Viện khoa học công nghệ việt nam viện công nghệ sinh học Báo cáo tổng kết đề tài nhánh năm 2005 Nghiên cứu, phân tích ADN tảo độc, tảo gây hại biển (7 loài) Thuộc đề tài cấp Nhà nớc, chơng trình KC- 09-19 Điều tra, nghiên cứu tảo độc, tảo gây hại số vùng nuôi trồng thuỷ sản tập trung ven biển,đề xuất giải pháp phòng ngừa, giảm thiểu tác hại chúng gây doTS Chu Văn Thuộc làm chủ nhiệm Chủ nhiệm đề tài nhánh: TS Đặng Diễm Hồng 6132-21 02/10/2006 Hà Nội, 2005 Phần I: Mở đầu Cho tới nay, cha có số thống kê đầy đủ thiệt hại tảo độc gây phạm vi toàn cầu Tuy nhiên, nở hoa tảo độc hại thực mối đe doạ thiệt hại kinh tế mà gây ô nhiễm môi trờng, huỷ hoại hệ sinh thái thuỷ vực nh ảnh hởng đến sức khoẻ ng−êi ViƯt Nam lµ n−íc cã bê biĨn dµi víi hệ sinh thái động thực vật biển đa dạng, phong phú ngành nuôi trồng thuỷ hải sản phát triển Mặc dù vậy, vấn đề tảo độc đợc quan tâm nghiên cứu vài ba thập kỷ trở lại Nhằm bảo vệ sức khoẻ ngời nguồn lợi sinh vật biển vấn đề giám sát tảo độc hại cần tiến hành thờng xuyên rộng khắp Trong chơng trình giám sát, việc xác định thành phần loài thuỷ vực đợc đặt trớc tiên Trên giới, bên cạnh phơng pháp phân loại truyền thống dựa đặc điểm hình thái kĩ thuật sinh học phân tử đợc sử dụng cách rộng rÃi để xác định thành phần loài Việt Nam, phân loại hình thái chủ yếu Trên thực tế, bắt gặp dạng biến thái loài điều kiện sống thay đổi Điều gây khó khăn cho phơng pháp phân dựa đặc điểm hình thái Vì vậy, phơng pháp phân loại kĩ thuật sinh học phân tử góp phần giải khó khăn Trong báo cáo tổng kết này, xin trình bày kt qu phân loại phân tử ADN ca loài tảo độc, hại thuộc ba chi Alexandrium, Prorocentrum Pseudonitzschia Viện Hải Dơng học Hải phòng cung cấp bao gồm: Alexandrium sp5,Alexandrium sp (C), Alexandrium sp16; Prorocetrum sp1, Prorocetrum sp 3, Pseudo-nitzschia sp ‘2, Pseudo-nitzschia sp (G3)- dựa việc đọc so sánh trình tự phần đoạn gen 18 S rADN loài thuộc chi Alexandrium chi Prorocentrum, on gen ITS1-5.8 S-ITS2 loài thuộc chi Pseudonitzschia Trên sở kết đọc trình tự thu đợc, tên mối quan hệ phát sinh chủng loại loài đợc phân lập Hải Phòng với loài Alexandrium spp., Pseudo-nitzschia sp., Prorocentrium sp khác đà đợc công bố ngân hàng gen giới đà đợc xác định Phần II: Vật liệu phơng pháp II Vật liệu - mẫu tảo độc hại phòng thực vật phù du, phân viện Hải Dơng học Hải Phòng phân lập cung cấp Độ khiết theo tiêu chuẩn hình thái tảo đợc kiĨm tra d−íi kÝnh hiĨn vi laser qt Axiovert 100M hÃng CarlZeiis - Plasmit, tế bào khả biến, enzym giới hạn đợc mua từ số hÃng nh Invitrogen (Mỹ), Pharma ( Thuỵ Điển), Biolabs (Anh) - Các trình tự gen 18S loài thuộc chi Alexandrium chi Prorocentrum, ITS1-5,8S-ITS2 loài thuộc chi Pseudonitzschia đợc công bố ngân hàng gen Quốc tế (Danh sách số đăng kí phần phụ lục) - Cp mồi Alex F-U18 R, U Pro F- U18 R dïng để nhân đoạn gen mà hoá cho 18S rADN ca loài thuộc chi Alexandrium, Prorocentrum cặp mồi PseuFPseuR nhân đoạn ITS1- 5.8 S- ITS2 loài thuộc chi Pseudonitzschia đà đợc thiết kế đặt mua hÃng Invitrogen (Mỹ) II.2 Phơng pháp nghiên cứu * ADN tổng số đợc tách chiết theo phơng pháp Y.K Hong có cải tiến cho phù hợp với điều kiện Việt Nam (Đặng Diễm Hồng CS., 2002) * Các phơng pháp sinh học phân tử đợc tiến hành chủ yếu theo sách cẩm nang phòng thí nghiệm tạo dòng phân tử (Sambrook, Russell, 2001) * Thiết kế mồi: + Để thiết kế cặp mồi đặc hiệu nhân đoạn gen mà hoá cho 18S rADN loài thuộc chi Alexandrium chi Prorocentrum, đoạn ITS1-5,8S-ITS2 loài thuộc chi Pseudonitzschia đà tiến hành tra cứu trình tự nucleotit gen 18S rARN trình tự đoạn ITS1-5,8S-ITS2 loài thuộc ba chi nói trên ngân hàng gen Quốc tế, so sánh trình tự nhận đợc sử dụng phần mềm chuyên dụng ®Ĩ thiÕt kÕ cỈp måi ®Ỉc hiƯu bao gåm Alex- U18R (nhân loài thuộc chi Alexandrium), Upro18 F- U18R (nhân loài thuộc chi Prorocentrum) PseuF- PseuR (nhân loài thuộc chi Pseudonitzschia) + Trình tự cặp mồi nh sau: Bảng Trình tự cặp mồi nhân đoạn gen 18S r ADN đoạn ITS1-5,8S-ITS2 KÝ hiƯu Tr×nh tù Primer Alex18F U18R U Pro18F U18R Pseu F Pseu R 5’- gagagggagcttgagaaatg-3’ 3’- GGCATCACAGACCTGTTATTGC-5’ 5’-TACCACATCTAAGGAAGGCAGCAG -3’ 3’-GGCATCACAGACCTGTTATTGC-5’ 5’- GGATCATTACCACACCGATCCAAG -3’ 3’-CGCAGATTCACATCCTGAGCTAGT-5’ KÝch th−íc s¶n phÈm PCR 1100 bp 1100 bp 825 bp t