuộc cả châu Âu, Châu Á, Châu Mỹ và Châu Đại Dương [16] Chính vì vậy tác nhân này được cho là đã gây ra sự sụt giảm sản lượng và thiệt hại kinh tế nghiêm trọng cho nền công nghiệp nuôi trồng thủy sản hai mảnh vỏ của nhiều quốc gia trên thế giới Tại Australia, những nốt sần trên cơ làm giảm giá trị

thương mại và gây chết trên diện rộng cho bào ngư môi đen Haliotis ruber, H laevigata và nghêu Tridacna crocea được xác định do sự cảm nhiễm bởi P olseni [17] Tại Hàn Quốc, Park và Choi (2001) cũng cho rằng dịch bệnh do P.olseni là nguyên nhân gây sụt giảm 80% sản lượng nghêu Ruditapes philippinarum trong những

năm 1990 Tác nhân này cũng được phát hiện kí sinh và trong nhiều trường hợp gây nên các dịch bệnh cho nhiều loài nhuyễn thể ở các quốc gia châu Á khác như Nhật Bản, Trung Quốc, Thái Lan và Việt Nam

Blackbourn, Bower và Meyer (1998) đã mô tả loài Perkinsus thứ ba, P qugwadi gây hại chủ yếu cho loài điệp Patinopecten yessoensis phân bố tại vùng British

Columbia-Canada với tỷ lệ gây chết cho điệp dưới 1 tuổi và trên 2 tuổi lần lượt là

100% và 60% Tuy nhiên, các loài điệp khác như Chlamys rublda và C hastata sống cùng khu vực với điệp P.yessoensi lại không cho thấy bị nhiễm KST này ngay cả khi

bị cảm nhiễm nhân tạo Điều này cho thấy tính đặc thù về vật chủ cao của P qugwadi Gần đây hơn, một số loài Perkinsus mới đã được công bố như P chesapeaki/andrewsi

kí sinh và gây chết trên nghêu vỏ mềm Mya arenaria tại vịnh Chesapeake, nghêu Macoma balthica, M.mercenaria [18] P mediterraneus kí sinh trên hào Châu Âu Ostrea edulis tại biển Tây Ban Nha và Địa Trung Hải P beihaiensis kí sinh trên hào

C hongkongensis, C ariakensis, Crassostrea madrasensis và nhiều vật chủ khác tại

các tỉnh ở Nam Trung Quốc và Ấn Độ [14], [19], [20]

Ngay khi Perkinsus được phát hiện từ những năm 1950s, một số biện pháp can

thiệp để giảm thiểu mức độ nhiễm của tác nhân này ở các loài mẫn cảm đã được thực hiện tại nhiều quốc gia, nhưng phần lớn không hiệu quả hay hiệu quả rất ít Theo Villalba & ctv (2004), nguyên nhân của thực trạng này là do thiếu những hiểu biết cơ

bản về vòng đời hay các giai đoạn phát triển của các loài Perkinsus, chính vì vậy mà

thành quả của các nghiên cứu in vitro lên đặc điểm sinh học, tế bào và phân tử của

vòng đời một số loài Perkinsus được bắt đầu từ những năm 1990s đã cung cấp một số

dữ liệu cốt lõi cho các thử nghiệm in vivo về khả năng kiểm soát và điều trị Perkinsus

ở thực tiễn Tuy nhiên cho đến nay các thông tin này chủ yếu tập trung vào P marinus

và P olseni

Các nghiên cứu in vitro của Mackin và Boswell (1956), Perkins (1986) lên vòng

đời của P marinus và P olseni cho thấy chúng thường trải qua 4 giai đoạn biến thái

bao gồm thể dinh dưỡng- trophozoite, bào tử nghỉ- hypnospore, túi bào tử động-

zoosporangium và bào tử động-zoospore [21], [22] Thể dinh dưỡng phát triển và nhân lên về mặt số lượng trong mô tế bào vật chủ để giải phóng ra môi trường các tiền túi bào tử động (pre-zoosporangium) Các pre-zoosporangium sẽ phân chia để tạo thành

