Ly trích diosgenin từ rễ cây cát lồi (costus speciosus)

TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA SƢ PHẠM  Tên đề tài: LY TRÍCH DIOSGENIN TỪ RỄ CÂY CÁT LỒI (Costus speciosus) Luận văn tốt nghiệp Ngành: SƢ PHẠM HÓA HỌC GV hướng dẫn: Sinh viên: Lê Thị Ánh Tuyết ThS.GVC Nguyễn Văn Hùng Lớp: Sư phạm Hóa Học K33 Mã số SV: 2072023 Cần Thơ, 09/05/2011 Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cát lồi LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình thực đề tài, nổ lực thân, nhận đƣợc giúp đỡ nhiệt lời động viên chân thành thầy cô bạn Vì xin cảm ơn đến : Thầy Nguyễn Văn Hùng, giảng viên Bộ môn Hóa, Khoa Sƣ Phạm, Trƣờng Đại Học Cần Thơ trực tiếp hƣớng dẫn, dạy tận tình Thầy tạo điều kiện thuận lợi để sớm hoàn thành luận văn tốt nghiệp Thầy Nguyễn Phúc Đảm, cô Lê Thi Lộc, cô Thái Thị Tuyết Nhung, thầy Nguyễn Điền Trung, thầy Ngô Quốc Luân thầy cô khác Bộ môn tận tình giúp đỡ, dạy truyền thụ kiến thức cho suốt bốn năm học để hoàn thành tốt đề tài Gia đình, thầy cô, tập thể lớp sƣ phạm Hóa K33, đặc biệt bạn Hồ Hoàng Việt động viên, giúp đỡ suốt thời gian thực thời điểm khó khăn Một lần xin chân thành cảm ơn ! GVHD: Nguyễn Văn Hùng SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cát lồi MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC TÓM TẮT PHẦN MỞ ĐẦU 1 LÝ DO CHỌN ĐỀ TÀI MỤC TIÊU VÀ GIỚI HẠN CỦA ĐỀ TÀI 2.1 Mục tiêu đề tài 2.2 Giới hạn đề tài PHƢƠNG PHÁP VÀ PHƢƠNG TIỆN CỦA ĐỀ TÀI .2 CÁC BƢỚC THỰC HIỆN ĐỀ TÀI PHẦN NỘI DUNG .3 A PHẦN LÝ THUYẾT TỔNG QUAN VỀ CÂY CÁT LỒI 1.1 Giới thiệu chung cát lồi 1.1.1 Mô tả 1.1.2 Phân bố thu hái chế biến 1.2 Thành phần hóa học cát lồi 1.2.1 Diosgenin 1.2.2 Tigogenin 1.2.3 Dioscin 1.2.4 Gracillin 1.2.5 Acid octacosanoic 1.2.6 Daucosterin 1.2.7 Cycloartanol 1.2.8 β-sitosterol 1.3 Tác dụng dƣợc lý cát lồi Các thuốc dân gian 10 TÌM HIỂU VỀ DIOSGENIN 10 2.1 Lịch sử tìm diosgenin 10 2.2 Thành phần hóa học, cấu trúc diosgenin 11 2.3 Tính chất diosgenin 11 2.4 Công dụng diosgenin 12 B PHẦN THỰC NGHIỆM 14 DỤNG CỤ VÀ HÓA CHẤT 14 1.1 Dụng cụ 14 1.2 Hóa chất 14 THỰC HIỆN LY TRÍCH 15 GVHD: Nguyễn Văn Hùng SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cát lồi 2.1 Quy trình ly trích tinh chế diosgenin 15 2.2 Các bƣớc tiến hành ly trích tinh chế diosgenin 15 2.2.1 Xử lý rễ cát lồi 15 2.2.2 Tiến hành ly trích 16 KẾT QUẢ 17 3.1 Đo nhiệt độ nóng chảy diosgenin 17 3.2 Phản ứng màu diosgenin 18 3.3 Tính chất tạo bọt diosgenin 18 3.4 Sắc ký mỏng diosgenin 19 3.5 Kết phổ IR diosgenin 19 PHẦN KẾT LUẬN - KIẾN NGHỊ 20 Phụ lục 1: Phổ IR chuẩn diosgenin 21 Phụ lục 2: Phổ IR diosgenin tinh chế 21 TÀI LIỆU THAM KHẢO 22 GVHD: Nguyễn Văn Hùng SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cát lồi TÓM TẮT Cây cát lồi (Costus speciosus) thuộc họ Mía dò (Costaceae) mọc hoang nhiều nơi lùm bụi, nơi đất ẩm mát, ven bờ sông Ở nƣớc giới sớm biết đến đặc tính y học quý báo có cát lồi Nó vị thuốc quí chống viêm, chữa bệnh tiêu hóa, tiết niệu, bệnh khớp xƣơng, đau dây thần kinh, đặc biệt giúp giải vấn đề tình dục Không dừng lại, nƣớc nhƣ Ấn Độ, Thái Lan, Trung Quốc, Malaysia cát lồi đƣợc trồng đại trà nhƣ loại công nghiệp phục vụ cho ngành công nghiệp hóa dƣợc, chủ yếu sản xuất diosgenin (một tiền thân progesterone) Còn Việt Nam, cát