Tiểu luận kỹ thuật gen di truyền
Tiểu luận kỹ thuật gen di truyền Mục lục Tổng quan bệnh teo DMD Triệu chứng bệnh Chẩn đoán • DNA test • Muscular biopsy test • Prenatal test Liệu pháp gen: • Liệu pháp truyền thống • Liệu pháp • Hướng 1: mini- micro- dydstrophin • Hướng 2: exon skipping Khái quát liệu pháp gen điều trị DMD Tài liệu tham khảo Trang 4-5 5 6-14 7 11 14 15 Tiểu luận kỹ thuật gen di truyền Tổng quan: Bệnh teo Duchenne muscular dystrophy Duchenne muscular dystrophy (DMD) dạng bệnh teo cơ, liên quan tới việc biểu tính trạng lặn nhiễm sắc thể giới tính X Người mặc chứng bệnh thoái hóa nhanh, chí khả lại chết; tỷ lệ mắc 1/3500 nam, góp phần lớn tầm nguy hiểm tất dạng teo Hầu hết nam có biểu bệnh, nữ thường người mang yếu tố gây bệnh, trừ trường hợp nữ có cha bị bệnh mẹ mang bệnh Sự rối loạn có đột biến gen DMD, định vị nhiễm sắc thể giới tính X (Xp21) thể gen người Cho tới nay, gen DMD coi gen lớn số 30,000 gen, mã hóa cho loại protein người; bao gồm 79 exons _chứa 2,6 triệu bp Với kích thước lớn thế, gen có xu hướng xếp lại tái tổ hợp, dễ gây đột biến Phần lớn đột biến một vài exon ( 60%); nhiên, lặp đoạn (6%), đảo đoạn đột biến điểm tìm thấy Khi xảy đột biến, phá vỡ khung đọc phiên mã dystrophin dẫn tới việc kết thúc sớm trình tổng hợp protein Dystrophin thành phần cấu trúc vô quan trọng tế bào cơ, giúp liên kết protein từ phía bên khung xương sợ với phức hợp màng sợi Nếu vắng mặt dystrophin cho phép canxi thâm nhập mức qua màng tế bào, gây nguy hiểm cho sợi thủng màng, vai trò tiềm protein truyền tín hiệu, nhiều triệu chứng bệnh phát có nguồn gốc từ hai hướng Sự yếu cách nhanh chóng dẫn tới việc tất bệnh nhân mắc DMD phải ngồi xe lăn trước 12 tuổi chết tuổi 20 Hình 1: Vai trò dystrophin Tiểu luận kỹ thuật gen di truyền Triệu chứng Triệu chứng DMD, hay rối loạn thần kinh nhanh chóng, yếu cơ, kèm với nhiễm độc cơ, thần kinh chủ động xương chậu, xương mác, diễn tiến tới thuộc vùng vai cổ, lan xuống tay hô hấp Các triệu chứng xuất từ năm đầu trẻ: • • • • • Trẻ bắt đầu bị sẩy chân, vấp ngã, lắc lư, gặp khó khăn lên cầu thang ngón chân (gót chân không nện xuống ,một đáp ứng bù lại thể duỗi đầu gối bị yếu ) Mệt mỏi Gặp khó khăn với kỹ liên hoàn ( chạy, nhảy lò cò, nhảy cao ) Khả học Mắc chứng bắp chân phình to, mô bị phá huỷ thay mỡ Hình 2: Mô bệnh học thuộc cẳng chân, từ người bị mắc bệnh Dunchenne tử vong Quan sát cho thấy nhiều sợi bị thay tế bào mỡ Tiểu luận kỹ thuật gen di truyền Chẩn đoán A DNA test: Việc kiểm tra phân tích DNA xác định loại đột biến exon bị ảnh hưởng Theo trang Leiden Muscular Dystrophy( hiệu đính tháng 10,2008): Dựa kết đảm bảo xác định loại đột biến gen DMD_ nguyên nhân gây bệnh teo Dunchenne [xem Table, White & den Dunnen 2006, Aartsma-Rus 2006] kỹ thuật dựa vật liệu DNA tốt để phát thay đổi mức phân tử thể bệnh nhân sau: Kiểm tra đoạn- lặp đoạn: • Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA): Điểm mạnh MLPA (Schwatz & Duno 2003) chỗ nhờ phương pháp người ta kiểm tra tất 79 exon gen DMD, đánh giá exon có khả bị đột