nghiên cứu nuôi thành thục trứng bò và trứng lợn

Bộ giáo dục đào tạo trờng đại học nông nghiệp hà nội Hà văn huy nghiên cứu nuôi thành thục trứng bò trứng lợn Luận văn thạc sĩ nông nghiệp Hà Nội, 2009 Bộ giáo dục đào tạo trờng đại học nông nghiệp hà nội Luận văn thạc sĩ nông nghiệp Đề tài: nghiên cứu nuôi thành thục trứng bò trứng lợn Chuyên ngành : chăn nuôi Mã số : 60.62.40 Ngời hớng dẫn khoa học : ts Bùi xuân nguyên Ngời thực : hà văn huy Hà Nội 2009 LI CAM OAN Tụi xin cam ủoan ủõy l cụng trỡnh nghiờn cu chớnh tụi thc hin v mt s kt qu cựng cng tỏc vi cng s khỏc, cỏc s liu lun ỏn l trung thc Tụi xin cam ủoan mi s giỳp ủ cho vic thc hin lun ny ủó ủc cỏm n v cỏc thụng tin trớch dn lun ủó ủc ch rừ ngun gc H ni ngy 26 thỏng 10 nm 2009 Tỏc gi lun H Vn Huy Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun Thc s khoa hc Nụng nghip i LI CM N Tụi xin by t lũng bit n chõn thnh v sõu sc ti TS Bựi Xuõn Nguyờn, ngi ủó tn tỡnh giỳp ủ, to ủiu kin v hng dn trc tip ủ ti lun ca tụi cho ti hon thnh lun ny Tụi xin by t lũng bit n chõn thnh v sõu xc ti TS Nguyn Th c, ngi ủó giỳp tụi thc hin cỏc thớ nghim cng nh to mi ủiu kin ủ tụi cú th hon thnh tt lun ny Tụi xin by t li cm n chõn thnh ti cỏc Cụ, Chỳ, anh ch em thuc phũng Cụng ngh phụi, Vin Cụng ngh sinh hc - Vin Khoa hc v Cụng ngh Vit Nam, cựng ủng nghip, ủc bit l tụi xin by t lũng bit n ti ThS Nguyn Vn Hnh, Nguyn Thựy Anh, Nguyn Th Mn, Nguyn Th Thm, Nguyn Th Nhung, Nguyn Th Hng ủó nhit tỡnh giỳp ủ tụi sut thi gian lm lun ny Tụi cng xin chõn thnh cm n B mụn Sinh lý Sinh húa ủng vt v th cỏn b, giỏo viờn khoa Chn nuụi v Nuụi trng thy sn trng i hc Nụng nghip H Ni Tụi xin chõn thnh cm n PGS.TS Nguyn Bỏ Mựi ủó tn tỡnh ch bo v giỳp ủ tụi hon thnh lun ny Cui cựng tụi xin chõn thnh cm n gia ủỡnh ủó ủng viờn, ng h, khớch l tụi sut quỏ trỡnh hc v hon thnh lun Thc s ny Xin chõn thnh cm n! H ni, ngy 26 thỏng 10 nm 2009 Tỏc gi lun H Vn Huy Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun Thc s khoa hc Nụng nghip ii MC LC PHN I M U 1.1 t ủ 1.2 Mc tiờu ca ủ ti 1.3 í ngha ca ủ ti Phn II TNG QUAN TI LIU 2.1 Quỏ trỡnh phỏt trin v thnh thc trng gia sỳc 2.1.1 Cỏc giai ủon phỏt trin nang trng v s hỡnh thnh t bo trng 2.1.2 Quỏ trỡnh thnh thc t bo trng 11 2.3 Tỡnh hỡnh nghiờn cu Vit Nam 26 Phn III I TNG - NI DUNG V PHNG PHP NGHIấN CU 28 3.1.1 i tng nghiờn cu 28 3.1.3 a ủim nghiờn cu 28 3.2 Ni dung nghiờn cu 28 3.2.1 Xõy dng atlas trng thỏi nhõn t bo trng bũ v trng ln 28 3.2.2 Kho sỏt ủc ủim sinh hc bung trng bũ, ln thu ti lũ m 28 3.2.3 Nghiờn cu s thnh thc t bo trng 28 3.3 Phng phỏp nghiờn cu 29 3.3.1 Phng phỏp thu, bo qun v chuyn bung trng 29 3.3.2 Phõn loi nang b mt bung trng 29 3.3.3 Chun b mụi trng thu v bung trng 29 3.3.4 Phng phỏp thu trng t bung trng 30 3.3.5 Phõn loi trng theo cht lng 31 3.3.6 Phng phỏp nuụi thnh thc trng bũ, ln ng nghim 32 3.3.7 Phng phỏp nhum nhõn t bo trng 33 3.3.8 Cỏc ch tiờu theo dừi 34 3.3.9 S ủ thớ nghim 34 Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun Thc s khoa hc Nụng nghip iii PHN IV KT QU V THO LUN 36 4.1 KT QU TRấN LN 36 4.1.1 Xõy dng Atlas trng thỏi nhõn t bo trng 36 4.1.2 Kho sỏt kh nng khai thỏc trng phc v nuụi thnh thc in vitro 39 4.1.3 Kt qu nuụi thnh thc v ủỏnh giỏ trng thỏi nhõn 45 4.2 KT QU TRấN Bề 56 4.2.1 Xõy dng Atlas trng thỏi nhõn t bo trng bũ 56 4.2.2 Kho sỏt kh nng khai thỏc trng phc v nuụi thnh thc in vitro bũ 59 4.2.3 Kt qu nuụi thnh thc v ủỏnh giỏ trng thỏi nhõn 66 KT LUN V NGH 75 5.1 KT LUN 75 5.2 NGH 75 TI LIU THAM KHO 76 Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun Thc s khoa hc Nụng nghip iv DANH MC BNG Bng 2.1 ng kớnh t bo trng trõu, bũ, ln (theo Hafez,1968) 11 Bng 2.2 Cỏc giai ủon phỏt trin nhõn t bo trng (Coenen K, Sirard,2004) 21 Bng 2.3 nh hng ca thi gian v nng ủ x lý BLI ti s thnh thc in vitro nhõn t bo trng bũ, Paulo Roberto Adona v cs, 2007 22 Bng 2.4 Bin ủi nhõn trng nuụi ti 24 gi ủi vi trng thu t nang cú kớch thc t 0,4 ủn 0,7 mm (Yujl Hiraov cs, 2004) 23 Bng 2.5 Thi gian bin ủi nhõn ca t bo trng 24 Bng 2.6 Kt qu nuụi trng thnh thc theo Kim J.S et al (2008) 24 Bng 2.7 S phỏt trin ca nhõn trng qua cỏc thi gian nuụi 24 Bng 2.8 Kt qu cỏc