Ứng dụng công nghệ vi ghép đỉnh sinh trưởng làm sạch bệnh greening trên cam Canh ở Hà Nội trong hệ thống nhà lưới 3 cấp sản xuất cây giống

DANH MỤC CÁC HÌNH 2.1 Qui trình phục tráng và làm sạch bênh greening và các bệnh virus khác hại cam quýt bằng công nghệ vi ghép đỉnh sinh 3.2 Sản xuất cây giống trên ruộng rau trồng đậu

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi Các số liệu, kết quả trong luận văn là trung thực và chưa được ai công bố trong bất

kỳ công trình nào khác

Tác giả luận văn

LÊ MAI NHẤT

Để hoàn thành luận văn này tôi xin bầy tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến:

khoa học, cho những lời khuyên, động viên chân tình và kinh nghiệm quí báu trong nghiên cứu

trong 2 năm qua

chất và tinh thần để tiếp sức cho tôi hoàn thành tốt luận văn

bạn trong nhóm nghiên cứu bệnh hại cây ăn quả có múi luôn dành cho tôi những thời gian quí báu và sẵn sàng giúp đỡ để tôi hoàn thành luận văn

tristeza cũng như các phương pháp chẩn đoán nhanh khi đi thực địa

Xin ghi nhận nơi đây tình cảm yêu thương của vợ, cha mẹ và anh chị đã luôn hết lòng động viên tinh thần trong suốt thời gian học tập và hoàn thành luận văn

MỤC LỤC

Trang Trang phụ bìa

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU VÀ CƠ SỞ KHOA HỌC CỦA ĐỀ TÀI 4 1.1 Cơ sở khoa học của việc nghiên cứu đề tài 4 1.2 Một số kết quả nghiên cứu trong và ngoài nước liên quan đến

đề tài

5

CHƯƠNG 2 ĐỊA ĐIỂM, THỜI GIAN, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG

PHÁP NGHIÊN CỨU

30

2.3 Nội dung nghiên cứu và các vấn đề cần giải quyết 32

2.4 Phương pháp nghiên cứu 32 2.4.1 Phương pháp điều tra thành phần bệnh hại trên các vườn cam

Canh tại Từ Liêm – Hà Nội

32

2.4.2 Phương pháp vi ghép đỉnh trưởng làm sạch bệnh vàng lá

greening, tristeza trên cây cam Canh

33

2.4.3 Phương pháp chẩn đoán bệnh vàng lá greening, tristeza trên

cây cam Canh bằng kỹ thuật PCR, Iodine, ELISA và khẳng định

3.1 Thành phần bệnh hại trên vườn cam Canh - Từ Liêm – Hà Nội 42 3.2 Ứng dụng kỹ thuật vi ghép đỉnh sinh trưởng làm sạch bệnh

vàng lá greening, tristeza trên cây cam Canh

54

3.3 Ứng dụng kỹ thuật PCR, Iodine, ELISA để chẩn đoán bệnh

vàng lá greening, tristeza trên cây cam Canh và khẳng định cây

DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT

CIRAD-FLHOR Centre de coopération internationale en recherche

agronomique pour le dévelopement –Département des productions fruitières et horticoles (Pháp)

CTIFL Centre technique interprofessionel des fruits et légumes FFTC Food and Fertilizer Technology Center ( tại Đài Loan ) ACIAR Australian Centre for International Agricultural Research FAO Food and Agriculture Organization

IPGRI International Plant Genetics Resource Institute

INRA Institut national de Recherche agronomique ( Pháp)

SPV Service de la Protection des végétaux

dNTP Deoxy Nucleotide triphosphate

EDTA Sodium ethylene diaminetetraacetate

PBS-T Phosphate-buyer saline-Tween

SDS Sodium dodecyl sulphate

DIECA Diethyldithio carbamate

NBT NitroBlue Tetrazolium

P-NPP P-nitrophenyl phosphate

SDS Sodium dodecyl sulphate

TE Tris + EDTA + Distilled water

TBE Tris + Boric acid + EDTA

TNE Tris + NaCl + Distilled water

BCIP Bromo-chloro-indolyl phosphate

DMS Dimethyl sulphate

TBS Tris buffered saline

PVP Polyvinyl pyrrolidone

DNA Deoxyribose nucleic acid

PCR Polymerase Chain Reaction

ELISA Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay

EG Electrofusion polyethylen glycol

RT-PCR Reverse transcription-Polymerase Chain Reaction

DANH MỤC CÁC BẢNG

1.1 Diện tích và các loài được trồng chủ yếu ở nước ta 23 3.1 Thành phần bệnh hại chính trên vườn cam Canh (Hà Nội,2007) 44 3.2 Kết quả điều tra hiện trạng sử dụng giống cam Canh tại Hà

Nội, 2007

45

3.3 Kết quả giám định mẫu cam Canh trên đồng ruộng bằng

phương pháp PCR và ELISA (Viện BVTV, 2007)

48

3.4 Kết quả chẩn đoán nhanh bệnh vàng lá greening bằng Iodine

trên vườn cam Canh (Hà Nội, 2007)

49

3.5 Kết quả giám định bệnh greening, tristeza ở một số vườn cam

Canh 5 tuổi (Viện BVTV, 2007)

3.10 Ảnh hưởng của thời gian xử lý rễ cây sau vi ghép bằng thuốc

Bavistine 50FL đến tỷ lệ cây sống sau vi ghép lần 1(Viện

3.12 Hiệu quả tăng cường ánh sáng đến khả năng sống sót của cây

sau vi ghép đối với giống cam Canh (Viện BVTV, 2007)

62

3.13 Ảnh hưởng của thời gian nuôi cây vi ghép lần 1 trong ống

nghiệm đến kết quả ghép lần 2 thành công (Viện BVTV, 2007)

DANH MỤC CÁC HÌNH

2.1 Qui trình phục tráng và làm sạch bênh greening và các bệnh

virus khác hại cam quýt bằng công nghệ vi ghép đỉnh sinh

3.2 Sản xuất cây giống trên ruộng rau trồng đậu Hà Lan 46 3.3 Sản xuất cây giống trên ruộng thâm canh rau 47

3.9 Mẫu lá và bộ kít chẩn đoán bệnh greening bằng Iodine 50 3.10 Kết quả giám định bằng Iodine 50 3.11 Các tuổi cây khác nhau trên cùng một đơn vị diện tích 53 3.12 Dụng cụ cần thiết khi tiến hành vi ghép đỉnh sinh trưởng 55 3.13 Các loại môi trường sử dụng trong vi ghép đỉnh sinh trưởng 55

3.15 Cắt bỏ rễ, thân trước khi vi ghép đỉnh sinh trưởng 55

3.18 Các loại môi trường khác nhau gieo hạt cam 3 lá 58 3.19 Cây vi ghép được xử lý rễ bằng thuốc Bavistine 50FL 64 3.20 Cây sau vi ghép lần 1 nuôi trong ống nghiệm: 1, 2, 3 tháng 64

3.21 Dụng cụ chuẩn bị vi ghép lần 2 65 3.22 Cây vi ghép nuôi trong ống nghiệm 1 tháng tuổi 65 3.23 Cây vi ghép nuôi trong ống nghiệm 45 ngày tuổi 65

3.26 Cây vi ghép lần 2 được trùm túi nilon trắng 66 3.27 Cây vi ghép lần 2 được tháo bỏ túi nilon 66

3.29 Hạt khoẻ và hạt bị bệnh vàng lá greening 74

MỞ ĐẦU

1 Tính cấp thiết của đề tài

Cây ăn quả có múi gồm nhiều loại và giống có giá trị kinh tế cao, được thuần hoá từ rất lâu và trồng rộng rãi ở nhiều nước thuộc vùng nhiệt đới, á nhiệt đới thậm chí ôn đới Ở nước ta cây ăn quả có múi cũng là cây quan trọng

và phổ biến khắp ba miền Bắc, Trung và Nam

Cây có múi ngoài chứa hàm lượng Vitamin C rất cao còn chứa một số loại vitamin khác như Vitamin A, Vitamin B1, B2 rất tốt cho sức khoẻ Do cây ăn quả có múi đa dạng về loài nên dịch hại luôn tồn tại và bùng phát dịch trên động ruộng Các biện pháp như canh tác, sinh học, hoá học tỏ ra có hiệu quả trong phòng trừ sâu hại, các bệnh do nhóm tác nhân nấm gây nên Nhóm tác nhân gây bệnh do vi khuẩn, vi rút rất khó phòng trừ và hầu như không mang lại hiệu quả

Vàng lá greening do vi khuẩn Liberobacter asiaticus là bệnh nguy hiểm nhất của cây ăn quả có múi Bệnh làm giảm năng suất, chất lượng, tuổi thọ của cây và rất khó phòng trừ Bệnh được mô tả lần đầu tiên ở Trung Quốc vào năm 1929 với tên là Huanglongbin Năm 1937 triệu chứng bệnh được phát hiện ở Nam Phi Merwe và Andersen đã mô tả với tên bệnh là greening Từ đó bệnh được báo cáo ở nhiều nơi khác với các tên khác nhau như Likubin ở Đài Loan, leaf mottling ở Philippine, Vein phloem deneration ở Indonesia Ở Việt Nam vàng lá greening được ghi nhận từ những năm 1960 Từ đó đến nay đã xảy ra hai đợt cao điểm của dịch vàng lá greening (Trung, 2005)[25]

