ảnh hưởng của tdz và naa đến sự nhân chồi và tạo rễ in vitro cây hoa thược dược (dahlia variabilis desf.)

TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG NGUYỄN THỊ THÊM ẢNH HƢỞNG CỦA TDZ VÀ NAA ĐẾN SỰ NHÂN CHỒI VÀ TẠO RỄ IN VITRO CÂY HOA THƢỢC DƢỢC (Dahlia variabilis Desf.) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Ngành: Hoa Viên Cây Cảnh Cần Thơ - 2012 TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG Luận văn tốt nghiệp Ngành: HOA VIÊN VÀ CÂY CẢNH ẢNH HƢỞNG CỦA TDZ VÀ NAA ĐẾN SỰ NHÂN CHỒI VÀ TẠO RỄ IN VITRO CÂY HOA THƢỢC DƢỢC (Dahlia variabilis Desf.) Cán hƣớng dẫn: Sinh viên thực hiện: Ths Nguyễn Văn Ây Nguyễn Thị Thêm MSSV: 3083757 Lớp: Hoa Viên Cây Cảnh K34 TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG Luận văn tốt nghiệp Kỹ sƣ ngành Hoa viên Cây cảnh với đề tài: “Ảnh hƣởng TDZ NAA đến nhân chồi tạo rễ in vitro hoa thƣợc dƣợc (Dahlia variabilis Desf.)” sinh viên NGUYỄN THỊ THÊM thực kính trình lên hội đồng chấm luận văn tốt nghiệp Cần Thơ, ngày… tháng… năm 2012 Cán hƣớng dẫn Nguyễn văn Ây i TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG Hội đồng chấm luận văn chấp thuận luận văn tốt nghiệp Kỹ sƣ ngành Hoa viên Cây cảnh với đề tài: “Ảnh hƣởng TDZ NAA đến nhân chồi tạo rễ in vitro hoa thƣợc dƣợc (Dahlia variabilis Desf.)”, sinh viên Nguyễn Thị Thêm thực bảo vệ trƣớc hội đồng chấm luận văn tốt nghiệp ngày….tháng….năm 2012 Luận văn đƣợc hội đồng đánh giá mức: ……………………………………… Ý kiến hội đồng: ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… Cần Thơ, ngày……tháng……năm 2012 Chữ ký thành viên hội đồng Thành viên Thành viên Khoa Duyệt Trƣởng khoa Nông Nghiệp & SHƢD ii Thành viên LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu thân thầy hƣớng dẫn Các số liệu, kết trình bày luận văn trung thực chƣa đƣợc công bố luận văn trƣớc Tác giả luận văn Nguyễn Thị Thêm iii TIỂU SỬ CÁ NHÂN LÝ LỊCH SƠ LƢỢC Họ tên: Nguyễn Thị Thêm Giới tính: Nữ Ngày sinh: 01/05/1989 Dân tộc: Kinh Nơi sinh: Cần Thơ Họ tên cha: Nguyễn Văn Hiền Họ tên mẹ: Phan Thị Bót Chỗ nay: Ấp Thới Xuân, xã Trƣờng Thắng, huyện Thới Lai, thành phố Cần Thơ QUÁ TRÌNH HỌC TẬP - 1996-2001: Học sinh Trƣờng tiểu học Thới Lai - 2001-2005: Học sinh Trƣờng trung học sở Thị Trấn Thới lai - 2005-2008: Học sinh Trƣờng trung học phổ thông Thới Lai - 2008-2012: Sinh viên Trƣờng Đại Học Cần Thơ, Khoa Nông nghiệp Sinh học ứng dụng, Ngành Hoa viên & Cây cảnh, khóa 34 Cần Thơ, ngày… tháng… năm 2012 Ngƣời khai Nguyễn Thị Thêm iv LỜI CẢM TẠ Kính dâng! Cha mẹ suốt đời tận tụy tƣơng lai Xin tỏ lòng biết ơn đến! Thầy Nguyễn Văn Ây tận tình giúp đỡ hƣớng dẫn suốt trình thực đề tài luận văn tốt nghiệp Thầy Phạm Phƣớc Nhẫn cô Lê Minh Lý, cố vấn học tập Lớp, với quý thầy cô Khoa Nông nghiệp Sinh Học Ứng Dụng tận tâm, dìu dắt, rèn luyện suốt năm học trƣờng Đại Học Cần Thơ Chân thành cám ơn! Cô Lê Hồng Giang, Cô Phan Thị Hồng Nhung, anh Mai Vũ Duy với anh chị, bạn sinh viên phòng thí nghiệm Nuôi Cấy Mô, Bộ Môn Sinh Lý-Sinh Hóa, Khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng, Trƣờng Đại Học Cần Thơ hết lòng giúp đỡ Các bạn sinh viên lớp Hoa viên & cảnh K34 giúp đỡ động viên năm tháng giảng đƣờng Đại Học v MỤC LỤC TRANG CHẤP NHẬN LUẬN VĂN CỦA CÁN BỘ HƢỚNG DẪN TRANG CHẤP NHẬN LUẬN VĂN CỦA HỘI DỒNG LỜI CAM ĐOAN TIỂU SỬ CÁ NHÂN LỜI CẢM