giai ủon nhõn trng ng vi kớch thc nang khỏc 25 Bng 4.1 Khi lng v s lng nang trờn b mt bung trng 39 Bng 4.2 Kt qu thu trng t nang mm 41 Bng 4.3 Kt qu thu trng t nang - mm 42 Bng 4.4 Kho sỏt cht lng trng ủc ly t nang trng cú kớch thc mm v 2-5mm 44 Bng 4.5 T l t bo trng thnh thc nuụi ti 44 gi v 48 gi vi t bo trng ủc thu t nang cú kớch thc 2mm 47 Bng 4.6 T l t bo trng thnh thc nuụi ti 48 gi vi t bo trng ủc thu t nang cú kớch thc < 5mm 48 Bng 4.7 S thnh thc nhõn trng ti thi ủim gi 50 Bng 4.8 S thnh thc nhõn trng ti thi ủim 20 gi 51 Bng 4.9 S thnh thc nhõn trng ti thi ủim 24 gi 52 Bng 4.10 S thnh thc nhõn trng ti thi ủim 44 gi 53 Bng 4.11 Khi lng v s lng nang trờn b mt bung trng bũ 60 Bng 4.12 Kt qu thu trng t nang mm 62 Bng 4.13 Kt qu thu trng t nang t 2-5 mm 62 Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun Thc s khoa hc Nụng nghip v Bng 4.14 Kho sỏt cht lng trng ủc ly t nang trng cú kớch thc t 2-5mm v < mm 65 Bng 4.15 S thnh thc nhõn trng ti thi ủim 20 - 22 gi 69 Bng 4.16 S thnh thc nhõn trng ti thi ủim 24 gi 70 Bng 4.17 S thnh thc nhõn trng ti thi ủim 24 gi 71 Bng 4.18 T l trng thnh thc v trng thoỏi húa ti 24 gi, 28gi v 30 gi nuụi 72 Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun Thc s khoa hc Nụng nghip vi DANH MC HèNH Hỡnh 2.1 Biu ủ biu din s thay ủi ca súng nang Hỡnh 2.2 (a) Biu ủ cho bit s thay ủi kớch thc ca nang trng ln nht v nang trng ln th hai cng nh th vng chu k ủng dc ca bũ súng nang Hỡnh 2.2 (b) Biu ủ cho bit s thay ủi kớch thc ca nang trng ln nht v nang trng ln th hai cng nh th vng chu k ủng dc ca bũ súng nang Hỡnh 2.3 Hỡnh nh s thay ủi bung trng chu k ủng dc Hỡnh 2.4 Cu to bung trng Hỡnh 2.5 Nhõn t ủiu khin s phỏt trin nang v trng cỏc loi khỏc 10 Hỡnh 2.6 Cu to t bo trng 11 Hỡnh 2.7 Hỡnh nh phõn bo 15 Hỡnh 2.8 S bin ủi ca nhõn t bo tng thi ủim nuụi 16 Hỡnh 3.1 Phng phỏp rch nang 30 Hỡnh 3.2 S ủ thớ nghim nuụi thnh thc trng bũ 34 Hỡnh 3.3 S ủ thớ nghim nuụi thnh thc trng ln 35 Hỡnh 4.1 Bung trng ln v t bo trng ln 36 Hỡnh 4.2 Cỏc giai ủon phỏt trin nhõn trng ln 38 Hỡnh 4.3 T l cỏc loi nang trng trờn bung trng 40 Hỡnh 4.4 T l trng thu ủc trờn nang v s trng thu ủc trờn bung 43 Hỡnh 4.5 T l trng loi A+ B, C v s trng A+B, C trờn bung trng 45 Hỡnh 4.6 T bo trng ln qua cỏc thi ủim nuụi 45 Hỡnh 4.7 nh hng thi gian nuụi lờn trng thỏi nhõn t bo trng 55 Hỡnh 4.8 Bung trng bũ v t bo trng bũ 56 Hỡnh 4.9 Cỏc giai ủon phỏt trin ca nhõn trng bũ (phúng ủi 400 ln) 58 Hỡnh 4.10 S phõn b t l nang trng trờn bung trng 61 Hỡnh 4.11 T l trng/ nang v s trng/ bung 63 Hỡnh 4.12 So sỏnh cht lng trng ph thuc vo kớch thc nang 66 Hỡnh 4.13 T bo trng bũ sau nuụi thnh thc 67 Hỡnh 4.14 T l trng thnh thc v trng thoỏi húa ng vi thi gian nuụi khỏc 74 Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun Thc s khoa hc Nụng nghip vii PHN I M U 1.1 t ủ Cụng ngh phụi hin ủi vi cỏc k thut nuụi thnh thc trng, th tinh ng nghim v nhõn bn vụ tớnh l mt nhng ủ khoa hc cụng ngh ủang ủc quan tõm nghiờn cu v phỏt trin, ủc ng dng cỏc lnh vc chn nuụi, bo tn dng sinh hc, sn xut t bo phụi gc phc v nghiờn cu v ủiu tr bnh Cỏc kt qu nghiờn cu cho thy bung trng ca cỏc loi ủng vt cú tim nng khng l v sn sinh t bo noón S lng nang giai ủon thnh thc sinh sn l hn 68000- 70000 ủi vi bũ (Erickson, 1996a); 12000-86000 ủi vi ln (Driancourt vcs, 1985) (Dn theo Nguyen B.X (2006)[47] Trờn thc t sinh sn t nhiờn s lng trng ủc s dng l rt hn ch so vi tim nng nang ca bung trng c tớnh mt bũ cỏi ch s dng t 10- 15 trng sut mt ủi sinh sn, tc l cha ti 0,01% tim nng nang trng cú bung trng (Nguyn Th c v CS, 1996)[18] cú th khai thỏc ti tim nng noón phc v ngnh cụng ngh phụi, ngi ta tin hnh thu t bo trng ủ nuụi thnh thc in vitro Trng ủc nuụi cỏc mụi trng tng hp cú ủy ủ cỏc thnh phn dinh dng v ủiu kin thớch hp ủ cú th tip tc phỏt trin bỡnh thng ủn giai ủon thnh thc t bo cht v nhõn t bo Ti Vit Nam, Cụng ngh phụi ủc nghiờn cu ti Vin Khoa hc v Cụng ngh Vit Nam t nm 1978 vi nhng thnh cụng trờn nhiu ủi tng vt nuụi phỏt trin cỏc nghiờn cu c bn cng nh ng dng k thut lnh vc cụng ngh phụi, vic thu trng bũ, trng ln v nõng cao cht lng trng sau nuụi thnh thc l ủ ủang ủc quan tõm Trong Cụng ngh sinh sn hin ủi, cỏc