và phóng thích các bào tử động bào tử động vào vật chủ và phát triển thành thể dinh dưỡng Tuy nhiên nếu phần mô của vật chủ chứa thể dinh dưỡng được đặt vào môi trường nuôi cấy giàu dinh dưỡng và yếm khí thì các thể dinh dưỡng sẽ phát triển thành bào nang bào tử nghỉ Tuy nhiên, con đường xâm nhập và các điều kiện sinh thái để

Perkinsus hình thành các giai đoạn tiếp theo trong tự nhiên vẫn chưa được biết Ngoài

ra, P qugwadi lại không phát triển giai đoạn bào tử nghỉ trong môi trường nuôi cấy như các loài Perkinsus còn lại, giai đoạn bào tử động của loài này lại được quan sát

bên trong mô tế bào vật chủ và thông tin di truyền của nó cũng khác biệt rất nhiều so

với các loài trong cùng giống Perkinsus

Tùy theo loài mà thời gian phát triển vòng đời của chúng là khác nhau, nhưng

đặc điểm chung cho thấy sự biến thái các giai đoạn của Perkinsus chịu ảnh hưởng bởi

các yếu tố môi trường như nhiệt độ, độ mặn và tình trạng hiếu hay hiếm khí [23], [24],

[25] Đồng thời, một số ít các báo cáo (chủ yếu tập trung cho P marinus và P olseni)

cho thấy độc lực khác nhau của Perkinsus lên vật chủ tùy thuộc vào giai đoạn của Perkinsus được dùng để cảm nhiễm và con đường cảm nhiễm chúng vào vật chủ

Một số thử nghiệm in vitro và in vivo đã được thực hiện để kiểm tra hiệu quả của

liệu pháp sử dụng hóa chất để làm giảm bệnh do Perkinsus [26], [27], [28], [29], [30],

[31], [32] Một số chất như cycloheximide và deferoxamine cho thấy có hiệu quả trong

việc giảm sự cảm nhiễm Perkinsus ở hàu và không có tác hại cho vật chủ mặc dù không thể tiêu diệt hoàn toàn Perkinsus cảm nhiễm Các thử nghiệm với chlorine [25],

[33], [34], N-halamine [11], nước ngọt [10], [25], [32], [35] và màn lọc kết hợp với

chiếu xạ bằng tia UV [36] được chứng minh có thể diệt các tế bào tự do của Perkinsus Liên quan đến các tác động của môi trường đến diễn biến của bệnh do Perkinsus

ở thực địa, các kết quả nghiên cứu dịch tể của bệnh do tác nhân P marinus và P olseni cho thấy có nhiều yếu tố ảnh hưởng đến sự biến động tỷ lệ, cường độ nhiễm và độc lực của Perkinsus trên các loài vật chủ khác nhau bao gồm địa lý phân bố, nhiệt

độ, độ mặn, mức độ ô nhiễm của môi trường hay các tác động từ con người [23], [24], [37] Trong những yếu tố này thì nhiệt độ và độ mặn cho thấy mối tương quan mật thiết nhất khi tỷ lệ chết của vật chủ thường được ghi nhận khi nhiệt độ trên 200C và độ mặn vượt 15‰ [14] Tuy nhiên ở một số quốc gia, vật chủ lại không hoặc rất ít cho

thấy bị ảnh hưởng bởi tác hại của P marinus và P olseni ở cùng phạm vi nhiệt độ và

độ mặn này [12] Thực tế này có lẽ cho thấy sự tồn tại của các chủng khác nhau của 2

loài tác nhân này và xa hơn là các chủng khác nhau của các loài Perkinsus khác

Hình 1.4: Bào tử nghỉ KST Perkinsus (40x)

