MỨC đa bội THỂ của tập đoàn GIỐNG cây có múi ở VIỆT NAM BẰNG PHƯƠNG PHÁP DÒNG CHẢY tế bào

Tạp chí Khoa học 2011:18b 238-247 Trường Đại học Cần Thơ MỨC ĐA BỘI THỂ CỦA TẬP ĐOÀN GIỐNG CÂY CÓ MÚI Ở VIỆT NAM BẰNG PHƯƠNG PHÁP DÒNG CHẢY TẾ BÀO Nguyễn Vũ Linh1, Nguyễn Xuân Phước2, Nguyễn Thị Ngọc Trâm1, Nguyễn Lê Duy Trung1 Trần Nhân Dũng1 ABSTRACT In this article, 107 commonly natural species of four Citrus groups in Vietnam: Citrus maxima; Citrus reticulata; Citrus sinensis; and mixed group Citrus aurantifolia, Citrofortunella microcarpa, Limonia acidissima were collected from Biotechnology Research and Development Institute, Can Tho University They were analysed ploidy level by flow cytometry (FCM) method with Partec Ploidy Analyser PA I, Germany machine Nuclear DNA content was isolated from leaf of samples and measured light scattering in various voltages to determine polyploidy The experiment was done in an effort to investigate polyploidy citrus cultivars in nature which are materials for seedless breeding in future Flow cytometry demonstrated 100% samples being the same diploid Especially, seedless lemon and seedless orange also consisted of diploid chromosome Keywords: citrus, Flow cytometry, Partec Ploidy Analyser PA-I, polyploidy, ploidy level Title: Ploidy of Citrus in Vietnamese citrus collection by flow cytometry TÓM TẮT Đề tài nhằm khảo sát mức độ đa bội thể 107 mẫu tự nhiên thuộc nhóm chính: nhóm bưởi (Citrus maxima); nhóm quýt (Citrus reticulata); nhóm cam (Citrus sinensis); nhóm chanh (Citrus aurantifolia), hạnh (Citrofortunella microcarpa), cần thăng (Limonia acidissima) tập đoàn có múi Việt Nam trồng Viện Nghiên cứu Phát triển Công nghệ Sinh học, Đại học Cần Thơ Thí nghiệm thực phương pháp phân tích dòng chảy tế bào (flow cytometry) sử dụng máy đo đa bội thể Partec Ploidy Analyser PA-I, Đức Tiến hành ly trích nội dung DNA nhân mẫu cần khảo sát đo khả tán xạ ánh sáng hiệu điện khác để xác định nhiễm sắc thể chúng Kết cho thấy 100% khảo sát, mang nhiễm sắc thể lưỡng bội (2n), dạng đa bội Đặc biệt, chanh cam không hạt mang nhiễm sắc thể lưỡng bội Từ khóa: có múi, dòng chảy tế bào, máy đo đa bội thể, mức đa bội, thể đa bội ĐẶT VẤN ĐỀ Trái có múi mặt hàng ăn trái ưa chuộng nước mà nước Các giống có múi trồng phổ biến đem lại nguồn thu nhập cho nông dân, như: cam Bố Hạ, cam xã Đoài, Vân Du, cam sành, bưởi Năm Roi, quít đường Bến Tre, quýt hồng Đồng Tháp… Tuy nhiên, nguồn giống có nhược điểm chung nhiều hạt, tính trạng có hạt làm giảm giá trị thương mại ngành công nghiệp có múi Vì vậy, việc tạo giống Viện Nghiên cứu phát triển Công Nghệ Sinh Học, Trường Đại học Cần Thơ Khoa Khoa học Tự nhiên, Trường Đại học Cần Thơ 238 Tạp chí Khoa học 2011:18b 238-247 Trường Đại học Cần Thơ có múi không hạt mục tiêu quan trọng đặt cho công tác tạo giống Chiến lược đặt tìm nguồn giống có múi mang thể đa bội có sẵn tự nhiên làm nguồn nguyên liệu cho việc lai tạo giống