Đợt thứ nhất vào các năm 1970 tại hầu hết các nông trường cam phía Bắc Đợt thứ hai từ đầu thập kỷ 1990 tại các vùng trồng cam quýt quan trọng trong cả nước: Hà Giang, Tuyên Quang, Nghệ An, Hà Tĩnh, Tiền Giang, Đồng Tháp, Vĩnh Long, Cần Thơ Người sản xuất đa phần chưa hiểu biết

những kỹ thuật trồng và thâm canh cây có múi, do đó đã tạo ra những vườn cây kém chất lượng Nguyên nhân có thể kể đến như sau:

Sử dụng giống không đạt tiêu chuẩn kỹ thuật, cây giống đã nhiễm sâu bệnh đặc biệt là bệnh vàng lá greening, tristeza

Chưa chú ý thâm canh ngay từ khi trồng mới do vậy sau vài năm cho quả cây đã bị kiệt sức và nhanh chóng tàn lụi

Chương trình quản lý tổng hợp bệnh vàng lá greening bắt đầu trong thập

kỷ 90 khi nông dân, các nhà nghiên cứu và nhà quản lý cùng quan tâm tìm giải pháp cứu vãn các vườn cam, quýt khỏi cơn đại dịch Chương trình được tiến hành với sự hợp tác hiệu quả của Trung tâm công nghệ lương thực phân bón châu Á Thái Bình Dương (FFTC) có trụ sở đóng tại Đài Loan và Trung tâm nghiên cứu và phát triển nông nghiệp quốc tế của Cộng hoà Pháp (CIRAD)

Với sự tài trợ đó, kỹ thuật vi ghép đỉnh sinh trưởng ở Việt Nam đã mang lại hiệu quả cho một số tỉnh trồng cam, quýt như Hà Giang, Tuyên Quang, Nghệ An Ở Hà Nội giống cam Canh là một loại cây ăn quả đặc sản đang bị bệnh vàng lá greening gây hại nghiêm trọng song kỹ thuật vi ghép đỉnh sinh trưởng chưa được tiến hành đối với cam Canh Giống này đã và đang bị bệnh vàng lá greening tàn phá rất nhanh, bên cạnh đó do quá trình đô thị hoá và công nghiệp hoá nên diện tích cũng nhanh chóng bị thu hẹp lại Để khắc phục được những tình trạng đó nhu cầu sử dụng cây giống sạch bệnh là không thể thiếu được, diện tích bị thu hẹp nên việc trồng mới thâm canh cao cũng cần được tiến hành song song

Bệnh vàng lá greening, tristeza đã gây hại nặng và lây lan bằng hai con đường đó là sử dụng giống từ cành chiết, mắt ghép bị bệnh và môi gới truyền bệnh Để khôi phục, phát triển được giống cam Canh và chống tái nhiễm trên đồng ruộng phục vụ sản xuất Biện pháp then chốt trước hết cần phải có cây

đầu dòng, cây cung cấp mắt ghép sạch bệnh Cây giống trồng trong sản xuất phải đảm bảo sạch bệnh vàng lá greening, tristeza và một số bệnh vi rút tương

tự viroid Với yêu cầu cấp bách đó tôi đã tiến hành thực hiện đề tài “Ứng dụng công nghệ vi ghép đỉnh sinh trưởng làm sạch bệnh greening trên cam Canh ở Hà Nội trong hệ thống nhà lưới 3 cấp sản xuất cây giống”

2 Mục tiêu và yêu cầu của đề tài

2.1 Mục tiêu của đề tài

Ứng dụng kỹ thuật vi ghép đỉnh sinh trưởng để phục tráng, duy trì và làm sạch bệnh vàng lá greening, tristeza đối với cây cam Canh

Hoàn thiện kỹ thuật sản xuất cây giống cam Canh sạch bệnh vàng lá greening, tristeza trong hệ thống nhà lưới ba cấp

2.2 Yêu cầu của đề tài

Tuyển chọn đúng chủng loại cây cam Canh làm vật liệu khởi đầu và sau vi ghép cây phải mang đầy đủ tính trạng của giống cam Canh

3 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài

Đóng góp cơ sở khoa học cho việc xây dựng chính sách quản lý cây giống

có múi theo chương trình cây giống có chứng thực

Đóng góp phương pháp nghiên cứu và ứng dụng kết quả của các qui trình sản xuất cây giống có múi sạch bệnh

Duy trì và bảo tồn nguồn gen vì cam Canh là cây có múi đặc sản của vùng ngoại thành Hà Nội và các tỉnh lân cận Cam Canh vừa là cam hàng hoá và đồng thời là cam cảnh trong dịp tết cổ truyền

Cung cấp cây giống sạch bệnh cho sản xuất

4 Đối tượng và phạm vi nghiên cứu của đề tài

Bệnh vàng lá greening, tristeza và kỹ thuật sản xuất giống cam Canh sạch bệnh trong hệ thống nhà lưới cấp

Đề tài tiến hành trên cam Canh của Hà Nội

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU VÀ CƠ SỞ KHOA HỌC CỦA ĐỀ TÀI 1.1 Cơ sở khoa học của việc nghiên cứu đề tài

Bệnh vàng lá greening do một loại vi khuẩn gây bệnh, vi khuẩn không định hình, có tên khoa học là Liberobacter asiaticum và không nuôi cấy được trên môi trường nhân tạo Dưới kính hiển vi điện tử, sử dụng lát cắt mỏng có thể thấy được hình dạng tự nhiên của vật gây bệnh, vi khuẩn có vách dầy, không có nhân, có lông cứng, kích thước 350 – 550 x 600 – 1500nm, có 2 lớp

tế bào xung quanh, độ dầy từ 20 – 25 nm

Ở Việt Nam các giống cây ăn quả có múi đều bị nhiễm bệnh này Triệu chứng bệnh greening trên đồng ruộng phụ thuộc vào giống cây có múi và việc đánh giá chung Triệu chứng chung nhất của bệnh là gân lá bị vàng ở những

mô lá liền kề, sau đó lá vàng hoặc khảm vàng, đôi khi có sự hoá bần của gân

lá Cây bị bệnh, lá thường bị rụng sớm, làm chết cành, gây thối rễ và cuối cùng làm cho toàn bộ cây bị chết Những lá bị bệnh thường vẹo, nhỏ, lệch tâm, thon nhỏ tương tự như triệu chứng lá cây bị thiếu kẽm Cây bị bệnh greening thường lùn, hoa ít và bị rụng, quả nhỏ, vỏ dầy và có màu xanh nhạt Bệnh vàng lá greening lây lan qua cành chiết, mắt ghép lấy từ cây đã bị bệnh Trên đồng ruộng bệnh còn lây lan qua rầy chổng cánh Diaphorina citri Giống cây có múi được nhân vô tính, do vậy nếu lấy mắt ghép từ cây bị bệnh đồng nghĩa với việc nhân nguồn bệnh Muốn có cây giống sạch bệnh cần tiến hành vi ghép đỉnh sinh trưởng để tạo ra cây cung cấp mắt ghép sạch bệnh

Kỹ thuật vi ghép đối với cây cam quýt hay còn gọi là kỹ thuật vi ghép đỉnh sinh trưởng (Shoot tip grafting) được Murashige áp dụng lần đầu tiên vào năm 1972 sau đó được cải tiến hoàn chỉnh bởi Navarro 1975; Delange,1978 và H.J Su,1984 [62][64][45][73] Nguyên tắc của phương pháp này là vi khuẩn và vi rút ít xuất hiện ở đỉnh sinh trưởng do ở đó chưa hình

thành mạch dẫn mà vi khuẩn Liberobacter asiaticum gây bệnh vàng lá greening, virus Tristeza closterovirus gây bệnh tristeza chỉ xuất hiện ở bộ phận của chồi đã hình thành mạch dẫn Dựa vào cơ sở đó tiến hành cắt đỉnh sinh trưởng dưới kính hiển vi soi nổi và được ghép vào gốc cam ba lá nuôi trong môi trường MS lỏng Cây vi ghép sau 1 tháng tuổi bắt đầu tiến hành vi ghép lần 2 trên gốc chanh Volkameriana

Cây vi ghép lần 2 thành công được bảo quản chăm sóc trong nhà lưới chống côn trùng Kiểm tra cây sạch bệnh một trong những khâu rất quan trọng trong kỹ thuật vi ghép đỉnh sinh trưởng để kiểm chứng kết quả vi ghép thành công Giám định bệnh bằng phương pháp PCR, ELISA được sử dụng

để tiến hành đánh giá cây sạch bệnh

1.2 Một số kết quả nghiên cứu trong và ngoài nước liên quan đến đề tài 1.2.1 Tình hình nghiên cứu ở nước ngoài

Bệnh vàng lá greening đã được ghi nhận từ năm 1929 ở Trung Quốc và năm 1947 phát hiện ở Nam Phi Những năm 1960 – 1970, bệnh này đã phá hàng triệu héc ta cây có múi ở châu Á, châu Phi và châu Mỹ; bệnh chưa được phát hiện ở Australia Bệnh do một loại vi khuẩn không nuôi cấy được trên môi trường nhân tạo có tên là Liberobacter asiaticum gây nên (Bové,J.M; Garnier, 1984)[39] và côn trùng môi giới truyền bệnh là rầy chổng cánh Diaphorina citri Bệnh tristeza gây nên hiện tượng tàn lụi cam quýt ở châu Phi rồi tràn sang châu Mỹ vào năm 1920 Hàng triệu cây đã bị chặt bỏ ở Braxin trong những năm 1970