Việt Nam

Dấu hiệu đầu tiên về Perkinsus được phát hiện vào năm 2003, khi tỉnh Thái Bình

bị chết gần 5 tấn nghêu không rõ nguyên nhân Sau đó, dịch bệnh liên tiếp lan rộng ra nhiều khu nuôi thân mềm trên cả nước như Tiền Giang, Bình Đại – Bến Tre, Cần Giờ - Thành phố Hồ Chí Minh khiến nhân dân thiệt hại nhiều về kinh tế

Những mô tả đầu tiên về Perkinsus tại Việt Nam được nhắc đến trong sách Bệnh

học thủy sản của Tiến sĩ Bùi Quang Tề thuộc Viện nghiên cứu thủy sản I năm 2006 [38] Thảo (2008) đã tiến hành những nghiên cứu ban đầu đánh giá sự hiện diện của

Perkinsus trên nghêu lụa ở Kiên Giang, Vũng Tàu Năm 2007, Perkinsus olseni được phát hiện trên trai tai tượng (Tridacna crocea) của Việt Nam xuất khẩu sang Mỹ để

làm cảnh [39] Nghiên cứu của Hảo và ctv (2011) tiến hành tại các bãi nuôi nghêu

Meretrix lyrata nghiên cứu thương phẩm của huyện Cần Giờ trong thời gian từ tháng

11/2009 đến tháng 10/2010 cũng cho thấy: Trong quần thể nghêu nuôi ở Cần Giờ

Perkinsus spp hiện diện với tỷ lệ 100% ở nhóm nghêu có kích cỡ ≥ 60 mm, 70% ở

nhóm từ 49 – 59 mm và không hiện diện ở nhóm nghêu có kích cỡ < 21 mm Bào tử

Perkinsus spp phân lập được từ mẫu nghêu thu tại vùng biển Cần Giờ có đặc điểm về hình dạng, kích thước tương tự như các loài Perkinsus spp được phát hiện trên một số

đối tượng nhuyễn thể hai mảnh vỏ khác ở các quốc gia trong khu vực Châu Á ngoại

trừ Perkinsus qugwadi [2], [40], [41] Kết quả sự có mặt của KST tương tự Perkinsus spp cũng được ghi nhận trên trai ngọc, hàu Thái Bình Dương, hàu cửa sông và tu hài

[4], [42], [43] Ngày 26/6/2014, Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn đã ban hành Thông tư số 21/2014/TT-BNNPTT hướng dẫn về các loại thiên tai, dịch bệnh được hỗ trợ theo Quyết định 142/2009/QĐ-TTg và Quyết định 49/2012/QĐ-TTg của Thủ

tướng Chính phủ, trong đó có bệnh về Perkinsus với hai trường hợp tác nhân gây bệnh

là Perkinsus marinus và Perkinsus olseni ở nghêu và tu hài Mới đây nhất, theo Chi

cục Nuôi trồng thủy sản tỉnh Bến Tre, tính đến cuối tháng 3/2015, tổng diện tích thiệt hại của các hợp tác xã trên địa bàn huyện Bình Đại, Ba Tri là 1.025 ha, tỷ lệ chết từ 5 –

80%, nghêu chết có kích cỡ từ 50 – 250 con/kg Tỷ lệ nhiễm Perkinsus spp cao ở tất

cả các mẫu lấy tại các hợp tác xã, đặc biệt mẫu ở hợp tác xã Tân Thủy 80%, hơp tác xã Bảo Thuận 100%, hợp tác xã Rạng Đông 100% [5]