TẠ MỤC LỤC DANH SÁCH BẢNG DANH SÁCH HÌNH DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT TÓM LƢỢC MỞ ĐẦU CHƢƠNG LƢỢC KHẢO TÀI LIỆU 1.1 Nguồn gốc, phân bố, giá trị thƣợc dƣợc i ii iii iv v vi viii ix x xi 2 1.1.1 Nguồn gốc phân bố 1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.1.3 Giá trị kinh tế 1.1.4 Các phƣơng pháp nhân giống thƣợc dƣợc 1.2 Phƣơng pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.2.1 Môi trƣờng nuôi cấy 1.2.2 Sơ lƣợc kỹ thuật nuôi cấy mô thực vật 1.2.3 Ƣu điểm khuyết điểm nuôi cấy mô thực vật 1.2.4 Các giai đoạn vi nhân giống 1.2.5 Phƣơng pháp vi nhân giống 11 1.3 Một số nghiên cứu thuộc họ Cúc (Asteraceae) CHƢƠNG PHƢƠNG TIỆN V PHƢƠNG PH P 12 14 2.1 Phƣơng tiện nghiên cứu 14 2.1.1 Vật liệu 14 2.1.2 Địa điểm thời gian tiến hành thí nghiệm 14 2.1.3 Điều kiện thí nghiệm 14 2.1.4 Thiết bị hóa chất 14 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 15 2.2.1 Chuẩn bị môi trƣờng nuôi cấy vi 15 2.2.2 Chuẩn bị mẫu cấy 15 2.2.3 ố tr th nghiệm 15 2.3 Xử l số liệu 17 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Hiệu TDZ lên nhân chồi thƣợc dƣợc in vitro 18 18 3.1.1 Số chồi gia tăng 18 3.1.2 Số gia tăng 21 3.1.3 Chiều cao gia tăng (cm) 22 3.2 Hiệu NAA lên tạo rễ chồi thƣợc dƣợc in 24 vitro 3.2.1 Tỷ lệ (%) chồi tạo rễ 24 3.2.2 Số rễ/chồi 25 3.2.3 Chiều dài rễ (cm) 26 3.2.4 Số gia tăng 27 3.2.5 Chiều cao gia tăng (cm) 28 CHƢƠNG KẾT LUẬN V ĐỀ NGHỊ 30 4.1 Kết luận 30 4.2 Đề nghị 30 T I LIỆU THAM KHẢO PHỤ CHƢƠNG vii DANH SÁCH BẢNG Bảng 3.1 Tựa bảng Trang Ảnh hƣởng TDZ lên gia tăng số chồi thƣợc dƣợc theo thời gian 18 (tuần sau cấy) 3.2 Ảnh hƣởng TDZ lên gia tăng số thƣợc dƣợc theo thời gian (tuần 21 sau cấy) 3.3 Ảnh hƣởng TDZ lên gia tăng chiều cao (cm) chồi thƣợc dƣợc theo 22 thời gian (tuần sau cấy) 3.4 Ảnh hƣởng NAA lên tạo rễ chồi thƣợc dƣợc vào thời điểm 25 tuần sau cấy 3.5 Ảnh hƣởng NAA lên gia tăng số thƣợc dƣợc theo thời gian (tuần 28 sau cấy) 3.6 Ảnh hƣởng NAA lên gia tăng chiều cao (cm) chồi thƣợc dƣợc theo thời gian (tuần sau cấy) viii 29 g/l + NAA mg/l đạt 3,7 cm, thấp so với nghiệm thức MS + than hoạt tính g/l + NAA 0,5 mg/l nghiệm thức đối chứng (Hình 3.3) Tuy số rễ chiều dài rễ nghiệm thức MS bổ sung than hoạt tính g/l + NAA 0,5 mg/l không khác biệt thống kê với nghiệm thức đối chứng, nhƣng nghiệm thức rễ phát triển tốt to hỏe so với nghiệm thức đối chứng Tƣơng tự nhƣ ết thí nghiệm Tống Hồ Nam (2009), nghiệm thức đối chứng (MS không bổ sung chất điều hòa sinh trƣởng) có chiều dài rễ tăng cao Tuy nhiên nghiệm thức rễ dài, mãnh, t lông tơ ém sức sống Theo Đặng Minh Tâm (2002), giống cúc CHD C18 môi trƣờng nuôi cấy MS diện chất điều hòa sinh trƣởng thực vật, cho kết tốt với vƣơn dài rễ Tuy nhiên, môi trƣờng có bổ sung NAA - mg/l có số rễ trung bình cao, rễ dài to khỏe Kết thí nghiệm Đỗ Bé Thảo (2009), cho thấy chiều dài rễ chồi cúc “Farm t m” cao môi trƣờng NAA 0,5 mg/l nhƣng hi nồng độ NAA cao (2 mg/l NAA) làm hạn chế kéo dài rễ Theo Ngô Quốc Hƣng (2009) môi trƣờng MS có bổ sung NAA 0,5 mg/l số rễ hình thành cao (4,3 rễ) cho rễ dài (3,2 cm) thích hợp cho giai đoạn tạo rễ hoa cát tƣờng 3.2.4 Số gia tăng Bảng 3.5 cho thấy số đạt đƣợc nghiệm thức tăng dần theo thời gian nuôi cấy Tuy nhiên, tuần sau cấy số đạt đƣợc thấp khác biệt hông có nghĩa thống kê nghiệm thức Đến thời