lồi đƣợc biết đến thuốc dân gian, làm cảnh, số vùng cát lồi đƣợc xem phá hại khó diệt Lá cát lồi vị thiếu bánh xèo Nam Bộ Chính lẽ đó, đề tài giúp hiểu rõ cát lồi, loại phá hại hay loại cảnh thấp giá trị Phƣơng pháp ly trích sử dụng hệ thống ly trích shoxlet với dung môi ete dầu hỏa từ nguồn nguyên liệu ban đầu rễ khô cát lồi Sau diosgenin đƣợc kết tinh lại nhiều lần với etanol 95%, diosgenin tinh chế đƣợc kiểm tra sắc ký lớp mỏng, phổ IR, cuối đo nhiệt độ nóng chảy Với phƣơng pháp ly trích này, diosgenin thu đƣợc tinh khiết, hiệu suất cao trang thiết bị đơn giản, phù hợp với điều kiện phòng thí nghiệm nƣớc ta Hy vọng tƣơng lai áp dụng quy trình vào thực tiễn, giúp ngành công nghiệp hóa dƣợc nƣớc ta thêm bƣớc tiến GVHD: Nguyễn Văn Hùng SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cát lồi PHẦN MỞ ĐẦU LÝ DO CHỌN ĐỀ TÀI Từ thời xa xƣa nƣớc giới, cát lồi đƣợc xem nhƣ loại dƣợc liệu quý việc chữa trị nhiều loại bệnh, giúp tăng cƣờng sức khỏe, làm mỹ phẩm… Từ kỷ XX, nƣớc phát triển lồi đƣợc nghiên cứu, trồng đại trà đƣợc sản xuất nhƣ ngành công nghiệp mũi nhọn Ở Việt Nam cát lồi vị thuốc dân gian trị đƣợc bá bệnh Trong ăn truyền thống Việt Nam đặc biệt bánh xèo Nam Bộ, thiếu vị chua chua, đăng đắng cát lồi Cát lồi đƣợc biết đến nhƣ giống cảnh đẹp Tuy nhiên, việc sử dụng phát triển cát lồi không phổ biến, số vùng Việt Nam cát lồi đƣợc xem nhƣ phá hoại, mọc hoang khó diệt MỤC TIÊU VÀ GIỚI HẠN CỦA ĐỀ TÀI 2.1 Mục tiêu đề tài Đề tài “ly trích diosgenin từ rễ cát lồi” cho ta nhìn cát lồi cỏ Việt Nam 2.2 Giới hạn đề tài Ly trích diosgenin từ rễ cát lồi khu vực đồng sông Cửu Long GVHD: Nguyễn Văn Hùng SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cát lồi PHƢƠNG PHÁP VÀ PHƢƠNG TIỆN CỦA ĐỀ TÀI 3.1 Phƣơng pháp - Thủy phân diosgenin dung dịch CH3COONa 2%, dung dịch HCl 5% - Ly trích diosgenin thô ete dầu hỏa - Diosgenin đƣợc kết tinh ethanol 95% - Định tính, xác định cấu trúc diosgenin, định lƣợng 3.2 Phƣơng tiện - Sử dụng hệ thống ly trích rắn lỏng soxhlet - Hệ thống chƣng cất - Dụng cụ, hóa chất phòng thí nghiệm - Máy vi tính internet - Tài liệu sách báo CÁC BƢỚC THỰC HIỆN ĐỀ TÀI - Thu thập tài liệu từ nhiều nguồn - Nghiên cứu lý thuyết, đƣa phƣơng pháp ly trích thích hợp - Thu mẫu tiến hành thí nghiệm - Viết báo cáo GVHD: Nguyễn Văn Hùng SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cát lồi PHẦN NỘI DUNG A PHẦN LÝ THUYẾT TỔNG QUAN VỀ CÂY CÁT LỒI 1.1 Giới thiệu chung cát lồi [3], [4], [5]  Tên khoa học: Costus speciosus  Tên Việt Nam: cát lồi, mía dò, đọt đắng, đọt hoàng, tậu chó (Lạng Sơn), củ  Bộ: Gừng  Họ: Mía dò  Chi: Mía dò  Loài: Cát lồi chóc 1.1.1 Mô tả Cây thân thảo, sống lâu năm, cao 1-2m, có đến 3m Thân rễ to, nạc, mọc bò ngang, phần non có vẩy bao bọc, vẩy có lông ngắn Thân xốp, phân nhánh Lá mọc so le, hình trứng thuôn, gốc tròn có bẹ, đầu nhọn, mép nguyên, mặt nhẵn, mặt dƣới có lông mịn, dài 15-20cm, rộng 6-7cm, gân rõ Lá non mọc thành đƣờng xoắn ốc đặc biệt Bẹ nhẵn có lông, lúc non màu lục nhạt sau chuyển trắng ngà đỏ sẫm, lƣỡi bẹ phẳng vát Cụm hoa mọc thân thành chùy, dài 8-13cm, rộng 5-9cm; bắc dày, xếp lợp, màu đỏ, có mũi nhọn, bắc kề bên, màu Đài hình ống loe đầu, có cứng màu đỏ sẫm Tràng hình phễu, có ống ngắn cong, màu trắng, họng vàng, nhẵn