Để ngăn ngừa được bệnh vàng lá greening, người nông dân nên bắt đầu trồng bằng giống cây sạch bệnh lấy từ các cơ sở sản xuất đáng tin cậy của nhà nước Tiếp sau đó cần chú trọng phòng trừ môi giới truyền bệnh là rầy chổng cánh bằng các loại thuốc hoá học đặc hiệu vào các thời điểm thích hợp Chú ý các đợt lộc, phun thuốc ngay từ khi lộc mới nhú được vài milimét (Aubert,

1990)[32] Nên sử dụng thuốc hoá học thuộc nhóm nội hấp để phòng trừ (Bové, 1980)[38] Để phòng trừ sự tái nhiễm của bệnh cũng như sự lây lan của bệnh trong vườn và vùng lân cận, người nông dân phải hợp tác và tuân thủ qui trình phòng trừ tổng hợp của các nhà khoa học (Philippe,1997)[66] Vườn sản xuất phải được cách ly với khu vực vườn cây trồng đã nhiễm bệnh, đặc biệt là bệnh vàng lá greening, cùng với việc tổ chức quản lý chặt chẽ việc nhân giống cây con và lưu thông giống với các vùng lân cận Vườn sản xuất có thể được cách ly về mặt địa lý, nằm dưới thung lũng ở vùng núi, hoặc được cách ly bởi rừng cây hay hàng cây trồng phân cách bao xung quanh vườn Tiến hành điều tra định kỳ để phát hiện và ghi nhận sự hiện diện của bệnh cũng như sự phát sinh của các loài sâu, bệnh hại chính trên đồng ruộng (Su, H.J; Chen, C.N, 1991)[74]

1.2.1.1 Tình hình chung về cây có múi

Theo Vũ Công Hậu, 1999 [9] Nguồn gốc: Khó có thể xác đinh được nguồn gốc của các loài cây có múi vì bao gồm rất nhiều loài và là cây trồng

đã được thuần hoá lâu năm, phân bố rộng, từ xích đạo lên vĩ tuyến 430 Các loài, thậm chí các chi lai hữu tính với nhau một cách dễ dàng, luôn tạo ra các loài mới và những loài người ta không xác định được bố mẹ Ở nước ta có những giống như chấp, cam bù, thậm chí ngay giống cam sành đã trồng rất phổ biến từ Bắc đến Nam và trồng ở nhiều tỉnh thành, các chuyên gia gọi là quýt và cũng không ai biết lai giữa các giống nào Đây cũng là lý do để giải thích tại sao các giống cam quýt có thể ghép với nhau, điều đó đã khẳng định cam quýt đã thuần dưỡng từ rất lâu

Cây ăn quả có múi được chia thành các nhóm sau:

- Chi Poncitrus (Cam ba lá) không trồng được ở Việt Nam mà chỉ được nhập vào làm vi ghép đỉnh sinh trưởng và dùng làm gốc ghép với nhiều ưu điểm

như: chống rét rất tốt, kháng bệnh chảy gôm, chịu được bệnh tristeza, ưa ẩm nhưng không chịu được hạn

- Chi Fortunella (Quất) được trồng chủ yếu ở Nhật Bản, Trung Quốc, Việt Nam Quả giống một qủa cam nhỏ, màu vàng nhưng ít múi, có từ 3 -7 múi, mỗi múi có từ 2 -3 hạt Ở Việt Nam từ Bắc đến Nam trồng chủ yếu làm cây cảnh, với kỹ thuật canh tác tốt đã cho ra hoa và quả chín vào dịp tết Quả có vị rất chua nên dùng làm mứt quả Ngày nay không chỉ trồng làm nguyên liệu chế biến mứt, cây cảnh, làm thuốc mà còn làm gia vị thay thế cho quả chanh

- Chi Citrus gồm các loài dùng làm thực phẩm dưới dạng quả tươi hoặc chế biến Chi Citrus gồm nhiều nhóm, với rất nhiều loài

Thanh yên và phật thủ (Citrus medica) được thuần dưỡng rất sớm ở Trung Quốc, Ấn Độ, bán đảo Đông Dương Đặc điểm là quả to, vỏ rất dầy và ở phật thủ phía đuôi quả lá noãn biến dạng hình thành những ngón tay co, duỗi khác nhau như một nắm tay phật Mùi thơm rất đặc sắc của các túi tinh dầu, quả to, đẹp nên thanh yên, phật thủ là những loại quả rất được ưa chuộng để bày bàn thờ, cúng lễ, cũng là một nguyên liệu cao cấp để làm mứt tết nhưng ít khi dùng làm quả tươi vì vỏ dày ít nước Giống này chưa bao giờ được trồng nhiều Thanh yên không chịu được nhiệt độ quá cao nên trồng chủ yếu ở Miền Bắc Hạt đơn phôi nên từ lâu người ta dùng biện pháp chiết hoặc cắm cành để nhân giống

Chanh: Có hai loài chính: chanh núm và chanh vỏ mỏng

Chanh núm (Citrus limon) gốc ở miền Trung và tây Bắc Ấn Độ ít mưa, không

ưa các khí hậu nhiệt đới ẩm mà ưa thích những khí hậu không quá nóng nhưng cũng không lạnh và hơi khô Trồng nhiều là vùng Xi-xin (Ý), Hy Lạp, Tây Ban Nha, Nam California và ở đây chanh núm có chất lượng cao, chín vàng, thơm, nhiều nước Quả có núm ở phía đuôi, hình trái xoan, vỏ dày

Chanh vỏ mỏng (Citrus aurantifolia) gốc ở vùng nóng và mưa nhiều phía Nam Ấn Độ cũng như ở bán đảo Đông Dương Loài chanh này chịu nóng, khí hậu ẩm mưa nhiều Cây nhỏ, nhiều cành nhỏ, nhiều gai, cuống lá gần như không xẻ thuỳ Quả thường nhỏ, vỏ mỏng, quả hình tròn hoặc hình trái xoan,

có một núm nhỏ, nhưng khác biệt ở chỗ vỏ mỏng, nhiều nước, rất chua Khi chín vỏ quả có màu xanh hoặc chỉ hơi vàng, khi cắt đôi thịt quả thường màu xanh nhạt, tuy cũng có giống thịt đỏ, vỏ đỏ Chanh vỏ mỏng trồng chủ yếu ở các nước nhiệt đới hoặc á nhiệt đới nóng ẩm Ví dụ ở Mỹ trồng ở Florida thích hợp hơn chanh núm

Quýt (Citrus reticulata) Theo Swingle những đặc tính chính của quýt là nhiều múi (9 – 13) cuống lá có cánh hẹp, vỏ dễ bóc, hạt nhỏ, phôi hạt xanh lục, nhưng theo Praloran (40) loài Citrus reticulata có thể được chia thành 4 nhóm phụ đó là:

Quýt Satsuma chịu rét tốt, trồng tại Nam Nhật Bản, ở vĩ tuyến cao nhất so với các cây có múi khác Quýt Satsuma chín sớm, thường không có hạt và có nhiều loài phụ

Quýt King: quả to, vỏ dày hơi khó bóc giống như cam, đáy quả hơi lõm xuống, một số hạt có phôi màu xanh, thịt khi chín đỏ vàng giống như quýt nên Praloran (40) cho rằng đó là một giống lai giữa cam Citrus cinensis và quýt Citrus reticulata Nhiều tác giả xếp quýt king vào loài Citrus nobilis, chủ yếu phân bố ở Thái Lan, Campuchia, Việt Nam Cam Sành ở Việt Nam thuộc loại này được trồng nhiều ở từ Bắc đến Nam Nguồn gốc lai của loài này rất rõ vì

có nhiều đặc tính lai giữa cam và quýt: quả tròn, quả dẹt, vỏ khi dày khi mỏng, phôi hạt chỉ có một số ít xanh còn đa số trắng Trung bình có 15 – 20 hạt một quả nhưng có quả hoàn toàn không hạt, có quả tới 25 – 30 hạt Ngay tên gọi ở Việt Nam là cam nói lên loại quả này có những đặc tính của cam trong khi đặc tính của quýt cũng rõ

Quýt Ponkan: gồm nhiều loài quýt trồng ở các nước Đông Nam Á Tên la tinh theo Praloran là Citrus reticulata nhưng với mỗi nước có một tên gọi khác Ponkan là tên gọi ở Đài Loan, ở Việt Nam tuỳ theo vùng có những tên gọi khác nhau Ở miền Bắc có cam đường (quả to gọi là cam nhưng đặc tính là quýt), cam giàng (một làng ở Thanh Hoá), quýt bộp Bố Hạ Tất cả các giống này, quả to,vỏ mỏng, dễ bóc, khi chín màu vàng hơi có sắc đỏ của gạch nung già, thường ngọt không có vị chua trừ quýt bộp Bố Hạ chua ngọt cân đối nhưng quả lại hơi nhỏ