điểm tuần sau cấy, số cao nghiệm thức MS + than hoạt tính g/l + NAA 0,5 mg/l 5,5 lá, khác biệt thống kê mức nghĩa 1% so với nghiệm thức lại Nghiệm thức MS + than hoạt tính g/l + NAA mg/l có số thấp (3,6 lá) Đến thời điểm tuần sau cấy, số cao nghiệm thức MS + than hoạt tính g/l + NAA 0,5 mg/l với 10,2 lá, khác biệt thống kê mức nghĩa 1% so với nghiệm thức lại Nghiệm thức MS + than hoạt tính g/l + NAA mg/l có số thấp (5,2 lá) nghiệm thức Tuy nhiên nghiệm thức MS + than hoạt tính g/l + NAA 0,5 mg/l lại không khác biệt số lá/chồi so với nghiệm thức đối chứng (8,1 lá) 27 Bảng 3.5 Ảnh hƣởng NAA lên gia tăng số thƣợc dƣợc theo thời gian (tuần sau cấy) Nồng độ NAA (mg/l) Thời gian sau cấy (tuần) 1,6 4,1 b 8,1 ab 0,5 2,0 5,5 a 10,2 a 1,9 4,4 ab 6,9 b 1,5 1,5 4,0 b 6,1 b 1,4 3,6 b 5,2 b ns ** ** 44,75 20,64 26,06 F CV (%) Trong cột số có chữ theo sau giống khác biệt khô phép thử Duncan; ns không khác biệt; **: khác biệt có ý ĩa 1% có ý ĩa t ống kê qua 3.2.5 Chiều cao gia tăng (cm) Kết Bảng 3.6 cho thấy vào thời điểm tuần sau cấy, chiều cao chồi đạt đƣợc cao nghiệm thức đối chứng (2 cm), khác biệt có nghĩa thống kê mức 5% so với nghiệm thức lại, ngoại trừ nghiệm thức MS + than hoạt tính g/l + NAA 0,5 mg/l MS + than hoạt tính g/l + NAA mg/l (lần lƣợt 1,7 1,8 cm) Chiều cao chồi thấp nghiệm thức MS bổ sung than hoạt tính g/l + NAA mg/l (0,9 cm) nhƣng hông hác biệt so với nghiệm thức MS + than hoạt tính g/l + NAA 1,5 mg/l Đến tuần sau cấy chiều cao chồi cao nghiệm thức MS bổ sung than hoạt tính g/l + NAA 0,5 mg/l (7 cm), khác biệt có ý nghĩa thống kê 1% so với nghiệm thức lại trừ nghiệm thức đối chứng Chiều cao chồi thấp nghiệm thức MS + than hoạt tính g/l + NAA mg/l (4,4 cm) nhƣng hông hác biệt thống kê so với nghiệm thức lại Đến tuần sau cấy chiều cao chồi cao nghiệm thức nghiệm thức MS + than hoạt tính g/l + NAA 0,5 mg/l 13,5 cm, khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5% so với nghiệm thức lại Tuy nhiên nghiệm thức lại khác biệt mặt thống kê 28 Bảng 3.6 Ảnh hƣởng NAA lên gia tăng chiều cao (cm) chồi thƣợc dƣợc theo thời gian (tuần sau cấy) Nồng độ NAA (mg/l) Thời gian sau cấy (tuần) 2,0 a 5,4 ab 10,2 b 0,5 1,7 ab 7,0 a 13,5 a 1,8 a 4,7 b 11,0 b 1,5 1,1 bc 4,6 b 10,3 b 0,9 c 4,4 b 10,1 b F * ** * CV (%) 41,05 23,69 20,04 Trong cột số có chữ theo sau giống khác biệt k ô có ý ĩa t ống kê qua phép thử Duncan; ns không khác biệt;* khác biệt có ý ĩa 5%; **: khác biệt có ý ĩa 1% Tóm lại, giai đoạn tạo rễ in vitro cho chồi thƣợc dƣợc, sử dụng môi trƣờng MS bổ sung g than hoạt tính môi trƣờng MS bổ sung than hoạt tính g/l NAA 0,5 mg/l, cho tỷ lệ chồi tạo rễ cao (tƣơng ứng 90,5% 100%), số rễ đƣợc hình thành nhiều (tƣơng ứng 10,3 12,5 rễ/chồi), chiều dài rễ (tƣơng ứng 8,3 9,5 cm), số (tƣơng ứng 8,1 10,2 lá), chiều cao chồi (tƣơng ứng 10,2 13,5 cm) đạt cao sau tuần nuôi cấy Các chồi in vitro sinh trƣởng phát triển tốt 29 CHƢƠNG KẾT LUẬN V ĐỀ NGHỊ 4.1 Kết luận Trong giai đoạn nhân chồi hoa thƣợc dƣợc, sử dụng môi trƣờng MS không bổ sung chất điều hòa sinh trƣởng TDZ để nuôi cấy đạt đƣợc hệ số nhân chồi cao (2,93 chồi sau tuần nuôi cấy) Trên môi trƣờng chồi sinh trƣởng phát triển tốt Sử dụng môi trƣờng MS bổ sung than hoạt tính g/l NAA 0,5 mg/l để tạo rễ hoa thƣợc dƣợc in vitro cho tỷ lệ tạo rễ cao (100%) số rễ nhiều (12,5 