Sản xuất protein tái tổ hợp Nuôi cấy tế bào thực vật sử dụng để sản xuất sản phẩm tự nhiên cách 20 năm gần chúng dùng để sản xuất protein tái tổ hợp Protein tái tổ hợp (protein ngoại lai) protein tự nhiên sửa đổi công nghệ gen nhằm nâng cao thay đổi hoạt tính chúng Tương tự tế bào vi sinh vật, tế bào thực vật thích hợp cho nguyên liệu tái tổ hợp chúng sinh trưởng môi trường tương đối đơn giản không cần bổ sung protein, chúng sinh vật eukaryote bậc cao nên tiến hành biến đổi hậu dịch mã tế bào người Nếu protein ngoại lai sản xuất nuôi cấy tế bào tiết môi trường, nhiều phần tích lũy tế bào, việc thu hồi tinh sản phẩm tiến hành mà nhiều protein nhiễm bẩn Các protein có nguồn gốc thực vật an toàn cho người protein có nguồn gốc từ tế bào động vật chất nhiễm bẩn virus thực vật tác nhân gây bệnh người Ngoài ra, nuôi cấy tế bào thực vật công cụ thực nghiệm thuận lợi cho việc khảo sát sản xuất protein ngoại lai hoàn chỉnh (whole plants) Thực vật chuyển gen xem hệ thống sản xuất kinh tế cho việc sản xuất protein ngoại lai kháng thể, enzyme hormone Sản xuất thương mại số protein vi khuẩn động vật tiến hành thực vật Yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến hiệu kinh tế sản xuất protein dựa sở thực vật hiệu suất protein ngoại lai nồng độ sản phẩm tích lũy sinh khối Theo đó, người ta ý cải thiện biểu gen ngoại lai chuyển gen thông qua việc phát triển promoter tốt hơn, chọn lọc dòng chuyển gen ổn định, ức chế gen im lặng (silence gene) Tuy nhiên, yếu tố quan trọng đứt gãy protein ngoại lai làm giảm nồng độ sản phẩm chức mô thực vật sau phân tử tổng hợp lắp ráp Sự đứt gãy protein ngoại lai làm bẩn sản phẩm với đoạn protein hoạt tính, người ta gặp khó khăn loại bỏ protein đứt gãy hoạt động thu hồi protein chức sản xuất quy mô lớn Tìm hiểu chi tiết vị trí chế đứt gãy nội ngoại bào cần thiết để phát triển phương pháp cho giảm thiểu tổn thất protein hậu sau dịch mã GM-CSF người GM-CSF người (human granulocyte macrophage-colony stimulate factor), bốn glycoprotein đặc biệt kích thích quần lạc đại thực bào tế bào bạch cầu hạt tổ tiên sản sinh bạch cầu hạt, đại thực khuẩn hai loại tế bào máu trắng quan trọng GM-CSF người ứng dụng lâm sàng điều trị bệnh giảm bạch cầu trung tính (neutropenia) bệnh thiếu máu không tái tạo (aplastic anemia) Sử dụng GM-CSF người cấy ghép tủy xương giảm thiểu đáng kể nguy nhiễm trùng chúng kích thích tăng tổng số bạch cầu trung tính GM-CSF người biểu nhiều thể vật chủ khác như: E coli, nấm men, A niger, tế bào động vật có vú tế bào thực vật, sản xuất để dùng lâm sàng Bảng 7.3 Một số protein tái tổ hợp sản xuất nuôi cấy tế bào thực vật Proteinđượcbiểuhiện Nhântốsinhtrưởngbiểumôngười Loàithựcvật Nicotianatabacum Hormonesinhtrưởngởngười N.tabacum Albuminhuyếtthanhngười N.tabacum,Solanumtuberosum Nhântốsinhtrưởngở cáhồi N.tabacum