nguyờn liu trng ny cú th s dng vi cỏc mc ủớch rt dng Trng trõu, bũ cú th s dng ủ nhõn bn vụ tớnh cho loi Sao la (Nguyen B.X (2006)[47], trng ln cú th s dng ủ nhõn bn vụ tớnh cho cu, kh, chut (Dominko v CS, 1999[26] Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun Thc s khoa hc Nụng nghip 20 15 23 13 15 15 10 129 16,13 1,44 Tng TB/ ln TN 9,000,88 72 10 14 10 SL 56,493,35 - - 60,00 60,00 66,67 53,85 60,87 60,00 35,00 55,56 TL (%) Trng thnh thc - 6,870,93 55 5 12 SL 41,922,80 - - 40,00 40,00 33,33 38,46 39,13 40,00 60,00 44,44 TL (%) Trng cha thnh thc Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun Thc s khoa hc Nụng nghip Trung bỡnh 18 S trng nuụi TN Ln 0 0 SL - 1,591,07 - - 0,00 0,00 0,00 7,69 0,00 0,00 5,00 0,00 TL (%) Trng thoỏi húa 0,250,16 Bng 4.15 S thnh thc t bo trng ti thi ủim 20 - 22 gi 69 60 68 50 32 62 42 51 45 60 522 52,203,40 10 Tng TB/ ln TN 320 41 28 30 27 42 18 32 44 25 33 SL - 18,101,93 181 16 13 16 14 18 14 15 24 33 18 SL 34,672,71 - - 26,67 28,89 31,37 33,33 29,03 43,75 30,00 35,29 55,00 34,62 TL (%) Trng cha thnh thc Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun Thc s khoa hc Nụng nghip 61,302,45 - - 68,33 62,22 58,82 64,29 67,74 56,25 64,00 64,71 41,67 63,46 TL (%) Trng thnh thc 32,002,62 T l/tng s trng nuụi) 52 S trng nuụi TN Ln Bng 4.16 S thnh thc t bo trng ti thi ủim 24 gi - 2,100,52 21 SL 4,021,07 - - 5,00 8,89 9,80 2,38 3,23 0,00 6,00 0,00 3,33 1,92 TL (%) Trng thoỏi húa 70 4.2.3.2 ỏnh giỏ s thnh thc nhõn trng bũ Mc ủớch ca thớ nghim ủ ủỏnh giỏ mc ủ thnh thc ca nhõn trng cỏc giai ủon phỏt trin v kim tra ủ chớnh xỏc gia soi th cc v xỏc ủnh thnh thc qua bin ủi nhõn Nhng trng sau thnh thc ủc ủỏnh giỏ bng quan sỏt s xut hin th cc th nht trờn kớnh hin vi s ủc mang ủi nhum nhõn, kt qu thu ủc ti bng 4.17 Bng 4.17 S thnh thc nhõn trng ti thi ủim 24 gi Ln TN S trng nhum S trng cỏc giai ủon thnh thc GV GVBD MI MII Thoỏi húa 20 1 33 15 25 6 26 44 19 32 2 11 18 Tng 152 15 20 24 91 TB/ 30,403,24 3,000,41 4,000,53 4,800,43 18,201,88 0,400,18 lnTN T l/tng trng 9,87 13,15 15,79 59,87 1,32 nhum (%) Khụng nhõn 0 0 0 0,00 0,00 T kt qu thu ủc bng 4.17 ta thy rng t l trng ủt Metaphase II qua quan sỏt trng thỏi ca nhõn l 59,87% thp hn so vi t l trng thnh thc ủc ủỏnh giỏ bng cỏch quan sỏt s xut hin ca th cc th nht (61,30%) iu ny ủc gii thớch quỏ trỡnh nộn trng v nhum trng ủó lm bin dng, v t bo trng Theo Arq Bras, 2006[19], nghiờn cu trờn bũ ti thi ủim 6h nuụi, t l trng trng thỏi GV l 92,9%, (Metaphase I, anaphase I and telophase I) ủt 7,1%, Metaphase II ủt 0%; ti thi ủim 12 gi nuụi, t l l trng trng thỏi GV l 10,1%, Metaphase II l 76,1% Nh vy ti 12 h nuụi, t l trng thnh thc ca tỏc gi ủó cao hn t l thnh thc ca chỳng tụi nuụi ủn 24 gi Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun Thc s khoa hc Nụng nghip 71 Thớ nghim ủi vi bũ Paulo Roberto Adona v cs, 2007[51] theo tỏc gi 6gi v 12 gi nuụi, t l trng ủt trng thỏi GV tng ng ủt 100% v 16,7%; Metaphase II l 0%, 2,6%; ti thi ủim 24 gi nuụi t l trng ủt trng thỏi trung k II (metaphase II) l 88,5% 4.2.3.3 nh hng ca thi gian nuụi lờn s thnh thc in vitro trng bũ Mc ủớch ca thớ nghim v tỡm thi gian nuụi thnh thc thớch hp vi trng bũ Vit Nam vic so sỏnh t l trng thnh thc, t l trng thoỏi húa tng thi gian nuụi lờn Kt qu v t trng thnh thc v t l trng thoỏi húa ng vi cỏc thi gian nuụi khỏc ủc chỳng tụi trỡnh by ti bng 4.18 Bng 4.18 T l trng thnh thc v trng thoỏi húa ti 24h, 28h v 30h nuụi Thi gian nuụi Ln TN S Trng thnh Trng cha thnh Trng thoỏi thc thc húa trng nuụi SL TL (%) SL TL (%) SL TL (%) 24 gi 10 522 320 61,30 181 34,67 21 4,02 28 gi 152 103 67,76 36 23,68 13 8,55 30 gi 150 102 68,00 35 23,33 13 8,67 Qua bng 4.18 v hỡnh 4.14 cho ta thy rng thi gian nuụi 24 gi t l thnh thc ủt 61,30 %, t l cha thnh thc ủt 34,67% v t l trng thoỏi húa l 4,02% Khi tng thi gian nuụi lờn thờm gi thỡ kt qu thu ủc l: t l trng thnh thc l 67,76%, t l trng cha thnh thc l 23,68% v t l trng thoỏi húa 8,55% Nh vy tng thi gian nuụi lờn gi thỡ t l trng thnh thc ủó tng lờn nhng song song vi s tng lờn ca trng thnh thc thỡ t l trng thoỏi húa cng tng lờn ủỏng k So sỏnh vi kt qu ca tỏc gi Paulo Roberto Adona v