có lông Nhị dạng cánh mang bao phấn, nhị kết hợp với trung đới kéo dài thành phần phụ hình trứng đảo hẹp, đầu tròn cong lòng máng ôm lấy vòi nhụy Cánh hoa to, màu hồng, trắng vàng, có khía đầu; bầu nhẵn có lông Quả nang hình trứng hình bầu dục có cạnh, màu đỏ sẫm, có đài Hạt nhiều, có cạnh không màu đen Mùa hoa quả: tháng 7-11 GVHD: Nguyễn Văn Hùng SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cát lồi Hình 1: Cây cát lồi Hình 2: Cánh đồng cát lồi Thái Lan Hình 3: Hoa cát lồi Hình 4: Quả hạt cát lồi Hình 5: Cành cát lồi GVHD: Nguyễn Văn Hùng SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cát lồi 1.1.2 Phân bố thu hái chế biến Phân bố: Cây thuộc vùng nhiệt đới, mọc hoang nhiều nơi lùm bụi, gò đất, chỗ đất ẩm mát Ở nƣớc nhƣ Thái Lan, Ấn Độ, Trung Quốc đƣợc trồng rộng rãi cánh đồng lớn hay đồi Có thể trồng đoạn thân, mầm thân, rễ hạt, khoảng 15-20 tạ thân rễ đƣợc trồng cho Ở Việt Nam mọc dại khu vực đồng sông Cửu Long chƣa có ứng dụng rộng rãi Ở Liên Bang Micronesia, Guam, Cộng hòa Palau, Polynesia thuộc Pháp cát lồi đƣợc liệt kê nhƣ xâm hại Thu hái: Thân rễ đƣợc thu hái vào mùa thu , rửa sạch, tỉa bớt rễ, thái nhỏ, phơi khô 1.2 Thành phần hóa học cát lồi Trong thân rễ cát lồi có chủ yếu hydratcarbon chất albuminoid Từ rễ khô cát lồi chiết đƣợc chất diosgenin (1), tigogenin (2), dioscin (3), gracillin (4), acid octacosanoic (5), daucosterin (6), cycloartanol (7), β-sitosterol(8) 1.2.1 Diosgenin GVHD: Nguyễn Văn Hùng SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cát lồi 1.2.8 β-sitosterol  Công thức cấu tạo: CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 HO  Tên: -sitosterol, - phytosterol, 24--etylcholesterol,  Công thức phân tử: C29H50O  Khối lƣợng phân tử: 414.71  Chỉ số CAS: 64997-52-0  Chỉ số EINECS: 201-480-6  Nhiệt độ nóng chảy: 136-140 ° C 1.3 Tác dụng dƣợc lý cát lồi [3] Cát lồi đƣợc sử dụng y học đại lẫn cổ truyền Nghiên cứu tác động chiết xuất từ etanol thân rễ cát lồi gây thay đổi dẫn truyền thần kinh não Các enzim monoamine oxidase (MAO) chuột cho thấy chứng sinh hóa chống hoạt động stress, hội chứng trầm cảm Thân rễ chữa viêm thận thuỷ thũng, beriberi, xơ gan cổ trƣớng viêm nhiễm đƣờng tiết niệu, đái buốt, đái dắt Giúp chữa lành sẹo hội chứng phát ban, zona, bệnh da Thành phần cát lồi diosgenin tiền thân progesterone Progesterone hormone quan trọng điều chỉnh hoạt động kích thích tố khác thể đặc biệt estrogen (hormone sinh dục nữ) testosterone (hormone sinh dục nam) kích thích ham muốn sinh hoạt tình dục, phát triển tuyến vú Nghiên cứu chiết xuất dầu thô thân rễ cát lồi giúp hạ đƣờng huyết Các thuốc dân gian Ở Lạng Sơn nhân dân dùng cành tƣơi đem nƣớng, vắt lấy nƣớc hay giã lấy nƣớc chữa đau tai, đau mắt, làm mát gan, giảm đau nhức GVHD: Nguyễn Văn Hùng SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cát lồi Trong thuốc dân gian Việt Nam, cát lồi dùng để chống viêm, chữa bệnh nhƣ sốt, đái buốt, đái vàng, thấp khớp, đau lƣng, đau dây thần kinh Ngƣời ta ngâm thân rễ rƣợu để uống hay xoa bóp Ở Ấn Ðộ rễ có tác dụng lọc máu, làm thuốc xổ trừ giun Thƣờng dùng chữa bệnh nhƣ:  Viêm thận thuỷ thũng, xơ gan cổ trƣớng  Viêm nhiễm đƣờng tiết niệu  Ho gà  Giảm niệu  Ðái buốt đái dắt  Cảm sốt, môi rộp, khát nƣớc nhiều  Các bệnh mày đay, mụn