biến hay lặp đoạn • Multiplex PCR (Beggs & Chamberlain kits): phương pháp kiểm tra 18 tổng số 79 exon không xác định đột biến lặp đoạn 5-7% bệnh nhân (den Dunnen 1989, White & den Dunnen 2006) Ngoài ra, kỹ thuật truyền thống, Southern blotting, cần thiết để xác định giới hạn xác vùng tái xếp gen, lọc đột biến lặp đoạn Việc tìm kiếm giới hạn vô quan trọng muốn phân biệt khung đọc mở khung đọc bị thay đổi đột biến • Các phương pháp khác : số phương pháp định lượng khác sử dụng rải rác, qPCR (quantitative-PCR - e.g Ashton 2008); Multiplex-Amplifiable Probe Hybridisation - (MAPH - White 2002) phương pháp đơn giản có tính chọn lọc cao, đòi hỏi hàm lượng DNA mẫu nhiều thao tác tỉ mỉ FISH, CA_ phương pháp phân tích đánh dấu lặp qPCR đặc hiệu exon công cụ có giá trị để xác nhận Tiểu luận kỹ thuật gen di truyền vùng tái xếp biết thể người mang yếu tố gây bệnh lại không hiệu muốn kiểm tra bệnh nhân trực tiếp Kiểm tra đột biến điểm: Nhiều nghiên cứu cho việc kiểm tra đột biến điểm dựa vật liệu RNA kỹ thuật mạnh để phát thay đổi hay lặp đoạn có hại exon gen DMD Bằng cách nhân vùng mang mã trọn vẹn DMD từ khuôn RNA, tất đột biến gây ngắn cụt bất lợi giải quyết, bao gồm trình tự RNA-splicing Phương pháp Protein Truncation Test (PTT) cải thiện tỏ hiệu quả, chưa phải cách đơn giản Hơn nữa, với mẫu RNA lấy sinh tiết từ lúc cho kết quả, với mẫu RNA từ tế bào lympho khó tiến hành (Tuffery-Giraud 2004) Đoạn cDNA có sau RT-PCR đem giải trình tự để xác định có mặt loại đột biến (Hamed 2006, xem Primers for DMD RNA RT-PCR) B Muscle biopsy test: Nếu kiểm tra DNA thất bại việc phát đột biến, việc thử sinh tiết cần tiến hành Chiết tách lấy lượng mẫu nhỏ mô đem nhuộm nhằm phát dystrophin Sự vắng mặt hoàn toàn loại protein người mắc bệnh C Prenatal tests: (Các kiểm tra mang thai) Nếu người bố mẹ người mang nhân tố gây bệnh (carrier), mối nguy hiểm tiềm tàng cho đứa trẻ Các test tiến hành suốt thời kỳ mang thai, nhằm cố gắng phát thai bị ảnh hưởng Tiểu luận kỹ thuật gen di truyền Hình 3: Sự di truyền bệnh DMD đến hệ sau mẹ người mang yếu tố gây bệnh (carrier) Liệu pháp gen A Liệu pháp gen truyền thống : Kích cỡ gen DMD mã hóa cho dystrophin thách thức ngặt ngèo nhà nghiên cứu liệu pháp gen chữa trị bệnh teo Dunchenne Nhằm thay gen dystrophin bị khiếm khuyết, người ta đưa cấu trúc cDNA vào nhân tế bào cơ, biểu điều hòa cách thích hợp Vì thế, để chuyển giao đoạn cDNA dystrophin 14kb ( với 11,5 kb mang mã), cần tới vecto có lực lớn Những vecto hệ tổng hợp từ virus vùng tuyến (adenoviral) có kích thước lên tới 8kb song nhỏ Sau này, nhiều vecto có sức chứa lớn ( 28kb _ loại bỏ hết gen virus) bỏ qua giới hạn này, làm giảm đáp ứng miễn dịch thể chủ nâng cao mức biểu chuyển gen tế bào Tuy nhiên, có hai vấn đề mà nhà nghiên cứu cần phải vượt qua trước áp dụng thành liệu pháp chữa trị rộng rãi : là, chúng lớn nên khó qua phức hợp màng ( extracellular matrix: tế bào lớp mỏng , gọi basal lamina, chứa collagen, elastin fibronectin; bao quanh sợi hoạt động màng lọc hay rào chắn có tính chọn lọc