Theo tÝnh to¸n lÝ thut cỈp måi Alex18F- U18R, U Pro18F - U18R nhân đợc đoạn gen 18S có kích thớc vào khoảng 1,1Kb cặp mồi PseuF -Pseu R nhân đợc đoạn ITS1-5,8S-ITS2 có kích thớc vào khoảng 825bp * Chúng tiến hành phản ứng PCR với thành phần chu trình nhiệt nh sau: Thành phần phản ứng: 20 àl hỗn hợp phản ứng chứa 1àl ADN khuôn; 2àl buffer 10X;1,5àl dNTP nồng độ 2.5Mm loại; 1àl primer loại, 0,3 Taq polymerase Chu trình nhiệt: + Chu trình nhiệt nhân phần đoạn 18S loài thuộc chi Alexandrium: 940C- phút, (940C- 30 giây, 51 0C- 1phút, 720C- 1phút) lặp lại 35 chu kì,720C- phút, giữ 40C + Chu trình nhiệt nhân phần đoạn 18S loài thuộc chi Prorocentrum: 940C- phót, (940C- 30 gi©y, 55 0C- 1phót, 720C- 1phút) lặp lại 40 chu kì,720C- phút, giữ 40C + Chu trình nhiệt nhân đoạn ITS1-5,8S-ITS2 loài thuộc chi Pseudonitzschia: 940C- phút, (940C- 30 giây, 55 0C- 1phút, 720C- 1phút) lặp lại35 chu kì,720C- phút, giữ 40C Sản phẩm PCR đợc kiểm tra điện di gel agarose 1%, sau nhuộm với Ethidium bromide quan sát máy soi tử ngoại * Sau chạy điện di kiểm tra, sản phẩm PCR đợc gắn vào vector pCRđ2.1 TOPOđ đợc biến nạp vào vi khuẩn E Coli chng DH5T1, cuối đợc nuôi môi trờng chọn lọc LB cã bổ sung Ampicilin, X-gal (5-Bromo-4chloro-3-indolyl β-D- galactopyranoside) ADN plasmit đợc tách chiết kiểm tra có mặt phần đoạn gen 18S (đối với mẫu thuộc chi Alexandrium, Prorocentrum) đoạn ITS1- 5,8S- ITS2 (đối với mẫu thuộc chi Pseudonitzschia) * Trình tự nucleotit mẫu nghiên cứu đợc thực máy đọc trình tù tù ®éng ABI PRISM 377 DNA Sequencer, sư dơng ABI PRISM Big Dye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction Kit hÃng Perkin-Elmer Dựa chơng trình Clustal X Multiple Sequence Alignment Program (version 1.81, June 2000) vµ DNASTAR chóng xây dựng phát sinh chủng loại loài đợc nghiên cứu với trình tự loài thuộc chi Alexandrium, Prorocentrum, Pseudonitzschia đà đợc công bố ngân hàng gen Quốc tế Phần III Kết thảo luận III.1 Tách chiết ADN tổng số Kết tách chiết ADN tổng số đợc trình bày h×nh M 4 Hình ADN tổng số mẫu tảo ®éc, h¹i GiÕngM: Marker 1Kb Plus DNA Ladder GiÕng 1, 2, 3: ADN tỉng sè cđa Alexandrium sp 16, A sp (C), A.sp5 GiÕng 4, : ADN tæng sè cña Prorocentrum sp 3, P.sp GiÕng 6, 7: ADN tỉng sè cđa Pseudonitzschia sp (G3), P sp’2 + Nång độ độ tinh ADN đợc kiểm tra máy UV- 1601 hÃng Shimadzu Từ kết điện di gel agarose 1% máy UV-1601 cho thấyADN tổng số tách chiết có nồng độ độ tinh cao cho phép tiến hành nghiên cứu III.2 Nhân đoạn gen mà hoá cho 18S rARN đoạn ITS1-5,8S-ITS2 kĩ thuật PCR Chúng tiến hành phản ứng PCR với thành phần phản ứng chu trình nhiệt nh đà đề cập Kết đợc trình bày hình 2 M 1,1 kb 825 bp Hình Sản phẩm PCR mẫu tảo độc, hại Giếng 1, 2, 3: Sản phẩm PCR víi cỈp måi AlexF- U18R cđa Alexandrium sp (C), A sp 5, A sp 16 GiÕng M: Marker 1Kb Plus DNA Ladder Giếng 4, 5: Sản phẩm PCR với cặp måi UPro18F- U18R cđa Prorocentrum sp vµ P sp Giếng 6, 7: Sản phẩm PCR với cặp mồi PseuF- PseuR cđa Pseudonitzschia sp’2, P sp (G3) KÕt qu¶ hình cho thấy sản phẩm PCR có kích thớc nh tính toán lý thuyết nhiên sản phÈm PCR víi cỈp måi AlexF- U18R cđa mÉu Alexandrium sản phẩm PCR với cặp mồi UPro18F- U18R hai mẫu Prorocentrum xuất smear dài Nếu dùng sản phẩm PCR mẫu gắn vào vecto tách dòng biến nạp vào tế bào EColi gây khó khăn cho việc chọn lọc dòng tế bào mang vecto tái tổ hợp Vì với mẫu Alexandrium mẫu Prorocentrum, sau chạy PCR tiến hành gel, sử dụng cột Sigma GenElute TM Agarose Spin column (USA), nhằm thu đợc sản phẩm PCR đặc hiệu Kết trình gel đợc hình M 1,1 Kb 825 bp Hình Kết kiểm tra sản phẩm PCR sau trình gel Giếng 1, 2: Sản phẩm PCR víi cỈp måi PseuF-PseuR cđa Pseudonitzschia sp’ 2, P sp (G3) GiÕngM: Maker 1Kb Plus DNA Ladder GiÕng 3, 4, 5: Sản phẩm PCR sau gel Alexandrium sp (C), A sp 5, A sp 16 GiÕng 6, 7: Sản phẩm PCR sau gel Prorocentrum sp P sp III.3.Tách dòng đoạn gen 18S rADN, ITS1-5,8S-ITS2 Với sản phẩm PCR đặc hiệu trên, tiến hành tách dòng theo TOFO Kit (Invitrogen) Các dòng tế bào mang vectơ tái tổ hợp có chứa đoạn gen mong muốn đợc kiểm tra PCR-Checking cắt enzym giới hạn EcoRI Các kết đợc hình h×nh M 1,1Kb 825 bp Hình4 Kết PCR checking dòng tế bào mang vecto tái tổ hợp (TTH) Giếng1 : Đối chứng khuẩn lạc xanh- dòng tế bào không mang vecto tái tổ hợp Giếng 2, 3, 4: Dòng tÕ bµo cđa Alexandrium sp(C), A sp 16, A.sp mang vecto TTH GiÕng M: 1Kb Plus DNA Ladder GiÕng 5, 6: Dòng tế bào Prorocentrum sp 1, P.sp mang vecto TTH Giếng 7, 8: Dòng tế bào cña Pseudonitzschia sp’2, P sp (G3) mang vecto TTH M 1,1kb 825 bp Hình Sản phẩm cắt enzym giới hạn EcoRI Giếng 1, 2, : Sản phẩm cắt ADN plasmit tái tổ hợp mẫu Alexandrium sp (C), A.sp (5), A.sp(16) GiÕng 4: §èi chøng - AND plasmit tách từ khuẩn lạc xanh Giếng M: Maker 1Kb Plus DNA Ladder Giếng 5, 6: Sản phẩm cắt ADN plasmit tái tổ hợp mẫu Prorocentrum sp(1), P sp (2) Các dòng tế bào mang vectơ tái tổ hợp đợc tiến hành tách chiết ADN-plasmit, sau tinh cột QIAprep(R)Miniprep (QIAGEN) Kết trình bày hình DC Hình Kết tách chiết ADN plasmit Giếng DC : ADN plasmit tách chiết từ khuẩn lạc xanh Giếng 1, 2,3, 4, : ADN plasmit tái tổ hợp III.4 Xử lí kết đọc trình tự Sau xác định trình tự đoạn gen 18S rADN mÉu thuéc chi Alexandrium: Alexandrium sp (C), A.sp 5, A.sp 16 ; mÉu thuéc chi Prorocentrum: Prorocentrum sp 1, P sp đoạn trình tự ITS1-5,8S- ITS2 mẫu thuộc chi Pseudonitzschia, tiến hành so sánh trình tự thu đợc mẫu nghiên cứu nói với 31 trình tự loài thuộc chi Alexandrium, Prorocentrum, Pseudonitzschia đợc công bố ngân hàng gen Quốc tế với hỗ trợ phần mềm DNAStar ClustalX 1, Xây dựng phát sinh chủng loại chi Alexandrium định tên cho Alexandrium sp (C), A.sp 5, A.sp 16 Sư dơng phơng pháp ClustalW phần mềm DNAStar để so sánh trình tự mẫu nghiên cứu với 12 trình tự loài Alexandrium đợc công bố ngân hàng gen Quốc tế thu đợc tỷ lệ phần trăm tơng đồng cặp trình tự loài chi Alexandrium (ma trận tam giác trên) khoảng cách di truyền (ma trận tam giác dới) KÕt qu¶ chØ ë b¶ng B¶ng TØ lệ % tơng đồng khoảng cách di truyền loài chi Alexandrium Bảng cho thấy độ tơng đồng loài tảo thuộc chi Alexandrium từ 92,5% (giữa loài Alexandrium leei A.cohorticula) đến 99,9% (giữa loài Alexandrium minutum A ostenfeldii, A.affine A.sp 16, A.sp 16 vµ A.sp (C), A.cohorticula vµ A tamiyavanichii) Qua kết nhận thấy chênh lệch độ tơng đồng không lớn loài chi nµy chøng tá gen 18S rADN cã tÝnh bảo thủ cao việc đọc so sánh trình tự đoạn gen 18S thích hợp cho việc xác định mối quan hệ phát sinh chủng loại loài loài Dựa hệ số tơng đồng khoảng cách di truyền loài thuộc chi Alexandrium, phát sinh chủng loại đợc xây dựng Hình Cây phát sinh chủng loại 15 loài Alexandrium spp dựa việc so sánh trình tự nucleotit đoạn gen 18S rADN * Định tên mẫu Alexandrium sp 16 A sp (C ) Dựa bảng hệ số tơng đồng nhận thấy: Alexandrium sp 16 có độ tơng đồng cao với A.sp (C) A affine ( 99,9%) sau ®ã ®Õn A.cohorticula (98,9%), A.catenella (98,6%) Dựa vào phát sinh chủng loại ta thấy Alexandrium sp 16 cïng víi loµi A.sp (C) lµm thµnh nhóm nằm cạnh A affine Alexandrium sp (C) có độ tơng đồng cao với A.sp 16 (99,9%), sau A affine ( 99,8%), A.cohorticula (98,8%), A.catenella(98,6%) Nh vậy, dựa vào hệ số tơng đồng phát sinh chủng loại xếp hai mẫu Alexandrium sp 16 vµ A sp (C ) vµo loµi A affine * Định tên mẫu Alexandrium sp Dựa vào bảng hệ số tơng đồng thấy Alexandrium sp có độ tơng đồng cao với A minutum (99,7%) sau loài A ostenfeldii (99,6%), A.sp tamutum (99,2%) Cây phát sinh chủng loại cho thấy Alexandrium sp có độ dài nhánh tiến hoá với A minutum Căn vào kết xếp Alexandrium sp vào loài A minutum 2, Xây dựng phát sinh chủng loại chi Prorocentrum định tên cho Prorocentrum sp 1, P.sp Tiến hành xử lí so sánh tr×nh tù hai mÉu Prorocentrum sp 1, P sp với trình tự loài Prorocentrum đà đợc công bố ngân hàng gen thu đợc bảng hệ số tơng đồng phát sinh chủng loại nh hình bảng Bảng Tỉ lệ % tơng đồng khoảng cách di truyền loài chi Prorocentrum Hình Cây phát sinh chủng loại loài Prorocentrum spp dựa việc so sánh trình tự nucleotit đoạn gen 18S rADN * Định tên mẫu Prorocentrum sp 1, P.sp - Mẫu Prorocentrum sp có hệ số tơng đồng cao với Prorocentrum mexicanum (100%) sau mẫu P.sp với hệ số tơng đồng 99,8%, P minimum (99,7%) - Mẫu Prorocentrum sp3 có hệ số tơng đồng cao Prorocentrum mexicanum P.sp (99,8%) sau mẫu P minimum (99,7%) , P micans (99,2%) - Dựa phát sinh chủng loại Prorocentrum sp1 loài P.mexicanum, P.sp nằm cạnh Prorocentrum sp vµ P mexicanum 10 Nh− vËy Prorocentrum sp loài P.mexicanum (vì có hệ số tơng đồng 100%) loài P.sp đợc xếp vào P.mexicanum P