Phôi sôma

Nuôi cấy phôi sôma • • • • • NỘI DUNG GIỚI THIỆU CHUNG LỊCH SỬ PHÁT TRIỂN SỰ PHÁT SINH PHÔI SOMA NUÔI CẤY PHÔI SOMA ỨNG DỤNG Giới thiệu chung Định nghĩa : Phôi soma phôi hình thành phát triển từ tế bào dinh dưỡng , mà tế bào phân hóa thành cấu trúc lưỡng cực, cực hình thành rễ cực tạo chồi, giống phôi hợp tử Đặc điểm phôi soma • Có tế bào chất đậm đặc, • Nhiều hạt tinh bột lớn • Có hạch nhân lớn ăn màu phẩm nhuộm đậm • Hàm lượng protein RNA cao • Có biểu hoạt tính dehydrogenase cao với thuốc thử tetrazolium SO SÁNH PHÔI HỮU TÍNH VÀ PHÔI VÔ TÍNH • Phôi hữu tính : hình thành phát triển từ tế bào sinh dục : sau thụ tinh đôi xảy ra: tinh trùng thụ tinh với trứng thành lập hợp tử lưỡng bội, loạt phân cắt đẳng nhiễm xảy ra, hợp tử phát triển thành phôi (cây bào tử thực vật ) SO SÁNH PHÔI HỮU TÍNH VÀ PHÔI VÔ TÍNH SO SÁNH PHÔI HỮU TÍNH VÀ PHÔI VÔ TÍNH • Phôi Soma : Phôi soma phôi phát triển từ tế bào dinh dưỡng ,chúng tạo từ tế bào thể thực vật, chúng hành động hợp tử, trải qua trình phát triển cấu trúc phôi SO SÁNH PHÔI HỮU TÍNH VÀ PHÔI VÔ TÍNH Phôi soma Lịch sử phát triển nuôi cấy mô Giai đoạn Giai đoạn Giai đoạn Giai đoạn Sự phát sinh phoi soma Theo Kohlenbach (1978) thể phôi soma xuất nuôi cấy invitro từ nguồn tế bào nhị bội: • Tế bào sinh dưỡng trưởng thành • Các tế bào sinh sản hợp tử • Trục hạ diệp tử diệp phôi hợp tử thông qua phát triển mô sẹo Có kiểu phát sinh phôi invitro • Phát sinh phôi soma bất định • Sự phát sinh đa phôi soma • Sự phát sinh phôi soma cảm ứng NUÔI CẤY PHÔI SOMA Phát sinh phôi từ tế bào soma , trải qua giai đoạn : • Mô thực vật nuôi cấy môi trường có mặt auxin để phát sinh tế bào soma.Khối tế bào soma tăng sinh nhanh theo hướng phản biệt hóa manh tính hữu cực • Khối tế bào soma đưa vào môi trường nuôi cấy môi trường giảm hẳn hay auxin hay có bổ sung cytokinin , tế bào soma kích thích để vào giai đoạn biệt hóa thành phôi soma Các bước nuôi cấy • • • • • • Chọn mẫu cấy Khử trùng mẫu Tách mẫu Môi trường nuôi cấy phôi Điều kiện nuôi cấy phôi Duy trì trình phát sinh phôi đồng • Tái sinh hoàn chỉnh từ phôi soma Chọn mẫu cấy Mẫu : • Tế bào sinh dưỡng trưởng thành • Các tế bào sinh sản tế bào sinh dục • Trục hạ diệp hay tử diệp phôi hợp tử mà không thông qua phát triển từ mô sẹo Khử trùng mẫu Người ta thường sử dụng dung dịch khử trùng thông thường Cahypochlorite , Na-hypochlorite , thủy ngân clorur…Ngoài người ta dụng thêm chất hoạt động bề mặt Tween 80 , teepol , mannoxol… Môi trường nuôi cấy • Phôi tách hoàn toàn tình trạng tự dưỡng • Như môi trường nuôi cấy phôi cần cung cấp đầy dủ chất dinh dưỡng thích hợp để thực khả phát sinh phôi • • • • • • • • Chất vô cơ: Nguồn carbon Nguồn Nitrogen Các chất hữu dịch chiết khác Chất điều hòa sinh trưởng Giá thể: Than hoạt tính pH môi trường Điều kiện nuôi cấy • Ánh sáng • Nhiệt độ Duy trì trình phát sinh phôi đồng : • Biệt hóa đồng kích thích phân chia đồng • Tách tế bào phôi • Sự kiểm soát khí • Kiểm soát sinh trưởng phôi liên tục áp suất thẩm thấu Tái sinh hoàn chỉnh từ phôi soma • Auxin • Làm khô Ứng dụng • Nhân giống sinh dưỡng nhanh kiểu di truyền