Liên quan đến các tác động của môi trường đến diễn biến của bệnh do Perkinsus, theo Chi cục Nuôi trồng thủy sản Bến Tre, KST nội sinh Perkinsus spp ưa phát triển

và gây hại trong điều kiện nhiệt độ, độ mặn cao đã gây chết nghêu Nghêu chết tập trung ở vùng triều cao vao thời điểm thủy triều kém, thời gian phơi bãi trong ngày dài kết hợp với nắng nóng và mật độ tăng cao đột ngột Trong đề tài nghiên cứu của Ngô Thị Ngọc Thủy (2011) về điều tra, nghiên cứu bệnh trên một số nhuyễn thể nuôi ở vùng ven biển Việt Nam cũng đã nhận định nguyên nhân gây chết nghêu hàng loạt vào các tháng mùa khô (cuối tháng 12 đến tháng 4), ở các vùng có nhiệt độ, độ mặn cao ở

các tỉnh phía Nam là loại KST đơn bào nội kí sinh Perkinsus spp Tuy nhiên, ở Việt

Nam chưa có nghiên cứu nào về ảnh hưởng của các yếu tố môi trường đến sự phát

triển của KST Perkinsus

CHƯƠNG 2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Địa điểm, thời gian và đối tượng nghiên cứu

- Đối tượng nghiên cứu: KST Perkinsus spp thu được từ 4 loài động vật 2 mảnh vỏ: nghêu Bến Tre (Meretrix lyrata), nghêu lụa (Paphia undulata), Tu hài (Lutraria rhynchaena), ngao dầu (Meretrix meretrix) đang được nuôi thương phẩm

- Địa điểm: Các thí nghiệm được thực hiện tại Phòng Thí nghiệm Sinh lý Sinh thái, Phòng Kính hiển vi, Phòng Thí nghiệm Bệnh học Thủy sản, thuộc Trung tâm Thí nghiệm Thực hành, Trường Đại học Nha Trang

- Thời gian: tháng 5/2014 – tháng 8/2015

1 Hải Phòng; 2 Khánh Hòa; 3 Vũng Tàu; 4 Bến Tre

Hình 2.1: Địa điểm thu mẫu

2.2 Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu

Hình 2.2: Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu 2.3 Vật liệu nghiên cứu

- Đối tượng nghiên cứu:

KST Perkinsus spp thu được từ 4 loài động vật 2 mảnh vỏ: Nghêu Bến Tre (Meretrix lyrata), nghêu lụa (Paphia undulata), Tu hài (Lutraria rhynchaena), ngao dầu (Meretrix meretrix) đang được nuôi thương phẩm

- Các hóa chất môi trường sử dụng

Nghiên cứu thành phần loài và ảnh hưởng của một số yếu tố môi trường lên sự biến thái của kí sinh trùng

