Nghiên cứu thành phần loài và ảnh hưởng của một số yếu tố môi trường lên sự biến thái của ký sinh trùng perkinsus ký sinh trên một số loài động vật thân mềm hai mảnh vỏ ở việt nam

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG NGUYỄN THỊ BẢO VÂN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM LOÀI VÀ PHƯƠNG THỨC LÂY NHIỄM KST Perkinsus spp KÝ SINH TRÊN NHUYỄN THỂ TẠI VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ Ngành: Nuôi trồng thủy sản Mã số: 60620301 Quyết định giao đề tài: 989/QĐ-ĐHNT ngày 07/10/2014 Quyết định thành lập HĐ: 1044/QĐ-ĐHNT ngày 10/11/2015 Ngày bảo vệ: 27/11/2015 Người hướng dẫn khoa học: TS PHẠM QUỐC HÙNG Chủ tịch Hội đồng: PGS.TS LẠI VĂN HÙNG Khoa sau đại học: KHÁNH HỊA - 2015 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu thân thực hiện, hướng dẫn giáo viên hướng dẫn – Tiến sĩ Phạm Quốc Hùng Các số liệu thích, trích dẫn rõ ràng Các số liệu luận văn trung thực lấy từ phần đề tài “Nghiên cứu đặc điểm loài phương thức lây nhiễm KST Perkinsus spp ký sinh nhuyễn thể Việt Nam” TS Phạm Quốc Hùng Học viên thực Nguyễn Thị Bảo Vân iii LỜI CẢM ƠN Trong trình thực hoàn thành luận văn tốt nghiệp, nỗ lực thân, nhận nhiều giúp đỡ tổ chức cá nhân Nhân xin chân thành cảm ơn giúp đỡ quý báu Trước tiên, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn đến TS Phạm Quốc Hùng - Viện Nuôi trồng thủy sản – Trường Đại học Nha Trang định hướng bảo tận tình cho tơi suốt q trình thực đề tài Tơi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến cô Hứa Thị Ngọc Dung – người trực tiếp giúp đỡ tận tình, quan tâm suốt thời gian làm đề tài để tơi hồn thành luận văn tốt nghiệp Qua đây, tơi xin chân thành cảm ơn cô Đặng thị Đoan Trang, cô Nguyễn Thị Thùy Giang, thầy Lê Thành Cường tập thể lãnh đạo, cán bộ, chuyên viên Viện Nuôi trồng thủy sản giúp đỡ trình thực đề tài Xin cảm ơn Trung tâm thí nghiệm phịng thực hành Bệnh học thủy sản – Đại học Nha Trang tạo điều kiện sở vật chất giúp tơi hồn thành luận văn tốt nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn hai em Kiều Thị Ái Vân Lương Thị Hải Yến lớp Ni trồng thủy sản khóa 53 giúp đỡ tơi suốt q trình thực đề tài Tơi xin gửi lời cảm ơn đến bạn bè, đồng nghiệp em kí túc xá K5 giúp đỡ thời gian thực tập Cuối xin dành biết ơn to lớn đến gia đình, chồng gái bên cạnh động viên giúp tơi vượt qua khó khăn suốt năm học vừa qua Nha Trang, tháng 10 năm 2015 Học viên thực Nguyễn Thị Bảo Vân iv MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN .iii LỜI CẢM ƠN iv MỤC LỤC v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vii DANH MỤC BẢNG viii DANH MỤC HÌNH ix TRÍCH YẾU LUẬN VĂN x MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan vùng nghiên cứu 1.1.1 Vị trí địa lý thủy văn Bến Tre 1.1.2 Vị