rễ) rễ phát triển tốt (9,5 cm) 4.2 Đề nghị Tiếp tục nghiên cứu giai đoạn dƣỡng hoa thƣợc dƣợc vƣờn ƣơm để hoàn thành quy trình vi nhân giống 30 T I LIỆU THAM HẢO  Tiếng Việt Đỗ Bé Thảo 2009 Khảo sát môi trƣờng tạo rễ tiền dƣỡng hoa cúc “Farm t m” (Chrysanthemum sp.) in vitro Luận văn tốt nghiệp ngành hoa viên cảnh Khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng Trƣờng Đại Học Cần Thơ Đặng Minh Tâm 2002 Khảo sát yếu tố ảnh hƣởng giai đoạn tạo hoàn chỉnh sinh trƣởng số giống cúc (Chrysanthemum sp.) nhập vào Việt nam Luận văn tốt nghiệp kỹ sƣ ngành trồng trọt Khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng Trƣờng Đại Học Cần Thơ Hoàng Đức Cự 2006 Sinh học thực vật Nhà xuất Đại học Quốc Gia Hà Nội Hoàng Thị Lan Hƣơng, Nguyễn Xuân Linh Nguyễn Thị Kim Lý 2004 Nghiên cứu qui trình nhân giống cúc CN97 phƣơng pháp nuôi cấy mô Tạp chí nông nghiệp phát triển nông thôn, (4) Hà Thị Lệ Ánh 2005 Giáo trình thực tập hình thái giải phẫu thực vật Tủ sách Đại học Cần Thơ Lâm Ngọc Phƣơng 2009 Giáo trình nhân giống vô tính Tủ sách Đại học Cần Thơ Lê Minh Lý 2010 Nhân giống đỗ quyên in vitro (Rhododendron sp.) Luận văn thạc sĩ trồng trọt Khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng Trƣờng Đại Học Cần Thơ Lê Văn Hòa Nguyễn Bảo Toàn 2005 Giáo trình sinh lý thực vật Tủ sách Đại học Cần Thơ Lê Văn Hòa, Nguyễn Bảo Toàn Đặng Phƣơng Trâm 1999 Bài giảng sinh lý thực vật Tủ sách Đại học Cần Thơ Ngọc Hà 2011 Kỹ thuật trồng hoa, mai, quất, đào NX Văn hóa-Thông tin Ngô Quốc Hƣng 2009 Hiệu benzyl adenin, naphthaleneacetic acid Gibberellic acid lên tạo chồi rễ hoa cát tƣờng (Eustoma grandiflorum (Raf.) Shinn.) in vitro Luận văn tốt nghiệp đại học, Khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng, Trƣờng Đại học Cần Thơ 31 Ngô Đăng Vịnh, Hà Thị Thúy, Dƣơng Minh Nga 2003 “Nghiên cứu hoàn thiện quy trình nhânh nhanh giống hoa đồng tiền nhập nội công nghệ in vitro” Tạp trí nông nghiệp phát triển nông thôn, Số 8/2003, 1012 - 1014 Nguyễn Bảo Toàn 2010 Giáo trình nuôi cấy mô tế bào thực vật NX Đại học Cần Thơ Nguyễn Xuân Linh 1998 Hoa kỹ thuật trồng hoa NXB Nông nghiệp Nguyễn Văn Uyển, Đoàn Thị Ái Thuyền Phan Xuân Thanh 1984 Nuôi cấy mô thực vật phục vụ công tác giống trồng Thành phố Hồ Ch Minh Nhà xuất Nông nghiệp Tp Hồ Ch Minh Nguyễn Đức Thành 2000 Nuôi cấy mô tế bào thực vật, nghiên cứu ứng dụng Nhà xuất Nông nghiệp Nguyễn Thị Lý Anh Nguyễn Quang Thạch 2004 Nghiên cứu nhân nhanh in vitro giống hoa cúc Nhật “Rivalry” Tạp chí nông nghiệp phát triển nông thôn, (7) Nguyễn Thị Kim Lý Nguyễn Xuân Linh 2004 Nghiên cứu qui trình công nghệ nhân nhanh giống cúc CN20 Tạp chí nông nghiệp phát triển nông thôn, (12) Nguyễn Đức Lƣợng Lê Thị Thủy Tiên 2002 Công nghệ tế bào Nhà xuất Đại học Quốc gia Tp Hồ Ch Minh Nguyễn Thị Lý Anh, Hồ Thị Thu Thanh, Nguyễn Thị Thanh Phƣơng Nguyễn Tấn Hƣng (2009), “Nghiên cứu nuôi cấy in vitro đào Nhật Tân (Prunus persica)” Tạp chí khoa học phát triển, Trƣờng Đại học Nông Nghiệp Hà Nội 7(4):387-393 Nguyễn Văn Hồng 2009 Nghiên cứu biện pháp kỹ thuật nhân giống hoa đồng tiền phƣơng pháp nuôi cấy mô Thái Nguyên Luận văn thạc sĩ nông nghiệp Trƣờng Đại Học Thái Nguyên Phan Thị Bích Trâm 2008 Bài giảng sinh hóa Tủ sách Đại học Cần Thơ Phạm Văn Duệ 2005 Giáo trình kỹ thuật trồng hoa cảnh Nhà xuất Hà Nội 32 