micans 3, Xây dựng phát sinh chủng loại chi Pseudonitzschia định tên cho Pseudonitzschia sp2, P.sp (G3) Cũng chơng trình Clustal X phần mềm DNAStar tiến hành so sánh trình tự đoạn ITS1-5,8S- ITS2 hai mẫu nghiên cứu Pseudonitzschia sp2, P.sp (G3) với trình tự đoạn ITS1-5,8S- ITS2 12 loài Pseudonitzschia spp khác ngân hàng gen Kết đợc bảng hình Bảng Tỉ lệ % tơng đồng khoảng cách di truyền loài chi Pseudonitzschia Từ bảng hệ số tơng đồng, nhận thấy độ tong đồng loài thuộc chi Pseudonitzschia nằm khoảng 53,1% - 99,7% Rõ ràng chênh lệch hệ số tơng đồng lớn khác với kết so sánh dựa đoạn gen 18S rADN Điều cho thấyvùng đệm ITS1, ITS2 vùng siêu biến đổi biến đổi vùng đặc trng cho loài vùng địa lí khác việc phân tích so sánh trình tự đoạn ITS1-5,8SITS2 cho phép xác định mối quan hệ dới loài 11 Hình Cây phát sinh chủng loại 14 loài Pseudnitzschia spp dựa việc so sánh trình tự nucleotit đoạn gen ITS1-5,8S-ITS2 * Định tên mẫu Pseudonitzschia sp2 - Bảng hệ số tơng đồng cho thấy Pseudonitzschia sp2 có hƯ sè t−ong ®ång cao nhÊt víi P.cf autralis (83,1%) sau P autralis (82,8%), P micropora( 81,3%) Trên phát sinh chủng loại Pseudonitzschia sp2 nằm cạnh P.cf autralis vµ P autralis Nh− vËy cã thĨ xÕp Pseudonitzschia sp2 vào loài P.cf autralis * Định tên mẫu Pseudonitzschia sp (G3) - Hệ số tơng đồng Pseudonitzschia sp ( G3) với P pungens đạt giá trị cao (98,8%) sau P multiseries (83,2%), P.cf autralis (79,4%) - Trên phát sinh chủng loại Pseudonitzschia sp (G3) nằm cạnh P.pungens Vì vậy, mẫu Pseudonitzschia sp (G3) loài P pungens Tóm tắt sơ kết định tên mẫu tảo độc, hại đợc nghiên cứu đợc Bảng Bảng 5: Kết định tên mẫu tảo độc h¹i, h¹i Stt KÝ hiƯu mÉu Alexandrium sp 16 Alexandrium sp (C ) Alexandrium sp Prorocentrum sp Prorocentrum sp Đoạn gen nghiên cøu 18S r ARN 18S r ARN 18S r ARN 18S r ARN 18S r ARN Pseudonitzschia sp’2 ITS1-5,8S- ITS2 Pseudonitzschia sp (G3) ITS1-5,8S- ITS2 12 KÕt qu¶ định tên Alexandrium affine Alexandrium affine Alexandrium minutum Prorocentrum mexicanum Prorocentrum mexicanum P.micans Pseudonitzschia cf australis Pseudonitzschia pungens IV Kết luận Từ kết nghiên cứu đà đạt đợc, rút số kết luận sau: Đà tách chiết tinh đợc ADN tổng số mẫu vi tảo độc, hại là: Prorocentrum sp1, Prorocentrum sp3, Alexandrium sp5 , Alexandrium sp16 Alexandrium sp (C), Pseudoniszschia sp2, Pseudonitzschia sp (G3) đợc phân lập Đồ Sơn Cát Bà, Hải Phòng Đà thiết kế thành công cặp mồi cặp mồi Alex18F/U18R, UPro18F/U18R để nhân đoạn gen 18 S rADN mẫu thuộc chi Alexandrium ,Prorocentrium cặp mồi PseuF/ PseuR để nhân đoạn ITS1- 5.8S- ITS2 mẫu tảo thuộc chi Pseudonitzschia Sử dụng cặp mồi nêu trên, đoạn gen 18S rADN đoạn ITS1- 5.8S- ITS2 có kích thớc khoảng 1.1kb 825 bp mẫu đà đợc nhân kỹ thuật PCR Đà tạo dòng phân tử sản phẩm PCR mẫu việc sử dụng hệ vector tách dòng pCR2.1đ-TOPOđ, tách chiết plasmit tái tổ hợp có gắn đoạn gen đà nhân đợc đảm bảo chất lợng cho việc xác định trình tự nucleotit Trình tự nucleotid đoạn gen 18S rADN đoạn ITS1- 5.8S- ITS2 mẫu vi tảo độc, hại đà đợc xác định Mối quan hệ phát sinh chủng loại mẫu vi tảo nêu với số loài vi tảo khác thuộc chi Alexandrium, Prorocentrum, Pseudonitzschia có quan hệ gần với chúng mặt tiến hoá đà đợc phân tích mẫu vi tảo độc, hại đà đợc định tên dựa việc đọc so sánh trình tự nucleotid đoạn gen 18S rADN đoạn ITS1-5,8S-ITS2 với hỗ trợ phần mềm máy tính chuyên dụng Mẫu Alexandrium sp5 loài A minutum , A sp16 vµ A.sp (C) lµ loµi A affine Mẫu Prorocentrum sp1 đợc định tên loài Prorocentrum mexicanum; P sp3 loài Prorocentrum mexicanum không loại trừ P.micans; mẫu Pseudonitzschia sp2 có thĨ lµ loµi Pseudonitzschia cf australis vµ Pseudonitzschia sp (G3) loài Pseudonitzschia pungens 13 Đà tiến hành đăng ký trình tự đoạn gen 18S rADN đoạn đoạn ITS1-5,8SITS2 mẫu vi tảo Genbank với số đăng ký là: mẫu Prorocentrium sp1 có trình tự nucleotit giống 100% với loài P mexicanum (số đăng ký Y16232) nên tiến hành đăng ký đợc trình tự gen ITS1-5,8S-ITS2 mẫu ngân hàng gen Quốc tế với số đăng ký AY886763; mẫu Prorocentrum sp3 có số đăng ký DQ174089; mẫu Alexandrium sp5 có số đăng ký DQ168664; mẫu Alexandrium sp16 có số đăng ký DQ171879; mẫu Alexandrium sp (C) có số đăng ký DQ166532; mẫu Pseudonitzschia sp (G3) có số đăng ký DQ166533, Pseudonitzschia