Cam đắng (Citrus aurantium) ở Việt Nam chỉ trồng lẻ tẻ, rất giống cam về hình thù cây, nhưng lá có cánh to hơn, quả không tròn và nhẵn như cam Thịt chua và vỏ múi đắng như bưởi Tinh dầu ở cả hoa và lá, có mùi thơm nổi tiếng và cam đắng là nguyên liệu cất tinh dầu nổi tiếng ở Địa Trung Hải Trước đây cam đắng rất hay được dùng làm gốc ghép cho cam ngọt vì có khả năng chống rét, chống ẩm, úng, chống bệnh chảy gôm do nấm Phytophthora spp nhưng lại rất mẫn cảm với bệnh vi rút như bệnh tristeza nên không được dùng nữa

Cam ngọt (Citrus cinensis) Đây là loài quan trọng nhất vì chiếm hơn 2/3 sản lượng quả có múi trên thế giới Nguồn gốc ở Trung Quốc (cũng có thể ở Ấn Độ) được thuần dưỡng ở đây sớm nhất nhưng được trồng nhiều ở Brazil, Mỹ, các nước quanh Địa Trung Hải Số lượng giống nhiều và có thể phân làm 3 nhóm chính

Cam Navel: ta gọi là cam có rốn vì ở đáy quả có một thứ quả phụ nằm lọt trong quả chính, bổ quả làm đôi mới thấy rõ Ở Việt Nam đã trồng thử nhưng

do giống này không chịu khí hậu nóng ẩm nên vỏ dày, ít nước, chưa được trồng với qui mô công nghiệp

Cam vàng: quả màu vàng mặt trời nên còn gọi là vàng da cam, khác với vàng rơm, vàng da chanh Thịt cùng màu Đây cũng là loài cam được trồng phổ

biến nhất so với hai nhóm cam Navel và cam huyết, thích hợp với khí hậu nóng hơn Đa số các giống trồng ở Việt Nam thuộc nhóm này Một số loài nhập nội trước đây từ Trung Quốc nhưng phần lớn do các sở canh nông thời Pháp nhập nội như cam Xã Đoài (giống Valencia late theo một số chuyên gia Pháp), cam Vân Du (trước đây gọi là cam Sunkis), cam Sông Con ở Miền Bắc, cam Mật ở miền Nam và còn có thể kể ra nhiều loài cam khác gọi theo tên vùng trồng Đa số các loài này không biết nguồn gốc nhưng có thể do các vườn cây ăn quả của nhiều tỉnh, từ những giống nhập nội trước đây như cam Hamlin, ping apple

Cam huyết: Có màu đỏ trong vỏ, thịt quả do có antoxian Những loài này gốc

ở vùng Địa Trung Hải và không trồng ở nhiệt đới

Tóm lại cam là một loại cây thích hợp với các vùng á nhiệt đới giữa các

vĩ tuyến 30 – 400 Tuy nhiên nhóm cam vàng có thể trồng kinh doanh ở các nước nhiệt đới với điều kiện thích hợp ví dụ như loài valencia late, nhất là những loài đã được nhập nội từ lâu Riêng ở Việt Nam điều kiện miền Bắc thích hợp hơn ở miền Nam, mặc dù ở miền Nam có thể đạt sản lượng cao hơn, nhưng chỉ có ở miền Bắc mới tạo ra được những quả cam chín vàng, thơm, hương vị xấp xỉ với cam á nhiệt đới nhờ có mùa rét

Bưởi (Citrus grandis) và bưởi chùm (Citrus paradisi) có nguồn gốc ở Trung Quốc, Ấn Độ, Đông Dương là loài cây có múi chịu khí hậu nóng ẩm nhất và thực tế chỉ trồng ở các vùng nhiệt đới và á nhiệt đới nóng Cây bưởi cao, to, lá

có cánh rộng, hoa, quả to chất lượng tốt hay xấu tuỳ theo giống bưởi Bưởi chùm rất giống bưởi, được coi là cây có múi duy nhất không có nguồn gốc ở Châu Á, xuất hiện ở các đảo Angti (Caribê) vào thế kỷ 18 – 19 theo Praloran

có thể là một biến dị mầm hoặc giống lai từ bưởi

Từ năm 1985 đến 1995, nhu cầu về cây ăn quả có múi trên thế giới đã tăng vọt từ 48 triệu tấn lên đến 80 triệu tấn với tốc độ tăng hàng năm là 8,7%,

trong đó cam chiếm phần lớn thị trường do cung ứng cho công nghiệp nước

ép trái cây, kế đến là quýt, chanh và sau cùng là bưởi chùm (Aubert và Guy Vullin, 1998)[33]

Theo các điều tra của FFTC thực hiện năm 1995 thì năng suất của cây

có múi ở Đông Nam Á thấp so với các nước Phương Tây, trong khi giá thành sản xuất lại tương đối cao Cây có múi ở Đông Nam Á đang bị bệnh gây hại nhiều, đặc biệt là bệnh vàng lá greening, các bệnh do vi rút và tương tự vi rút Tuổi thọ của vườn ngắn cũng là nhân tố làm giảm tỷ lệ quả trong vùng và làm giá thành sản xuất cao nên thiếu nguồn cung cấp cây giống sạch bệnh, và thiếu kỹ thuật canh tác (Chang, 1995)[44]

1.2.1.2 Bệnh vàng lá greening, bệnh tristeza và các bệnh khác trên giống cây có múi

Trên cây có múi, các bệnh truyền nhiễm qua nhân giống được phân ra thành 4 nhóm (Roistacher,1993)[72]

- Nhóm gây hại nặng, có côn trùng trung gian truyền bệnh gồm: bệnh greening do vi khuẩn Liberobacter asiaticum gây hại trong mạch dẫn, bệnh

do virus tristeza, bệnh Stubborn do Spiriplasma citri, bệnh Witches bloom trên chanh do Phytoplasma, bệnh vàng lá do Xylelle fastidiosa và bệnh lùn mất màu lá do vi rút

- Nhóm gây thiệt hại trung bình, lây truyền được qua con đường cơ học như: bệnh vảy vỏ do viroid exocortis, bệnh cachexia do viroid cachexia, bệnh vi rút tatter leaf và bệnh psorosis do vi rút Ophio

- Nhóm bệnh hoàn toàn kiểm soát được nếu sử dụng cây giống sạch bệnh và chỉ do nhà nhân giống làm lây nhiễm qua việc ghép từ chồi bệnh gồm bệnh psorosis A do virus Ophio, các bệnh thuộc nhóm cho triệu chứng “gân trong dạng lá sồi” như bệnh mồng gà cristacortis, bệnh đá cứng, bệnh concave gum

và các bệnh chảy mủ vỏ thân do viroid, rỗ thân chảy mủ trên cam ba lá do viroid hay bệnh nứt vỏ ở chỗ tiếp hợp do vi rút

- Nhóm bệnh do côn trùng truyền nhưng thiệt hại không đáng kể: bệnh veinenation do vi rút

1.2.1.3.Bệnh vàng lá greening

Hoanglongbin hay vàng lá greening đang lan rộng trên 50 quốc gia, và

đe doạ nghiêm trọng đến nguồn gen cây có múi ở các nước châu Á Bệnh vàng lá greening xuất hiện từ năm 1929 tại Trung Quốc, mãi đến 1919 Reinking [71] mới báo cáo về bệnh và bệnh trở nên trầm trọng từ 1926 và Lin, 1956[61] chứng minh bệnh truyền được qua mắt ghép Tác nhân gây bệnh truyền qua dây tơ hồng đến cây dừa cạn (Catharanthus roseus L.) (Garnier; Bové, 1984) [51] và được khẳng định là một loại vi khuẩn nhuộm gram âm Bové và CTV,1984 [39] báo cáo rằng vi khuẩn gây bệnh vàng lá greening ở Nam Phi là tác nhân không chịu nhiệt trong khi vi khuẩn này ở Philippines và Ấn Độ chịu nhiệt tốt Theo Su và CTV, 1993[76] cho rằng dùng kháng thể đơn dòng sản xuất ở Đài Loan, Việt Nam, Thái Lan và Malaixia trong khi Bové và CTV cũng sản xuất đoạn mồi (probe) tương tự và cần 2 gam lá cho một mẫu Các đoạn mồi DNA của Bové có thể nhận được cả Liberobacter trong từng cá thể rầy Diaphorina citri

Bệnh vàng lá greening không ảnh hưởng đến mô gỗ nhưng ảnh hưởng đến mô libe, sự vận chuyển đường đến các phần trên của cây bị cản trở Lá bị vàng héo, nhanh chết, quả mất chất lượng, sự phân chia tế bào luôn xảy ra khiến gân lá sưng lên Vi khuẩn cũng hiện diện nhiều ở cuống quả và quả bị lệch tâm, đồng thời bị giảm trọng lượng và độ đường dẫn đến giảm chất lượng (Aubert, 1987)[28] Khảo sát bộ rễ cây đang bệnh, ta cũng thấy do nghẽn mạch dẫn, rễ không được nuôi và không còn hoạt động tốt nên bị huỷ

hoại nhiều, nhất là rễ tơ Cây bị rụng quả cùng với tiến triển của bệnh, cây sẽ chết sau 2-5 năm tuỳ mức độ nhiễm (Aubert, 1988)[30]