nhọt sƣng đau viêm tai  Liều dùng 3g 10g đến 8g 16g nấu cao uống Có thể giã nhỏ đắp sƣng tấy nấu nƣớc tắm rửa trị mẩn ngứa Ấn Ðộ, ngƣời ta dùng rễ trị rắn cắn Ở Java, thân rễ có báo cáo sử dụng cho bệnh giang mai Trong Visayas, nƣớc ép tƣơi thân đƣợc sử dụng chửa bệnh lỵ Các bệnh da, phát ban nhƣ eczema, mày đay: Dùng 3-9 g nguyên liệu khô sắc lại uống, xoa, rửa TÌM HIỂU VỀ DIOSGENIN [1], [6],[8], [10], [11] 2.1 Lịch sử tìm diosgenin Progesterone nguồn nguyên liệu quí, có ý nhĩa lớn y học có giá trị kinh tế cao Trong năm 1920, progesterone chủ yếu đƣợc lấy từ buồng trứng heo nái (lợn) Trong năm 1930 1940 nguồn thu đƣợc chuyển sang cholesterol acid mật động vật Tuy nhiên, quy trình sản xuất dài khó khăn đƣa đến giá thành sản phẩm đắt đỏ, nên nhà hóa học cố gắng để tìm nguyên liệu rẽ so với việc sử dụng cholesterol acid mật GVHD: Nguyễn Văn Hùng 10 SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cát lồi Năm 1936, nhà nghiên cứu Nhật Bản sau khảo sát khoai mỡ tìm thấy chiết xuất diosgenin có cấu trúc tƣơng tự với số kích thích tố tuyến thƣợng thận Nhà hóa học Marker Russell thuộc Đại học Pennsylvania, nhận thấy diosgenin đƣợc chuyển đổi thành progesterone Sau ông tới Mexico để xem tìm thấy nguồn thực vật có chứa diosgenin Bắt đầu từ năm 1944, Marker xây dựng công ty sản xuất hormone progesterone từ nguồn tự nhiên, đƣa ngành công nghiệp sản xuất diosgenin Giúp ngành khoa học hóa dƣợc lên bƣớc tiến mới, tiền đề quan trọng cho ngành công nghiệp mỹ phẩm phát triển 2.2 Thành phần hóa học, cấu trúc diosgenin  Công thức cấu tạo:  Tên: (25R)-Spirost-5-en-3beta-ol, nitogenin, dioscorea sapogenin  Công thức phân tử diosgenin: C27H42O3  Khối lƣợng phân tử: 414.627  Chỉ số CAS: 512-04-9  Chỉ số EINECS: 208-134-3 2.3 Tính chất diosgenin  Diosgenin sapogenin steroid Nó đƣợc sản xuất thông qua thủy phân saponin acid, base mạnh enzyme  Tỉ trọng: 1.13g/cm  Nhiệt độ nóng chảy: 205-208°C  Nhiệt độ sôi: 527,1 ° C 760 mmHg  Chiết suất: 1.564 GVHD: Nguyễn Văn Hùng 11 SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cát lồi  Độ tan: tan tốt chloroform 20mg / ml, cho màu vàng Tan dung môi hữu khác, không tan nƣớc  Quang độ (c = 1.4, chloroform)  Diosgenin sapogenin steroid thuộc nhóm spirostan Nên có đặc tính sau:  Có tính chất tạo bọt: Tạo bọt môi trƣờng kiềm  Các phản ứng màu:  Acid sulfuric đậm đặc hòa tan saponin cho màu thay đổi từ vàng, đỏ, lơ-xanh hay lơ-tím (phản ứng Salkowski)  Sapogenin hoà tan vào 1ml anhydrid acetic, cho thêm giọt H 2SO4 đậm đặc cho màu lơ-xanh (phản ứng Liebermann-Burchardt) 2.4 Công dụng diosgenin Diosgenin đƣợc sử dụng nhƣ tiền chất để tổng hợp progestrone, pregnenolone, prednisolone, testosterone, hydrocortisone, dexamethason, betamethasone, Progesterone hormone quan trọng điều chỉnh hoạt động cho kích thích tố khác thể đặc biệt estrogen testosterone Estrogen (hormone sinh dục nữ) trợ giúp tăng âm, biên độ tần suất co thắt nhịp nhàng khác tử cung, làm giảm đau kỳ kinh nguyệt hay hội chứng thời kỳ tiền mãn kinh, kích thích ham muốn tình dục Giúp tăng cƣờng phát triển mô vú, định hình vú nên diosgenin thành phần thuốc nâng ngực cao cấp Lƣợng estrogen sinh giúp hạn chế loãng xƣơng phụ nữ thời kỳ mãn kinh Testosterone (hormone sinh dục nam) giúp kích thích ham