trí địa lý thủy văn Vũng Tàu .5 1.1.3 Vị trí địa lý thủy văn Khánh Hòa .6 1.1.4 Vị trí địa lý thủy văn Cát Bà (Hải Phòng) 1.2.1 Hệ thống phân loại phân bố .8 1.2.2 Hình thái cấu tạo 10 1.3 Các nghiên cứu bệnh Perkinsiosis nhuyễn thể hai mảnh vỏ 11 1.3.1 Bệnh Perkinsiosis động vật nhuyễn thể 11 1.3.2 Những nghiên cứu bệnh Perkinosis nhuyễn thể hai mảnh vỏ 14 CHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Địa điểm, thời gian đối tượng nghiên cứu 20 2.2 Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu 21 2.3 Vật liệu nghiên cứu 21 v 2.4 Phương pháp nghiên cứu .22 2.4.1 Xác định mức độ cảm nhiễm KST Perkinsus spp nghêu Bến Tre, nghêu lụa, tu hài ngao dầu 22 2.4.2 Nghiên cứu biến thái KST Perkinsus 25 2.4.2.1 Khảo sát biến thái KST Perkinsus từ thể dinh dưỡng sang bào tử nghỉ điều kiện tương tự tự nhiên 25 2.4.2.2 Khảo sát biến thái KST Perkinsus tác động yếu tố sinh thái 26 2.5 Phương pháp xử lý số liệu 27 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .30 3.1 Nghiên cứu hình thái mức độ cảm nhiễm KST Perkinsus spp ngao dầu, tu hài, nghêu lụa nghêu Bến Tre 30 3.1.1 Hình thái bào tử Perkinsus sp sau nuôi cấy môi trường FTM 30 3.1.2 Mức độ cảm nhiễm KST Perkinsus tu hài, nghêu Bến Tre, ngao dầu nghêu lụa 32 3.1.3 Nghiên cứu mô bệnh học 35 3.2 Nghiên cứu biến thái KST Perkinsus .38 3.2.1 Khảo sát biến thái KST Perkinsus từ thể dinh dưỡng sang bào tử nghỉ điều kiện tương tự tự nhiên 38 3.2.2 Khảo sát biến thái KST Perkinsus tác động yếu tố sinh thái 39 Chương 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 46 4.1 Kết luận 46 4.2 Kiến nghị .46 PHỤ LỤC vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT CĐCN Cường độ cảm nhiễm ctv Cộng tác viên ĐBSCL Đồng sông Cửu Long FAO Tổ chức Lương thực Nông nghiệp Liên Hợp Quốc (Food and Agriculture Oraganization of the United Nations) FTM Fluid Thioglycolate Medium KST Kí sinh trùng OIE Office International des Epizooties PBS Phosphate Buffered Saline PCR Polymerase Chain Reaction (Phản ứng khuếch đại gen) TLCN Tỷ lệ cảm nhiễm TLN Tỷ lệ nhiễm sp Loài chưa xác định tên ssp Nhiều loài chưa xác định tên vii DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1: Các hóa chất mơi trường sử dụng 22 Bảng 2.2: Các đối tượng nghiên cứu 24 Bảng 2.3: Cơ quan nghiên cứu đối tượng 24 Bảng 2.4: Thanh đánh giá mức độ nhiễm Perkinsus 28 Bảng 3.1: Đường kính bào tử Perkinsus vật chủ (400x) .31 Bảng 3.2: Thời gian thu mẫu đối tượng thí nghiệm .32 Bảng 3.3: Một số tiêu sinh học mức độ nhiễm Perkinsus 32 Bảng 3.4: Ngày xuất bào tử nghỉ ảnh hưởng nhiệt độ 40 Bảng 3.5: Ngày xuất bào tử nghỉ ảnh hưởng độ mặn 42 Bảng 3.6: Ngày xuất bào tử nghỉ ảnh hưởng pH 44 viii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Kí sinh trùng Perkinsus (40x) .11 Hình 1.2: Vịng đời kí sinh trùng Perkinsus olseni nghêu T decussatus 12 Hình 1.3: Bản đồ phân bố lồi Perkinsus .13 Hình 1.4: Bào tử nghỉ KST Perkinsus (40x) 17 Hình 2.1: Địa điểm thu mẫu 20 Hình 2.2: Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu …………………………………… 21 Hình 2.3: Quá trình xử lý mẫu 23 Hình 3.1: Bào tử nghỉ KST Perkinsus sp (40x) 30 Hình 3.2: Biểu mơ bệnh học quan mang (400x) .36 Hình 3.3: Biểu mơ bệnh học quan tiêu hóa (400x) .37 Hình 3.4: Biểu mơ bệnh học chân bị (400x) 38 ix TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Nhuyễn thể hai mảnh vỏ loài đóng vài trị quan trọng kinh tế Việt Nam Tuy nhiên, nghề nuôi nhuyễn thể gặp nhiều khó khăn dịch bệnh, nhiễm môi trường, giống, thị trường tiêu thụ Từ đầu năm 2003 nay, Việt Nam ghi nhận tượng nhiều lồi động vật hai mảnh vỏ ni mơ hình bị chết liên tục phạm vi nước, gây thiệt hại nghiệm trọng cho kinh tế, xã hội mơi trường quốc gia Kí sinh trùng đơn bào Perkinsus ghi nhận gây thiệt hại nghiêm trọng gây tỷ lệ chết cao thường xuyên cho loài nhuyễn thể (hào, điệp, bào ngư, nghêu, vẹm, trai ngọc sò huyết) nước mặn có giá trị tất châu lục Hiện giới có 10 lồi Perkinsus công bố Mẫu nghiên cứu thực số loài nhuyễn thể: Ngao dầu, tu hài, nghêu lụa nghêu Bến Tre thu tỉnh Hải Phòng, Khánh Hòa, Vũng Tàu Bến Tre Nghiên cứu thực theo nghiên cứu mô học Howard et al (2004) phương pháp định lượng Ray (1992) điều chỉnh theo Choi ctv (1989) để xác định yếu tố mức độ cảm nhiễm, nhiệt độ, độ mặn, pH Bào tử kí sinh trùng Perkinsus ni cấy mơi trường FTM có dạng hình cầu, oval với lớp vỏ dầy đặc trưng, đường kính trung bình 72,96 ± 1,388 µm Bằng phương pháp nghiên cứu mô học nuôi cấy môi trường FTM, mang quan mà kí sinh trùng xâm nhập Mức độ cảm nhiễm nghêu lụa cao nhất, tiếp nghêu Bến Tre, tu hài phát kí sinh trùng mang, thịt không phát ngao dầu không phát kí sinh trùng Nghiên cứu biến thái kí sinh trùng Perkinsus điều kiện tượng tự tự nhiên cho thấy bào tử nghỉ kí sinh trùng Perkinsus chịu điều kiện khắc nghiệt môi trường thời gian điều kiện thí nghiệm Nghiên cứu biến thái kí sinh trùng Perkinsus điều kiện sinh thái thấy khoảng nhiệt độ tối ưu 30 – 350C, khoảng độ mặn 15 - 30‰, pH 7,0 Vậy bào tử kí sinh trùng Perkinsus ni cấy mơi trường FTM có dạng hình cầu, oval với lớp vỏ dầy đặc trưng, đường kính trung bình 72,96 ± 1,388 µm x Mức độ cảm nhiễm nghêu lụa cao điều kiện thuận lợi tối ưu cho trình biến thái: nhiệt độ 30 – 350C, độ mặn 15 - 25‰, pH 7,0 Từ khóa: Kí sinh trùng Perkinsus sp, nhuyễn thể hai mảnh vỏ Khánh Hòa, ngày 16 tháng 12 năm 2015 Học viên (Ký ghi rỗ họ tên) Nguyễn Thị Bảo Vân Chủ tịch hội đồng Người hướng dẫn (Ký ghi rỗ họ tên) (Ký ghi rỗ họ tên) PGS.TS LẠI VĂN HÙNG TS PHẠM QUỐC HÙNG xi Phụ lục C: Các thông số tu