mong muốn – hữu ích cho kiểu di truyền làm vườn , dòng vụ mùa khô cằn thực vật chuyển gen • Sự phân phối trực tiếp thực vật nuôi cấy mô tới cánh đồng – đặc biệt hữu ích cho loài giao phấn giống dị hợp tử cho loài trồng rừng Ứng dụng • Nhân giống kiểu di truyền giống cha mẹ cho sản xuất hệ lai F1 tổng hợp hệ có giới hạn • Nguồn chất chuyển hóa – hạt dạng lipid cocoa butter, sáp lỏng từ jojoba hay acid linolenic Hạt nhân tạo Merry Christmas & Happy New Year !!!! [...]... chương trình sớm của quá trình phát triển: • Cảm ứng biệt hóa tế bào của những tế bào tiền phôi • Biểu hiện trình tự phát triển ở các tế bào tiền phôi Có 3 kiểu phát sinh phôi invitro • Phát sinh phôi soma bất định • Sự phát sinh đa phôi soma • Sự phát sinh phôi soma do cảm ứng NUÔI CẤY PHÔI SOMA Phát sinh phôi từ tế bào soma , trải qua 2 giai đoạn : • Mô thực vật được nuôi cấy trên môi trường có... đoạn biệt hóa thành phôi soma Các bước nuôi cấy • • • • • • Chọn mẫu cấy Khử trùng mẫu Tách mẫu Môi trường nuôi cấy phôi Điều kiện nuôi cấy phôi Duy trì quá trình phát sinh phôi đồng nhất • Tái sinh cây hoàn chỉnh từ phôi soma Chọn mẫu cấy Mẫu có thể là : • Tế bào sinh dưỡng của cây trưởng thành • Các tế bào sinh sản không phải là tế bào sinh dục • Trục hạ diệp hay tử diệp của phôi hợp tử mà cây con... Sharp và các đồng nghiệp (1980) sự tạo phôi soma có thể theo 2 con đường: • Phôi phát sinh trực tiếp không qua giai đoạn tạo mô sẹo • Sự tạo phôi soma cần có giai đoạn tạo mô sẹo ban đầu Sự phát sinh phoi soma Mỗi tế bào phôi soma đều phát triển qua 3 giai đoạn trước khi trưởng thành: Hình cầu Hình tim Hình thủy lôi Hình cầu Hình tim Hình thủy lôi Sự phát sinh phôi soma Có 2 sự kiện quan trọng quyết... thể: Than hoạt tính pH môi trường Điều kiện nuôi cấy • Ánh sáng • Nhiệt độ Duy trì quá trình phát sinh phôi đồng nhất : • Biệt hóa đồng nhất kích thích sự phân chia đồng nhất • Tách tế bào phôi • Sự kiểm soát khí • Kiểm soát sinh trưởng phôi liên tục bằng áp suất thẩm thấu Tái sinh cây hoàn chỉnh từ phôi soma • Auxin • Làm khô Ứng dụng • Nhân giống sinh dưỡng nhanh các kiểu di truyền mong muốn – hữu... người ta còn dụng thêm các chất hoạt động bề mặt như Tween 80 , teepol , mannoxol… Môi trường nuôi cấy • Phôi được tách ra hoàn toàn đang trong tình trạng tự dưỡng • Như vậy môi trường nuôi cấy phôi cần được cung cấp đầy dủ chất dinh dưỡng thích hợp để có thể thực hiện được khả năng phát sinh phôi • • • • • • • • Chất vô cơ: Nguồn carbon Nguồn Nitrogen Các chất hữu cơ và dịch chiết khác Chất điều ... xảy ra, hợp tử phát triển thành phôi (cây bào tử thực vật ) SO SÁNH PHÔI HỮU TÍNH VÀ PHÔI VÔ TÍNH SO SÁNH PHÔI HỮU TÍNH VÀ PHÔI VÔ TÍNH • Phôi Soma : Phôi soma phôi phát triển từ tế bào dinh... tiền phôi • Biểu trình tự phát triển tế bào tiền phôi Có kiểu phát sinh phôi invitro • Phát sinh phôi soma bất định • Sự phát sinh đa phôi soma • Sự phát sinh phôi soma cảm ứng NUÔI CẤY PHÔI... cấu trúc phôi SO SÁNH PHÔI HỮU TÍNH VÀ PHÔI VÔ TÍNH Phôi soma Lịch sử phát triển nuôi cấy mô Giai đoạn Giai đoạn Giai đoạn Giai đoạn Sự phát sinh phoi soma Theo Kohlenbach (1978) thể phôi soma