QUY TRÌNH NUÔI CẤY ĐỈNH SINH TRƯỞNG CÂY KEO

QUY TRÌNH NUÔI CẤY ĐỈNH SINH TRƯỞNG CÂY KEO

Bài Tiểu Luận

Nhóm thực hiện:

Phạm Thị Ngọc Hạnh

Dùng Thị Chi Nguyễn Thị Nhung

QUY TRÌNH NUÔI CẤY ĐỈNH

SINH TRƯỞNG CÂY KEO.

I Các b ướ c c b n trong quá ơ ả

trình nuôi c y đ nh sinh ấ ỉ

tr ưở ng cây keo ở

1 Chọn cây lấy mẫu nuôi cấy:

Khi chọn mẫu cần xác định được:

- Xuất xứ của cây: lai tạo hay tự nhiên.

- Thân thẳng không tẽ.

- Có giá trị hàng hóa.

- Có giá trị sử dụng thương phẩm.

2 Chọn vị trí lấy mẫu:

- Không chọn đỉnh sinh trưởng ở những

cành phía dưới vì: tỉ lệ nảy chồi thấp, cây con tạo ra sẽ mọc ngang

- Đối với những cây từ 1-2 tuổi chọn những cành từ 2/3 cây trở lên ngọn vì: những

cành này phát triển thẳng, khả năng nảy chồi là tốt nhất

- Nên chọn cành cấp 1, cành cấp 2 thường phát triển ngang -> không tốt

3 Xử lý mẫu nuôi cấy:

- Xử lý thô: mẫu lấy về được rửa sạch bằng

xà phòng dưới vòi nước sau đó tráng lại bằng nước cất

- Xử lý tinh: có thể dùng cồn 75° 30 giây- 2 phút, HgCl2 3-4 phút , CaCl2 4-7 phút ,

Javen 20-25% 1-2 phút,

4 Cấy mẫu vào trong môi trường nuôi cấy.

• Mẫu sau khi xử lí được đưa vào môi

trường tái sinh chồi

• MS + 2mg BA + 30g sucrose + 0,1g Myo-inositol+ 3g agar , pH 5,8

• Nuôi cấy trong điều kiện nhiệt độ 25-27°C,

ẩm độ 75-80%, cường độ chiếu sáng từ 2000-3000 lux, thời gian 16h sáng/8h tối

5 Mẫu sau khi nuôi cấy được khoảng 20- 25 ngày thì có thể cấy chuyển sang hai loại

môi trường:

-Môi trường ra rễ

-Môi trường nhân nhanh:

Nhân nhanh chồi

• Môi trường: MS+ 1,5-2mg BAP, 30g

đường sucrose, 0,1 Myo- inotolsi,2g agar,

pH 5,8

Nuôi trong phòng với cường độ chiếu sáng

từ 2000-3000lux, thời gian chiếu sáng từ 10-12h/ ngày, nhiệt độ phòng 25-27°C, ẩm

độ 75-80%

6 Sau khi nuôi cấy trên môi trường nhân

nhanh cây cao được 1/3 lọ nuôi cấy (bình 500ml) thì tiến hành chuyển sang môi

trường ra rễ

- Môi trường ra rễ: môi trường cơ bản là môi trường MS giảm ½ NH4NO3, KNO3, đồng thời bổ sung thêm 1,550 mg/l glutamin,

750mg/l KCl, 20g sucrose,0,5mg/l TBA,

0,5mg/l NAA

- khi thấy cây mọc xanh dài khoảng

15-20cm, có từ 2-3 lá, bộ rễ khỏe thì chuyển sang môi trường thuần dưỡng

7 Sau khi nuôi cấy ở môi trường ra rễ

khoảng 10-20 ngày cho ra môi trường cát

có thể cấy chuyển cây ra bầu

Thao tác cấy chuyển

• Dụng cụ

- Kéo

- Kẹp

- Đĩa

Dùng kẹp gắp cây và dùng kéo cắt phần mẫu cần nuôi cấy Không để kéo cắt vào phần mẫu

có thạch, và nên loại bỏ những phần mẫu bị thối

• Đối với mẫu chuyển sang môi trường ra rễ:mẫu dài khoảng 2-3 cm, có 2-3 cặp lá Khi cấy nên