cs, 2007[51]ti thi ủim 24 gi nhõn ủt trng thỏi metaphase II l 88,50%, nh vy t l thnh thc ca chỳng tụi thp hn (61,30% so vi 88,50%) ủiu ny ủc gii Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun Thc s khoa hc Nụng nghip 72 thớch vỡ tỏc gi cú s dng cỏc yu t khỏc mụi trng nuụi, mt khỏc nh hng ca ging bũ, ủiu kin chn nuụi ủó nh hng ti s thnh thc ca trng bũ Vit Nam Kt qu thu ủc ti bng 4.18 cho chỳng ta thy vi thi gian nuụi 24 gi, 28 gi v 30 gi thỡ t l thnh thc ủt 61,30%; 67,76% v 68,00% Tng ng vi thi gian nuụi ủú thỡ t l thoỏi húa l 4,02%; 8,55% v 8,67% Nh vy cú s sai khỏc rừ rt gia t l trng thnh thc thi gian nuụi 24 gi v 28 gi nhng khụng cú s sai khỏc rừ rt gia t l trng thnh thc v t l trng thoỏi húa ti thi ủim 28 gi nuụi v 30 gi nuụi Nguyn Hu c, 2005[3] ủó cụng b ti thi ủim 24 gi nuụi t l trng thnh thc l 72,26%; ti thi ủim 28 gi nuụi l 73,29% Nh vy kt qu nuụi thnh thc ca chỳng tụi thp hn Kt qu t l trng thnh thc ca chỳng tụi so vi kt qu ca Nguyn Vn Lý,2006[9] thỡ kt qu ca chỳng tụi cao hn (ca tỏc gi l 65,61% so vi ca chỳng tụi l 67,76%) Cng theo Nguyn Hu c, 2005[3] tng thi gian nuụi lờn 32 gi thỡ t l trng thnh thc gim ủi so vi 28 gi (72,55% so vi 73,29%), ủiu ny cng phự hp vi kt qu ca chỳng tụi Nh vy, ủi vi trng bũ Vit Nam nuụi thnh thc ti thi ủim 28 gi cho kt qu nuụi thnh thc tt Kt qu ca chỳng tụi thp hn ca Otoi v CS, 1997[49] ủó bỏo cỏo Theo tỏc gi thỡ t l trng nuụi thnh thc ủt 77,23%, Nguyn Hu c v CS (2003)[4] t l thnh thc ủt 76,83% Tuy nhiờn kt qu ca chỳng tụi cao hn ca Yang v CS, 1988[61] ủó bỏo cỏo v t l trng bũ nuụi thnh thc l 55% Kt qu ca chỳng tụi v ca Yang thp hn ca cỏc tỏc gi khỏc vỡ cỏc tỏc gi ch thu trng t 2-8mm cũn ca chỳng tụi v ca Yang dựng c t bo trng ủc thu t nang cú ủng kớnh di mm, ủiu ny ủó lm gim t l thnh thc chung ca trng Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun Thc s khoa hc Nụng nghip 73 67.76 70.00 68.00 61.30 60.00 50.00 T l trng thnh thc (%) 40.00 T l thoỏi húa (%) 30.00 20.00 8.55 8.67 4.02 10.00 0.00 24 gi 28 gi 30 gi Thi gian Hỡnh 4.14 T l trng thnh thc v trng thoỏi húa ng vi thi gian nuụi khỏc Qua quan sỏt biu ủ cho ta thy ti 28 gi nuụi v 30 gi nuụi t l trng thnh thc v t l trng thoỏi húa khụng cú s khỏc bit rừ rt Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun Thc s khoa hc Nụng nghip 74 KT LUN V NGH 5.1 KT LUN Chỳng tụi ủó xõy dng ủc mt phn Atlas cỏc trng thỏi phỏt trin nhõn t bo trng bũ, trng ln v s dng chỳng ủ ủỏnh giỏ kt qu nuụi thnh thc in vitro, xỏc ủnh ủc thi gian nuụi thnh thc phự hp, ủỏnh giỏ kh nng cung cp trng nuụi in vitro t bung trng bũ v bung trng ln thu ti Vit Nam Kh nng cung cp trng thnh thc ủi vi Ln - Ti thi ủim bt ủu nuụi s trng trng thỏi GV chim t l 69,83%; sau 24 gi t l trng ủt trng thỏi MI: 58,81% v 44 gi nuụi t l trng ủt trng thỏi MII (trng thnh thc) l: 47,61% - Nuụi ủn 48 gi cho t l thnh thc cao nht - S trng trung bỡnh thu ủc/bung 22,13 Kh nng cung cp nuụi trng thnh thc invitro ủi vi bũ Laisind - T l trng giai ủon búng mm (GV) sau nuụi thnh thc 24 gi l 9,87%; t l trng cú nhõn giai ủon trung k I (MI) l 15,79% v t l trng nuụi thnh thc sau nuụi 24 gi ủt 59,87% - Trng bũ thu ti Vit Nam nuụi ti 28 gi cho t l cao nht - S trng trung bỡnh thu ủc/bung l 12,56 5.2 NGH Cn tip tc nghiờn cu v nh hng ca mụi trng nuụi ủn t l thnh thc trng bng cỏch kim tra s bin ủi ca nhim sc th qua quỏ trỡnh thnh thc tng giai ủon nuụi Nghiờn cu v kớch thc nang cú nh hng ủn s thnh thc ca nhõn cỏc giai ủon phỏt trin ca trng Nghiờn cu t l th tinh ca nhng t bo trng thnh thc thi gian 48 gi nuụi ủi vi ln v 28 gi nuụi ủi vi bũ ủ t ủú khng ủnh ủc thi gian nuụi thnh thc thớch hp vi trng bũ v trng ln Vit Nam Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun Thc s khoa hc Nụng nghip 75 TI LIU THAM KHO 1) Ting vit Cự Xuõn Dn, Nguyn Xuõn Tnh, Tit Hng Ngõn v Nguyn Bỏ Mựi, Giỏo trỡnh sinh lý gia sỳc, NXB Nụng Nghip H Ni,1996 Nguyn Hu c, Nguyn Th c, Bựi Xuõn Nguyờn (1996), Trng thỏi phỏt trin nhõn t bo trng thu t bung trng bũ ni Vit nam, k yu Vin Cụng ngh sinh hc, 1996 Nguyn Hu c (2005)Nghiờn cu nuụi thnh thc v th tinh ng nghim trng bũ ni Vit Nm, Lun ỏn tin s Nụng nghip Nguyn Hu c, Nguyn Th c, Lờ Vn Ty, Qun Xuõn