không hạt sau Trước đây, để phát giống đa bội, người ta sử dụng phương pháp đếm nhiễm sắc thể Phương pháp tỏ tốn thời gian, khó nhọc thiếu xác mà quy trình thực lại không đồng cho loại khác (Martens Reisch, 1988; Owen Miller, 1993) Vì phương pháp đời, phương pháp ứng dụng dòng chảy tế bào (flow cytometry-FCM) để phân tích mức độ đa bội thể sinh vật Đây phương pháp đánh giá nhanh, đơn giản hiệu năm gần Leus (2005) sử dụng máy CA-II PAS-III (Partec, Đức) để phân tích mức bội thể phân loại 339 giống hoa hồng (Rosa sp.) vườn thực vật Bộ môn Di truyền Chọn giống, Đại học Ghent (Bỉ) An et al (2009) tiến hành lai khác loài Citrus unshiu với Citrus sinensis kĩ thuật dung hợp tế bào trần Phương pháp FCM tỏ hiệu dùng để phân tích mức độ đa bội thể sản phẩm lai, kết thu 15 tổng số 102 lai tứ bội thể Và nguồn giống tứ bội (4n) sử dụng cho việc lai tạo tam bội (3n) không hạt Hiện tập đoàn giống có múi Việt Nam đạt chất lượng tốt phong phú Những nghiên cứu đặc tính hình thái, sinh lý gen chúng thực hiện, nhiên việc nghiên cứu mức độ đa bội thể tập đoàn bỏ ngỏ Vì việc thực “Khảo sát mức độ đa bội thể tập đoàn giống có múi Việt Nam phương pháp dòng chảy tế bào” nhằm xác định mức đa bội thể tập đoàn giống Trên sở tìm nguồn đa bội thể có múi có sẵn tự nhiên, nhằm hỗ trợ cho nghiên cứu sau việc tạo giống có múi không hạt PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Phương tiện nghiên cứu Vật liệu: Trong nghiên cứu sử dụng 107 mẫu bao gồm 38 mẫu bưởi (Citrus maxima), 21 mẫu quýt (Citrus reticulata), 34 mẫu cam (Citrus sinensis) 14 mẫu thuộc nhóm chanh (Citrus aurantifolia), hạnh (Citrofortunella microcarpa), cần thăng (Limonia acidissima) Viện Nghiên cứu Phát triển Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Cần Thơ cung cấp 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp thu mẫu Trên sở tập đoàn giống có múi thu thập từ nhiều tỉnh thành khác nước trồng chăm sóc Viện Nghiên cứu Phát triển Công nghệ Sinh học, đề tài chọn khoảng 100 giống, giống thu từ 3-4 mẫu non nhiều vị trí khác nhau, khoảng từ 20-30 ngày tuổi, bệnh 2.2.2 Phương pháp trích nhuộm nội dung DNA nhân từ - Lau mẫu cồn 700 239 Tạp chí Khoa học 2011:18b 238-247 Trường Đại học Cần Thơ - Lấy khoảng 0,5 cm2 mẫu cho vào đĩa petri, cho 0,5 ml dung dịch nhuộm CyStain UV ploidy (chứa chất có tác dụng ly trích nội dung DNA nhân tế bào chất nhuộm DAPI (4’ 6-diamidino-2-phenylindole) phát quang đèn UV) - Dùng dao lam cắt nhỏ mẫu thành sợi mảnh - Cho thêm 1,5 ml dung dịch nhuộm Cystain UV ploidy, ủ nhiệt độ phòng khoảng phút - Sau lọc dung dịch mẫu qua màng lọc Partec 30 μm CellTrics (Đức) tiến hành đo mức đa bội thể máy Partec Ploidy Analyser PA-I 2.2.3 Phương pháp thiết lập thông số cho máy Partec Ploidy Analyser PA-I Các mẫu đối chứng nhóm sau: nhóm bưởi (Citrus maxima) mẫu đối chứng bưởi roi SH-P74; nhóm quýt (Citrus reticulata) quýt đường SH-M54; nhóm cam (Citrus sinensis) cam soàn SH-O58; nhóm chanh (Citrus aurantifolia) chanh tàu Các mẫu xác định kính hiển vi mang nhiễm sắc thể lưỡng bội 2n=18 - nhiễm chuẩn chi Citrus Tiếp theo, chúng dùng để thiết lập thông số lưỡng bội cho máy đo đa bội thể Tiến hành đo hiệu chỉnh thông số máy biểu đồ thu có dạng đỉnh cao nhọn, đồng thời cho giá trị trung bình hàm lượng DNA (mean DNA nuclei content) ổn định sau nhiều lần đo (khoảng 10 lần) Giá trị thông số máy thiết lập sau: Đối với nhóm chanh, hạnh, cần thăng  Par Gain : 615.0  Speed : 1.00(µl/s)  Total count : 9500  L-L (Lower-level) : 100  U-L (Upper-level) : 999 Đối với nhóm bưởi, quýt, cam  Par Gain : 690.0  Speed : 1.00 (µl/s)  Total count : 8000-10000  L-L : 80  U-L : 999 Mỗi mẫu khảo sát phân tích lặp lại lần Ghi nhận giá trị trung bình mẫu (C) Sau 10 lần đo, tiến hành rửa máy dung dịch rửa dung dịch loại nhiễm 2.2.4 Phân tích số liệu Mức độ đa bội thể mẫu thí nghiệm tính theo công thức: (C/ C0) x N0 Với: - C: Giá trị trung bình hàm lượng DNA nhân cần khảo sát 240 Tạp chí Khoa học 2011:18b 238-247 Trường Đại học Cần Thơ - C0: Giá trị trung bình hàm lượng DNA nhân đối chứng - N0: Mức đa bội mẫu đối chứng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Phân tích chung Các giá trị nội dung DNA nhân trung bình mẫu đối chứng sau: bưởi roi SH-P74, Mean C0=103,93 (Hình 1A, B); quýt đường SH-M54, Mean C0=101,76 (Hình 2A, B); cam soàn SH-O58, Mean C0=90,09 (Hình 3A, B); chanh tàu, Mean C0=276,99 (Hình 4A, B) 1A 1B Hình 1: Mẫu đối chứng bưởi roi SH-P74 1A Biểu đồ phân tích mức lưỡng bội phương pháp dòng chảy tế bào 1B Bộ NST kính hiển vi Olympus, vật kính 40X 2A 2B Hình 2: Mẫu đối chứng quýt đường SH-M54 2A Biểu đồ phân tích mức lưỡng bội phương pháp dòng chảy tế bào 2B Bộ NST kính hiển vi Olympus, vật kính 40X 241 Tạp chí Khoa học 2011:18b 238-247 Trường Đại học Cần Thơ 3A 3B Hình 3: Mẫu đối chứng cam soàn SH-O58 3A Biểu đồ phân tích mức lưỡng bội phương pháp dòng chảy tế bào 3B Bộ NST kính hiển vi Olympus, vật kính 40X 4A 4B Hình 4: Mẫu đối chứng chanh Tàu 4A Biểu đồ phân tích mức lưỡng bội phương pháp dòng chảy tế bào 4B Bộ NST kính hiển vi Olympus, vật kính 40X Một trăm lẻ bảy mẫu dùng thí nghiệm chia thành nhóm chính: gồm 38 mẫu nhóm bưởi (Citrus maxima), 21 mẫu nhóm quýt (Citrus reticulata), 34 mẫu nhóm cam (Citrus sinensis) 14 mẫu thuộc nhóm chanh (Citrus aurantifolia), hạnh (Citrofortunella microcarpa), cần thăng (Limonia acidissima) Sau phân tích phương pháp dòng chảy tế bào sử dụng máy Partec Ploidy Analyser PA-I, kết xuất dạng biểu đồ Nhìn chung, kết phân tích đa bội thể bốn nhóm cho thấy: tất mẫu khảo sát có mức đa bội lưỡng bội (2n) Một số biểu đồ phân tích xuất đỉnh phụ nhỏ bên cạnh đỉnh vị trí 4n tế bào giai đoạn nhân đôi trình nguyên phân Số liệu phân tích nhóm thống kê thành bảng sau: 242 Tạp chí Khoa học 2011:18b 238-247 Trường Đại học Cần Thơ Bảng 1: Kết phân tích đa bội thể nhóm bưởi (Citrus maxima)* TÊN C C/C0 MỨC ĐA BỘI Bưởi roi SH-P74 Bưởi Bằng