α-interferonngười Oryzasativa Hirudin(chốngđôngmáu) N.tabacum Erythropoietinngười N.tabacum α andβhaemoglobinngười N.tabacum Humanmuscariniccholinergicreceptors N.tabacum GM-CSFchuột N.tabacum Interleukin-2vàInterleukin-4người N.tabacum Alkalinephosphatasenhauthaingười N.tabacum α1-antitrypsinngười O.sativa HBsAg N.tabacum,Glycinemax N.tabacum,O.sativa, GM-CSFngười Lycopersicumesculentum Khángthểđơndòng(Mab)chống HBsAg N.tabacum Lysozymengười O.sativa Mabchuỗinặng N.tabacum IgG2b/κchuột N.tabacum ĐoạnkhángthểscFv N.tabacum,O.sativa ĐoạnkhángthểbiscFv N.tabacum IgG2b/κkíchthướchoànchỉnh N.tabacum Chuỗinặngγđơndòngcủachuột N.tabacum Bryodin1 N.tabacum Kháng thể IgG1 chuột Đã sản xuất cách nuôi cấy rễ tơ tế bào dịch huyền phù thuốc (Nicotiana tabacum) chuyển gen Để thực lắp ráp kháng thể hoàn chỉnh, từ đến đoạn kháng thể nhỏ tích lũy sinh khối tế bào Các nhân tố ức chế protease, tác nhân ổn định protein, nhân tố ức chế N-glycosylation tiết protein, tác nhân tái hoạt động glycan (polysaccharide) mẫu dò lực sử dụng để nghiên cứu đặc điểm đoạn này, khảo sát vị trí chúng chế hình thành Tất phân tử kháng thể tiết môi trường nuôi cấy Interleukin Là thuật ngữ chung cho cytokine bạch cầu sản xuất (lymphokine), interleukin-2 cytokine quan trọng phát triển đáp ứng miễn dịch thích ứng, sử dụng để điều trị số bệnh viêm nhiễm virus bệnh ung thư Interleukin-2 (IL-2) interleukin-4 (IL-4) người sản xuất tiết môi trường nuôi cấy dịch huyền phù tế bào N tabacum biến đổi di truyền Sự tiết qua màng huyết tương thành tế bào vào môi trường thuận lợi nhờ trình tự leader tự nhiên của động vật có vú Nồng độ IL-2 IL-4 môi trường nuôi cấy tương ứng 0,10 0,18µg/mL, nồng độ chúng bên lymphokine cao (IL-2 khoảng 0,8 µg/mL IL-4 khoảng 0,28 µg/mL) Phân tích Western blot10 cho thấy IL-4 tiết môi trường nuôi cấy tế bào thực vật hai chuỗi polypeptide nhỏ với trọng lượng phân tử khoảng 1820 kDa Hoạt tính sinh học IL-2 xác định sinh sản tế bào dòng tế bào CTLL-2 chuột phụ thuộc IL-2 [CT.h4S] chuyển nhiễm ổn định receptor IL-4 người Những khám phá cho thấy nuôi cấy dịch huyền phù tế bào thực vật sử dụng để sản xuất tiết môi trường đủ loại protein động vật có vú có hoạt tính sinh học dùng chẩn đoán điều trị ... A niger, tế bào động vật có vú tế bào thực vật, sản xuất để dùng lâm sàng Bảng 7.3 Một số protein tái tổ hợp sản xuất nuôi cấy tế bào thực vật Protein ượcbiểuhiện Nhântốsinhtrưởngbiểumôngười... yếu tố quan trọng đứt gãy protein ngoại lai làm giảm nồng độ sản phẩm chức mô thực vật sau phân tử tổng hợp lắp ráp Sự đứt gãy protein ngoại lai làm bẩn sản phẩm với đoạn protein hoạt tính, người... loại bỏ protein đứt gãy hoạt động thu hồi protein chức sản xuất quy mô lớn Tìm hiểu chi tiết vị trí chế đứt gãy nội ngoại bào cần thiết để phát triển phương pháp cho giảm thiểu tổn thất protein