tế bào) Hai là, nhiều thụ thể tương thích với adenoviral bề mặt sợi Tương phản với vecto adenoviral, vecto có nguồn gốc từ virus herpes simplex type-1 (HSV-1) tự chứa đoạn cài lớn Loại vecto tỏ đạt mức Tiểu luận kỹ thuật gen di truyền độ chuyển gen cao phòng thí nghiệm, nhưng, giống adenoviral vecto, chúng tìm thấy tế bào sinh Ngoài ra, tính độc hại virus miễn dịch HSV-1 cản trở biểu gen dài hạn Kích thước mảnh cDNA dystrophin vấn đề lớn làm việc với vector plasmid DNA nguồn gốc từ virus chúng chứa đoạn cài lớn Những vecto tổng hợp nhân tạo không lây lan, thích hợp để dùng thử nghiệm Tuy nhiên, đường chuyển gen không hiệu mô cơ, hình thành phân tử lipid Để làm tăng hiệu suất chuyển gen, cần tới thao tác : xung điện, vi bong bong sóng siêu âm… B Liệu pháp gen mới: Một vài cách tiếp cận liệu pháp gen cho bệnh DMD nghiên cứu phát triển, song song với cách truyền thống Việc sử dụng mạch đôi DNA chuỗi oligonucleotide RNA nhằm sửa chữa lại đoạn gen bị hỏng nhờ vào máy sửa sai DNA tế bào nghiên cứu phòng thí nghiệm , mở khám phá đầy hứa hẹn cho bệnh quái ác Con đường cho phép sửa chữa đột biến điểm exon 23 gen dystrophin chuột intron gen CXMD loài chó vàng Phương pháp chưa hiệu thể người phụ thuộc nhiều vào tốc độ sửa sai tế bào chủ Tuy nhiên, tỏ mạnh tác động bền bỉ, tích lũy lâu dài Một lựa chọn khác điều trị aminoglycoside ( nhóm chất kháng sinh có tác dụng ức chế việc tổng hợp protein vi khuẩn đặc biệt VK gram âm ), với cố gắng ngăn chặn ba kết thúc sớm _ nguyên nhân gây DMD Ví dụ, hoạt chất gentamicin phục hồi lại biểu dystrophin chức xương chuột mdx Sau đó, vài thử nghiệm người với loại thuốc truyền thống tiến hành báo cáo hoàn thiện, nhiên không thành công so với thử nghiệm chuột Vì cần có nghiên cứu sâu để đánh giá lại tính khả thi phương pháp Hướng 1: mini- micro- dystrophin Tiểu luận kỹ thuật gen di truyền • Giảm kích thước đoạn gen chuyển mã hóa dystrophin Một loạt đoạn bị dystrophin nguyên nhân gây triệu chứng bệnh lý nhẹ thể bệnh nhân BMD Do vậy, phần lớn gen không quan trọng với chức Để thiết lập đồ vùng cần thiết cho hoạt tính dystrophin, chuột mdx biến đổi để bị vài chi tiết khác bốn domain dystrophin Những đoạn bị domain N-terminal có liên quan đến kiểu hình bệnh lý trên, chứng tỏ vùng quan trọng chưa phải thiết yếu cho liên kết với actin cytoskeleton Ngược lại, việc xóa domain giàu cysteine gây triệu chứng teo mạnh, nguyên nhân phá hủy phức hợp dystrophinglycoprotein Domain C-terminal không cần cho gắn kết phức hợp Cuối domain nối trung tâm, xóa vài đoạn domain này, cấu trúc cần thiết số lượng đoạn lặp lại giảm xuống cách đáng kể Tuy nhiên, thuộc tính định vị đoạn lặp diện,hình dạng vùng kết nối có tính cốt yếu Một cấu trúc mini 6.2kb (∆H2–R19) chứa đoạn lặp vùng nối 1,3,4 thiết kế để bắt chước exon 17 Người ta nhận hoàn toàn vận hành: chuột mdx chuyển gen mang cấu trúc biểu hình thái không bị teo hoạt động bình thường Một cấu trúc dystrophin mini khác cải thiện bệnh lý teo chuột mdx Nhiều nghiên cứu đoạn lặp vùng nối đủ khả cung cấp độ dài