Hu, Nguyn Trung Thnh, Bựi Linh Chi, Nguyn Vn Hnh, Nguyn Thựy Anh, Nguyn Vit Linh, Bựi Xuõn Nguyờn (2003) Kt qu th tinh ng nghim v cy phụi bũ lai sind Hi ngh cụng ngh sinh hc ton quc, NXB Khoa hc v K thut, H Ni: 699-702 Trn Tin Dng, Dng ỡnh Long, Nguyn Vn Thanh (2002) Giỏo trỡnh sinh sn gia sỳc, NXB Nụng Nghip 2002, trang 232 -234 Hunh Th L Duyờn v cs (2003), ng dng k thut th tinh ng nghim trờn heo, Bỏo cỏo khoa hc, Hi ngh cụng ngh sinh hc ton quc, H Ni, 2003, 639 642 Nguyn Th Phng Hin (2007) Nghiờn cu nh hng ca v lờn kt qu nuụi thnh thc mt s ủng vt nuụi, Lun ỏn thc s Nụng nghip Nguyn Mng Hựng Bi ging sinh hc, NXB khoa hc v k thut, H Ni -1993, trang 16-83 Nguyn Vn Lý (2006) Nghiờn cu cỏc yu t nh hng ủn kt qu th tinh ng nghim trng bũ Vit Nam, Lun ỏn tin s Nụng nghip 10 Nguyn Th Mn, 2008 nh hng ca s thay th Pyruvate/lactate bi Gluco v t l Pyruvate/Lactate v Gluco mụi trng nuụi cy ủn kh nng phỏt trin phụi ln Th tinh ng nghim, Bỏo cỏo khoa hc thng niờn ln th ca Hi cụng ngh sinh hc sinh sn Chõu Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun Thc s khoa hc Nụng nghip 76 11 Nguyn Th Mn, Nguyn Th c, Dng ỡnh Long, Nguyn Khc Tớch, Trn Th Thm, Nguyn Th Nhung, Nguyn Thựy Anh, Bựi Xuõn Nguyờn nh hng ca v ủn nuụi thnh thc v sn xut phụi bũ lai sind Bỏo cỏo khoa hc thng niờn ln th ca Hi cụng ngh sinh hc sinh sn Chõu , thỏng 11/2009 12 Bựi Xuõn Nguyờn, Nguyn Hu c, Lờ Vn Ty, Nguyn Th c (1994), Kt qu bc ủu nghiờn cu nuụi trng v th tinh in vitro trõu bũ, k yu Vin Cụng ngh sinh hc 1994 NXB Khoa hc v k thut, H Ni, trang 166-168 13 Kim Tuyờn (1995), Nghiờn cu siờu bi noón bũ bng s dng FSH v Prostaglandin, Lun ỏn tin s khoa hc Nụng Nghip, H ni,1995 14 Lờ Vn Ty, Hong Ngha Sn, Nguyn Vn Hnh, Nguyn Hu c, Bựi Xuõn Nguyờn (2003) Bc ủu nghiờn cu to phụi ủ nhõn bn bũ tút (Bos Gaurus) bng k thut cy nhõn, lm c s cho vic bo v ủng vt quý him ny ca Vit Nam, Sinh hc, ISSN 0866-7160,tp 25, s 2, 1-6 15 Nguyn Th c, Nguyn Hu c, Lờ Vn Ty, Bựi Xuõn Nguyờn (1996), S chớn nhõn t bo trng trõu ủm ly nuụi in vitro mụi trng M199 cú b sung FSH v estradiol - 17, K yu 1996, Vin Cụng ngh sinh hc 16 Nguyn Th c, Lờ Vn Ty, Nguyn Hu c, Bựi Linh Chi, Nguyn Trung Thnh, Nguyn Vit Linh, Nguyn Vn Hnh, Qun Xuõn Hu, Nguyn Thựy Anh, Hong Ngha Sn, Dng ỡnh Long, Bựi Xuõn Nguyờn (2003), Nghiờn Cu sn xut bũ sa ging thng phm bng cy truyn phụi v xỏc ủnh gii tớnh, Ti liu Hi ngh Cụng Ngh Sinh hc ton quc, H Ni 2003, NXB Khoa hc v K thut H Ni, trang 717-719 17 Nguyn Th c v cs (2008), Sn xut phụi ln mini ni bng t hp cụng ngh ng nghim v nhõn bn vụ tớnh, Tp cụng ngh sinh hc 6(4A): 625-635 18 Nguyn Th c, Nguyn Hu c, Lờ Vn Ty, Bựi Xuõn Nguyờn (1996) s chớn nhõn t bo trng trõu ủm ly nuụi in vitro mụi trng T199 cú b sung FSH v Estradiol - 17, k yu vin Cụng ngh sinh hc, Nh xut bn khoa hc v k thut, trang 274 278 Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun Thc s khoa hc Nụng nghip 77 2) Ti liu tham kho ting Anh 19 Arq Bras Med Vet (2006) Effect of concentration and exposure period to butyrolactone I on meiosis progression in bovine oocytes Zootec vol.58 no.3 Belo Horizonte June 20 Avery B., Strobech L., Jacobsen T., Bogh I.B., Greve T (2003), In vitro maturation of bovince cumulus oocyte complexes in undiluted follicular fluid: effect on nuclear maturation, pronucleus formation and embry development, Theriogenology, 59, 987-999 21 Beker A.R.C.L., Colenbrander B., Bevers M.M (2002), Effect of 17 Estradiol on the in vitro maturation of bovine oocytes, Theriogenology, 58, 1663 -1673 22 Bearden, H.J and Fuquay, J.W (2000), The Female Reproductive system Applied Animal Reproduction Prentice Hall, InC, pp: 7-20 23 Blondin P., Coenen K Guibault L.A., Siard M.A (1997), In vitro production of bovine embryo: deverlopmental competence is acquired befor maturation, Theriogenology,47, 1061-1075 24 Coenen K, Masicote, Siard MA, 2004 Study of newly synthesized proteins during bovine oocytes maturation in vitro using image analysis of two dimensional gel electrophoresis, 2004, University Laval, Canada 25 Danell, D (1987), Morphology of bovine ovaries Theriogenology 29: 205 26 Dominko T, Mitalipova M, Haley B, BeyhanZ, Memili