muốn tình dục, cải thiện chức năng, sức chịu đựng bền bỉ Vì diosgenin có loại thực phẩm chức giúp tăng sinh lực nam Diosgenin nguyên liệu để tổng hợp thuốc chống viêm corticosteroid giúp kháng viêm, lành sẹo bệnh nhƣ phát ban, zona Diosgenin đƣợc sử dụng để giúp làm giảm đau viêm khớp, thấp khớp, đau lƣng, đau dây thần kinh Diosgenin đƣợc sử dụng nhƣ nguồn tự nhiên để tổng hợp dehydroepiandrosterone (DHEA), steroid giảm theo tuổi tác Giúp cho hoạt động GVHD: Nguyễn Văn Hùng 12 SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cát lồi chống oxy hóa thể ngƣời, giảm mức lipid huyết thanh, ức chế phát triển ngừng chu kỳ hoạt động tế bào u xƣơng ác tính, ung thƣ biểu mô tế bào gan Theo số nghiên cứu diosgenin làm giảm cholesterol gan chuột, tăng tiết cholesterol thành acid mật tăng tiết sterol trung tính GVHD: Nguyễn Văn Hùng 13 SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cát lồi B PHẦN THỰC NGHIỆM DỤNG CỤ VÀ HÓA CHẤT 1.1 Dụng cụ STT Dụng cụ STT Dụng cụ Becher loại 14 Phễu thủy tinh Erlen loại 15 Pipette Pasteur Ống đong loại 16 Pipette nhựa Lọ thủy tinh 50ml 17 Giá ống nghiệm Đũa thủy tinh 18 Giấy lọc Phễu chiết 19 Nồi đun cách thủy Vi quản 20 Bếp điện Ống nghiệm 21 Lƣới amiang Bình sắc ký 22 Muỗng nhựa, inox 10 Sắc ký mỏng 23 Máy cô quay chân không 11 Cân kỹ thuật 24 Máy sấy 12 Cân phân tích 25 13 Tủ sấy 26 Máy đo nhiệt độ nóng chảy electrothermal Tủ hút 1.2 Hóa chất STT Hóa chất STT Hóa chất Ete dầu hỏa TLC Etanol 95o Na2SO4 khan Metanol H2SO4đđ Chloroform H2 O GVHD: Nguyễn Văn Hùng 14 SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cát lồi THỰC HIỆN LY TRÍCH 2.1 Quy trình ly trích tinh chế diosgenin [11] Rễ tƣơi -Rửa sạch, tỉa bớt rễ con, thái nhỏ -Sấy 50-600C, xay nhiễn Bột rễ khô - Ngâm 14 dung dịch CH3COONa 2% - Ngâm 24 dung dịch HCl 5% - Sấy khô Bột rễ xử lý - Cô đặc áp suất - Ly trích 18 ete dầu hỏa hệ thống soxhlet - Cô cạn Diosgenin thô Kết tinh lại lần etanol 95% Diosgenin tinh chế 2.2 Các bƣớc tiến hành ly trích tinh chế diosgenin 2.2.1 Xử lý rễ cát lồi kg rễ tƣơi đƣợc thu vào tháng 9, khu vực huyện Đức Hòa, tỉnh Long An Rễ đƣợc rửa sạch, cắt bỏ hết rễ con, thái nhỏ, sấy khô 50 oC đến khối lƣợng không đổi đƣợc xay nhiễn đƣợc 0,5 kg bột nguyên liệu (độ ẩm 91,67%) GVHD: Nguyễn Văn Hùng 15 SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Hình6: Rễ cát lồi Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cát lồi Hình7: Rễ cát lồi cắt nhỏ Hình8: Rễ cát lồi xay nhiễn Cho 500g bột nguyên liệu ngâm vào lít dung dịch CH3COONa 2% 14 Bột nguyên liệu đƣợc rửa sấy khô lại, đƣợc thủy phân lít dung dịch HCl 5% 24 Sau thủy phân xong, rửa HCl (pH=7) Thu đƣợc bột rễ xử lý (480g) Hình 9: Bột nguyên liệu ngâm Hình 10: Bột nguyên liệu ngâm dd CH3COONa 2% dd HCl 5% 2.2.2 Tiến hành ly trích Tiến hành ly trích diosgenin thô: Ly trích 480g bột rễ xử lý 18 ête dầu hỏa hệ thống soxhlet , dung dịch cô cạn thu đƣợc diosgenin thô, có màu vàng (8,1 g, hiệu suất 1,7 %) GVHD: Nguyễn Văn Hùng 16 SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cát lồi Hình12: Kết tinh lại diosgenin Hình11: Diosgenin thô Tiến hành kết tinh diosgenin: Diosgenin thô đƣợc kết tinh phân đoạn etanol 95% lần cho diosgenin tinh thể dạng vỡ mảnh (bột), màu trắng (6,7 g, hiệu suất 1,4%) Hình13: