NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA MỘT SỐ CHỦNG XẠ KHUẨN CÓ HOẠT TÍNH KHÁNG Pseudomonas aeruginosa
TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC BỘ MÔN KHOA HỌC SỰ SỐNG NGUYỄN THỊ LIỄU NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA MỘT SỐ CHỦNG XẠ KHUẨN CĨ HOẠT TÍNH KHÁNG Pseudomonas aeruginosa KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Giáo viên hướng dẫn: TS Vi Thị Đoan Chính Thái Nguyên - 2009 NỘI DUNG BÁO CÁO Mở đầu Đối tượng, vật liệu phương pháp nghiên cứu Kết thảo luận Kết luận kiến nghị Đặt vấn đề MỞ ĐẦU - Nhiễm trùng bệnh viện mối đe dọa đến tính mạng gây tổn thất nặng nề kinh tế cho hàng triệu người dân giới - Pseudomonas aeruginosa tác nhân gây nhiễm trùng bệnh viện hàng đầu - Không Pseudomonas aeruginosa ngày kháng lại nhiều CKS sử dụng điều trị - Trong vi sinh vật có khả sinh kháng sinh xạ khuẩn đóng vai trị quan trọng nhất, chiếm tới 80% CKS mô tả - Nhằm góp phần tìm kiếm chủng xạ khuẩn có khả sinh kháng sinh điều trị bệnh nhiễm trùng bệnh viện nói chung nhiễm Pseudomonas aeruginosa nói riêng, thực đề tài:“ Nghiên cứu đặc điểm sinh học số chủng xạ khuẩn có hoạt tính kháng Pseudomonas aeruginosa” 2 Mục tiêu nghiên cứu - Nghiên cứu đặc điểm sinh học đặc điểm phân loại hai chủng xạ khuẩn lựa chọn - Phân loại đến loài hai chủng xạ khuẩn nghiên cứu Nội dung nghiên cứu - Nghiên cứu đặc điểm hình thái, đặc điểm ni cấy, đặc điểm sinh lý, sinh hoá hai chủng xạ khuẩn lựa chọn - Nghiên cứu đặc điểm phân loại hai chủng xạ khuẩn - Phân loại đến loài hai chủng xạ khuẩn nghiên cứu ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu 2.1.1 Xạ khuẩn Hai chủng xạ khuẩn DT 7.1 HT 28 có hoạt tính kháng sinh mạnh, kháng vi khuẩn G+, vi khuẩn G- Đặc biệt khả kháng số chủng Pseudomonas aeruginosa phân lập từ bệnh nhân 2.1.2 Vi sinh vật kiểm định - Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 Viện kiểm nghiệm - Bộ Y tế cung cấp - Pseudomonas aeruginosa 45 phân lập từ bệnh nhân Khoa vi sinh vật, bệnh viện Đa khoa trung ương Thái Nguyên cung cấp 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp giữ giống 2.3.2 Phương pháp xác định hoạt tính kháng sinh 2.3.3 Nghiên cứu đặc điểm sinh học phân loại xạ khuẩn 2.3.4 Phương pháp xử lí số liệu KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Đặc điểm hình thái chủng DT 7.1 HT 28 Cuống sinh bào tử bề mặt bào tử chủng DT 7.1 Cuống sinh bào tử bề mặt bào tử chủng HT 28 3.2 Đặc điểm nuôi cấy chủng DT 7.1 HT 28 Bảng 3.1 Đặc điểm nuôi cấy hai chủng DT 7.1 HT 28 Môi trường ISP ISP ISP ISP ISP Gause Gause 79 Glycerin nitrat Kí hiệu chủng Sinh trưởng Màu KTKS Màu KTCC Màu sắc tố hoà tan DT 7.1 + Trắng Trắng Không màu HT 28 ++ Xám Trắng xám Không màu DT 7.1 +++ Vàng Vàng đậm Vàng HT 28 +++ Xám Xám Không màu DT 7.1 +++ Vàng Trắng Không màu HT 28 ++ Vàng Trắng Không màu DT 7.1 ++ Vàng Trắng Không màu HT 28 ++ Ghi xám Trắng xám Nâu đen DT 7.1 + Xám Trắng Vàng đậm HT 28 + Xám Trắng Đen DT 7.1 +++ Xám Vàng Vàng HT 28 +++ Xám Không màu Không màu DT 7.1 + Ghi xám Vàng Vàng HT 28 + Xám Nâu thẫm Nâu DT 7.1 ++ Trắng Trắng Không màu HT 28 ++ Trắng Nâu Vàng nâu DT 7.1 ++ Vàng Vàng đậm Vàng HT 28 ++ Nâu xám Đỏ thẫm Đỏ ∗ Khả sinh sắc tố melanin - Chủng DT 7.1 khơng có khả làm biến đổi màu môi trường ISP6 từ vàng sang đen chứng tỏ khơng có khả sinh sắc tố melanin - Chủng HT 28 có khả làm biến đổi màu môi trường ISP từ vàng sang đen, chứng tỏ chủng có khả sinh sắc tố melanin Hình 3.5 Khả sinh sắc tố melanin chủng DT 7.1 HT 28 3.3 Đặc điểm sinh lý, sinh hoá 3.3.1 Khả đồng hoá nguồn cacbon chủng DT 7.1 HT 28 Bảng Khả đồng hoá nguồn đường chủng DT7.1 HT 28 Chủng xạ khuẩn Nguồn đường DT7.1 HT28 Khơng có đường (Đối chứng âm) - - Glucose + ++ Arabinose +++ +++ Raffinose - ++ Maltose + +++ Lactose +++ +++ Inositol +++ ++ Fructose +++ +++ Ghi chú: +++ Sinh trưởng tốt + Sinh trưởng yếu ++ Sinh trưởng trung bình - Khơng sinh trưởng 3.3 Đặc điểm sinh lý, sinh hoá 3.3.1 Khả đồng hoá nguồn cacbon chủng DT 7.1 HT 28 Hình 3.6 Khả đồng hố Hình 3.7 Khả đồng hoá nguồn đường chủng DT 7.1 nguồn đường chủng HT 28 3.3.2 Khả chịu muối Bảng 3.3 Khả chịu muối chủng DT 7.1 HT 28 Nồng độ muối (%) Chủng xạ khuẩn DT7.1 HT28 ++ ++ 0,5 ++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ + + - + - 11 - - 12 - - Ghi chú: +++ Sinh trưởng tốt + Sinh trưởng yếu ++ Sinh trưởng trung bình - Khơng sinh trưởng 3.3.3 Khả chịu nhiệt Bảng 3.4 Khả chịu nhiệt chủng DT 7.1 HT 28 Nhiệt độ 20oC 25oC 30oC 35oC 40oC 45oC 50oC DT 7.1 ++ +++ +++ +++ ++ + - HT 28 ++ +++ +++ +++ + - - Chủng Ghi chú: +++ Sinh trưởng tốt + Sinh trưởng yếu ++ Sinh trưởng trung bình - Khơng sinh trưởng 3.3.4 Ảnh hưởng pH đến sinh trưởng xạ khuẩn Bảng 3.5 Ảnh hưởng pH đến khả sinh trưởng chủng DT 7.1 HT 28 Thang pH Chủng 5,5 6,5 DT 7.1 - - + ++ ++ +++ HT 28 - - + + ++ +++ Ghi chú: +++ Sinh trưởng tốt + Sinh trưởng yếu 7.5 8,5 9,5 +++ +++ ++ + + - +++ + + - - ++ ++ Sinh trưởng trung bình - Khơng sinh trưởng 3.3.5 Khả sinh enzyme ngoại bào Bảng 3.6 Hoạt tính enzyme chủng DT 7.1 HT 28 Hoạt tính enzyme (D – d, mm) Chủng Amylase Protease Cellulase DT 7.1 20,33 ± 0,58 19,67 ± 0,89 20,33 ± 0,89 HT 28 18,67 ± 0,58 14,67 ± 0,33 18,33 ± 0,89 3.3.5 Khả sinh enzyme ngoại bào Hình 3.8 Hoạt tính enzyme chủng DT 7.1 HT 28 3.4 Định loại hai chủng DT 7.1 HT 28 - Chủng DT 7.1 xem chủng xạ khuẩn thuộc lồi Streptomyces kursanovii có tên gọi Streptomyces kursanovii DT 7.1 - Có thể xem chủng HT 28 chủng xạ khuẩn thuộc loài Streptomyces cinereoruber subsp cinereoruber chủng có tên gọi Streptomyces cinereoruber subsp HT 28 Bảng 3.7 So sánh đặc điểm phân loại chủng DT 7.1 với Streptomyces kursanovii Đặc điểm so sánh Cuống sinh bào tử Bề mặt bào tử KTKS