hài trình thí nghiệm 3.1 Kích thước khối lượng mẫu đem nuôi cấy STT cá thể 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 L (cm) 6.42 6.20 7.19 5.55 6.00 6.70 6.86 6.14 6.07 6.89 6.56 6.50 6.23 6.89 6.14 5.62 6.77 6.00 5.32 6.23 6.37 6.93 5.94 6.42 6.20 7.19 5.55 6.00 6.70 6.86 P toàn thân (g) 13.9165 12.2537 18.5247 10.7555 12.5922 13.3730 18.0809 10.7042 11.4644 18.4302 14.0528 20.2895 10.0004 11.7084 11.7493 7.7987 13.9872 16.3287 8.1001 9.8207 8.3819 16.1802 11.9553 13.9165 12.2537 18.5247 10.7555 12.5922 13.3730 18.0809 12 P mang (g) 0.2373 0.3973 0.3348 0.6254 0.2318 0.2454 0.3631 0.2350 0.2066 0.3576 0.2751 0.1977 0.2651 0.2750 0.1682 0.1793 0.2363 0.4378 0.1240 0.1750 0.2991 0.2371 0.3365 0.2373 0.3973 0.3348 0.6254 0.2318 0.2454 0.3631 P không mang (g) 10.6052 9.5152 13.2834 7.0546 10.0375 10.5342 12.8945 8.3041 8.3317 13.0165 10.2365 14.2733 8.5982 9.0514 9.1182 5.9326 10.7689 12.0875 5.8698 7.4294 5.9925 13.0067 9.4403 10.6052 9.5152 13.2834 7.0546 10.0375 10.5342 12.8945 3.2 Cường độ cảm nhiễm mang (bào tử/g) Mẫu Số Perkinsus buồng đếm có Neubauer Inproved Perkinsus 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 10 0 0 11 0 0 12 0 0 13 0 0 14 0 0 15 0 0 16 0 0 17 0 0 18 0 19 0 0 20 0 0 21 0 0 22 0 0 23 0 0 13 V mẫu (ml) N bào tử/ml 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1,250 0 0 CĐCN (bào tử/g) 0 0 0 0 0 0 0 0 2,855 0 0 Phụ lục D: Các thơng số ngao dầu q trình thí nghiệm 4.1 Kích thước khối lượng mẫu đem nuôi cấy STT cá thể 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 L (cm) 4.88 4.81 5.23 4.65 5.02 4.63 4.83 4.79 4.82 4.91 4.53 5.24 4.82 4.95 4.71 4.88 4.75 4.84 4.92 4.93 5.13 4.82 4.77 4.99 4.51 5.14 4.71 5.07 4.98 5.34 P toàn thân (g) 4.5530 4.5146 5.1486 3.5422 5.2062 4.0237 3.8671 3.9597 4.2351 3.6856 3.0248 5.6923 4.0551 3.5533 3.1743 3.6831 3.4800 4.0576 3.4214 4.7719 4.9514 3.6988 3.1205 3.8505 3.3845 5.3852 4.8605 4.6500 4.3810 4.0889 14 P không mang (g) 4.5186 4.1690 4.7175 3.3123 4.7770 3.6862 3.6149 3.4356 3.9215 3.3007 2.7889 5.2424 3.7771 3.2436 2.9264 3.4326 2.9699 3.6416 3.0981 4.4486 4.6476 3.4672 2.8865 3.5630 3.1085 4.9135 4.5965 4.3250 4.0212 3.6276 4.2 Kích thước khối lượng mẫu mang đem nuôi cấy STT cá thể 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 L (cm) 4.96 5.14 4.63 5.21 4.78 4.83 4.83 4.82 5.12 4.92 5.15 4.94 4.99 4.94 5.02 5.02 4.53 4.77 5.11 5.01 5.04 4.74 4.94 5.35 5.08 4.32 4.53 4.96 5.11 5.09 P toàn thân (g) 6.9517 4.9141 3.9412 4.7575 3.5555 5.5041 3.9960 5.5860 3.7390 3.6799 6.3611 5.0570 4.2575 3.9041 5.7280 4.6039 3.7500 4.0070 6.0251 4.7484 5.0729 3.4892 5.1290 5.0351 4.5880 2.9491 2.9285 4.7337 6.3956 5.7244 15 P mang (g) 0.7710 0.4465 0.3882 0.4378 0.3343 0.3657 0.4098 0.3606 0.4741 