E, McKusick B, First NL (1999), Bovine oocytes cytoplasm supports development of embryos produced by nuclear transfer of somatic cell nuclear from various mammalian species, Biol Report 60(6): 1496-1502 27 Donnay I., Van Langendonckt A., Dessy F (1997), Effects of bovine embryo Theriogenology, 47,1549-1561 28 Duc N.H , Uoc N.T., Ty L.V., Hanh N.V., Thanh N.T., Chi B.T Anh N.T., Huu Q.X., Nguyen B.X (2003), potential for in vitro production of embryo from follicular oocyte of Yellow and Yellow Redsindhi croosbred cattle, Theriogenology, 59 (1),442 Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun Thc s khoa hc Nụng nghip 78 29 Fukui Y., Sakuma Y (1980), Maturation of bovine oocytes cultured in vitro in relation to ovary activity, follicular size and the presence or absence of cumulus cells, Biol Reprod., 20, 313-319 30 Fukui Y., Fukushima Y., Terawaki Y., Ono H (1982), Effect of gonadotropin, steroids and culture media on bovine oocyte maturation in vitro, Theriogenology,18, 161-175 31 Fulka, J and Motlik, J (1980), In vitro maturation Procceedings of the Ninth International Congress of Animal Reproduction and Artificial Insemination (Madrid) 2: 55 62 32 Galli C., Crotti G., Notari C., Turini P., Duchi R and Lazzari G (2001), Embryo production by ovum pick up from live donors, Theriogenology, 55, 1341-1357 33 Hamano,S And Kuwayama, M (1993), In vitro fertilization and development of bovine oocytes recovered from ovaries of individual donors: a comparison between the cutting and aspiration method Theriogenology 39: 703-712 34 Hasler, J.F., Hurtgen, P.J., Z.Q and Stockes, J.E (1997), Survival of IVFderived bovine embryos frozen in glycerol or ethylene glycol Theriogenology 48: 563-579 35 Iwasaki, S., Kono, T., Nakahara T., Shioya, Y., Fukushima, M., and Hanada, A (1987), New methods for the recovery of oocytes from bovine ovarian tissue in relation to vin vitro maturation and feritilization Japanese journal of Animal Reproduction 33, 1988 -1992 36 Kim J.S et al (2008), Exogenous dibutyryl cAMP affects meiotic maturation via protein kinase A activation; it stimulates further embryonic development including blastocyst quality in pigs, Theriogenology (69) 290-301 Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun Thc s khoa hc Nụng nghip 79 37 Knight PG and Glister C (2006) TGF-bsuperfamily members and ovarian follicle development Reproduction 132: 191-206 38 Kruip TAM., Van Beneden T.H., Dieleman S.J., Bevers M.M (1988), The effect of Estradiol 17 on nuclear maturation of bovine oocytes, Proceedings of the 11th international congress on Animal Reproduction, Vol 3, 336 39 Leibfied L., First N.L (1979), Characterization of bovine follicular oocytes and their ability to mature in vitro J Anim Sci., 48,76-86 40 Leibfried Rutledge M.L., Critser E.S., Eyestone W.H., Northey D.L., and First (1986a), Developmental potential of bovine oocytes matured in vitro or in vivo Theriogenology., 25, 164 41.Leibried- Rutlegde et al (1987), Development potential of bovine oocyte matured in vitro or in vivo, Biology of Reproductive (36) 376-383 42 Lonergan P Monaghan P., Rizos D., Boland M.P., Gordon I (1994), Effect of follicle size on bovine oocyte quality and developmental competence following maturation, fertilization and culture in vitro Mol Reprod Dev., 37, 48 -53 43 Lu, K.H (1990), Studies related to the in vitro maturation and fertilization of ovarian oocytes in cattle PhD thesis, National University of Ireland, Dublin 44 Madison V., Avery B, Greve T (1992), Selection of immature bovine oocytes for developmental in vitro, Anim Reprod Sci.,27, 1-11 45 Nagano M et al (2007), Effect of duration of in vitro maturation on nuclear maturation and fertilizability of feline oocytes, Theriogenology 69 (2008) 231-236 46 Nakagawa A., Martino A., Pollard J.W, Leibo S.P (1995), stage of nuclear maturation of bovine oocytes at insemination influences sperm penetradion and zygoto development, Theriogenology, 43, 286 Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun Thc s khoa hc Nụng nghip 80 47 Nguyen B.X, (2006) Current status and trends of animal reproductive biotechnology in Vietnam Embryo Transfer Newsletter, V24, No 2:5-10 48 Nobuyuki Kanayama, TakaShi Myano.