Lọc diosgenin sau kết tinh lại Hình14: Diosgenin tinh chế KẾT QUẢ 3.1 Đo nhiệt độ nóng chảy diosgenin tinh chế Cho diosgenin tinh chế vào ống mao quản, tiến hành đo nhiệt độ nóng chảy diosgenin máy hiệu electrothermal Sau lần đo kết đo là: Lần Nhiệt độ đo Nhiệt khảo độ 0 212 C – 215 C o 213 C – 217 C tham GVHD: Nguyễn Văn Hùng 0 215 C – 216 C o 205 C – 208 C 17 SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cát lồi 3.2 Phản ứng màu diosgenin tinh chế Hòa tan bột diosgenin vào axit sulfuric đậm đặc cho màu thay đổi từ vàng, đỏ, lơ-xanh hay lơ-tím (phản ứng Salkowski) Hình15 : Màu vàng Hình16 : Màu đỏ Hình17 : Lơ xanh Cho bột diosgenin hoà tan vào 5ml anhydrid acetic, cho thêm vài giọt H2SO4 đậm đặc cho màu lơ-xanh (phản ứng Liebermann-Burchardt) Hình18: Màu lơ xanh 3.3 Tính chất tạo bọt diosgenin tinh chế Cho vào ống nghiệm diosgenin vào 2ml cồn 95% đun cách thủy khoảng 10 phút Sau cho vào vài giọt dung dịch NaOH 0,1 N (pH=13) Lắc mạnh ống nghiệm thấy tạo bọt Hình19: Hiện tƣợng tạo bọt GVHD: Nguyễn Văn Hùng 18 SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cát lồi 3.4 Sắc ký mỏng diosgenin tinh chế  TCL Silicagel 60 F254: 5x1 cm  Hệ dung môi: CHCl3: C2H5OH ( 90 : 10 )  Thuốc màu: dung dịch H2SO4 20%  Kết quả: mỏng xuất vệt tròn màu hồng, Rf = 0,375 Hình20: Sắc ký mỏng 3.5 Kết phổ IR diosgenin tinh chế [2] Mẫu diosgenin tinh chế đƣợc phân tích phổ IR máy quang phổ hồng ngoại Bruker Equinox 55 với chất KBr Trƣờng Đại Học Khoa Học Tự Nhiên TP.HCM So sánh phổ IR diosgenin tinh chế với phổ IR chuẩn diosgenin nghiên cứu : Nhóm chức Bƣớc sóng ( cm-1 ) Diosgenin tinh chế Diosgenin chuẩn  O-H 3408 3416  C-H 2934 2932  C=C 1642 1601  C-O 1162 1168 Nhận xét: Phổ IR diosgenin tinh chế phổ IR chuẩn diosgenin phù hợp GVHD: Nguyễn Văn Hùng 19 SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cát lồi PHẦN KẾT LUẬN - KIẾN NGHỊ Đề tài ly trích diosgenin từ rễ cát lồi với quy trình ly trích đơn giản, diosgenin thu đƣợc tinh khiết, hiệu suất tƣơng đối (1,4%) trang thiết bị đơn giản, phù hợp với điều kiện phòng thí nghiệm nƣớc ta Tuy nhiên đề tài thực hàm lƣợng nhỏ, với phƣơng pháp phòng thí nghiệm Hy vọng tƣơng lai áp dụng quy trình vào thực tiễn, giúp ngành công nghiệp hóa dƣợc nƣớc ta thêm bƣớc tiến Trong rễ cát lồi chứa hàm lƣợng dioscin cao, nguồn nguyên liệu giá trị công nghiệp hóa dƣợc Vì vậy, tƣơng lai có điều kiện nên tiếp tục cho nghiên cứu cát lồi phƣơng pháp ly trích dioscin GVHD: Nguyễn Văn Hùng 20 SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cát lồi Phụ lục 1: Phổ IR chuẩn diosgenin [2],[5] Phụ lục 2: Phổ IR diosgenin tinh chế GVHD: Nguyễn Văn Hùng 21 SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cát lồi TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Chen Changxiang,Yin Huixin Steroidal saponins from costus specious DOI: CNKI: SUN: TRCW 04-003, 1995 [2] Eman M Elgendy and Huda Al-Ghamdy Thermal and Photooxidation Reactions of the Steroids: -Sitosterol, Stigmasterol and Diosgenin Taiwan Pharmaceutical Journal, 59, 113-132, 2007 [3] Eunsook Ma and Jongwon Kim College of Pharmacy, Catholic University of Daegu, Hayang, 712-702, Korea Epoxidation of Diosgenin, 25(R)-1,4,6-Spirostatrien-3-one and 25(R)-4,6-Spirostadien-3β-ol Molecules, 8, 