cần thiết cho domain Sẽ khả thi muốn rút ngắn cấu trúc micro (3.6–4.2 kb), thích hợp với tế bào cơ, chuột Cấu trúc nhỏ hiệu (∆R4–R23) có 3,6kb, chứa đoạn lặp vùng nối 1,2,4 • Chuyển gen nhờ vectơ rAAV : bên cạnh việc giúp thêm hiểu biết đại phân tử protein dystrophin, đồ domain cung cấp cấu trúc gen mang mã mà với nó, vấn đề lâu liên quan đến lực chứa có giới hạn vecto chuyển gen giải Nói riêng việc sử dụng vectow rAAv để chuyển gen khả thi Các cấu trúc mini- micro- dystrophin khác chuyển vào vectow rAAV type-2 kiểm nghiệm lại chuột mdx Các nghiên cứu cho kết vecto rAAV chuyển gen chứa 4,5 hay đoạn lặp liên kết với vùng nối phương thức hiệu điều trị nhiều triệu chứng DMD Nhìn chung, có biểu rõ ràng mini- micro-dystrophin, với định vị xác màng sợi phức hợp glycoprotein-dystrophin phục hồi lại Những tác động liệu pháp xác định nhiều thông số sinh lý như: đường kính sợi cơ, tế bào cơ, độ giảm tính nguyên vẹn màng mức độ hoại tử Tiểu luận kỹ thuật gen di truyền Tuy nhiên, đáp ứng miễn dịch thể chống lại rAAV lại mạnh hơn, quan sát thấy bị teo so với khỏe mạnh bình thường Điều dễ dẫn tới viêm nhiễm môi trường quanh mdx tác động kháng nguyên tế bào (APCs), hoạt hóa tế bào lympho T chống lại sản phẩm chuyển gen, phá hủy sợi Dù vậy, sau kháng nguyên NEO lại giải phóng từ sợi bị teo, hoạt động nhờ nguyên bào tái sinh sợi Để tối thiểu hóa đáp ứng miễn dịch này, cần tới thuốc ức chế miễn dịch để đình hoạt động APCs, bảo vệ sợi Hình 4: Mô hình domain cấu trúc phân tử dystrophin thể người, becker mini- micro-dystrophin, ultrophin • Phân tử dystrophin có chiều dài đầy đủ bao gồm domain: N-terminal (đỏ) liên kết với F-actin, domain giàu cystein (xanh cây) gắn với β-dystroglycan (β-DG) vùng C-terminal (vàng) liên kết với dystrobrevins syntrophin Domain trung tâm (xanh da trời) chứa 24 spectrin_ tương tự đoạn lặp (R1-R24) đoạn nối (H1H4) • Trong cấu trúc mini-dystrophin, domain nối bị cắt bỏ bớt vài đoạn lặp đoạn nối Lưu ý cấu trúc chuyển vào vecto rAAv không chứa domain C-terminal • Phân tử ultrophin bao gồm domain N-terminal liên kết với actin, domain trung tâm ( thiếu vài đoạn lặp 15-19 vùng nối), domain C-terminal lại gắn với phức hợp dystrophin- protein Tiểu luận kỹ thuật gen di truyền Hình 5: Dùng vecto adeno-associated viral (rAAV) tái tổ hợp dường phương án tốt để chuyển gen vào tế bào cơ,mặc dù giới hạn đoạn cài có kb.Nó có khả mang lại biểu gen dài hạn,do hình thành monomer EPISOME bền Hơn nữa, nhiều hiệu chuyển gen đáng ý đạt mô trưởng thành, đưa lại biểu mạnh thụ thể AAV type Quan trọng nhất,mảnh rAAV đủ nhỏ để vượt qua phức hợp màng cách dễ dàng Gen đích, ví dụ mini- hay microdystrophins cài vào trình tự AAV inverted terminal repeat (ITR),dưới điều khiển promoter mong muốn (vd,CMV,MCK CK6) • Triển vọng: Cấu trúc micro- mini- dystrophin đạt hiệu với chuột mdx phải xem xét thể người Những yêu cầu tính tối thiểu protein dystrophin người domain thiết yếu khác so với chuột Nhưng, hướng mở câu hỏi liệu cấu trúc khôi phục lại chức ngăn chặn nguy hiểm cho không, thể