(2002) Acquisition of meiotic competence in growing pig oocytes correlates with their ability to activate Cdc2 Kinase and Map kinase Kobe University, Kobe, Japan 49 Otoi, T., Yamamoto, K., Koyama, N., Tachikawa, S., and Suzuki, T (1997), Bovine oocyte diameter in relation to developmental competence Theriogenology 48: 769-774 50 Park, Y.S., Kim, S.S, Kim J.M., and Byun M.D (2005), The effects of duration of in vitro maturation of bovine oocytes on subsequent development, quality and transfer of embryos Theriogenology 64:123-134 51 Paulo Roberto Adona, Pedno Ratto Lisboa pire, Marid Daniela Quetglas, K.R.L Schwarz and Claudia lima verd Leal,2007 Effect of concentration and exposure period to butyrolactone I on meiosis progression in bovine oocytes 52 Pavlok A.A., Lucas-Hahn, niemann H (1992), Fertilization and developmental competence of bovine oocytes derived from different categories of antral follicles, Mol Reprod Dev., 31, 63-67 53 Pereia, D.C., Dode, M.A.N and Rumf, R (2005), Evaluation of different culture systems on the in vitro production of bovine embryos Theriogenology 63: 1131-1141 54 Ratky, Katiyar P.K, Raminder Singh, 2003 Maturation of porcine oocytes in vitro and developmental competence of porcine oocytes, Gamete Biology, Biology of reproduction, 11: 299-305 55 Saitoh, N., Kanagawa, H and Shimihira, I (1995), Manual of bovine embryo transfer Japan Livestock Technology Association 56 Spinaci M et al (2008), Effects of epigallocatechin-3-gallate (EGCG) on in vitro maturation and fertilization of porcine oocytes, Theriogenology (69) 877-885 57 Sreenan, J.M (1969), Studies related to ovum transfer in cattle PhD thesis, National University of Ire land, Dublin Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun Thc s khoa hc Nụng nghip 81 58 Suss U and Wuthrich, K (1985), stages of first meiotic division in bovine oocytes matured in vitro Theriogenology 23: 281 59 Wani N.A, Noshaki M.A,,2005, Kinetics of nuclear maturation and effect of holding ovaries at room temperature in vitro maturation of camel oocytes, Theriogenology, volume 64, Issue 1, pages 75 -85 60 Weima, Dong Zhang, YiHou, Yong-HaiLi, Qinh-YuanSun, Xiao- Fang Sun and Wei-Hua Wang,2005 Reduced Expression of MAD2, BCL2, and MAP Kinase Activity in Pig Oocytes after In Vitro Aging Are Associated with Defects in Sister Chromatid Segregation During Meiosis II and Embryo Fragmentation After Activation Biology of reproduction, vol 72, no.2: 373-383 61 Yang, X., Kupota, C., Suzuki., H., Taneja, M., Bols, P.E.J., and Presicce, G.A (1998), Control of oocyte maturation in cows-biological factors Theriogenology 49: 471-482 62 Younis A.I., Brackett B.G., Frayer-Hosken R.A (1989), Influence of serum and hormones on bovine maturation and fertilization in vitro Gamete Res., 23, 189-201 63 Yuji Hirao, Takechiro Itoh, Manabu Shimizu, Kosuke Iga, Kazushige Aoyagi, Masato Kobayashi, Masayuki Kachi, HiroYoshi and Naoki Takenouchi In Vitro Growth and Development of Bovine OocyteGranulosa Cell Complexes on the Flat Substratum: Effects of High Polyvinylpyrrolidone Concentration in Culture Medium, Biology of Reproduction January 1, 2004, Vol 70 no.1: 83-91 3) Ti liu t trang WEB 64 Herbrandson & Cynthia, 2005 67 http//beef.unl.edu/images/follicularwave.jpg Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun Thc s khoa hc Nụng nghip 82 DANH MC CH VIT TT FSH : Follicle Stimulating hormone LH : Luteinsing Stimulating hormone BLI : Butyrolactone I FRF : Follicle releasing factor LRF : Luteinsing releasing factor GV (germinal vesicle) : trng giai ủon búng mm GVBD (germinal vesicle breakdown): trng giai ủon mng nhõn tan MI (metaphase I) : trng giai ủon trung k I AI (ana metaphase I) : trng giai ủon ủu ca phõn k I MII (metaphase II) : trỳng giai ủon trung k II Deg (Degen - erated) : trng thoỏi hoỏ IVM (In vitro Maturation) : Mụi trng nuụi thnh thc ng nghim TT : thnh thc CTT : cha thnh thc TN : thớ nghim TL : t l SL : s lng TB : trung bỡnh Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun Thc s khoa hc Nụng nghip 83 [...]