886-893, 2003 [4] Jeetendra Nehete, Manish Bhatia and Minal Narkhede In-vitro Evaluation of Antioxidant Activity and Phenolic Content of Costus speciosus (Koen) J.E Sm Iranian Journal of Pharmaceutical Research, (3), 271-277, 2010 [5] IR Spectrum of diosgenin 2011 by the U.S Secretary of Commerce on behalf of the United States of America COBLENTZ NO 8977 [6] M N Cayen and D Dvornik Effect of diosgenin on lipid metabolism in rats Journal of Lipid Research, 20,162-174, 1979 [7] Mosquera, Oscar M., Correra, Yaned M and Niño, Jaime.Diosgenin Quantification by HPLC in a Dioscorea polygonoides Tuber Collection from Colombian Flora J Braz Chem Soc., Vol 18, No 5, 1073-1076, 2007 [8] Pankaj Oudhia Society for Parthenium Management, (SOPAM),28-A, College Road, Geeta Nagar Raipur- 492001 India Kands of Chhattisgarh, India Keu Kand (Costus speciosus, family : Scitamineae).Keukand ( Costus speciosus Koen ex Retz.) Sm [9] Qiao CF, Li qw, Dong H, Xu LS, Wang ZT Studies on chemical constituents of two plants from Costus Zhongguo Zhong Yao Za Zhi Feb; 27 (2):123-5, 2002 [10] Simon Kim.George Mason University Fairfax, Virginia 22030 Wild Yam [11] Uma Prawat, Pittaya Tuntiwachwuttikul, Walter C.Taylor Steroid saponin of Lacerus Costus J.Sci Soc Thailand, 15, 139-147, 1989 GVHD: Nguyễn Văn Hùng 22 SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cát lồi [12] Ulf-Ingo Flügge A plant steroid, diosgenin, induces apoptosis, cell cycle arrest and COX activity in osteosarcoma cells FEBS, Letters 506, 225- 230, 2001 [13] Yuqing Zhang, Linru Tang, Xuan An, Erhong Fu and Chaofan Ma Modification of cellusase and its application to extraction of diosgenin from Dioscorea Ziberensis C.H.Wright Biochemial Engineering Journal 47, 80-86, 2009 [14] Diosgenin http://en.wikipedia.org GVHD: Nguyễn Văn Hùng 23 SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết [...]... ly trích Tiến hành ly trích diosgenin thô: Ly trích 480g bột rễ đã xử lý 18 giờ trong ête dầu hỏa bằng hệ thống soxhlet , dung dịch cô cạn thu đƣợc diosgenin thô, có màu hơi vàng (8,1 g, hiệu suất 1,7 %) GVHD: Nguyễn Văn Hùng 16 SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cây cát lồi Hình12: Kết tinh lại diosgenin Hình11: Diosgenin thô Tiến hành kết tinh diosgenin: Diosgenin. .. 2934 2932  C=C 1642 1601  C-O 1162 1168 Nhận xét: Phổ IR của diosgenin tinh chế và phổ IR chuẩn của diosgenin rất phù hợp GVHD: Nguyễn Văn Hùng 19 SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cây cát lồi PHẦN KẾT LUẬN - KIẾN NGHỊ Đề tài ly trích diosgenin từ rễ cây cát lồi với quy trình ly trích đơn giản, diosgenin thu đƣợc khá tinh khiết, hiệu suất tƣơng đối (1,4%)... Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cây cát lồi 2 THỰC HIỆN LY TRÍCH 2.1 Quy trình ly trích và tinh chế diosgenin [11] Rễ tƣơi -Rửa sạch, tỉa bớt rễ con, thái nhỏ -Sấy ở 50-600C, xay nhiễn Bột rễ khô - Ngâm 14 giờ bằng dung dịch CH3COONa 2% - Ngâm 24 giờ bằng dung dịch HCl 5% - Sấy khô Bột rễ đã xử lý - Cô đặc dưới áp suất kém - Ly trích 18 giờ trong ete dầu hỏa bằng hệ thống soxhlet - Cô cạn Diosgenin. .. Tuyết Luận văn tốt nghiệp Hình6: Rễ cát lồi Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cây cát lồi Hình7: Rễ cát lồi cắt nhỏ Hình8: Rễ cát lồi xay nhiễn Cho 