Luân SH-P80 Bưởi Bình San đợt SH-P56 Bưởi Bông Đào SH-P63 Bưởi chua đợt SH-P34c Bưởi da xanh Châu SH-P79 Bưởi da xanh Châu SH-P79b Bưởi da xanh Châu SH-P79c Bưởi da xanh Chánh SH-P36 Bưởi da xanh Chánh SH-P36e Bưởi diễn SH-P31e Bưởi diễn SH-P31f Bưởi đỏ SH-P60b Bưởi đỏ SH-P60c Bưởi đỏ SH-P60e Bưởi Đoan Hùng SH-P62c Bưởi Đoàn Làng đợt SH-P69 Bưởi đường cam đợt SH-P77b Bưởi đường núm SH-P16b Bưởi long Sơn đợt SH-P29d Bưởi long Dỷ đợt SH-P71 Bưởi Mono SH-P78 Bưởi ngon SH-P59c Bưởi ngon SH-P59d Bưởi ngon SH-P59e Bưởi Phúc Trạch SH-P82b Bưởi Sửu SH-P46 Bưởi sửu chi đám SH-P46c Bưởi sửu chi đám SH-P46d Bưởi Sửu ĐH SH-P66b Bưởi ta SH-P70 Bưởi ta SH-P70b Bưởi tàu Huế SH-P76 Bưởi Thanh Trà SH-P23e Bưởi Thanh Trà VVT SH-P22 Bưởi Thanh Trà VVT SH-P22b Bưởi Thanh Yên SH-L35 Bưởi Tô Sửu SH-P75b 103,93 (C0) 108,95 106,71 104,43 104,95 106,14 106,79 115,75 105,89 104,76 112,61 112,58 104,80 105,20 108,06 110,88 106,58 106,30 107,17 89,20 105,83 108,89 113,35 109,98 107,21 100,26 110,60 99,98 102,07 112,37 107,50 109,33 108,32 105,54 107,37 103,60 112,69 107,44 1,00 1,05 1,03 1,00 1,01 1,02 1,03 1,11 1,02 1,01 1,08 1,08 1,01 1,01 1,04 1,07 1,03 1,02 1,03 0,86 1,02 1,05 1,09 1,06 1,03 0,96 1,06 0,96 0,98 1,08 1,03 1,05 1,04 1,02 1,03 1,00 1,08 1,03 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n * Mẫu đối chứng phân tích nhóm bưởi mẫu bưởi roi SH-P74có giá trị mean C0=103.93 với thông số Par Gain: 690 243 Tạp chí Khoa học 2011:18b 238-247 Trường Đại học Cần Thơ Bảng 2: Kết phân tích đo đa bội thể nhóm quýt (Citrus reticulata)* TÊN C C/Co MỨC ĐA BỘI Quýt đường SH-M54 Quýt Chu Sa SH-M52 Quýt Chu Sa SH-M52b Quýt Đông Khê SH-M61 Quýt đường BP SH-M7 Quýt đường Đồng Tháp SH-M37 Quýt đường TBT SH-M53 Quýt đường TBT SH-M53b Quýt Gia Luận Cát Bà SH-M60b Quýt Gia Luận Cát Bà SH-M60c Quýt hôi SH-M62 Quýt Ôn Châu SH-M27 Quýt Sapa SH-M49 Quýt ta SH-M50 Quýt ta SH-M50b Quýt Unsiu Quýt vàng Lạng Sơn SH-M57 Quýt vàng Lạng Sơn SH-M57e Quýt vàng SH-M57g Quýt vàng vỏ dòn SH-M58 Quýt Visa Nam Đàn đợt SH2-1244 101,76 (C0) 112,03 112,64 95,01 107,15 105,23 104,47 104,09 90,37 91,52 100,36 92,70 109,55 109,59 106,28 108,26 110,91 97,95 103,32 90,63 1,00 1,10 1,11 0,93 1,05 1,03 1,03 1,02 0,89 0,90 0,99 0,91 1,08 1,08 1,04 1,06 1,09 0,96 1,02 0,89 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 89,13 0,88 2n * Mẫu đối chứng phân tích nhóm quýt mẫu quýt đường SH-M54 có giá trị mean C0=101.76 với thông số Par Gain: 690 Bảng 3: Kết phân tích đa bội thể nhóm cam (Citrus sinensis)* TÊN Cam soàn SH-O58 Cam bù đợt SH-O44b Cam Campuchia đợt SH-O45 Cam chịu nhiệt SH-O43 Cam chịu nhiệt SH-O43b Cam chua da nhăn SH-OS2 Cam chua da nhăn SH-OS2d Cam chua đợt SH-OS1 Cam cười SH-O42a Cam cười SH-O42b Cam cười SH-O42d Cam Đài Loan SH-O57 Cam đường canh đợt SH-M16b Cam không hạt SH-O51 Cam không hạt SH-O51c Cam mật Ô Môn SH-O41 Cam mật Ô Môn SH-O41b 244 C 99,89 (C0) 92,18 90,37 103,60 100,44 103,60 104,30 