sp2 có số đăng kí DQ192110 Nh vậy, đà hoàn thành đầy đủ công việc năm 2005 chủ nhiệm đề tài KC-09 giao cho V/ Kết thu đợc đề tài nhánh đà đợc công bố Hội nghị tạp chí nh sau: 1.Ngô Hoài Thu, Hoàng Minh Hiền, Hoàng Lan Anh, Luyện Quốc Hải, Trần Vân Khánh, Chu Văn Thuộc, Nguyễn Minh Huyền, Đặng Diễm Hồng Tách dòng đọc trình tự gen mac hoá cho 18S ITS1-5,8S-ITS2 hai loài Alexandrium sp Pseudonitschia sp Báo cáo Hội thảo quốc gia tảo độc vấn đề liên quan, Viện hải Dơng Học, Nha Trang, 7-8/1/2005 2.Hoàng Minh Hiền, Ngô Hoài Thu, Hoàng Lan Anh, Luyện Quốc Hải, Chu Văn Thuộc, Nguyễn Minh Huyền, Đặng Diễm Hồng Phân tích di truyền loài Prorocentrium sp dựa trình tự nucleotit đoạn gen mà hoá cho 18S rARN ITS1-5,8S-ITS2 Báo cáo Hội thảo quốc gia tảo độc vấn đề liên quan, Viện hải Dơng Học, Nha Trang, 7-8/1/2005 Hoàng Thị Lan Anh, Chu Văn Thuộc, Đặng Diễm Hồng (2005) "Xây dựng phát sinh chủng loại Pseudonizschia sp(G3) đợc phân lập Hải Phòng dựa phân tích trình tự nucleotid ®o¹n gen ITS1-5,8S-ITS2", T¹p chÝ Sinh häc, (®ang gưi) Đặng Diễm Hồng, Hoàng Minh Hiền, Ngô Thị Hoài Thu, Hoàng Thị Lan Anh, Chu Văn Thuộc (2005), Định loại tên loài Prorocentrium sp phân lập Hải 14 Phòng dựa trình tự nucleotid đoạn gen 18S rADN ITS1-5,8S-ITS2, Tạp chí Sinh học, (đang in) 5.Ngô Thị Hoài Thu, Luyện Quốc Hải, Đặng Diễm Hồng, Chu Văn Thuộc (2005), Định loại Alexandrium sp(C) phân lập Đồ Sơn, Hải Phòng dựa trình tự nucleotit đoạn gen 18S rADN, Hội nghị khoa học toàn quốc 2005, Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, (đang in) VI/ Đào tạo: - Một luận văn thạc sỹ bảo vệ 8/2005 VII/ Tài liệu tham kh¶o Altamirano R C and Beltran A P S 2003 Morphology and taxonomy of Prorocentrum mexicanum and reinstatement of Prorocentrum rhathymum (dinophyceae) J Phycol 39: 221-225 Asai R., Nakashi K., Nakamura C., Kebukuro K., Miyake J and Karube I., 2003 A polymerase chain reaction-based ribosomal DNA detection technique using a surface plasmon resonance detector for a red tide causing microalga, Alexandrium affine Phycological Research 51: 118-125 NguyÔn Đức Bách, Đặng Diễm Hồng, Dơng Đức Tiến, Nguyễn Văn §ång, 2003 Mèi quan hƯ di trun cđa mét sè chủng Scenedesmus phân lập từ hồ Hoàn Kiếm dựa trình tự nucleotit đoạn ITS-1 ribosome Tạp chí Sinh häc TËp 25(3), trang 1-4 Bates S.S., 2000 Domoic acid producing diatoms: another genus added J.Phycol.36: 978- 985 Cagelost G A., Hamlin A M., Marin III R and Scholin C A., 1997 Detection of Stable Pre-rRNA in toxic Pseudo-nitzschia Species Applied and Enviromental Microbiology Vol 63(12): 4859-4865 Destombe C., Cembella A D., Murphy C A and Ragan M A., 1992 Nucleotide sequence of the 18S ribosomal RNA genes from the marine dinoflagellate Alexandrium tamarese (Gonyaulacales, Dinophyta) Phycological Vol 31(1): 121124 Faust M A 1997.Three new benthic species of Prorocentrum (dinophyceae) from Belize: P norrisianum sp nov., P tropicalis sp nov., and P reticulatum sp nov J Phycol 33: 851-858 Fehling J., Green D H., Davidson K., Bolch C J and Bates S.S., 2004 Domoic acid production by Pseudo-nitzschi seriata (Bacillariophyceae) in Scottish waters J.Phycol ***-*** (2004) (C) Phycological Society of America P 1-9 Galluzzi L., Penna A., Bertozzini E., Vila M., Garcos E., and Magnani M., 2003 15 Development of a Real-Time PCR Assay for Rapid Detection and Quantification of Alexandrium minutum (a Dinoflagellate) Appied and Enviromental Microbiology Vol 70(2): 1199-1206 10 Đặng Diễm Hồng, Nguyễn Đức Bách, Luyện Quốc Hải, Ngô Thị Hoài Thu, Dơng Đức Tiến, Nguyễn Văn Đồng, 2003 Phân loại số loài tảo Việt Nam (Gracilaria, Hypnea, Cauulerpa, Scenedesmus) kỹ thuật so sánh trình tự nucleotit đoạn ITS-1 Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống Báo cáo khoa học, Hội nghị Khoa học toàn quốc lần thứ nghiên cứu Sinh häc, N«ng nghiƯp, Y häc, H, trang 913-916 11 Đặng Diễm Hồng, Hoàng Minh Hiền, Phạm Ngọc Sơn, Nguyễn Đức B¸ch, Nguyễn Văn Đồng 2004 Áp dụng kỹ thut c v so sánh trình t nucleotit ca on ITS-1 việc ph©n loại số lồi tảo Việt Nam Tun tập b¸o c¸o khoa học Hội nghị khoa học “Biển Đ«ng 2002” Nha Trang: 424-436 12 Đặng Diễm Hồng, Hoàng Minh Hiền, Phạm Ngọc Sơn, Nguyễn Đức Bách, Nguyn Vn ng 2002 So sánh trình t nucleotit đoạn ITS-1 số loài tảo biển Việt