Tác nhân gây bệnh vàng lá greening: Theo Bové và CTV, 1980[38] đã xác định có 2 loài Liberobacter gây bệnh greening đó là Liberobacter asiaticum (loài châu Á) và Liberobacter africanum (loài châu Phi), vỏ có bề dày khoảng 25 µm với 3 lớp của 1 vi khuẩn gram thực sự Vi khuẩn có 2 dạng: dạng dài, chiều dài đo được 1 - 4µm, đường kính 0,15 – 0,3µm và dạng tròn có đường kính 0,1µm Loài vi khuẩn châu Á có tính kháng nhiệt nên khó phòng trị hơn, người ta cũng đã chứng minh được rằng mỗi loài rầy đều có khả năng truyền được cả 2 loài vi khuẩn chấu Á và châu Phi

Vi khuẩn chỉ sống được trong mô libe của cây, sử dụng dây tơ hồng (Cuscuta spp.) để truyền vi khuẩn qua cây dừa cạn (Catharanthus roseus L.) thành công và là một trong những biện pháp để nhân nhanh mật số vi khuẩn cho nghiên cứu Sự hiện diện của Liberobacter asiaticum trong cơ thể rầy cũng được xác định tỷ lệ rầy nhiễm vi khuẩn tại một địa bàn hay sau một thời gian phòng trừ tổng hợp

Garnier và Bové, 1984[51] đề nghị kỹ thuật quan sát trực tiếp vi khuẩn gây bệnh vàng lá greening như sau: Cắt nhỏ gân lá từ lá bệnh (có triệu chứng lốm đốm) từng mảnh nhỏ khoảng 1mm, cố định với 4% glutaldehyde trong chất đệm 0,1M caccodylate (Phosphate), pH 7,5% trong 6 giờ Với cùng loại chất đệm trên nhúng 3 lần, sau đó cố định với 1% osmium tetroxide SO4 trong cùng chất đệm rồi dùng máy cắt vi mẫu nhỏ để cắt mẫu nhuộm với citrate và quan sát dưới kính hiển vi điện tử Các nghiên cứu gần đây đã phát triển kháng thể đơn dòng và nhờ sản xuất được các probe DNA, phương pháp chẩn đoán và giám định bệnh nhanh chóng và chính xác (Garnier và Bové, 1984; Hong Ji Su và CTV, 1993)[51] [76]

Tác nhân truyền bệnh greening: Bệnh lây lan qua RCC Diaphorina citri Kuwayyama và Triozea erytrea Del Guercio Loài thứ nhất phân bố ở châu Á như Trung Quốc, Việt Nam, Thái Lan, Indonesia, Malaysia, Bruney,

Ấn Độ ; loài thứ hai ở châu Phi như Nam Phi, Sudan, Madagasca

Người ta cũng ghi nhận một số vùng có cả 2 loài rầy và cả 2 loài vi khuẩn như ở Réunion, Mauritius, tây nam Ả rập Mỗi loài rầy đều có khả năng truyền được cả hai loài vi khuẩn (Aubert và CTV, 1988)[31] Rầy trưởng thành và rầy non thường tập trung ở các đọt non, chồi ngọn để chích hút dịch tế bào

Ký chủ của RCC là tất cả các cây trong họ cam quýt như: cam, quýt, bưởi, chanh, hạnh và đặc biệt là các cây cảnh như nguyệt quế, phật thủ, trong đó nguyệt quế là cây được RCC ưa thích nhất

Thiên địch của RCC là các loại bọ rùa, nấm ký sinh nhưng có 2 loài ong quan trọng nhất đó là ong ngoại ký sinh Tamarixia radiata và ong nội ký sinh Diaphorencyrtus aligarhensis Ong Tamarixia radiata đẻ trứng nhiều nhất trên ấu trùng tuổi 4 và cả hai đều ăn trên ấu trùng rầy, khi ấu trùng bị ăn thì không đẻ trứng nữa (Aubert, 1987)[28]

Buitendag và Von Boembsen,1993[40] đã cho rằng quản lý phòng trị bệnh vàng lá greening là kết quả của biện pháp phòng trừ tổng hợp gồm: sử dụng cây sạch bệnh, giảm mật độ cây nhiễm, điều tra và chặt bỏ ngay những cành, cây có triệu chứng bệnh và phòng trừ RCC truyền bệnh

Quản lý dịch hại tổng hợp (IPM) đối với bệnh vàng lá greening

Để đối phó với bệnh vàng lá greening, trong nhiều nước, qua nhiều năm, hầu như người ta chỉ dựa vào thuốc hoá học để trừ rầy và cả vi khuẩn gây bệnh greening mà lãng quên các phương pháp “không hoá học” Tuy nhiên, biện pháp sinh học luôn luôn khó ứng dụng hơn hoá học và hiệu quả không thấy ngay, dù có một ý nghĩa và tính chất lâu dài Phòng trừ hoàn toàn

bằng thuốc hoá học đã thành công trong những trường hợp thâm canh diện rộng ở Nam Phi song lại quá tầm tay đối với hộ nông dân nhỏ và không thành công ở châu Á (Aubert và CTV, 1988) [31]

Tác động xấu của việc sử dụng hoá chất trừ rầy là phải dùng hoá chất lâu dài, RCC cũng sẽ dần dần kháng thuốc và nếu trừ vi khuẩn Liberobacter bằng kháng sinh thì vi khuẩn cũng dần dần quen thuốc Do đó, biện pháp hoá học phải kết hợp với một hệ thống phòng trừ tổng hợp với các biện pháp sinh học và quản lý môi trường (Bové và CTV, 1980)[38]

Giống kháng: Cho đến nay chưa có giống hay chủng loại cây có múi nào kháng được bệnh vàng lá greening, song các cây như bưởi chua, chanh tỏ

ra hơi chống chịu được Chương trình lai tạo sử dụng cây mẹ là chanh lime nhất là phương pháp sử dụng phôi chanh Tahiti đã tìm ra được 1 dòng lai ăn được với cam quýt tỏ ra chống chịu tốt với greening Các dòng lai khác, được lai với cam ba lá cũng đang tiến triển tốt và triển vọng kháng tốt đối với dòng

vi khuẩn châu Phi (Gmitter và CTV, 1992)[52]

Để phòng chống bệnh tốt cần được áp dụng liên kết với các phương pháp khác trong chiến lược phòng trừ tổng hợp mà kế hoạch hoạt động ngăn chặn tác nhân gây bệnh và tác nhân truyền bệnh do con người chủ động quản

lý là quan trọng (Aubert, 1987)[29]

1.2.1.4 Bệnh vi rút Tristeza

Vi rút thuộc nhóm closterovirus, dạng hình que kích thước 12 x 2.000nm, gồm chuỗi RNA đơn, có vỏ protein bao bọc bên ngoài (Kitajima, 1964)[58] Triệu chứng quan sát được trên cây có múi tuỳ thuộc vào điều kiện môi trường, ký chủ tự nhiên và dòng vi rút gây bệnh Nói chung, cam quýt có thể chống chịu được bệnh này và không biểu hiện triệu chứng nhiễm bệnh, trong khi nhóm chanh, nhóm bưởi chùm dễ bị nhiễm bệnh và triệu chứng biểu hiện rất rõ Dòng vi rút trên cam Valencia ở Indonexia, Trung Quốc, Đài Loan

và dòng gây rỗ thân đã được mô tả trước đây (Musharam và Whittle, 1991)[63]

Vi rút truyền qua rệp muội theo kiểu bán bền vững và thông qua mắt ghép Toxoptera citricida truyền bệnh nhanh nhất và hữu hiệu gấp khoảng 10 lần so với Aphis grossipii, sau Aphis grossipii là loài A citricola và Toxoptera aurantii khả năng truyền bệnh không cao (Dodds và Bar-Joseph, 1983)[47] Phát triển và sử dụng kháng thể đơn dòng được thực hiện để phân loại các loài vi rút tristeza khác nhau (Tsai và Su, 1991)[80]

Hugees và Litster, 1949[56] lần đầu tiên chứng minh sự liên quan giữa các triệu chứng gân trong, rỗ thân, trái nhỏ và chua ở nhóm chanh lime Citrus aurantifolia (Christm) Swingle, việc này xem như bước khởi đầu cho khái niệm dùng cây chỉ thị trong chẩn đoán

Các yếu tố như cây ký chủ tự nhiên, dòng vi rút được truyền và điều kiện môi trường như nhiệt độ, số lượng rệp trên cành có thể ảnh hưởng đến quá trình truyền bệnh Tristeza (Raccah và CTV, 1989)[68]

1.2.1.5 Cải thiện bảo vệ thực vật đối với giống gốc ghép

Kỹ thuật cải thiện tính thuần cây gốc ghép

Aubert và Guy Vullin, 1998[34] đã tổng kết một số phản ứng đối với bệnh của một số giống gốc ghép như sau:

Cây cam đắng (Citrus aurantium) mẫn cảm với bệnh malsecco, cây tạo

ra các tổ hợp mẫn cảm đối với vi rút tristeza, nhất là trường hợp ghép với cam, quýt và các loài cây lai của chúng hay bưởi chùm, nhưng đối với chanh hoặc cây cam bergamot tạo ra các tổ hợp chống chịu bệnh cháy lá Cây cam đắng chống chịu tốt với các bệnh viroid Cachexia, Exocortis, kháng đối với bệnh chảy mủ Phytophthora spp., nhưng mẫn cảm với các loại tuyến trùng nhất là Tylenchus semipenetrans Cam ba lá (Poncitrus trifoliata) kháng rất tốt đối với bệnh chảy mủ Phytophthora spp., chống chịu tốt bệnh viroid cachexia và các loại tuyến trùng, nhất là tuyến trùng Tylenchulus semipenetrans Cam ba lá khi dùng làm gốc ghép có thể tạo nên các tổ hợp chống chịu được bệnh tristeza, nhưng lại mẫn cảm đối với bệnh vẩy vỏ exocortis

Citrange Troyer (Citrus sinensis x Poncirus trifoliata) có gen kháng đối với bệnh chảy mủ Phytophthora spp., nhưng ghép với quýt Clementine đôi khi tại vết ghép xuất hiện các vết nứt rạn nhỏ, các vết này có thể bị Phytophthora spp tạo khuẩn lạc tại đó và tạo nên những túi mủ khít ngay trên điểm ghép

Citrange carrizo tạo được các tổ hợp chống chịu bệnh tristeza và khả năng kháng tuyến trùng hơn Troyer Carrizo ít mẫn cảm đối với một vài viroid, song lại tương đương với Troyer trên nhiều tính chất khác

Quýt Cleopat (Citrus reticulata Blanco), gốc ghép này được sử dụng do chống chịu tốt bệnh cachexia và exocortis Quýt cleopatra tạo nên các tổ hợp chống chịu phần nào bệnh tristeza và bệnh cháy lá song giống này lại chỉ chịu các loại đất xốp và được tiêu thoát nước tốt

Citrus volkameriana: gốc ghép này chống chịu tốt với bệnh chảy mủ và tạo nên các tổ hợp kháng các bệnh tristeza, exocortis, cachexia Đây là một gốc ghép đáng quan tâm trong trường hợp các nước chưa có một hệ thống sản xuất cây giống có múi chứng thực (Ollitrault và CTV, 1990; Gmitter và CTV,1992,1996,1997)[65][52][53][54]

1.2.1.6 Cải thiện cây giống bằng vi ghép và indexing bệnh trong một hệ thống nhân giống sạch bệnh

* Vai trò của Công nghệ sinh học (CNSH) trong cải thiện giống về mặt BVTV

Các phát triển gần đây của CNSH nhất là nuôi cấy tế bào chất đã mở ra

cơ hội phát triển giống và giống gốc ghép mới Các mục tiêu mới về chương trình lai tạo cho cây gốc ghép bao gồm các chỉ tiêu tính kháng, các tác nhân gây bệnh và chống chịu được điều kiện môi trường như kháng vi rút tristeza, kháng thối rễ Phytophthora spp., kháng tuyến trùng, chống chịu lạnh, hạn, mặn và điều kiện đất kiềm

Các kỹ thuật lai tế bào sinh dưỡng cho cây có múi đã được phát triển hơn 10 năm qua Có nhiều dòng lai tế bào chất sinh dưỡng và cây có múi đã được báo cáo Các dòng lai này đang được thử nghiệm đánh giá ở nhiều nước (Ollitrault, 1990; Gmitter và CTV, 1992)[65][52]

Phân tử đánh dấu vẫn luôn được xem như là phương tiện giúp CNSH

hỗ trợ cải thiện cây có múi như dùng để tìm kiếm các gen kháng vi rút tristeza

và các chiến lược cải thiện giống trong đó CNSH tiến bộ nhanh chóng đã mang lại cho nhà lai tạo cây có múi thiết kế được những chương trình lai tạo hiệu quả hơn (Gmitter và CTV, 1996)[52]

* Vi ghép: Kỹ thuật in-vitro làm sạch bệnh tiềm ẩn quan trọng trên cây có múi

Cây ăn quả có múi là cây lâu năm có hiệu quả kinh tế cao, trong quá trình nhân giống vô tính, các bệnh vi rút, tương tự vi rút dễ dàng lây qua mắt ghép, cây con hầu hết bị nhiễm nếu cây mẹ có bệnh và tạo cơ hội cho bệnh tồn tại hàng chục đến hàng trăm năm (Roistacher, 1993)[72] Do vậy, sạch hoá vật liệu trồng là bước thiết yếu trong công tác tuyển chọn bảo tồn để giải quyết được các áp lực bệnh do nhóm vi rút và tương tự vi rút gây ra

Cơ sở lý luận về vi ghép: Kỹ thuật này do Murashige và CTV phát triển năm 1972 [62] đã được Navarro và CTV, 1975 [64] làm hoàn chỉnh hơn về phần vô trùng, sau đó Delange năm 1978 [45] cải thiện thêm Sạch hoá bằng

kỹ thuật vi ghép đỉnh sinh trưởng thể hiện nhiều lợi thế: các thể vi sinh vật gây nhiễm thuộc loại hình viroid, vi rút hoặc tương tự vi rút có thể loại bỏ được nhờ vi ghép, kỹ thuật bảo toàn trọn vẹn các tính chất di truyền của các

mô tế bào được xử lý trong khi gieo bằng hạt và tuyển chọn cây phôi tâm cũng là cách loại bỏ được các bệnh nhưng tính chậm thành thục của cây lại khó khắc phục (Roistacher, 1993)[72]

* Các phương pháp giám định, indexing bệnh cây có múi

Mục tiêu của indexing là tìm các tác nhân gây bệnh mà đặc biệt là giám định bệnh qua tác nhân gây bệnh trên cây đầu dòng qua vi ghép để khẳng định

sự sạch bệnh của cây nhằm phục vụ mục tiêu cuối cùng là sản xuất và duy trì một vườn cây đầu dòng sạch bệnh cho công tác nhân giống, cải thiện sản xuất

có năng suất cao, chất lượng tốt

Các kỹ thuật giám định bệnh cây có thể tạm chia như sau:

Các kỹ thuật dựa vào cơ chế miễn dịch như phương pháp ELISA, DIBA, Immunofluorescence

Các kỹ thuật dựa vào acid nucleic như phương pháp lai DNA, PCR

Các kỹ thuật sử dụng kính hiển vi điện tử (dựa vào cả 2 cơ chế trên) như

sử dụng mẫu tươi, vi mẫu có kháng thể

Các kỹ thuật giám định vi khuẩn bằng sinh hoá và sử dụng phages

Các kỹ thuật sử dụng kính hiển vi điện tử quét để giám định bệnh nấm Trong kỹ thuật indexing bệnh trên cây có múi, người ta phân biệt 3 loại là indexing ngắn hạn, indexing phân tử và indexing sinh học trên cây có múi (FAO/IBPGR, 1988)[48]

Indexing ngắn hạn bao gồm: Khảo sát triệu chứng trên cây con hay cây lớn đang sinh trưởng, tiêm cơ giới qua cây thảo mộc ký chủ khác, phương pháp ELISA và nuôi cấy trên môi trường (đối với bệnh stubborn do Spiroplasma citri)

Indexing phân tử bao gồm phương pháp sPAGE (dành cho viroid), phương pháp dsRNAc, phương pháp lai phân tử và các phương pháp PCR hoặc RT-PCR

Indexing sinh học: Sử dụng các cây chỉ thị như cam mật, chanh giấy, Citron (861-S-1), Citrange Rusk hay Troyer trong các điều kiện nhà lưới mát hay ấm Các phương pháp indexing bệnh được mô tả cùng hình ảnh rất chi tiết trong Agriculture Hand Book, 1968[27]

Sử dụng cây chỉ thị hay còn gọi là indexing sinh học có các ưu điểm là: thể hiện rõ qua cây và nhìn thấy được bằng mắt thường, vi rút hay vi khuẩn dù với lượng rất nhỏ khi ghép vào cây ký chủ đã gia tăng mật số đáng kể minh chứng sự hiện diện nếu có trong cây đem giám định rõ ràng, tuy đòi hỏi phải mất nhiều thời gian, cần có diện tích lớn và các cây chỉ thị phải đảm bảo không bị côn trùng truyền bệnh Phương pháp ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) dựa trên các khái niệm tạo kháng thể và tính chất của Enzym (Bar Joseph và CTV, 1976; Bar Joseph và Garsney, 1981)[35][36] là một phương pháp rất tiện lợi, đơn giản nhất để xác định vi rút tristeza và các bệnh vi rút khác như bệnh SDV (Satsuma dwarf virus), Spiroplasma citri (BarJoeph và CTV, 1976) [36]

Qui trình giám định bệnh do Hong Ji Su đề nghị áp dụng cho các nước Việt Nam, Thái Lan, Philippines, Malayxia như sau:

Giám định bệnh vàng lá greening bằng phương pháp lai DNA (dùng DNA probe) hoặc sử dụng phương pháp PCR

Giám định bệnh tristeza bằng phương pháp ELISA hoặc RT-PCR Giám định vi rút tatter leaf bằng cây chỉ thị Rusk citrange hoặc phương pháp RT-PCR