0.3744 0.5838 0.4564 0.3575 0.3528 0.4684 0.3740 0.3146 0.4050 0.3888 0.4660 0.4449 0.2778 0.3008 0.3434 0.3550 0.2153 0.3831 0.4636 0.5522 0.3607 Phụ lục E: Các liệu thu tiến hành thí nghiệm ảnh hưởng nhiệt độ lên trình biến thái từ giai đoạn thể dinh dưỡng sang bào tử nghỉ kí sinh trùng Perkinsus sp nghêu Bến Tre (Meretrix lyrata) 5.1 Bố trí thí nghiệm Ng ày ủ M ẫu 1 10 11 12 14 13 14 15 200C P mang (g) 1.53 49 1.13 88 1.36 47 1.48 89 1.31 89 1.13 26 1.43 08 1.40 45 1.61 98 1.24 51 2.21 61 1.55 34 1.51 54 1.71 08 1.65 08 M ẫu 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 300C P mang (g) 1.88 32 1.41 76 1.47 60 1.85 29 1.65 94 1.50 25 1.40 76 1.45 37 1.54 20 1.50 27 1.18 99 1.59 06 1.42 75 1.38 30 1.60 97 16 M ẫu 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 350C P mang (g) 1.52 65 1.53 95 1.43 29 1.48 26 1.64 61 1.51 58 1.86 72 1.98 68 2.25 24 1.53 60 1.58 32 1.26 23 1.48 93 1.39 07 1.23 55 M ẫu 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 400C P mang (g) 1.45 74 1.52 28 1.75 12 1.54 59 1.71 80 1.46 57 1.34 68 1.49 02 1.23 60 1.03 40 2.08 90 1.66 23 2.13 54 1.64 07 1.73 06 5.2 Đường kính bào tử nghỉ (µm) STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 o 20 C 62.5 87.5 75.0 62.5 120.0 117.5 120.0 85.0 102.5 95.0 92.5 72.5 67.5 132.5 120.0 115.0 100.0 100.0 60.0 110.0 Đường kính bào tử nghỉ (µm) 30oC 35 oC 22.5 32.5 20.0 40.0 25.0 35.0 25.0 32.5 15.0 25.0 15.0 25.0 12.5 15.0 12.5 15.0 22.5 27.5 12.5 15.0 15.0 17.5 17.5 17.5 17.5 15.0 17.5 20.0 27.5 25.0 25.0 25.0 12.5 20.0 17.5 12.5 25.0 25.0 22.5 15.0 17.5 17.5 20.0 17 Phụ lục F: Các liệu thu tiến hành thí nghiệm ảnh hưởng độ mặn lên trình biến thái từ giai đoạn thể dinh dưỡng sang bào tử nghỉ kí sinh trùng Perkinsus sp nghêu Bến Tre (Meretrix lyrata) 6.1 Bố trí thí nghiệm Ngày ủ 14 Mẫu 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 Pmang Mẫu Pmang 2.2851 25 2.0006 2.3536 26 1.5455 2.0812 27 2.0806 1.8813 28 1.3240 1.7268 29 1.4823 2.0830 30 1.6413 2.3514 31 1.5661 2.0558 32 1.4195 2.1613 33 1.9527 2.2551 34 1.8956 2.0784 35 1.2744 1.8705 36 1.5075 2.1956 37 1.3655 2.0889 38 1.4384 2.3207 39 1.8965 2.4132 40 1.5408 2.4211 41 1.7702 1.5877 42 1.6662 1.7198 43 1.7888 1.8818 44 1.8620 1.4814 45 1.5487 1.5730 46 1.7997 1.5377 47 1.8450 2.0988 48 1.5351 Bố trí mẫu ảnh hưởng độ mặn 15 10 Mẫu Pmang Mẫu Pmang Mẫu Pmang 49 1.9802 73 1.6454 97 1.6999 50 2.2883 74 1.7348 98 1.7875 51 1.9517 75 1.6571 99 1.8796 52 1.9592 76 1.9635 100 2.0651 53 1.9775 77 2.2509 101 1.9519 54 1.8430 78 1.7174 102 1.8736 55 1.4543 79 1.7600 103 1.6612 56 1.4943 80 1.9731 104 2.0922 57 1.5429 81 1.7036 105 1.6395 58 1.5022 82 2.3082 106 1.7627 59 1.7949 83 1.4605 107 2.2751 60 1.5419 84 1.3312 108 1.6522 61 1.5588 85 