Nam Tạp chÝ khoa học c«ng nghệ Số 40: 161-167 13 Đặng Đ×nh Kim, Đặng Hồng Phước Hiền 1999 C«ng nghệ Sinh học Vi tảo Nhà xuất N«ng nghiệp, Hà Nội 14 J Lasen and N.L Nguyen, 2004 Potentially toxic microalgae of Vietnamese waters Nghiên cứu loài vi tảo có khả độc hại thuỷ vùc ven bê ViÖt Nam OPERA Botanica 140- 2004 15 John U., Fensome R A., Medlen L K., 2003 The application of a molecular clock based on molecular sequences and the fossil record to explain biogeographic distributions within the Alexandrium tamarense “Species complex” (Dinophyceae) Mol Bio Evol Vol 20(7): 1015-1027 16 Nina Lundholm N., Moestrup ∅., Hasle G R., Hoef-Emden K., 2003 A study of the Pseudo-nitzschia pseudelicatissima/cuspidata complex (Bacillariophyceae): What is P pseudodelicatissima ? Phycol 39: 797-813 17 Trần Hữu Quang, Trần Kiªn Cường, Vũ Văn Dũng, Vâ Thương Lan, ng Dim Hng 1998 Nghiên cu trình tách chiết nhanh làm axit nucleic từ c¸c lồi tảo biển Kỷ yếu Viện C«ng nghệ Sinh học Trung t©m KHTN & CNQG: 107-113 18 Sambrook J., Russell D W., 2001 Molecullar cloning A Laboratory manual Cold Spring HarborLaboratory Press 19 Taylor F J R 1993 The species problem and its impact on harmful phytoplankton studies, with emphasis on dinoflagellate morphology In: T J Smayda and Y Shimizu (eds), Toxic Phytoplankton Blooms in the Sea New York, Elsevier Science Inc.: 81-86 20 Taylor F J R 1992 The taxonomy of harmful marine phytoplankton Gior Bot Ital No 26: 209-219 21 Watanabe M M, Tanabe Y and Otsuka S 2004 Global water stresses and toxic cyanobacterial blooms Innovative roles of biological resource centers Proceedings 16 of the tenth international congress for culture collections Tsukuba, Japan, 10-15 Octorber 2004: 209-215 22 Witek B., Plinski M 2000 The first recorded bloom of Prorocentrum minimum (Pavillard) Schiller in the coastal zone of the Gulf of Gdansk Oceanologia 41 (2): 29-36 23 Yeung P K K., Kong K F., Wong F T W and Wong J T Y 1996 Sequence data for two large-subunit rRNA genes from an Asian strain of Alexandrium catenella Appied and Enviromental Microbiology Vol 62 (11): 4199-4201 24 http://www.redtide.whoi.edu/hab/ 25 http://ioc.unesco.org/hab/default.htm Xin chân thành cảm ơn ! Hà Nội, ngày tháng năm 2005 Xác nhận Viện CNSH Ngời viết báo cáo TS Đặng Diễm Hồng 17 Phụ lục Bảng 1: Các loài Alexandrium có trình tự đoạn gen 18S rADN đà công bố ngân ngân hàng gen Quốc tế đợc sử dụng để phân loại mẫu vi tảo thuộc nhóm Alexandrium Stt 10 11 12 M· sè GENBANK AJ535388 AJ535383 X54946 AY641565 U27498 AB088325 AJ535375 AY883005 AJ535379 AJ535390 AJ535392 AF113935 Tên loài Alexandrium minutum Alexandrium ostenfeldii Alexandrium tamarense Alexandrium leei Alexandrium margaelefii Alexandrium tamiyavanichii Alexandrium affine Alexandrium monilatum Alexandrium sp tamutum Alexandrium taylori Alexandrium cantenella Alexandrium cohorticula Gen m· ho¸ 18S rRNA 18S rRNA 18S rRNA 18S rRNA 18S rRNA 18S rRNA 18S rRNA 18S rRNA 18S rRNA 18S rRNA 18S rRNA 18S rRNA Bảng 2: Các loài Prorocentrum có trình tự đoạn gen 18S rADN đà công bố ngân ngân hàng gen Quốc tế đợc sử dụng để phân loại mÉu vi t¶o thuéc nhãm Prorocentrum Stt Tên loài Prorocentrum lima Prorocentrum maculosum Prorocentrum concavum Prorocentrum micans Prorocentrum minimum Prorocentrum mexicanum Prorocentrum emarginatum M· sè GENBANK Gen m· ho¸ Y16235 Y16236 Y16237 M14649 Y16238 Y16232 Y16239 18S rRNA 18S rRNA 18S rRNA 18S rRNA 18S rRNA 18S rRNA 18S rRNA Bảng 3: Các loài Pseudonitzschia có trình tự đoạn gen 18S rADN đà công bố ngân ngân hàng gen Quốc tế đợc sử dụng để phân loại mẫu vi tảo thuộc nhóm Pseudonitzschia 18 Stt Tên loài 10 11 12 Psedonitzschia pungens Psedonitzschia sp.Hobart5 Psedonitzschia australis Psedonitzschia calliantha Psedonitzschia cf.australis Psedonitzschia cf.subpacifica Psedonitzschia cuspidata Psedonitzschia delicatissima Psedonitzschia fraudulenta Psedonitzschia galaxiae Psedonitzschia micropora Psedonitzschia multiseries M· sè GENBANK AY544769 AY 257851 ay452528 AY 257857 AY 559850 AY257860 AY 257853 AY 257849 AY257840 AY 257850 AY 257847 AY 257844 Gen m· ho¸ ITS1-5,8S-ITS2 ITS1-5,8S-ITS2 ITS1-5,8S-ITS2 ITS1-5,8S-ITS2 ITS1-5,8S-ITS2 ITS1-5,8S-ITS2 ITS1-5,8S-ITS2 ITS1-5,8S-ITS2 ITS1-5,8S-ITS2 ITS1-5,8S-ITS2 