Giám định bệnh viroid exocortis bằng cây chỉ thị Etrog Citron 861-S hoặc RT-PCR

* Chương trình quản lý và sản xuất cây có múi sạch bệnh

Ở Pháp: từ năm 1958 tập đoàn quĩ gen cây có múi quan trọng được Trạm nghiên cứu nông học San Giuliano ở đảo Corse quản lý theo các tiêu chuẩn nghiêm ngặt về dịch bệnh cây và hình thái học quả Hệ thống cấp chứng chỉ đặt ra cho cây có múi cũng tương tự như hệ thống dành cho cây ăn quả khác Hệ thống được hỗ trợ của Viện INRA và Trung tâm CIRAD, dưới quyền bảo trợ của Viện Nông nghiệp và được quản lý bởi 2 cơ quan CTIFL

và SPV trong các tiểu vùng lãnh thổ hải ngoại của Pháp, các nhà ươm cây ăn quả có múi được đặt dưới quyền kiểm tra của sở Bảo vệ thực vật địa phương, trung tâm CIRAD-FLHOR là cơ quan chủ quản sản xuất cây giống S1(Philipp, 1998)[20]

Ở Tây Ban Nha: vào những năm đầu tiên của thập niên 1980, tại Viện AVIA ở Valencia, Tây Ban Nha đã triển khai thiết bị đảm bảo việc sản xuất các cây cấp S1 Cơ quan AVASA liên hệ làm việc với các nhà cung cấp giống được Viện INSPY công nhận (Lee,1993)[60]

Ở Trung Quốc (Kechung và Xu Chiang Fan, 1990)[57] cùng với chương trình sản xuất và sử dụng cây sạch là biện pháp phòng trừ tổng hợp bệnh Hoanglongbin

Ở Nam Phi: Kinh nghiệm về một chương trình cải thiện cây có múi cho thấy với mục tiêu cơ bản là giải quyết vấn đề sản xuất của ngành cam, quýt bằng biện pháp cây giống có chất lượng cao, sạch bệnh, có sẵn và được người trồng sử dụng đạt hiệu quả tối đa Cây giống phải được sản xuất từ qui trình vi ghép có kiểm tra bệnh Chương trình ở Nam Phi luôn theo sát 2 mục tiêu cụ thể là:

- Cung cấp mắt ghép của các giống thương phẩm trong sản xuất đòi hỏi có khảo nghiệm chứng nhận

- Chuyển giao công nghệ sản xuất cây giống cho các vườn cây giống và giúp người sản xuất cây giống cam quýt có đủ khả năng sản xuất đúng qui trình để chương trình này chứng nhận

Cần có cơ quan nghiên cứu về cây ăn quả để hỗ trợ và chuyển giao kỹ thuật canh tác cũng như sản xuất cây giống có múi mới có thể cải thiện trong chương trình cải tiến chung cho sự phát triển cây ăn quả trong vùng Chương trình sạch hoá cây có múi, nghiên cứu cây gốc ghép phù hợp và cải thiện các khuyết điểm của cam, quýt (Correa và Arrango, 1994)[43]

Tóm lại, có rất nhiều các nghiên cứu trên thế giới về bệnh cây có múi, các công nghệ vi ghép, giám định bệnh bằng nhiều phương pháp đã hoàn thiện và được sử dụng rộng rãi trong ngành sản xuất cây giống Tuy nhiên, các công nghệ đưa vào sản xuất cây giống có chứng nhận kiểm nghiệm chỉ được áp dụng thành công ở một số nước và đang được tiếp tục triển khai để bảo vệ ổn định ngành sản xuất quả đối với cây có múi trên toàn thế giới 1.2.2.Tình hình nghiên cứu ở trong nước

Theo Vũ Công Hậu, 1999 [9] đầu những năm 90 của thế kỷ này, so với

30 - 40 năm trước đây, sản xuất và tiêu thụ quả có múi trên thế giới đã có nhiều thay đổi đáng kể

Quả có múi đã trở thành loại quả quan trọng nhất so với trước đây chỉ bằng hoặc thua ba loại quả quan trọng khác là nho, chuối và táo bom

Vị trí các nước sản xuất nhiều quả có múi nhất cũng thay đổi Trước đây (1963) sản xuất nhiều nhất là Mỹ (5,7 triệu tấn) rồi mới tới Braxin (2,3 triệu tấn), Tây Ban Nha (2,0 triệu tấn) Năm 1990 đứng đầu là Braxin (15 triệu tấn), Mỹ (9 triệu tấn), Trung Quốc (4 triệu tấn)

Cây ăn quả có múi là một trong những cây ăn quả được nhân dân ta ưa chuộng do vậy nhiều giống đặc sản đã được tuyển chọn và duy trì ở nhiều vùng sinh thái khác nhau Các vùng chuyên trồng cây có múi ở nước ta theo Viện Quy hoạch và Thiết kế Nông nghiệp năm 1994 [26] như sau:

Bảng 1.1 Diện tích và các loài được trồng chủ yếu ở nước ta

Vùng trồng Diện tích (ha) Chủng loại Dọc 2 bên sông Tiền và sông Hậu 34.000 Cam, quýt,

bưởi, chanh Vùng bưởi Tân Triều, Đồng Nai 400 Bưởi

Vùng bưởi Hương Thuỷ, Hương Trà 300 Bưởi

Vùng đặc sản Hương Khê, Hương Sơn, Hà Tĩnh

và Tuyên Hoá

2.500 Bưởi Phúc

Trạch, Cam Bù Vùng trồng cam Nghĩa Đàn - Nghệ An 3.000 Cam

Vùng trồng cam quýt Hàm Yên – Tuyên Quang,

Bắc Quang – Hà Giang

500 Cam, quýt

Vùng bưởi đặc sản Yên Bình, Đoan Hùng, Yên

Sơn

600 Bưởi, cam, quýt

Hà Nội là vùng trồng cây cam Canh đặc sản với diện tích tuy không nhiều, do quá trình đô thị hoá một cách nhanh chóng nên diện tích trồng cam Canh đã bị thu hẹp Cam Canh là loài cây trồng hiệu quả kinh tế cao, hàng năm vào dịp tết cổ truyền giá bán 1kg cam Canh từ 25.000 đến 35.000 đồng

Ngày nay khi đời sống mỗi ngày một cao hơn, cam Canh không chỉ là sản phẩm hàng hoá mà còn rất phù hợp dùng làm cây cảnh trong ngày tết Cây xanh tốt, vỏ quả màu đỏ và chín đúng vào dịp tết mà không cần can thiệp thêm về kỹ thuật canh tác Để làm cây cảnh trên mỗi héc ta có thể trồng từ 2.000 – 2.500 cây, giá bán dao động 400.000đồng – 2 triệu đồng/cây

Ngoài thiệt hại do sâu, bệnh theo Vũ Công Hậu, 1999[9] thì lượng hao hụt sau thu hoạch có thể chiếm đến 25 – 30% sản lượng quả Trong nguy cơ dịch bệnh làm suy thoái, việc nghiên cứu và bảo tồn quỹ gen cây có múi ở nước ta rất quan trọng và đang được tiến hành (Lê Quang Hạnh,1993; Đỗ Đình Ca, 1999; Lê Thị Thu Hồng, 1998)[8][41][55]

Trong những năm 1967 – 1968 Viện Bảo vệ thực vật đã tiến hành điều tra cơ bản sâu bệnh hại cây trồng ở các tỉnh phía Bắc và sau ngày thống nhất đất nước những năm 1977 – 1978, 1997 – 1998 trên cây trồng và trên cây ăn quả Riêng trên cây có múi đã ghi nhận được 19 loại bệnh do nấm, 2 loại bệnh

do vi rút, 2 loại do bệnh vi khuẩn, 2 loại bệnh tuyến trùng, 4 loại do thực vật thượng đẳng và 4 loại bệnh sinh lý Trong đó bệnh vàng lá greening, tristeza, loét, chảy gôm, phấn trắng được xem như những loại bệnh hại nguy hiểm trên cây có múi Nghiên cứu về thành phần loài sâu hại cây ăn quả có múi ở nước

ta còn chưa nhiều, sau 3 lần điều tra cơ bản về sâu hại cây trồng đã công bố danh sách thành phần sâu hại cây ăn quả có múi với số loài từ 60 - 96 loài côn trùng gây hại, trong đó đáng chú ý là rầy chổng cánh và rệp là 2 đối tượng làm môi giới truyền bệnh Đến nay trong cả nước ghi nhận có 169 loài sâu hại cây ăn quả có múi (T.T Bình,2002; P.V Lầm, 2002)[3][12]

Đã có một số nghiên cứu về thành phần thiên địch trên cây ăn quả có múi Thiên địch trên cây ăn quả có múi ở vùng Hà Nội có 54 loài, Hà Giang

82 loài, ở vùng Cần Thơ và An Giang ghi nhận 58 loài, Vĩnh Long có 65 loài nhện lớn Đến nay đã ghi nhận tổng 127 loài thiên địch của sâu hại cây ăn quả

có múi ở nước ta Rầy chổng cánh ở vùng đồng bằng sông Cửu Long có 14 loài ký sinh, ở phía Bắc có 10 loài bắt mồi Vùng đồi Hoà Bình có 8 loài thiên địch của nhện đỏ cam (T.T Bình, 2002; T.X Dũng, 2003; H.T Đức, 1999; P.V Lầm và cs, 2002; H.C Lằm, 1996)[3][5][7][12][13]