người phân tử dystrophin lớn 10 Tiểu luận kỹ thuật gen di truyền Hướng 2: “Bỏ qua” exon gắn với mạch antisense Những triệu chứng bệnh lý BMD ( dạng teo nguy hiểm so với DMD ) xuất phát từ nguyên nhân đột biến đoạn lớn đoạn vô nghĩa, làm nảy sinh ý tưởng liệu pháp gen : “bỏ qua” exon trình cắt nối phân tử pre-mRNA, mở rộng vùng bị gen DMD, nhờ giống với kiểu khiếm khuyết nội khung đọc BMD, thay xảy phiên mã kết thúc sớm trước Hình 6: Giản đồ minh họa cho hướng “bỏ qua exon” a Trong thể bệnh nhân DMD với đột biến exon từ 45-54, phiên mã khung dẫn đến exon 44 nối với exon 55 Khi khung đọc dịch chuyển, ba kết thúc nằm exon 55 nên trình tổng hợp dystrophin kết thúc sớm b Liệu pháp: sử dụng mạch antisense oligonucleotide (AON) liên kết vào exon 44 Như vậy, trình phiên mã quay trở lại khung đọc 11 ( cho dù bị đoạn lớn hơn) triệu chứng bệnh giảm bớt, gần với dạng BMD Tiểu luận kỹ thuật gen di truyền Bằng chứng cho liệu pháp gen “bỏ qua exon” tế bào bệnh nhân DMD từ nghiên cứu nhắm tới exon 46 Đột biến exon 45 (~7%) dạng gây bệnh DMD phổ biến Phương pháp bỏ qua exon 46 nhờ AON đặc hiệu tiến hành bệnh nhân DMD bị exon 45, với hiệu “bỏ qua” với 15% khung đọc phục hồi việc tổng hợp dystrophin đạt tới 75% ống Hơn nữa, mức độ dystrophin hình thành đáng kể cho thấy bám dính protein Một đánh giá cho hàng loạt loại đột biến gây bệnh DMD việc “ bỏ qua” exon liệu pháp gen hiệu cho nhiều dạng đột biến khác Ví dụ, “ bỏ qua” exon 51, phục hồi khung đọc bệnh nhân bị exon 45-50, 47-50, 48-50, 49-50, 50, 52 52-63, mà số bệnh nhân chiếm tới 17,5% tổng số người mắc DMD 12 Tiểu luận kỹ thuật gen di truyền • Triển vọng : Mặc dù phương pháp đặc hiệu điểm mạnh quan trọng so với liệu pháp truyền thống sửa chữa, phục hồi hầu hết dạng dystrophin, mà trì trình điều hòa gen tế bào ban đầu Hơn nữa, mảnh AON nhỏ, tính đặc hiệu cao, dễ thiết kế tác nhân điều trị an toàn Tuy nhiên cần nhiều thí nghiệm để tối ưu phương pháp Hình 8: RT-PCR cho vùng exon mở rộng 43-55, cho kết ống chưa điều trị, hầu hết trình phiên mã rơi khung đọc chứa exon 44 (lane 2) xử lý AON 90% phiên mã khung thiếu exon 44 (lane 3) 13 Tiểu luận kỹ thuật gen di truyền Hình 9: liệu pháp dẫn tới tổng hợp dystrophin thực phòng thí nghiệm Điều kiểm chứng phương pháp phân tích miễn dịch sinh hóa tiến hành sợi thao tác western blot _ phân tích mẫu protein Hình 10: Dystrophin tập trung màng ngày, tích lũy dần tới ngày Không có phân tử dystrophin mẫu chưa qua xử lý (NT) Phân tử tạo thành ngắn dystrophin nguyên lấy từ mẫu HC Khái quát đường liệu pháp gen chữa trị bệnh teo Dunchenne muscular dystrophy 14 Tiểu luận kỹ thuật gen di truyền Tài liệu tham khảo 15 Tiểu luận kỹ thuật gen di truyền Duchenne muscular dystrophy From Wikipedia- http://en.wikipedia.org/wiki/Duchenne_muscular_dystrophy ADVANCES IN DUCHENNE MUSCULAR DYSTROPHY GENE THERAPY Judith C.T.van Deutekom and Gert-Jan B.van Ommen From Patient UK- http://www.patient.co.uk/health/Duchenne-MuscularDystrophy.htm Leiden Muscular Dystrophy pages 16 [...]