1.5400 109 1.7986 62 1.6867 86 1.6070 110 1.9656 63 1.5561 87 1.8968 111 1.6473 64 2.4312 88 1.7090 112 1.9994 65 2.0087 89 1.8611 113 1.7709 66 1.7489 90 2.1258 114 1.5840 67 1.6482 91 2.2392 115 1.7938 68 1.5655 92 1.6400 116 1.9424 69 1.4852 93 1.7909 117 1.6815 70 1.5249 94 1.7488 118 2.2832 71 1.4408 95 1.5592 119 1.7550 72 1.5818 96 1.6321 120 1.9549 18 20 Mẫu Pmang 121 1.7642 122 1.5114 123 1.7761 124 1.6802 125 1.6658 126 1.3442 127 2.1089 128 1.7196 129 1.5901 130 1.5866 131 1.6146 132 1.9303 133 1.8442 134 1.7324 135 1.5917 136 2.2834 137 1.8244 138 1.7017 139 1.5731 140 1.7475 141 1.5042 142 2.0176 143 2.2469 144 1.4777 25 Mẫu Pmang 145 1.5238 146 1.2661 147 1.6018 148 1.5406 149 1.7389 150 1.7458 151 1.5793 152 1.6338 153 1.6503 154 1.6009 155 1.6727 156 1.7555 157 1.9185 158 2.2479 159 1.6510 160 1.6701 161 1.6040 162 1.5186 163 1.9884 164 1.7684 165 1.4764 166 1.5852 167 1.5889 168 1.8165 30 Mẫu Pmang 169 1.8825 170 2.4818 171 1.7070 172 1.8726 173 1.6051 174 1.9596 175 1.8250 176 2.0000 177 1.7357 178 1.6672 179 1.8841 180 1.9698 181 2.0183 182 1.9713 183 1.8634 184 2.2403 185 2.3421 186 2.1060 187 1.8366 188 1.4976 189 1.6811 190 1.7486 191 1.8988 192 1.8859 6.2 Đường kính bào tử nghỉ (µm) Độ mặn Stt 10‰ 15‰ 20‰ 25‰ 17.5 30.0 15.0 60.0 20.0 15.0 80.0 42.5 15.0 15.0 80.0 30.0 20.0 30.0 17.5 75.0 32.5 25.0 30.0 17.5 25.0 35.0 17.5 37.5 25.0 22.5 57.5 17.5 17.5 20.0 22.5 17.5 22.5 10 25.0 45.0 11 17.5 32.5 12 25.0 13 50.0 19 Phụ lục G: Các liệu thu tiến hành thí nghiệm ảnh hưởng pH lên q trình biến thái từ giai đoạn thể dinh dưỡng sang bào tử nghỉ kí sinh trùng Perkinsus sp nghêu Bến Tre (Meretrix lyrata) 7.1 Bố trí thí nghiệm N gày ủ M ẫu 1 5 6 Pma ng 1 6.5 1.2 278 1.7 170 1.9 636 1.3 740 2.0 526 2.2 965 2.3 592 2.5 557 2.3 052 2.4 923 2.2 550 3.1 255 1.4 855 1.5 530 1.3 707 1.4 081 1.4 942 M ẫu 3 3 3 4 Pma ng 1.4 965 1.4 246 1.1 800 1.3 823 1.6 900 1.2 040 1.4 505 1.3 527 1.6 739 1.5 890 1.6 686 1.7 659 1.8 097 1.8 869 2.0 529 1.7 724 1.5 106 M ẫu 5 5 5 5 6 6 6 20 7.5 Pma ng 2.0 061 1.7 418 1.4 414 1.4 029 1.5 538 1.7 384 1.3 759 1.3 866 1.4 425 1.3 721 1.4 555 1.3 420 1.3 789 1.5 002 2.0 467 1.4 347 1.5 671 M ẫu 7 7 7 8 8 8 8 8 Pma ng 1.5 469 2.0 550 2.3 934 2.2 765 2.1 574 1.9 791 2.1 222 2.1 754 2.3 578 2.0 042 1.6 995 1.7 346 1.6 949 1.6 797 2.1 185 1.6 838 1.4 942 M ẫu 9 9 00 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 Pma ng 2.0 871 2.1 873 1.9 980 2.0 973 3.0 125 2.5 854 2.1 395 2.1 757 2.2 403 1.9 672 2.7 124 2.0 884 1.5 716 1.6 026 1.6 593 1.4 817 1.3 663 2 2 14 1.9 979 2.2 220 2.3 721 1.7 137 1.4 930 1.8 965 1.4 343 4 4 1.2 984 1.5 463 1.3 477 2.0 876 1.7 774 1.7 615 1.5 505 6 7 21 1.4 587 1.5 092 1.9 162 1.6 402 1.6 104 2.0 331 1.7 798 9 9 9 1.5 