ITS1-5,8S-ITS2 ITS1-5,8S-ITS2 I.Trình tự nucleotit mẫu thuộc chi Alexandrium I.1.Tr×nh tù nucleotit cđa mÉu Alexandrium sp (C) TACCACATCTAAGGAAGGCAGCAGGCGCGCAAATTACCCAATCCTAG CACAGGGAGGTAGTGACAAGAAATAACAATACAAGGCATCCATGTCT TGTACTTGGAATGAATGGATATTAAACCTTTCTATAAGTATCAATTGG AGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCCAGCTCCAATAGC GTATATTAAAGTTGTTGCGGTTAAAAAGCTCGTAGTTGGATTTCTGCT GAGGGTGGCTGGTCCGCCCTCTGGGTGAGTATTTGGCACAGCCTGGGC ATTTATCTTGAAAGCACAACTGCACTTGACTGTGTGGTGTGTTATCGA GAACATTTACTTTGAGGAAATCAGAGTGTTTCAAGCAGGTGTTTAGCC TTGAATACATTAGCATGGAATAATACTCAAGACCGTGATTCTTTTTTG TTGGTTTCTAGAATTGAGGTAATGATTAATAGGGATAGTTGGGGGCAT TCGTATTTGATTGTCAGAGGTGAAATTCTTGGATTTGTTAAAGACGGA CTACTGCGAAAGCATTTGCCAAGGATGTTTTCATTGATCAAGAACGAA AGTTAGGGGATCGAAGACGATCAGATACCGTCCTAGTCTTAACCATA AACCATGCCAACTAGAGATTGAAGGTTGTTACTTGTATGACTTCTTCA GCACCCTATGAGAAATCAAAGTGTTTGGGTTCCGGGGGGAGTATGGT CGCAAGGCTGAAACTTAAAGGAATTGACGGAAGGGCACCACCAGGA GTGGAGCCTGCGGCTTAATTTGACTCAACACGGGGAAACTTACCAGG TCCAGACATAATGAGGATTGACAGATTGATAGCTTTTTCTTGATTCTA TGGGTGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTGG TTAATTCCGTTAACGAACGAGACCTTAACCTGCTAAATAGTTACATGT 19 AATTTCGATTATGTGGGCAACTTCTTAGAGGGACTTTGTGTGTATAAT GCAAGGAAGTTTGAGGCAATAACAGGTCTGTGATGCC I.2.Tr×nh tù nucleotit cđa mÉu Alexandrium sp 16 TACCACATCTAAGGAAGGCAGCAGGCGCGCAAATTACCCAATCCTAG CACAGGGAGGTAGTGACAAGAAATAACAATACAAGGCATCCATGTCT TGTACTTGGAATGAATGGATATTAAACCTTTCTATAAGTATCAATTGG AGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCCAGCTCCAATAGC GTATATTAAAGTTGTTGCGGTTAAAAAGCTCGTAGTTGGATTTCTGCT GAGGGTGGCTGGTCCGCCCTCTGGGTGAGTATTTGGCACAGCCTGAGC ATTTATCTTGAAAGCACAACTGCACTTGACTGTGTGGTGTGTTATCGA GAACATTTACTTTGAGGAAATCAGAGTGTTTCAAGCAGGTGTTTAGCC TTGAATACATTAGCATGGAATAATACTCAAGACCGTGATTCTTTTTTG TTGGTTTCTAGAATTGAGGTAATGATTAATAGGGATAGTTGGGGGCAT TCGTATTTGATTGTCAGAGGTGAAATTCTTGGATTTGTTAAAGACGGA CTACTGCGAAAGCATTTGCCAAGGATGTTTTCATTGATCAAGAACGAA AGTTAGGGGATCGAAGACGATCAGATACCGTCCTAGTCTTAACCATA AACCATGCCAACTAGAGATTGAAGGTTGTTACTTGTATGACTTCTTCA GCACCCTATGAGAAATCAAAGTGTTTGGGTTCCGGGGGGAGTATGGT CGCAAGGCTGAAACTTAAAGGAATTGACGGAAGGGCACCACCAGGA GTGGAGCCTGCGGCTTAATTTGACTCAACACGGGGAAACTTACCAGG TCCAGACATAATGAGGATTGACAGATTGATAGCTTTTTCTTGATTCTA TGGGTGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTGG TTAATTCCGTTAACGAACGAGACCTTAACCTGCTAAATAGTTACATGT AATTTCGATTATGTGGGCAACTTCTTAGAGGGACTTTGTGTGTATAAT GCAAGGAAGTTTGAGGCAATAACAGGTCTGTGATGCC I.3 Tr×nh tù nucleotit cđa mÉu Alexandrium sp5 GAGAGGGAGCTTGAGAAATGGCTACCACATCTAAGGAAGGCAGCAGGC GCGCAAATTACCCAATCCTGACACAGGGAGGTAGTGACAAGAAATAAC AATACAAGGCATCCATGTCTTGTACTTGGAATGAATGGATATTAAACCT TTCTATGAGTATCAATTGGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTA ATTCCAGCTCCAATAGCGTATATTAAAGTTGTTGCGGTTAAAAAGCTCG TAGTTGGATTTCTGCTGAGGGTGGCTGGTCCGCCCTCTGGGTGAGTATCT GGCACAGCCTGAGCATTCTTCTTGAAAGCACAACTGCACTTGACTGTGT GGTGTGGTATTGAGAACCTTTACTTTGAGGAAATCAGAGTGTTTCAAGC AGGTGTTTGCCTTGAATACATTAGCATGGAATAATATTATAGGGCCTTG GTTCTATTTTGTTGGTTTCTAGAACTGAGGTAATGATTAATAGGGATAGT TGGGGGCATTCGTATTTAATTGTCAGAGGTGAAATTCTTGGATTTGTTAA AGACGGACTACTGCGAAAGCATTTGCCAAGGATGTTTTCATTGATCAAG AACGAAAGTTAGGGGATCGAAGACGATCAGATACCGTCCTAGTCTTAA CCATAAACCATGCCAACTAGAGATTGGAGGTCGTTATCTCTATGACTTC 20 TTCAGCACCTTATGAGAAATCGAAGTCTTTGGGTTCCGGGGGGAGTATG GTCGCAAGGCTGAAACTTAAAGGAATTGACGGAAGGGCACCACCAGGA GTGGAGCCTGCGGCTTAATTTGACTCAACACGGGGAAACTTACCAGGTC CAGACATAATGAGGATTGACAGATTGATAGCTTTTTCTTGATTCTATGG GTGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTGGTTAAT TCCGTTAACGAACGAGACCTTAACCTGCTAAATAGTTACACGTAATTCC GGTTATGTGGGCAACTTCTTAGAGGGACTTTGTGTGTATAACGCAAGGA AGTTTGAGGCAATAACAGGTCTGTGATGCC II Trình tự nucleotit mẫu thuộc chi Prorocentrum II.1.Tr×nh tù nucleotit cđa mÉu Prorocentrum sp1 TACCACATCTAAGGAAGGCAGCAGGCGCGCAAATTACCCAATCCTGA CACAGGGAGGTAGTGACAAGAAATAACAATACAGGGCATATCTGTCT TGTAATTGGAATGAGTAGAATTTAAATCCCTTTACGAGTACCAATTGG AGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCCAGCTCCAATAGC GTATATTAAAGTTGTTGCGGTTAAAAAGCTCGTAGTTGGATTTCTGCC GAGGACGACCGGTCCGCCCTCTGGGTGAGTATCTGGCTCGGCCTGGG CATCTTCTTGGAGAACGTAGCTGCACTTGACTGTGTGGTGCGGTATCC AGGACTTTTACTTTGAGGAAATTAGAGTGTTTCAAGCAGGCTTACGCC TTGAATACATTAGCATGGAATAATAAGATAGGACCTCGGTTCTATTTT GTTGGTTTCTAGAGCTGAGGTAATGATTAATAGGGATAGTTGGGGGC ATTCGTATTTAACTGTCAGAGGTGAAATTCTTGGATTTGTTAAAGACG GACTACTGCGAAAGCATTTGCCAAGGATGTTTTCATTGATCAAGAACG