Perkinsus kí sinh trên một số loài động vật thân mềm hai mảnh vỏ ở Việt Nam

Nghiên cứu hình thái và mức độ cảm nhiễm kí sinh

trùng Perkinsus spp trên ngao dầu, tu hài, nghêu lụa

tự nhiên

Khảo sát sự biến thái

KST Perkinsus dưới tác

động các yếu tố sinh thái

Kết luận và đề xuất ý kiến

Nghiên cứu mô bệnh học

Vai trò của nước biển trong

sự hình thành bào

tử nghỉ

Sự có mặt của bào tử nghỉ trong môi trường yếm khí

Sự có mặt bào tử nghỉ trên

mô vật chủ còn sống

Ảnh hưởng của yếu tố nhiệt độ

Ảnh hưởng của yếu tố

độ mặn

Ảnh hưởng của yếu tố

pH

Bảng 2.1: Các hóa chất môi trường sử dụng

1 FTM (Fluid Thioglycollate

Medium) 500g

Himedia Laboratories Pvt.limited - Ấn Độ

Pha môi trường FTM

2 NaCl (Sodium Chloride)

3 NaOH (Natri hydroxyt) 500g Trung Quốc Pha dung dịch

Pha dung dịch PBS

7 Cồn Ethanol tuyệt đối 99,5% Đài Loan

Pha dung dịch Davidson

2.4 Phương pháp nghiên cứu

2.4.1 Xác định mức độ cảm nhiễm KST Perkinsus spp trên nghêu Bến Tre,

nghêu lụa, tu hài và ngao dầu

Thu mẫu đánh giá mức độ cảm nhiễm KST Perkinsus spp

Thu mẫu

Mẫu nhuyễn thể hai mảnh vỏ dùng nghiên cứu mô bệnh học, mức độ cảm nhiễm

Perkinsus sp được thu ngẫu nhiên ở Bến Tre (Nghêu Bến Tre Meretrix lyrata), Khánh Hòa (Tu hài Lutraria rhynchaena), Vũng Tàu (Nghêu lụa Paphia undulata) và Hải Phòng (Ngao dầu Meretrix meretrix) Mẫu còn sống được vận chuyển trong thùng xốp

đóng khí có bổ sung đá khô về phòng thí nghiệm bệnh học trường Đại học Nha Trang

Xử lý mẫu

Trước khi tách vỏ, mẫu nhuyễn thể được đo chiều dài bằng thước kẹp Caliper độ chính xác 0.1 mm Các loài nhuyễn thể này đều có kỹ thuật tách vỏ tương tự nhau Dùng tay trái cầm mẫu vật, đặt lưng mẫu vật vào lòng bàn tay, mặt thuẫn của mẫu vật hướng về phía người mình Tay phải cầm dao giải phẫu, dùng ngón trỏ và ngón giữa của tay trái ấn nhẹ lưỡi dao cắt đứt cơ khép vỏ trước của vỏ trái Sau đó, ta vòng dao sang bên cắt đứt cơ khép vỏ còn lại Kết quả của hai lần cắt ta có thể mở được vỏ của mẫu vật, dùng dao gạt nhẹ để lấy phần cơ thịt bên trong Phần cơ thịt sau khi tách sẽ

được cân

A: Đo chiều dài B: Tách vỏ C: Lấy mang D: Cân

Hình 2.3: Quá trình xử lý mẫu

- Mẫu nhuyễn thể để nghiên cứu mức độ cảm nhiễm Perkinsus bằng phương

pháp mô học và phương pháp định lượng của Ray (1952), Choi và ctv (1989) sẽ được tiến hành thu mẫu ở Bến Tre, Hải Phòng, Vũng Tàu, Khánh Hòa

Bảng 2.2: Các đối tượng nghiên cứu

Stt Đối tượng nghiên cứu Địa điểm thu

mẫu

Thời gian thu mẫu

Số lượng thu mẫu (con)

Meretrix meretrix Hải Phòng 19/01/2015 30

Bảng 2.3: Cơ quan nghiên cứu của các đối tượng

Cơ quan

nghiên cứu

Số lượng mẫu

Mức độ cảm nhiễm

Nghiên cứu mô bệnh học

Mẫu sau khi được cố định bằng dung dịch Davidson trong thời gian 24 – 48 giờ,

sẽ được chuyển sang cồn tuyệt đối để bảo quản mẫu Mẫu được đem đi cắt mô nếu sau

7 ngày ủ mẫu nuôi cấy trong môi trường FTM quan sát thấy bào tử KST Perkinsus

Mẫu sau khi cắt mô sẽ đem quan sát dưới kính hiển vi ghi nhận các biểu hiện thayy đổi

mô học

Mức độ cảm nhiễm

Sau 7 ngày nuôi cấy, bào tử Perkinsus được phân lập bằng cách ly tâm 3000 rpm

trong 5 phút, loại bỏ môi trường FTM Phần thịt nhuyễn thể được phân hủy bằng NaOH 2M ở 600C (trong bể ổn nhiệt Water Bath) Quá trình được thực hiện vài lần cho đến khi phần cơ được tiêu hủy hoàn toàn Dung dịch sau hủy cơ được ly tâm và phần lắng được giữ trong dung dịch PBS Các bào tử (nếu có) sẽ được đo đường kính

và đếm số lượng để tính cường độ cảm nhiễm bằng buồng đếm hồng cầu (Improved Neubauer)