Trần Khắc Hạnh, Trần Thị Lệ, Nguyễn Thị Kim Lý Nguyễn Xuân Linh 2004 Xây dựng qui trình nhân giống cúc CN01 phƣơng pháp nuôi cấy mô Tạp chí nông nghiệp phát triển nông thôn, (11): 1506-1508 Tống Hồ Nam 2009 Vi nhân giống hoa cúc “Đài Loan” vàng (Chrysanthemum sp.) Luận văn tốt nghiệp ngành trồng trọt Khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng Trƣờng Đại Học Cần Thơ Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mạnh Hùng Lê Hồng Điệp 2006 Công nghệ tế bào Nhà xuất giáo dục Hà Nội Vũ Văn Vụ 1999 Sinh lý thực vật ứng dụng Nhà xuất Giáo Dục Võ Văn Chi 2003 Từ điển thực vật thông dụng tập NXB Khoa học Kỹ thuật  Tiếng Anh Curir, P., C Damiano, and T Cosmi 1986 In vitro propagation of some rose cultivars Acta Hortic 189, 221-224 Chen, J., D.B Mcconnell, R.J Henny, and K.T Everitt 2003 Cultural guidelines for commercial production of interiorscape Aglaonema IFAS ENH957 Univ of Florida Chin-yi lu, Nugent and Wardley 1990 Efficient, direct plant regeneration from stem segments of chrysanthemum (Chrysanthemum morifolium Ramat Cv Royal Purple) Calgene Pacific Pty, 16 Gipps Street, 3066 Colling wood, Victoria, Australia Fellmann, C.D., P.E Read and M.A Hosier 1987 Effects of thidiazuron and CPPU on meristem formation and shoot proliferation HortScience 22, 1197-1200 George E.F 1993 Plant propagation by tissue culture, Part and Edition Wilts, England, Exegetics Ltd 1362p Jaime, A Teixeira da silva 2004 The effect of carbon source on in vitro organogenesis of chrysanthemum thin cell layers Bragantia, 63 (2) 33 Kerns, H.R and M.M Meyer 1986 Tissue culture propagation of Acerx x freemanii using thidiazuron to stimulate shoot tip proliferation HortScience, 21, 1209-1210 Murthy, Murch and Saxena 1998 Thidiazuron: a potent regulator of in vitro plant morphogenesis In vitro cellular and Development Biology-Plant 34, 267275 Murashige, T and F Skoog 1962 A revised medium for rapid growth and bioassay with tobacco tissue culture Physiol Plant 15: 473 - 479 Mor, M.C, D.W.S Mok, D.J Armstrong, K Shudo, Y Isogai and T Okamoto 1982 Cytokinin activity of N-phenyl-N’-1,2,3 thidiazol-5-ylurea (Thidiazuron) Phytochemistry 21, 1509 - 1511 Pati, P.K., S.P Rath, M Sharma, A Sood, and P.S Ahuja 2006 In vitro propagation of rose – a review Biotechnology Advances 24 Pp.94 - 144 Singha, S and Bhatia S.K 1988 Shoot proliferation of pear cultures on medium containing thidiazuron and benzylamino purine HortScience 23, 803 34 PHỤ CHƢƠNG Thành phần môi trƣờng MS gồm: Nh m hoáng đa lƣợng (mg l) : NH4NO3 1650 KNO3 1900 MgSO4.7H2O 370 CaCl2 440 KH2PO4 170 Nh m hoáng vi lƣợng (mg l): MnSO4.4H2O 22,30 ZnSO4.7H2O 8,60 H3BO3 6,20 Na2MoO4.2H2O 0,25 CuSO4.5H2O 0,025 CoCl2.6H2O 0,025 KI 0,83 FeSO4.7H2O 27,80 Na2EDTA 37,30 Vitamin (mg/l): Thiamine (B1) Pyridoxine (B6) Nicotinic acid (B3) PHỤ CHƢƠNG 2.1 Thí nghiệm Hiệu TDZ lên nhân chồi thƣợc dƣợc in vitro Phụ Bảng Số chồi/mẫu thƣợc dƣợc môi trƣờng có nồng độ TDZ khác tuần sau cấy Nguồn biến Tổng bình Trung bình động Độ tự phƣơng bình Giá trị F Giá trị P phƣơng Nghiệm thức 0,020 0,003 5,608 0,0006 Sai số 28 0,017 0,001 Tổng cộng 34 0,037 CV (%) = 3,42 Số liệu đ ợc chuyể sa lo (x+5) tr ớc phân tích thống kê Phụ Bảng Số chồi/mẫu thƣợc dƣợc môi trƣờng có nồng độ TDZ khác tuần sau cấy Nguồn biến Tổng bình