500g bột nguyên liệu ngâm vào 5 lít dung dịch CH3COONa 2% trong 14 giờ Bột nguyên liệu đƣợc rửa sạch sấy khô lại, đƣợc thủy phân trong 5 lít dung dịch HCl 5% trong 24 giờ Sau khi thủy phân xong, rửa sạch HCl (pH=7) Thu đƣợc bột rễ đã xử lý (480g) Hình 9: Bột... bƣớc tiến mới Trong rễ cây cát lồi còn chứa hàm lƣợng dioscin cao, cũng là một nguồn nguyên liệu giá trị trong công nghiệp hóa dƣợc Vì vậy, trong tƣơng lai nếu có điều kiện nên tiếp tục cho nghiên cứu về cây cát lồi và phƣơng pháp ly trích dioscin GVHD: Nguyễn Văn Hùng 20 SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cây cát lồi Phụ lục 1: Phổ IR chuẩn của diosgenin [2],[5]... GVHD: Nguyễn Văn Hùng 9 SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cây cát lồi Trong các bài thuốc dân gian Việt Nam, cát lồi dùng để chống viêm, chữa các bệnh nhƣ sốt, đái buốt, đái vàng, thấp khớp, đau lƣng, đau dây thần kinh Ngƣời ta ngâm thân rễ trong rƣợu để uống hay xoa bóp Ở Ấn Ðộ rễ cây có tác dụng lọc máu, làm thuốc xổ trừ giun Thƣờng dùng chữa các bệnh nhƣ:... Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cây cát lồi 1.2.8 β-sitosterol  Công thức cấu tạo: CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 HO  Tên: -sitosterol, - phytosterol, 24--etylcholesterol,  Công thức phân tử: C29H50O  Khối lƣợng phân tử: 414.71  Chỉ số CAS: 64997-52-0  Chỉ số EINECS: 201-480-6  Nhiệt độ nóng chảy: 136-140 ° C 1.3 Tác dụng dƣợc lý của cây cát lồi [3] Cát lồi đƣợc sử dụng trong y... – 208 C 17 SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cây cát lồi 3.2 Phản ứng hiện màu của diosgenin tinh chế Hòa tan một ít bột diosgenin vào axit sulfuric đậm đặc và cho màu thay đổi từ vàng, đỏ, lơ-xanh lá hay lơ-tím (phản ứng Salkowski) Hình15 : Màu vàng Hình16 : Màu đỏ Hình17 : Lơ xanh Cho một ít bột diosgenin hoà tan vào 5ml anhydrid acetic, cho thêm vài giọt... Văn Hùng 10 SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cây cát lồi Năm 1936, các nhà nghiên cứu Nhật Bản sau khi khảo sát cây khoai mỡ đã tìm thấy chiết xuất diosgenin có cấu trúc tƣơng tự với một số các kích thích tố tuyến thƣợng thận Nhà hóa học Marker Russell thuộc Đại học Pennsylvania, nhận thấy rằng diosgenin có thể đƣợc chuyển đổi thành progesterone Sau đó ông... 3.3 Tính chất tạo bọt của diosgenin tinh chế Cho vào ống nghiệm một ít diosgenin vào 2ml cồn 95% đun cách thủy khoảng 10 phút Sau đó cho vào vài giọt dung dịch NaOH 0,1 N (pH=13) Lắc mạnh ống nghiệm thấy tạo bọt Hình19: Hiện tƣợng tạo bọt GVHD: Nguyễn Văn Hùng 18 SVTH: Lê Thị Ánh Tuyết Luận văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cây cát lồi 3.4 Sắc ký bản mỏng của diosgenin tinh chế  TCL Silicagel ... văn tốt nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cát lồi Hình 1: Cây cát lồi Hình 2: Cánh đồng cát lồi Thái Lan Hình 3: Hoa cát lồi Hình 4: Quả hạt cát lồi Hình 5: Cành cát lồi GVHD: Nguyễn Văn... CỦA ĐỀ TÀI 2.1 Mục tiêu đề tài Đề tài ly trích diosgenin từ rễ cát lồi cho ta nhìn cát lồi cỏ Việt Nam 2.2 Giới hạn đề tài Ly trích diosgenin từ rễ cát lồi khu vực đồng sông Cửu Long GVHD: Nguyễn... nghiệp Đề tài: Ly trích diosgenin từ rễ cát lồi 2.1 Quy trình ly trích tinh chế diosgenin 15 2.2 Các bƣớc tiến hành ly trích tinh chế diosgenin 15 2.2.1 Xử lý rễ cát lồi 15