AAAGTTAGGGGATCGAAGACGATCAGATACCGTCCTAGTCTTAACCA TAAACCATGCCGACTAGAGATTGGAGGTCGTTATCTATACGACTCCTT CAGCACCTTATGAGAAATCAAAGTCTTTGGGTTCCGGGGGGAGTATG GTCGCAAGGCTGAAACTTAAAGGAATTGACGGAAGGGCACCACCAGG AGTGGAGCCTGCGGCTTAATTTGACTCAACACGGGGAAACTTACCAG GTCCAGACATAGTAAGGATTGACAGATTGATAGCTCTTTCTTGATTCT ATGGGTGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTG GTTAATTCCGTTAACGAACGAGACCTTAACCTGCTAAATAGTTACACG TAACTTCGGTTACGTGGGCAACTTCTTAGAGGGACTTTGCGTGTCTAA CGCAAGGAAGTTTGAGGCAATAACAGGTCTGTGATGCC II.2.Tr×nh tù nucleotit cđa mÉu Prorocentrum sp3 TACCACATCTAAGGAAGGCAGCAGGCGCGCAAATTACCCAATCCTGA CACAGGGAGGTAGTGACAAGAAATAACAATACAGGGCATATCTGTCT TGTAATTGGAATGAGTAGAATTTAAATCCCTTTACGAGTACCAATTGG AGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCCAGCTCCAATAGC GTATATTAAAGTTGTTGCGGTTAAAAAGCTCGTAGTTGGATTTCTGCC GAGGACGACCGGTCCGCCCTCTGGGTGAGTATCTGGCTCGGCCTGGG 21 CATCTTCTTGGAGAACGTAGCTGCACTTGACTGTGTGGTGCGGTATCC AGGACTTTTACTTTGAGGAAATTAGAGTGTTTCAAGCAGGCTTACGCC TTGAATACATTAGCATGGAATAATAAGATAGGACCTCGGTTCTATTTT GTTGGTTTCTAGAGCTGAGGTAATGATTAATAGGGATAGTTGGGGGC ATTCGTATTTAACTGTCAGAGGTGAAATTCTTGGATTTGTTAAAGACG GACTACTGCGAAAGCATTTGCCAAGGATGTTTTCATTGATCAAGAACG AAAGTTAGGGGATCGAAGACGATCAGATACCGTCCTAGTCTTAACCA TAAACCATGCCGACTAGAGATTGGAGGTCGTTATCTATACGACTCCTT CAGCACCTTATGAGAAATCAAAGTCTTTGGGTTCCGGGGGGAGTATG GTCGCAAGGCTGAAACTTAAAGGAATTGACGGAAAGGCACCACCAGG AGTGGAGCCTGCGGCTTAATTTGACTCAACACGGGGAAACTTACCAG GTCCAGACATAGTAAGGATTGACAGATTGATAGCTCTTTCTTGATTCT ATGGGTGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTG GTTAATTCCGTTAACGAACGAGACCTTAACCTGCTAAATAGTTACACA TAACTTCGGTTACGTGGGCAACTTCTTAGAGGGACTTTGCGTGTCTAA CGCAAGGAAGTTTGAGGCAATAACAGGTCTGTGATGCC III.Trình tự nucleotit mẫu thuộc chi Pseudonitzschia III.1 Tr×nh tù nucleotit cđa mÉu Pseudonitzschia sp’2 GGATCATTACCACACCGATCCAAGATCAGTCTTCATTGTGAATTGTGCTATCGCGG GCTTGGGTTTGTTTAACCCATCCCGACGCCAACTTAACGCCGAATCGAGCACTAGG ATCGAGCTTCGGCTCCATCTAACGATCTCTCCGGCAAACACCCGGTCGAAAGACTG GGTGCCCAATACGTTTTTACGATTGGTAACTGGAAAGAACCAAATGACCTAAAGC AAAAATGCAGTGGTTTTGGTGTCGTGTCCCTCTCGGGCCGACGCCACCCTGTACAT TATACCTAATACATTACAACTTTCAGCGGTGGATGTCTAGGTTCCCACAACGATGA AGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGCGAATTGCAAGACCTCGTGAATCATTA AGATTTTGAACGCACATTGCGCTTTCGGGATTTTCCCGGTAGCATGCTTGTCTGAG TGTCTGTGGATCCCACTCAGCGCTGTTGCCTTTCTTTTGGCATCGGCTGCTGGTTGT TTTGGCTTTGACCGCCTCGTTTGCGGTCTCTGCTCAAGTTCTACGGTTACCGTACGT GCATAGATCTAGAACCCTCAACCTGTCTTGCTCAAGACGGCGTTGACACTCTTGTC TATCTCTGGTAGAAGTTGGCTCGTTCCGATTTTTTTCTAGAGTTTGTTTAGGAGTCG TCATGCTAAAGCCGTTTCTGTAGCTTTGTTGGTGGAGCGGACCTAGGTCTAGCTAT GGCATGTAATGTCGTGGCTATCCAATTCCGGATCTCAGATCAAGCAAGAGGACCC GCCGAATTTAAGCATATAATTAAGCGGAGGAAAAGAAACTAACTAGGATTCCCTC AGTAACGGCGGTAGAAGCGGGACTAGCTCAGGATGTGAATCTGCG III.2 Tr×nh tù nucleotit cđa mÉu Pseudonitzschia sp (G3) GGATCATTACCACACCGATCCAAGATCAGTCTTCATTGTGAATCTGATTGCACTGG TCTAGTATTTTTACTAAACCGCTGCCGTCAAACTTAAACTTGCAACGCGATGATTA ATTCCGCCTTGCTGCCATTCTTCACGATTGGTAACTGGAAAGAACCAAATGACCTA AAGCAAAAATGATGCAGTGTTTCGGAGCGCTGAGCGGGCGTCTTAAGTATTAGAT GCATACCAAACCGACTCTATTGCTGGCACTGCACATTACACCTAATACATTACAAC TTTCAGCGGTGGATGTCTAGGTTCCCACAACGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGA 22 TACGTAATGCGAATTGCAAGACCTCGTGAATCATCAAGATTTTGAACGCACATTGC GCTTTCGGGTATTCCCGGTAGCATGCTTGTCTGAGTGTCTGTGGATCCCACTCAGC GCTGGCTTCGTGCTGGCTGCTGGTATTTTGGCCGTGACTGAATTTGTTTAGTCTCGG CTTAAGTTTTACGTTAAGTACGTGCATAGATCTAGAAAGCTCTGCCCGTTTAGTTA AAAACACGGCGTTGACACTCTTGTCTATCTCTGGTAGGTTTATTCGACTGGAGTTT GCTACGAGTTGTCTATAGCTGTTTTGAAACTACTGGAATGAGCGCTTGTAGATCTA ACTAGCTGGAAACAGTTAGTTATACAATTCCGGATCTCAGATCAAGCAAGAGGAC CCGCCGAATTTAAGCATATAATTAAGCGGAGGAAAAGAAACTAACTAGGATTCCC TCAGTAACGGCGAGTGAAGCGGGACTAGCTCAGGATGTGAATCTGCG 23 ...Phần I: Mở đầu Cho tới nay, cha có số thống kê đầy đủ thiệt hại tảo độc gây phạm vi toàn cầu Tuy nhiên, nở hoa tảo độc hại thực mối đe do? ?? thiệt hại kinh tế mà gây ô nhiễm môi trờng,... Kết thảo luận III.1 Tách chiết ADN tổng số Kết tách chiết ADN tổng số đợc trình bày hình M 4 H×nh ADN tổng số mẫu tảo độc, hại GiếngM: Marker 1Kb Plus DNA Ladder GiÕng 1, 2, 3: ADN tæng sè cña Alexandrium... mexicanum P.micans Pseudonitzschia cf australis Pseudonitzschia pungens IV KÕt luËn Tõ kết nghiên cứu đà đạt đợc, rút số kết luận sau: Đà tách chiết tinh đợc ADN tổng số mẫu vi tảo độc, hại là: Prorocentrum