Trung bình động Độ tự phƣơng bình Giá trị F Giá trị P phƣơng Nghiệm thức 0,116 0,019 17,189 0,0000 Sai số 28 0,032 0,001 Tổng cộng 34 0,148 CV (%) = 4,52 Số liệu đ ợc chuyể sa lo (x+5) tr ớc phân tích thống kê Phụ Bảng Số chồi/mẫu thƣợc dƣợc môi trƣờng có nồng độ TDZ khác tuần sau cấy Nguồn biến Tổng bình Trung bình động Độ tự phƣơng bình Giá trị F Giá trị P phƣơng Nghiệm thức 0,134 0,022 18,871 0,0000 Sai số 28 0,033 0,001 Tổng cộng 34 0,167 CV (%) = 4,52 Số liệu đ ợc chuyể sa lo (x+5) tr ớc phân tích thống kê Phụ Bảng Số chồi/mẫu thƣợc dƣợc môi trƣờng có nồng độ TDZ khác tuần sau cấy Nguồn biến Tổng bình Trung bình động Độ tự phƣơng bình Giá trị F Giá trị P phƣơng Nghiệm thức 0,132 0,022 14,833 0,0000 Sai số 28 0,041 0,001 Tổng cộng 34 0,173 CV (%) = 4,82 Số liệu đ ợc chuyể sa lo (x+5) tr ớc phân tích thống kê Phụ Bảng Chiều cao (cm) chồi thƣợc dƣợc môi trƣờng có nồng độ TDZ khác tuần sau cấy Nguồn biến Tổng bình Trung bình động Độ tự phƣơng bình Giá trị F Giá trị P phƣơng Nghiệm thức 1,306 0,218 17,616 0,0000 Sai số 28 0,346 0,012 Tổng cộng 34 1,652 CV (%) = 7,50 Số liệu đ ợc chuyể sa lo (x+5) tr ớc phân tích thống kê Phụ Bảng Chiều cao (cm) chồi thƣợc dƣợc môi trƣờng có nồng độ TDZ khác tuần sau cấy Nguồn biến Tổng bình Trung bình động Độ tự phƣơng bình Giá trị F Giá trị P phƣơng Nghiệm thức 3,559 0,593 23,658 0,0000 Sai số 28 0,702 0,025 Tổng cộng 34 4,261 CV (%) = 9,44 Số liệu đ ợc chuyể sa lo (x+5) tr ớc phân tích thống kê Phụ Bảng Chiều cao (cm) chồi thƣợc dƣợc môi trƣờng có nồng độ TDZ khác tuần sau cấy Nguồn biến Tổng bình Trung bình động Độ tự phƣơng bình Giá trị F Giá trị P phƣơng Nghiệm thức 4,731 0,788 33,920 0,0000 Sai số 28 0,651 0,023 Tổng cộng 34 5,382 CV (%) = 8,13 Số liệu đ ợc chuyể sa lo (x+5) tr ớc phân tích thống kê Phụ Bảng Chiều cao (cm) chồi thƣợc dƣợc môi trƣờng có nồng độ TDZ khác tuần sau cấy Nguồn biến Tổng bình Trung bình động Độ tự phƣơng bình Giá trị F Giá trị P phƣơng Nghiệm thức 4,430 0,738 23,848 0,0000 Sai số 28 0,867 0,031 Tổng cộng 34 5,297 CV (%) = 8,61 Số liệu đ ợc chuyể sa lo (x+5) tr ớc phân tích thống kê Phụ Bảng Số thƣợc dƣợc môi trƣờng có nồng độ TDZ khác tuần sau cấy Nguồn biến Tổng bình Trung bình động Độ tự phƣơng bình Giá trị F Giá trị P phƣơng Nghiệm thức 0,102 0,017 4,558 0,0024 Sai số 28 0,105 0,004 Tổng cộng 34 0,207 CV (%) = 7,79 Số liệu đ ợc chuyể sa lo (x+5) tr ớc phân tích thống kê Phụ Bảng 10 Số chồi thƣợc dƣợc môi trƣờng có nồng độ TDZ khác tuần sau cấy Nguồn biến Tổng bình Trung bình động Độ tự phƣơng bình Giá trị F Giá trị P phƣơng Nghiệm thức 0,326 0,054 18,244 0,0000 Sai số 28 0,083 0,003 Tổng cộng 34 0,409 CV (%) = 6,38 Số liệu đ ợc chuyể sa lo (x+5) tr ớc phân tích thống kê Phụ Bảng 11 Số chồi thƣợc dƣợc môi trƣờng có nồng độ TDZ khác tuần sau cấy Nguồn biến Tổng bình Trung bình động Độ tự phƣơng bình Giá trị F Giá trị P phƣơng Nghiệm thức 0,319 0,053 17,146 0,0000 Sai số 28 0,087 0,003 Tổng cộng 34 0,406 CV (%) = 6,07 Số liệu đ ợc chuyể sa lo (x+5) tr ớc phân tích thống kê Phụ Bảng 12 Số chồi thƣợc dƣợc môi trƣờng có nồng độ TDZ khác tuần sau cấy Nguồn biến Tổng bình Trung bình động Độ tự phƣơng bình Giá trị F Giá trị P phƣơng Nghiệm thức 0,301 0,050 12,710 0,0000 Sai số 28 0,111 0,004 Tổng cộng 34 0,412 CV (%) = 6,40 Số liệu đ ợc chuyể sa lo (x+5) tr