... trong môi trường thành thục là tối ưu Nhưng ñối với trứng bò và trứng lợn thu tại Việt Nam thì thời gian nuôi thành thục vẫn là vấn ñề cần ñược nghiên cứu Từ những lý do trên, nhằm mục ñích tiếp tục ñóng góp vào sự phát triển của chuyên ngành công nghệ phôi ñộng vật ở nước ta, chúng tôi tiến hành nghiên cứu ñề tài Nghiên cứu nuôi thành thục trứng Bò và trứng Lợn với sự chú ý xác ñịnh và phân tích trạng... Nguyên và CS ,1994[12] ñã báo cáo kết quả bước ñầu nghiên cứu nuôi trứng thành thục và thụ tinh ống nghiệm ở trâu bò; (Nguyễn Thị Ước và CS, 1996)[15] ñã nghiên cứu về sự thành thục nhân ở tế bào trứng trâu ñầm lầy nuôi trong ống nghiệm Nguyễn Hữu ðức và CS (1996)[2] ñã nghiên cứu về trạng thái phát triển nhân tế bào trứng thu từ buồng trứng của bò nội Việt Nam Lê Văn Ty và cs, 2003[14] ñã nghiên cứu. .. khi ñem nuôi thành thục và tỷ lệ thành thục sau khi nuôi Hiện nay tại Việt Nam ñã có nghiên cứu sự thành thục của trứng ñược ñánh giá thông qua quan sát trạng thái bông tơi của lớp tế bào cận noãn, sự xuất hiện của thể cực thứ nhất nhưng chưa có nghiên cứu chi tiết về sự thành thục của tế bào trứng ở mức ñộ nhân Ngoài ra, ñối với nước ngoài ñã chọn thời gian nuôi trứng lợn từ 40-44 giờ, trứng bò từ 20-24... Tại các cơ sở nghiên cứu trong và ngoài nước hiện nay, người ta thường ñánh giá kết quả nuôi trứng thành thục trong ống nghiệm thông qua kết quả thụ tinh ống nghiệm (số hợp tử phân chia ở giai ñoạn 2 tế bào) và kết quả nuôi phôi trong ống nghiệm (số phôi dâu, phôi nang) thu ñược về sau (Nguyen B.X và CS, 2006[47] Tình hình nuôi thành thục trứng bò Trong quá trình nuôi thành thục trứng bò, cấu trúc nhiễm... với sự chú ý xác ñịnh và phân tích trạng thái phát triển của nhân trứng trong quá trình nuôi thành thục 1.2 Mục tiêu của ñề tài - ðánh giá, phân tích ảnh hưởng của giai ñoạn phát triển nang trứng ñến tỷ lệ thu trứng và kết quả nuôi thành thục trứng bò và trứng lợn - Xây dựng ñược bộ atlas về hình thái và trạng thái nhân tế bào trứng bò và lợn thu tại Việt Nam ở các giai ñoạn phát triển khác nhau (GV,... quả nuôi thành thục và trạng thái nhân tế bào trứng Hiện nay trên thế giới ñã có nhiều nghiên cứu về kỹ thuật nuôi, các yếu tố ảnh hưởng ñến kết quả nuôi thành thục với mục tiêu nâng cao tỷ lệ thành thục in vitro IVM là quá trình dùng các môi trường và ñiều kiện nhân tạo cần thiết ñể nuôi trứng thành thục, có khả năng thụ tinh ðây là bước ñi căn bản quan trọng ñầu tiên ảnh hưởng tới chất lượng trứng. .. dùng môi trường 199 làm môi trường cơ bản và bổ sung thêm FSH, LH, Estradiol, huyết thanh trâu, bò ñể nuôi thành thục trứng Việc bổ sung Estradiol – 17 β vào môi trường nuôi thành thục trứng có tác dụng cải thiện hiệu quả nuôi thành thục trong ống nghiệm các trứng bò thu từ các nang có ñường kính 1 – 6 mm (Fukui và CS, 1982)[30]; Younis và CS, 1989[62]; Beker và CS, 2002 [21] Tuy nhiên nồng ñộ Estradiol... phát triển và thành thục trứng gia súc 2.1.1 Các giai ñoạn phát triển nang trứng và sự hình thành tế bào trứng Các giai ñoạn phát triển nang trứng và sự hình thành tế bào trứng gắn liền với các hoạt ñộng chu kỳ của buồng trứng Buồng trứng là cơ quan sinh sản cơ bản ở gia súc cái Buồng trứng có chức năng sản sinh ra giao tử cái (noãn bào - tế bào trứng) và hormone sinh sản cái (oestrogen và progesterone)... ra Nuôi trứng trong các môi trường nuôi thích hợp nhằm nâng cao tỷ lệ thành thục tế bào trứng từ ñó có thể tận dụng ñược số lượng trứng non của những vật nuôi quý hiếm, tận dụng ñược ưu thế của vật nuôi ñó, nhằm phục vụ tốt cho các khâu tiếp theo như thụ tinh ống nghiệm, nhân bản vô tính Trong quá trình nôi thành thục trứng bò, lợn có mối liên hệ chặt chẽ giữa chất lượng trứng với khả năng thành thục. .. hưởng âm tính ñến việc hình thành các thoi vô sắc cũng như sự xuất hiện thể cực thứ nhất (Kruip và CS, 1988)[38] Spinaci và CS, 2008[56] ñã tiến hành nuôi trứng lợn thu từ nang 4 – 6 mm trong môi trường NCSU 37 trong 46h cho tỷ lệ thành thục trứng là 90,5 ± 3,3% Tóm lại, các trứng có chất lượng tốt thu từ buồng trứng ñều ở trạng thái chưa thành thục và hoàn toàn có thể nuôi thành thục trong các môi trường