để thẳng mẫu và cho cắm vào thạch

• Mẫu cây thường có chồi hữu hiệu và chồi không hữu hiệu, chồi hữu hiệu là chồi mọc trực tiếp từ thân chính, còn lại là chồi không hữu hiệu

• Đối các với mẫu chuyển sang môi trường ra rễ nên chọn chồi hữu hiệu

• Đối với môi trường nhân nhanh:

Đối với keo trước khi cấy chuyển cần đổ thêm

Mẫu lấy có thể chồi hữu hiệu hoặc không hữu hiệu càng nhiều cặp lá càng tốt

- Môi trường nhân nhanh thường có đầy đủ các yếu tố như: khoáng đa lượng, vi lượng, vitamin, các chất kích thích sinh trưởng

Còn đối với môi trường ra rễ thường giảm từ

1/3-1/2, có một số chất giảm hoàn toàn

Concentrations (mg L -1 ) Concentrations (mg L Woody Plant Medium -1 )

Ammonium nitrate (NH4NO3) 1650 400

Boric Acid (H3BO3) 6.2 6.2

Calcium chloride (CaCl2 · 2H2O) 440 96

Calcium nitrate (Ca(NO3)2*4H2O 0 556

Cobalt chloride (CoCl2 · 6H2O) 0.025 0

Cupric sulfate (CuSO4 · 5H2O) 0.025 0.25

Ferrous sulfate (FeSO4 · 7H2O) 27.8 27.8

Magnesium sulfate (MgSO4 · 7H2O) 370 370

Manganese sulfate (MnSO4 · 4H2O) 22.3 22.3

Potassium iodine (KI) 0.83 0

Potassium nitrate (KNO3) 1,900l 0

Potassium phospate (KH2PO4) 0 170

Potassium sulfate (KH2PO4) 170 990

Sodium molybdate (Na2MoO4 · 2H2O) 0.25 0.25

Zinc sulfate (ZnSO4 · 7H2O) 8.6 8.6

Na2EDTA · 2H2O 37.2 37.2

Common additives

Myo-inositol 100 100

Nguyên tắc pha chế:

- Từ nồng độ thấp đến nồng độ cao

- Từ không đến có (không nên làm ngược lại)

• Nấu môi trường gồm có: nước, hóa chất (dung dịch mẹ và dạng tinh bột) + nước định mức +

pH-> nấu

Nấu: Nồi tráng men nấu được khoảng 5l, nồi

nhôm nấu được khoảng 30l: 3000 bình tam giác

250 ml

Cốc thủy tinh: 1l môi trường

Kết luận

• Với kỹ thuật nhân nhanh giống cây keo

bằng đỉnh sinh trưởng đã tạo ra một

lượng lớn giống cây sạch bệnh virus

• Khắc phục được nguy cơ lan truyền sâu bệnh qua vật liệu giống

• Giúp người dân nâng cao năng xuất phẩm chất phát triển kinh tế

III- Danh mục tài liệu tham khảo:

1 Lê Đình khả: nhân giống hom keo lá tràm và

keo tai tượng, kết quả nghiên cứu khoa học về chọn giống cây rừng Tập 2, NXB nông nghiệp,

Hà Nội, 1997.

2 Lê Đình Khả và cộng sự(2001): Nghiên cứu

chọn tạo giống và nhân giống cho một số loài

cây rừng chủ yếu Báo cáo khoa học đề tài

KHCN 08.04.2001.

3 Shoot apex culture of Acacia Mearnsii, by Iain Mungo Thompson, in the school of biochemistry, genetics, microbiology and plant pathology,