- Mức độ cảm nhiễm của Perkinsus được đánh giá thông qua chỉ số tỷ lệ cảm

nhiễm và cường độ cảm nhiểm

Tỷ lệ cảm nhiễm là phần trăm cá thể vật chủ bị nhiễm Perkinsus/ tổng số cá thể vật

chủ kiểm tra

Cường độ cảm nhiễm được đánh giá ở mức định lượng dựa vào kết quả phân lập

bào tử nghỉ của Perkinsus (số bào tử bào tử nghỉ/ gam mô vật chủ; hoặc số bào tử nghỉ/

1 cá thể vật chủ), ở mức vi thể dựa vào mức độ xâm nhập của Perkinsus được quan sát

từ kết quả mô học theo phương pháp của Thao và Choi (2004)

2.4.2 Nghiên cứu sự biến thái của KST Perkinsus

2.4.2.1 Khảo sát sự biến thái KST Perkinsus từ thể dinh dưỡng sang

bào tử nghỉ trong điều kiện tương tự tự nhiên

- Vai trò của nước biển trong sự hình thành bào tử nghỉ:

Phần mô mềm của 40 cá thể vật chủ sau khi tách khỏi vỏ được cắt nhỏ và trộn

kỹ Phân cơ này được bỏ vào 20 ống nghiệm 15ml với khối lượng cơ trong mỗi ống nghiệm được ghi nhận gồm hai nhóm (nhóm có/không có bổ sung nước biển) gồm 20 ống nghiệm/nhóm Các ống nghiệm được ủ trong bóng tối ở 250C trong 7 ngày trước khi phân tích theo phương pháp của Ray (1952) được điều chỉnh bởi Choi và ctv (1989)

- Sự có mặt của bào tử nghỉ trong môi trường yếm khí:

Thí nghiệm này bố trí 20 cá thể vật chủ còn sống Mỗi cá thể vật chủ được quấn chặt 2 vỏ lại với nhau bằng giấy paraffine, được đặt vào cốc thủy tinh đóng kín và giữ trong bóng tối 7 ngày trước khi đem đi phân tích sự có mặt của bào tử nghỉ

- Sự có mặt bào tử nghỉ trên mô vật chủ còn sống:

Tiến hành phân lặp bào tử nghỉ trực tiếp bằng cách lấy cơ thể 20 cá thể vật chủ đi hủy cơ bằng NaOH 2M Bào tử nghỉ được nhuộm bằng Lugol đánh giá khả năng còn sống của bào tử nghỉ ki sinh trùng

2.4.2.2 Khảo sát sự biến thái KST Perkinsus dưới tác động các yếu tố

sinh thái

- Thí nghiệm về ảnh hưởng của yếu tố nhiệt độ

Bốn nghiệm thức ảnh hưởng của nhiệt độ (20, 30, 35, 400C) lên thời gian biến thái (1, 2, 4, 7 và 14 ngày) của giai đoạn thể dinh dưỡng thành bào tử nghỉ được tiến hành Mỗi nghiệm thức được lặp lại 3 lần, mô mang của các cá thể nghêu Bến Tre được thu, cân và đặt vào các ống nghiệm 15ml (mang của 10 cá thể nghêu/1 ống nghiệm) được đánh số thứ tự chứa môi trường FTM có bổ sung kháng sinh Mẫu được

ủ ở các mức nhiệt độ 20, 30, 35, 400C trong bóng tối và lần lượt được mang đi hủy cơ kiểm tra sự hình thành bào tử nghỉ sau 1, 2, 4, 7 và 14 ngày ủ Thí nghiệm tiến hành cho tới khi quan sát thấy bào tử nghỉ xuất hiện thì ngừng

- Thí nghiệm về ảnh hưởng của yếu tố độ mặn

Tám nghiệm thức ảnh hưởng của độ mặn (0, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30‰) lên thời gian biến thái (1, 2, 4, 7 và 14 ngày) của giai đoạn thể dinh dưỡng thành bào tử nghỉ được tiến hành Mỗi nghiệm thức được lặp lại 3 lần, tiến hành như thí nghiệm về nhiệt