106,60 105,63 106,57 100,73 102,41 90,09 100,75 102,93 104,85 96,17 C/C0 1,00 0,92 0,90 1,04 1,01 1,04 1,04 1,07 1,06 1,07 1,01 1,03 0,90 1,01 1,03 1,05 0,96 MỨC ĐA BỘI 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n Tạp chí Khoa học 2011:18b 238-247 Cam mật SH-O55 Cam SH-O46b Cam SH-O46c Cam SH-O46d Cam SH-O46e Cam Ponkan SH-M20d Cam Ponkan SH-M20f Cam sành Hà Giang SH-M64c Cam sen SH-O12 Cam sông đợt SH-O13d Cam Valencia SH-O1 Cam Valencia SH-O33 Cam Valencia SH-O33b Cam Vân Du SH-O7c Cam Xã Đoài SH-O47 Cam Xã Đoài SH-O47b Cam Xã Đoài X1 SH-O48c Trường Đại học Cần Thơ 103,16 100,63 108,42 101,85 100,06 108,76 107,06 108,28 107,08 95,36 107,28 104,08 110,80 94,88 97,88 93,57 102,49 1,03 1,01 1,09 1,02 1,00 1,09 1,07 1,08 1,07 0,95 1,07 1,04 1,11 0,95 0,98 0,94 1,03 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n * Mẫu đối chứng phân tích nhóm cam mẫu cam soàn SH-O58 có giá trị mean C0=99,89 với thông số Par Gain: 690 Bảng 4: Kết phân tích đa bội thể nhóm chanh (Citrus aurantifolia), hạnh (Citrofortunella microcarpa), cần thăng (Limonia acidissima)* TÊN Chanh tàu Cam đắng Phủ Quỳ Chanh trúc Thái Lan SH-L16 Chanh trúc Hà Tiên Chanh yên Phủ Quỳ SH-L18 Chanh côn đợt III SH-L15b Chanh giấy TQHN SH-L56 Chanh chấp đợt III SH-L66 Chanh Tứ thời Chanh Volka SH-L27 Chanh không hạt gốc ghép chanh tàu Hạnh trái tròn SH-F42 Hạnh trái tròn SH-F42b Cần thăng C 278,32 262,95 258,89 249,78 257,00 259,03 257,69 275,09 276,61 271,62 257,88 255,64 265,57 265,14 C/C0 1,00 0,94 0,93 0,90 0,92 0,93 0,93 0,99 0,99 0,98 0,93 0,92 0,95 0,95 MỨC ĐA BỘI 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n 2n * Mẫu đối chứng phân tích nhóm chanh, hạnh, cần thăng mẫu chanh tàu có giá trị mean C0=276.32 với thông số Par Gain: 615 Các hình 5, 6, 7, minh hoạ mức đa bội thể mẫu khảo sát thuộc nhóm bưởi, quýt, cam, chanh Các mẫu bưởi da xanh SH-P74, quýt đường SH-M54, cam soàn SH-O58, chanh Tàu có giá trị C/C0 xỉ Tương ứng mang nhiễm sắc thể lưỡng bội mẫu đối chứng 245 Tạp chí Khoa học 2011:18b 238-247 Hình 5: Biểu đồ phân tích mức lưỡng bội phương pháp dòng chảy tế bào Bưởi da xanh Châu SH-P79b, Mean C0=106,79 Hình 7: Biểu đồ phân tích mức lưỡng bội phương pháp dòng chảy tế bào Cam chịu nhiệt SH-O43b, Mean C0=100,44 Trường Đại học Cần Thơ Hình 6: Biểu đồ phân tích mức lưỡng bội phương pháp dòng chảy tế bào Quýt hôi SH-M62, Mean C0=100,36 Hình 8: Biểu đồ phân tích mức lưỡng bội phương pháp dòng chảy tế bào Chanh giấy TQHN SH-L56, Mean C0=257,69 3.2 Thảo luận mẫu không hạt nghiên cứu Với kết phân tích đa bội thể cam (hình 9) chanh không hạt (hình 10) nghiên cứu có mức bội thể lưỡng bội (2n) Điều giải thích, đặc tính không hạt mẫu khảo sát không xuất phát từ nguyên nhân đa bội lẻ, mà từ nguyên nhân sau: Do gen hay tổ hợp gen ảnh hưởng đến trình thụ tinh, phát triển hợp tử, hình thành hạt,… Hình 9: Cam không hạt SH-O51c có mức đa bội thể 2n 246 Hình 10: Chanh không hạt có mức