... từ mẫu HC Khái quát các con đường trong liệu pháp gen chữa trị bệnh teo cơ Dunchenne muscular dystrophy 14 Tiểu luận kỹ thuật gen di truyền Tài liệu tham khảo 15 Tiểu luận kỹ thuật gen di truyền 1 Duchenne muscular dystrophy From Wikipedia- http://en.wikipedia.org/wiki/Duchenne_muscular_dystrophy 2 ADVANCES IN DUCHENNE MUSCULAR DYSTROPHY GENE THERAPY Judith C.T.van Deutekom and Gert-Jan B.van Ommen 3... liệu pháp gen hiệu quả cho nhiều dạng đột biến khác nhau Ví dụ, nếu “ bỏ qua” exon 51, có thể phục hồi khung đọc ở những bệnh nhân bị mất các exon 45-50, 47-50, 48-50, 49-50, 50, 52 hoặc 52-63, mà số bệnh nhân này chiếm tới 17,5% tổng số người mắc DMD 12 Tiểu luận kỹ thuật gen di truyền • Triển vọng : Mặc dù phương pháp này khá đặc hiệu nhưng điểm mạnh quan trọng nhất của nó so với các liệu pháp truyền. . .Tiểu luận kỹ thuật gen di truyền Hướng đi mới 2: “Bỏ qua” exon được gắn với mạch antisense Những triệu chứng bệnh lý BMD ( dạng teo cơ ít nguy hiểm hơn so với DMD ) xuất phát từ nguyên nhân do đột biến mất những đoạn lớn hoặc những đoạn vô nghĩa, đã làm nảy sinh ý tưởng mới về liệu pháp gen : “bỏ qua” một exon trong quá trình cắt nối phân tử pre-mRNA, mở rộng vùng bị mất trên gen DMD, nhờ... exon 44 Như vậy, quá trình phiên mã có thể quay trở lại đúng khung đọc 11 ( cho dù bị mất một đoạn lớn hơn) và các triệu chứng bệnh được giảm bớt, về gần với dạng BMD Tiểu luận kỹ thuật gen di truyền Bằng chứng đầu tiên cho liệu pháp gen “bỏ qua exon” này trên tế bào cơ của các bệnh nhân DMD là từ một nghiên cứu nhắm tới exon 46 Đột biến chỉ mất exon 45 (~7%) là dạng gây bệnh DMD phổ biến nhất Phương... được điều trị, hầu hết quá trình phiên mã rơi ra ngoài khung đọc và vẫn chứa exon 44 (lane 2) trong khi nếu được xử lý bằng AON thì 90% sự phiên mã trong khung và thiếu exon 44 (lane 3) 13 Tiểu luận kỹ thuật gen di truyền Hình 9: liệu pháp dẫn tới sự tổng hợp dystrophin thực sự trong phòng thí nghiệm Điều này được kiểm chứng bằng các phương pháp phân tích miễn dịch sinh hóa tiến hành trên các sợi cơ... phương pháp này khá đặc hiệu nhưng điểm mạnh quan trọng nhất của nó so với các liệu pháp truyền thống là nó có thể sửa chữa, phục hồi hầu hết các dạng của dystrophin, mà vẫn duy trì được quá trình điều hòa gen trên tế bào cơ ban đầu Hơn thế nữa, các mảnh AON khá nhỏ, tính đặc hiệu cao, dễ thiết kế và là tác nhân điều trị an toàn Tuy nhiên vẫn cần nhiều thí nghiệm để tối ưu phương pháp Hình 8: RT-PCR cho ... pháp gen chữa trị bệnh teo Dunchenne muscular dystrophy 14 Tiểu luận kỹ thuật gen di truyền Tài liệu tham khảo 15 Tiểu luận kỹ thuật gen di truyền Duchenne muscular dystrophy From Wikipedia-... bị ảnh hưởng Tiểu luận kỹ thuật gen di truyền Hình 3: Sự di truyền bệnh DMD đến hệ sau mẹ người mang yếu tố gây bệnh (carrier) Liệu pháp gen A Liệu pháp gen truyền thống : Kích cỡ gen DMD mã hóa... dystrophin Tiểu luận kỹ thuật gen di truyền • Giảm kích thước đoạn gen chuyển mã hóa dystrophin Một loạt đoạn bị dystrophin nguyên nhân gây triệu chứng bệnh lý nhẹ thể bệnh nhân BMD Do vậy, phần lớn gen