MT ISP KTCC Sắc tố KTKS MT Gause KTCC Sắc tố KTKS MT Gause KTCC Sắc tố KTKS MT Glycerin KTCC nitrat Sắc tố MT ISP Sinh tổng hợp melanin Sinh tổng hợp CKS DT 7.1 Streptomyces kursanovii Xoắn Nhẵn Vàng Vàng đậm Vàng Xám Vàng Vàng Ghi xám Vàng Vàng Vàng Vàng đậm Vàng Xoắn Nhẵn Vàng Vàng đậm đến vàng cam Vàng Xám Vàng đậm vàng cam Giống màu KTCC, không màu Vàng đến ghi Vàng nâu Vàng Vàng Vàng đậm Vàng Khơng Có sinh melanin Chưa rõ Ostreogrisine, Fumaramycine Bảng 3.8 So sánh đặc điểm phân loại chủng HT 28 với Streptomyces cinereoruber subsp cinereoruber Đặc điểm so sánh Cuống sinh bào tử Bề mặt bào tử KTKS ISP3 KTCC Sắc tố KTKS MT Gause KTCC Sắc tố KTKS MT Gause KTCC Sắc tố KTKS MT Glycerin KTCC nitrat Sắc tố MT ISP Sinh tổng hợp melanin Thẳng Nhẵn Xám Xám Không màu Xám Không màu Không màu Xám Nâu thẫm Nâu Nâu xám Đỏ thẫm Đỏ Có sinh melanin Streptomyces cinereoruber subsp cinereoruber Thẳng Nhẵn Không mô tả Không mô tả Không mô tả Xám Tím hồng Tím hồng Xám Nâu đến nâu thẫm Nâu, dần Kem, nâu xám Đỏ thẫm Đỏ Có sinh melanin Sinh tổng hợp CKS Chưa rõ Rhodomycine HT 28 KẾT LUẬN Đặc điểm hình thái hai chủng DT 7.1 HT 28 - Chủng DT 7.1 có cuống sinh bào tử xoắn (S) , bề mặt bào tử nhẵn (Sm) - Chủng HT 28 có cuống sinh bào tử thẳng (RF), bề mặt bào tử nhẵn (Sm) Một số đặc điểm sinh lý, sinh hoá hai chủng DT 7.1 HT 28 - Khả đồng hoá đường : hai chủng có khả đồng hố nhiều nguồn đường khác arabinose, lactose, fructose… - Khả chịu muối: khả chịu muối tối đa chủng DT 7.1 9% chủng HT 28 5% - Khả chịu nhiệt: Nhiệt độ tối ưu cho sinh trưởng hai chủng 25oC - 35oC - Xác định pH tối ưu: Chủng DT 7.1 sinh trưởng tốt mơi trường có pH 6,5 - 7,5 chủng HT 28 sinh trưởng tốt môi trường có pH 6,5 - - Khả sinh enzyme ngoại bào: hai chủng có khả sinh enzyme amylase, protease, cellulase Định loại hai chủng DT 7.1 HT 28 - Chủng DT 7.1 có tên gọi Streptomyces kursanovii DT 7.1 - Chủng HT 28 có tên gọi Streptomyces cinereoruber subsp HT 28 KIẾN NGHỊ Hai chủng xạ khuẩn DT 7.1 HT 28 có khả sinh kháng sinh mạnh, kháng vi khuẩn G+ G-, đặc biệt khả kháng P aeruginosa Vì cần tiếp tục nghiên cứu vấn đề sau: - Tối ưu hóa điều kiện lên men CKS - Tách chiết tìm hiểu chất hoá học CKS hai chủng sinh HÂN THÀNH CẢM ƠN! XIN C ... hoạt tính kháng Pseudomonas aeruginosa? ?? 2 Mục tiêu nghiên cứu - Nghiên cứu đặc điểm sinh học đặc điểm phân loại hai chủng xạ khuẩn lựa chọn - Phân loại đến loài hai chủng xạ khuẩn nghiên cứu. .. nghiên cứu Nội dung nghiên cứu - Nghiên cứu đặc điểm hình thái, đặc điểm ni cấy, đặc điểm sinh lý, sinh hoá hai chủng xạ khuẩn lựa chọn - Nghiên cứu đặc điểm phân loại hai chủng xạ khuẩn - Phân loại... kiếm chủng xạ khuẩn có khả sinh kháng sinh điều trị bệnh nhiễm trùng bệnh viện nói chung nhiễm Pseudomonas aeruginosa nói riêng, thực đề tài:“ Nghiên cứu đặc điểm sinh học số chủng xạ khuẩn có hoạt