ớc phân tích thống kê 2.2 Thí nghiệm Hiệu NAA lên tạo rễ chồi thƣợc dƣợc in vitro Phụ Bảng 13 Tỷ lệ (%) mẫu chồi thƣợc dƣợc tạo rễ môi trƣờng có nồng độ NAA khác tuần sau cấy Nguồn biến Tổng bình Trung bình động Độ tự phƣơng bình Giá trị F Giá trị P phƣơng Nghiệm thức 444,356 111,089 0,656 Sai số 30 5078,350 169,278 Tổng cộng 34 5522,705 CV (%) = 13,80 Phụ Bảng 14 Số rễ chồi thƣợc dƣợc môi trƣờng có nồng độ NAA khác tuần sau cấy Nguồn biến Tổng bình Trung bình động Độ tự phƣơng bình Giá trị F Giá trị P phƣơng Nghiệm thức 106,364 26,658 11,179 0,0000 Sai số 30 71,540 2,385 Tổng cộng 34 178,173 CV (%) = 16,07 Phụ Bảng 15 Chiều dài rễ (cm) chồi thƣợc dƣợc môi trƣờng có nồng độ NAA khác tuần sau cấy Nguồn biến Tổng bình Trung bình động Độ tự phƣơng bình Giá trị F Giá trị P phƣơng Nghiệm thức 134,819 33,705 10,534 0,0000 Sai số 30 95,984 3,199 Tổng cộng 34 230,803 CV (%) = 26,20 Phụ Bảng 16 Số thƣợc dƣợc môi trƣờng có nồng độ NAA khác tuần sau cấy Nguồn biến Tổng bình Trung bình động Độ tự phƣơng bình Giá trị F Giá trị P phƣơng Nghiệm thức 1,706 0,426 0,741 Sai số 30 17,266 0,576 Tổng cộng 34 18,971 CV (%) = 44,75 Phụ Bảng 17 Số thƣợc dƣợc môi trƣờng có nồng độ NAA khác tuần sau cấy Nguồn biến Tổng bình Trung bình động Độ tự phƣơng bình Giá trị F Giá trị P phƣơng Nghiệm thức 14,696 3,674 4,615 0,0050 Sai số 30 23,882 0,796 Tổng cộng 34 38,577 CV (%) = 20,64 Phụ Bảng 18 Số thƣợc dƣợc môi trƣờng có nồng độ NAA khác tuần sau cấy Nguồn biến Tổng bình Trung bình động Độ tự phƣơng bình Giá trị F Giá trị P phƣơng Nghiệm thức 105,379 26,345 7,271 0,0003 Sai số 30 108,696 3,623 Tổng cộng 34 214,075 CV (%) = 26,06 Phụ Bảng 19 Chiều cao (cm) chồi thƣợc dƣợc môi trƣờng có nồng độ NAA khác tuần sau cấy Nguồn biến Tổng bình Trung bình động Độ tự phƣơng bình Giá trị F Giá trị P phƣơng Nghiệm thức 6,174 1,543 3,978 0,0105 Sai số 30 11,640 0,388 Tổng cộng 34 17,814 CV (%) = 41,05 Phụ Bảng 20 Chiều cao (cm) chồi thƣợc dƣợc môi trƣờng có nồng độ NAA khác tuần sau cấy Nguồn biến Tổng bình Trung bình động Độ tự phƣơng bình Giá trị F Giá trị P phƣơng Nghiệm thức 32,255 8,064 5,291 0,0024 Sai số 30 45,724 1,524 Tổng cộng 34 77,979 CV (%) = 23,69 Phụ Bảng 21 Chiều cao (cm) chồi thƣợc dƣợc môi trƣờng có nồng độ NAA khác tuần sau cấy Nguồn biến Tổng bình Trung bình động Độ tự phƣơng bình Giá trị F Giá trị P phƣơng Nghiệm thức 59,292 14,823 3,039 0,0324 Sai số 30 146,319 4,877 Tổng cộng 34 205,611 CV (%) = 20,04 [...]... LƢỢC Đề tài: Ảnh hƣởng của TDZ và NAA đến sự nhân chồi và tạo rễ in vitro cây hoa thƣợc dƣợc (Dahlia variabilis Desf.) đƣợc thực hiện nhằm tìm ra nồng độ TDZ và NAA thích hợp cho giai đoạn nhân chồi và tạo rễ in vitro cây hoa thƣợc dƣợc Thí nghiệm đƣợc thực hiện tại phòng Nuôi cấy mô, Bộ môn Sinh lý-Sinh hóa, Khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng, Trƣờng Đại học Cần Thơ, từ tháng 01 đến tháng 06 năm... Vì vậy, đề tài Ảnh hƣởng của TDZ và NAA đến sự nhân chồi và tạo rễ in vitro cây hoa thƣợc dƣợc (Dahlia variablis Desf)” đƣợc thực hiện nhằm tìm ra nồng độ TDZ và NAA thích hợp cho giai đoạn nhân chồi và tạo rễ in vitro cây hoa thƣợc dƣợc, góp phần hoàn chỉnh quy trình vi nhân giống loại hoa này, đáp ứng nhu cầu tiêu thụ 1 CHƢƠNG 1 LƢỢC HẢO T I LIỆU 1.1 Nguồn gốc, phân bố, giá trị của cây thƣợc dƣợc... than hoạt