độ Mẫu được ủ ở các mức độ mặn (0, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30‰) trong bóng tối và lần lượt được mang đi hủy cơ kiểm tra sự hình thành bào tử nghỉ sau 1, 2, 4, 7 và 14 ngày

ủ Thí nghiệm tiến hành cho tới khi quan sát thấy bào tử nghỉ xuất hiện thì ngừng

- Thí nghiệm về ảnh hưởng của yếu tố pH

Năm nghiệm thức ảnh hưởng của pH (6, 6,5 , 7, 7,5 , 8) lên thời gian biến thái (1,

2, 4, 7 và 14 ngày) của giai đoạn thể dinh dưỡng thành bào tử nghỉ được tiến hành

Mỗi nghiệm thức được lặp lại 3 lần, tiến hành như thí nghiệm về nhiệt độ Mẫu được ủ

ở các mức của pH (6, 6,5 , 7, 7,5 , 8) trong bóng tối và lần lượt được mang đi hủy cơ kiểm tra sự hình thành bào tử nghỉ sau 1, 2, 4, 7 và 14 ngày ủ Thí nghiệm tiến hành cho tới khi quan sát thấy bào tử nghỉ xuất hiện thì ngừng

2.5 Phương pháp xử lý số liệu

Tỷ lệ cảm nhiễm

Tỷ lệ cảm nhiễm (TLN) là số phần trăm cá thể vật chủ bị nhiễm Perkinsus so với

tổng số cá thể vật chủ kiểm tra, xác định theo công thức:

Cường độ cảm nhiễm

Cường độ cảm nhiễm (CĐCN) Perkinsus là số lượng tế bào nghỉ / gam mô vật chủ

sử dụng để nuôi cấy xác định bằng công thức:

Trong đó:

N: Số lượng bào tử nghỉ Perkinsus/ml xác định bằng buồng đếm hồng cầu

V: Thể tích mẫu (ml)

P: Khối lượng mô dùng nuôi cấy bào tử (g)

Ngoài ra, sử dụng công thức Mackin (1966) để đánh giá mức độ cảm nhiễm

Bảng 2.4: Thanh đánh giá mức độ nhiễm Perkinsus

Công thức tính số lượng bào tử Perkinsus/ml

Xác định số lượng bào tử nghỉ có trong mẫu bằng cách sử dụng phương pháp đế

trực tiếp bằng buồng đếm hồng cầu Số lượng bào tử nghỉ Perkinsus được xác định bởi

Số liệu sau khi thu thập được phân tích bằng phép phân tích phương sai một yếu tố (ANOVA) trên phần mềm SPSS 16.0 Khi có sự khác biệt giữa các giá trị trung bình về

thời gian biến đổi các giai đoạn của Perkinsus hay kích cỡ bào tử của các nghiệm thức,

phép kiểm định Duncan’s Test được sử dụng để xác định sự khác biệt có ý nghĩa thống

kê với mức ý nghĩa P < 0,05 (Zar, 1999)

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

3.1 Nghiên cứu hình thái và mức độ cảm nhiễm KST Perkinsus spp trên

ngao dầu, tu hài, nghêu lụa và nghêu Bến Tre

3.1.1 Hình thái bào tử Perkinsus sp sau khi nuôi cấy trong môi trường FTM

Bào tử Perkinsus sp phân lập từ mẫu Tu hài (Lutraria rhynchaena), nghêu Bến Tre (Meretrix lyrata), ngao dầu (Meretrix meretrix), nghêu lụa (Paphia undulata) sau

7 ngày nuôi cấy trong môi trường FTM có dạng hình tròn, oval với lớp vỏ dầy đặc

trưng cho giống Perkinsus Đường kính bào tử nghỉ thay đổi từ 30 – 160 µm, trung

Vỏ cellulose dầy Thể dinh

dưỡng