620 1.8 490 1.5 062 1.7 748 1.7 187 2.0 291 2.6 671 14 15 16 17 18 19 20 1.4 291 1.4 936 1.7 431 1.6 792 1.5 530 1.5 948 1.5 223 7.2 Đường kính bào tử nghỉ (µm) Đường kính bào tử nghỉ (µm) Stt pH = pH = 7.5 pH = 65.0 22.5 32.5 42.5 40.0 27.5 50.0 25.0 27.5 32.5 32.5 25.0 45.0 35.0 20.0 47.5 42.5 25.0 25.0 32.5 32.5 40.0 10 22.5 11 25.0 22 Phụ lục H: Một số hình ảnh q trình thí nghiệm A: Cho mẫu mang/ vào ống nghiệm có chứa mơi trường FTM B: Cho mẫu vào tủ ấm C: Lắc mẫu D: Ly tâm mẫu E: Loại bỏ dịch, giữ cặn F: Thêm NaOH 2M G: Ủ mẫu nhiệt độ 600C H: Cặn lắng 23 Quá trình xử lý mẫu Nghêu Bến Tre Meretrix lyrata (Sowerby, 1851) Ngao dầu Meretrix meretrix (Linnaeus, 1758) Tu hài Lutraria rhynchaena (Jonas, 1844) Nghêu lụa Paphia undulata (Born, 1778) 24 Phụ lục K: Cách pha hóa chất mơi trường Mơi trường FTM Cân 29,7 g môi trường FTM, 20 g muối NaCl cho vào bình tam giác có bổ sung 1000 ml nước cất Đem hỗn hợp khuấy bếp khuấy từ có gia nhiệt mơi trường chuyển sang màu hồng Sau đó, đem dung dịch cho vào nồi hấp nhiệt 1210C 30 phút Dung dịch sau hấp để nguội bổ sung kháng sinh Cloramphenicol (200 μg/ml) Nystatin (200 IU/ml) Dung dịch PBS Cân g NaCl, 0,2 g KCl, 0,2 g KH2PO4, 1,15 g Na2HPO4.12H2O cho vào bình tam giác Cho 1000 ml nước cất vào bình tam giác Đem hỗn hợp khuấy bếp khuấy từ đến dung dịch hịa tan hồn tồn Dung dịch dùng thí nghiệm: Pha phần dung dịch gốc PBS với phần nước cất dung dịch PBS 10% Dung dịch Davidson Cho 330 ml Ethanol 95%, 220 ml Formaldehyde 100%, 115 ml acid acetic 335 ml nước cất vào bình tam giác 1000 ml, khuấy 1lit dung dịch Davidson dùng cho cố định mẫu mô học Dung dịch NaOH 2M Cân 80 g NaOH cho vào bình tam giác chứa 1000 ml nước cất có nắp đậy đem khuấy bếp từ, để nguội cho vào bình bảo quản 25 Phụ lục: KẾT QUẢ XỬ LÝ SỐ LIỆU (SPSS) Đường kính bào tử Perkinsus vật chủ (400x) duongkinh LoaiNT 2MV Std Error Mean NgheuB tr 87.792 Ngheul ua 53.546 Total 72.955 N Std Deviation Mean 225 27.42238 1,82776 172 10.83816 0,82592 397 27.65473 1,81039 Đường kính trung bình bào tử Perkinsus One-Sample Statistics Std N duongki nh 397 Deviation Mean 72.955 27.65473 26 Std Error Mean 1.38795 ... nội dung nghiên cứu Nghiên cứu thành phần loài ảnh hưởng số yếu tố mơi trường lên biến thái kí sinh trùng Perkinsus kí sinh số lồi động vật thân mềm hai mảnh vỏ Việt Nam Nghiên cứu hình thái mức... Việt Nam cần thiết Do đó, chúng tơi đề xuất thực đề tài ? ?Nghiên cứu thành phần loài ảnh hưởng số yếu tố mơi trường lên biến thái kí sinh trùng Perkinsus kí sinh số lồi động vật thân mềm hai mảnh. .. nước biển hình thành bào tử nghỉ Sự có mặt bào tử nghỉ mơi trường yếm khí Sự có mặt bào tử nghỉ mơ vật chủ cịn sống Ảnh hưởng yếu tố nhiệt độ Ảnh hưởng yếu tố độ mặn Ảnh hưởng yếu tố pH Kết luận