t nh 2 g/l và NAA 0,5 mg/l để tạo rễ cho chồi hoa thƣợc dƣợc in vitro đã cho tỷ lệ tạo rễ cao (tƣơng ứng là 90,5% - 100%) và số rễ cao (tƣơng ứng là 10,3 và 12,5 rễ) rễ phát triển tốt so với các nghiệm thức còn lại Về mặt lý thuyết, trong một năm có thể tạo ra từ 1.060.000 – 1.172.000 cây in vitro từ một chồi ban đầu Từ khóa: cây hoa thƣợc dƣợc, TDZ, NAA, nhân chồi, tạo rễ xi MỞ ĐẦU Khi xã... SÁCH CHỮ VIẾT TẮT MS TDZ NAA HgCl2 ctv α -NAA : : : : : : Murashige & Skoog 1962 Thidiazuron Naphthalene acetic acid Clorua thủy ngân Cộng tác viên alpha-naphthalene acetic acid x NGUYỄN THỊ THÊM 2012 Ảnh hƣởng của TDZ và NAA đến sự nhân chồi và tạo rễ in vitro cây hoa thƣợc dƣợc (Dahlia variabilis Desf.) Luận văn tốt nghiệp đại học ngành Hoa viên - cây cảnh, Khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng, Trƣờng... do cây đã quen với cyto inin và mô đã đƣợc trẻ hóa (Nguyễn Đức Lƣợng và Lê Thị Thủy Tiên, 2002)  Các yếu tố ảnh hƣởng lên sự hình thành chồi bên Theo Nguyễn Đức Lƣợng và Lê Thị Thủy Tiên (2002) thì nhu cầu về cytikinin rất khác nhau (loại và nồng độ cytokinin) Ví dụ cây con của Bromeliaceae có thể tạo chồi bên mà không cần sự hiện diện của cyto inin trong môi trƣờng nuôi cấy Đối với một số loại cây, ... cụm chồi, chồi mới hình thành từ mầm ngủ của các nách lá Ở các nghiệm thức bổ sung TDZ với nồng độ cao thì số lƣợng chồi rất thấp, chồi kém phát triển và mô sẹo hình thành rất lớn Theo nhận định của Briggs và ctv (1988) thì TDZ kích thích sự nhân chồi đỗ quyên, tuy nhiên TDZ có xu hƣớng tạo ra các chồi cứng, ngắn và mộng nƣớc Nồng độ TDZ càng cao, mô sẹo càng nhiều và làm ảnh hƣởng đến sức sống của chồi. .. chất điều hòa sinh trƣởng NAA 0,5 mg/l cho tỉ lệ tạo rễ cao 100%, số rễ đƣợc hình thành 4,3 rễ/ cây, sự vƣơn dài rễ 5,6 cm và chiều cao chồi 4,6 cm có hiệu quả cao nhất trong môi trƣờng tạo rễ của chồi cúc “Farm t m” (Chrysanthemum sp.) Jaime (2004) sử dụng môi trƣờng MS kết hợp TDZ 2 mg/l để tạo mô sẹo có hiệu quả trên hoa cúc (Chrysanthemum sp.) và môi trƣờng thích hợp tạo rễ là MS kết hợp NAA 1 mg/l... hóa Khi có tác dụng của auxin ở các mức hác nhau, đối với các tế bào tách rời (nuôi cấy mô) sự cân đối giữa auxin và cytokinin sẽ kích thích sự thành lập callus, rễ và chồi Cyto inin đƣợc tổng hợp ở rễ, từ đó vận chuyển lên chồi Chúng đóng vai trò ch nh trong sự thành lập chồi và cơ quan trong nuôi cấy mô Nồng độ cytokinin quá cao sẽ kích thích hình thành nhiều chồi nhỏ nhƣng những chồi này không thể... làm cho chồi chứa nhiều nƣớc (Nguyễn Đức Lƣợng và Lê Thị Thủy Tiên, 2002) Các cyto inin thƣờng dùng trong nuôi cấy mô là kinetin (6-furfurylaminopurin), BA (Benzyl adenine), BAP (6-Benzyl amino purin) Ngoài các loại cytokinin trên, còn có Thidiazuron (TDZ) là cytokinin có hoạt tính cao nhờ ít bị phân hủy bởi enzyme nội sinh so với các loại cytokinin khác (Mor và ctv., 1982) Hiệu quả tăng nhanh chồi trong... Chất điều hòa sinh trƣởng Chất điều hòa sinh trƣởng thực vật là những chất có hoạt tính sinh học rất lớn, đƣợc tạo ra một lƣợng rất nhỏ để điều hòa các quá trình sinh trƣởng và phát triển của thực vật Gồm hai nhóm chất: auxin và cytokinin  Auxin Auxin tự nhiên thƣờng tìm thấy ở thực vật là indole-3-acetic acid (IAA) Năm 1953, Went và Thimann chứng minh rằng auxin (IAA) kích thích sự tạo rễ (trích bởi