đa bội thể 2n Tạp chí Khoa học 2011:18b 238-247 Trường Đại học Cần Thơ Xử lý chất kích thích tăng trưởng (auxin,…) giai đoạn trước thụ phấn Ngoài ra, việc tạo thành không hạt tự nhiên thoái hoá quan sinh sản làm cho khó thụ phấn mẫu Chanh không hạt nhà vườn ông Nguyễn Văn Chiến, Châu Thành, Hậu Giang (nơi thu mẫu Chanh không hạt thí nghiệm) Phương pháp dòng chảy tế bào phương pháp ứng dụng rộng rãi nhiều lĩnh vực phân loại hay đếm số lượng nhiễm sắc thể ứng dụng tiện ích kỹ thuật Kết nghiên cứu Lâm Ngọc Phương cộng năm 2010 đối tượng dưa hấu xử lý với colchicine để tạo thể đa bội từ thể nhị bội, kết phân tích với máy Flow Cytometry cho thấy xác định dạng dưa hấu tam bội (3n) dưa hấu tứ bội (4n) so với dưa hấu đối chứng không xử lý colchicine (2n) Do phương pháp phân tích dòng chảy tế bào trở thành công cụ quan trọng hữu hiệu việc đánh giá mức bội thể đối tượng cần nghiên cứu KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 4.1 Kết luận Khảo sát 107 giống có múi thuộc nhóm: nhóm bưởi (Citrus maxima), nhóm quýt (Citrus reticulata), nhóm cam (Citrus sinensis) nhóm chanh (Citrus aurantifolia), hạnh (Citrofortunella microcarpa), cần thăng (Limonia acidissima) tập đoàn có múi Việt Nam trồng Viện NC&PT Công nghệ Sinh học, ĐHCT cho thấy 100% mang nhiễm sắc thể mức lưỡng bội (2n) Đặc biệt, không hạt biểu mức lưỡng bội 2n, chứng tỏ đặc điểm không hạt khảo sát không bắt nguồn từ bất thụ đa bội lẻ, mà nguyên nhân khác 4.2 Kiến nghị Dựa vào qui trình trích hoàn chỉnh, tiếp tục thực khảo sát giống lại tập đoàn có múi Viện NC&PT Công nghệ Sinh học, mở rộng khảo sát tập đoàn giống khác TÀI LIỆU THAM KHẢO An, H J., J S Beom, K B Cheorl, and P H Guen 2009 Production of Somatic Hyrids between Satsuma mandarin (Citrus unshi) and Navel orange (Citrus sinensis) by Protoplast Fusion, Journal of Plant Biology, Vol 51, 3, pp 186-191 Leen, L 2005 “Resistance breeding for powdery mildew (Podosphaera pannosa) and black spot (Diplocarpon rosae) in roses”, PhD Thesis, Faculty of Bioscience Engineering, Ghent University, pp.148 Martens and Reisch 2005 Indicated the influence of the time of sampling in the activity of cell mitosis Scientia Horticulturae Volume 105, Issue 1, pp 139-143 Oven, H R and A R Miller.1993 A comparison of staining techniques for somatic chromosomes of strawberry, Hort Sci 28 247 ... việc thực “Khảo sát mức độ đa bội thể tập đoàn giống có múi Việt Nam phương pháp dòng chảy tế bào nhằm xác định mức đa bội thể tập đoàn giống Trên sở tìm nguồn đa bội thể có múi có sẵn tự nhiên,... tích mức lưỡng bội phương pháp dòng chảy tế bào 3B Bộ NST kính hiển vi Olympus, vật kính 40X 4A 4B Hình 4: Mẫu đối chứng chanh Tàu 4A Biểu đồ phân tích mức lưỡng bội phương pháp dòng chảy tế bào. .. phân tích mức lưỡng bội phương pháp dòng chảy tế bào Cam chịu nhiệt SH-O43b, Mean C0=100,44 Trường Đại học Cần Thơ Hình 6: Biểu đồ phân tích mức lưỡng bội phương pháp dòng chảy tế bào Quýt hôi