Trong những năm gần đây, không chỉ ở Việt Nam mà cả nhiều nước trên thế giới đều phải đương đầu và gánh chịu những thiệt hại lớn do sự suy thoái nhanh chóng của các vườn trồng cam quýt mà nguyên nhân chính không còn xa lạ đó là bệnh vàng lá greening và các bệnh khác do vi rút Bệnh lây lan nhanh và tàn phá nặng ở các vườn tập trung, các vườn hộ gia đình do hệ thống quản lý giống, biện pháp canh tác không tốt, côn trùng môi giới truyền bệnh dẫn đến cây sinh trưởng kém đã gián tiếp làm giảm hiệu quả phòng trừ hoặc hầu như không phòng trừ môi giới Mặt khác cây sinh trưởng kém làm sức đề kháng của cây yếu, tăng khả năng nhiễm bệnh Tác hại trực tiếp của rầy chổng cánh, rệp muội không lớn nhưng tác hại gián tiếp là truyền bệnh vàng

lá greening và tristeza thì cực kỳ nguy hiểm

Bên cạnh hai đối tượng bệnh hại chính gây suy thoái nhanh các vườn cây ăn quả có múi, ở Việt Nam còn rất nhiều đối tượng sâu bệnh hại khác ảnh hưởng đến sự sinh trưởng và phát triển của cây, đặc biệt là trong giai đoạn vườn kiến thiết cơ bản và thời điểm cây ra hoa đậu quả Hầu hết các loại bệnh

và sâu thường tập trung phát triển, gây hại vào các đợt cây ra lộc non Trong

đó phải kể đến các bệnh như: chảy gôm, loét, sẹo sâu vẽ bùa, các loại rệp, nhện, sâu đục thân, sâu xanh bướm phượng Những sâu bệnh này thường gây hại nặng và ảnh hưởng đáng kể đến sinh trưởng của cây nếu không phòng trừ kịp thời

Theo Hà Minh Trung; Su; và CTV,1995[24] chuyến khảo sát về bệnh

đã ghi nhận sự hiện diện của hai đối tượng bệnh vàng lá greening, tristeza tại các vùng trồng cam, quýt phổ biến như Hà Nội, Hà Giang, Tuyên Quang,

Nghệ An Năm 1997 – 1998 với sự trợ giúp của Trung tâm lương thực và phân bón vùng Châu Á – Thái Bình Dương (FFTC) và tổ chức CIRAD – Pháp đã chuyển giao cho Viện Bảo vệ thực vật kỹ thuật chẩn đoán bệnh vàng

lá greening, tristeza bằng phương pháp PCR, ELISA

- Lá mới ra biến vàng, nhỏ và uốn cong, triệu chứng này giống với thiếu Zn

- Lá già có màu xám nhạt, cong vẹo, gân lá bị sưng, triệu chứng này giống với thiếu Bo

- Lá của đợt lộc hè và thu biểu hiện rõ hơn lộc xuân Lá bệnh rụng sớm vào mùa Đông, cành bệnh trở nên trơ trụi, dần dần khô chết

- Trên hoa, quả: hoa ra trái vụ, quả nhỏ, tâm quả bị vẹo, nhiều hạt bị lép

- Bộ rễ: Rễ kém phát triển hơn là cây bình thường Ngoài ra cây còn có biến đổi bên trong

Theo tác giả Aubert b.; Lê T.T Hồng [2] ở vùng nhiệt đới triệu chứng bệnh xuất hiện trên tán lá ở bất kỳ mùa nào trong năm Trên từng phần của lá

bị đổi mầu, cành khô rồi chết, lá lốm đốm xanh vàng, gân xanh, lá vàng, cong giống như triệu chứng thiếu kẽm Bệnh không ảnh hưởng tới mô gỗ nhưng ảnh hưởng đến mô libe, sự vận chuyển đường ở diệp lục và nhu mô đến các phần trên cây bị bệnh

Về nguyên nhân gây bệnh: Ban đầu cùng tồn tại hai trường phái khác nhau về nguyên nhân gây bệnh Trường phái thứ nhất cho rằng bệnh vàng lá greening

do yếu tố sinh lý gây ra, trường phái thứ hai lại cho rằng bệnh vàng lá greening là do vi sinh vật gây nên và có truyền nhiễm

Trong giai đoạn này chưa xác định được vi sinh vật gây bệnh là vi rút, phytoplasma hoặc một loại tác nhân nào đó Cho đến nay các nhà khoa học xác định bệnh vàng lá greening ở Việt Nam gây ra là do vi khuẩn Liberobacter asiaticum còn ở Châu Phi do loài Liberobacter africanum Quá trình giám định bệnh được thực hiện tại phòng thí nghiệm INRA – Pháp (J.M Bové, Hà Minh Trung, Monique Garnier, 1990-1995) [24]

Qui luật phát sinh và sự lan truyền của bệnh

Theo các tác giả Đỗ Thành Lâm; Hà Minh Trung và CTV, 1995[11] RCC có khả năng truyền bệnh vàng lá greening trên cam quýt và phương pháp chẩn đoán bệnh bằng indexing là sử dụng cây cam ngọt Orlando làm cây chỉ thị

Bệnh vàng lá greening còn truyền qua mắt ghép, cành chiết Khi mắt ghép đã bị bệnh ghép trên tất cả các loại cây gốc ghép đều biểu hiện triệu chứng của bệnh

Hiện tượng vàng lá và suy tàn cây có múi ở nước ta do nhiều nguyên nhân song quan trọng nhất là do nhóm bệnh vi rút Theo Vũ Khắc Nhượng, 1997[16] từ những năm 60 điều tra của đoàn Viện sĩ L.A Canchaveli và Cục sản xuất Nông nghiệp tỷ lệ cây bị vàng lá từ 1 – 5%, mật độ RCC chưa cao, đến cuối những năm 60, tốc độ lây lan lên đến 50 – 60% mặc dù mãi đến sau năm 1975 nguyên nhân dịch bệnh mới được xác định rõ Trên cây có múi ở đồng bằng sông Cửu Long, bên cạnh bệnh vàng lá greening, bênh tristeza thì bệnh chảy mủ Phytophthora spp và nhện trắng trên quả rất phổ biến (Hà Minh Trung và CTV, 1995)[23]

Kết quả điều tra phân bố và mức độ gây hại của bệnh vàng lá greening

ở miền Bắc Việt Nam năm 1990 – 1991 cho thấy bệnh lan tràn và nhiễm trên

hầu hết các vùng trồng cam, quýt và gây hại ở mọi lứa tuổi của cây, làm giảm tuổi thọ, năng suất và chất lượng quả (Hà Minh Trung, Phạm Văn Lầm, Ngô Vĩnh Viễn,1993)[22] Biểu hiện đặc trưng và diễn biến triệu chứng của bệnh trên cây có múi ở phía Nam cũng được tác giả mô tả và ghi nhận (Hà Minh Trung và CTV, 1995)[23]

Bệnh vàng lá cam, quýt nhất là bệnh vàng lá greening trên cây có múi ở nước ta rất nghiêm trọng và đang có chiều hướng lây lan mạnh, ảnh hưởng xấu đến sản xuất cam quýt hàng hoá (Vũ Khắc Nhượng, 1997)[15] Trong khi chiến lược phát triển đến năm 2010 dự kiến sẽ tăng diện tích cây ăn quả có múi là 200.000 héc ta, để đạt 4.000.000 tấn (Nguyễn Minh Châu, 1999 [4] các giải pháp kỹ thuật nhằm góp phần giải quyết một số khía cạnh bảo vệ thực vật cho cây có múi là thiết yếu để khắc phục tồn tại này Theo Aubert và Hồng,

1996 [2], để đạt được bình quân 10kg quả cây có múi trên đầu người với mức dân số 80 triệu người, Việt Nam cần khoảng 800.000 tấn quả

Biện pháp giải quyết dịch bệnh lây nhiễm trên cây có múi

Để giải quyết các vấn đề bệnh lây nhiễm qua mắt ghép trên cây có múi

ở nước ta, chương trình cải tạo giống cây có múi ở Việt Nam đã được đề xuất với các nội dung như: tuyển chọn cây đầu dòng, xác định bệnh vi rút, tạo cây sạch bệnh bằng vi ghép đỉnh sinh trưởng, kiểm tra bệnh cho cây vi ghép, khảo sát đặc tính kinh tế của cây mẹ vi ghép và phân phối mắt ghép sạch bệnh cho vườn ươm chuyên trách Chương trình này chưa mang lại hiệu quả cho các vùng chuyên sản xuất lớn Các chuyên gia Cuba cho rằng các nước cần khẩn trương trong giai đoạn đầu nhằm cải thiện ngành cây ăn quả nói chung hay cho ngành cây có múi nói riêng

Ở những vườn trồng cây giống sạch bệnh, nguy cơ tái nhiễm bệnh vàng

lá greening rất cao do côn trùng môi giới truyền bệnh, mật độ từ 5-8 con/cành non về mùa hè, mùa đông và có thể lên tới 18-25 con/cành non ở mùa xuân,

mùa thu (Vũ Khắc Nhượng, 1997) [14] Các phương pháp nghiên cứu để xác định khả năng đẻ trứng của RCC đã được hoàn thiện cho phép tiến hành liên tục không phụ thuộc vào các đợt lộc của cây và rút ngắn thời gian, giảm chi phí (Hoàng Lâm, 1991)[10]

Khả năng mang nguồn bệnh của rầy trưởng thành trên quýt Ponkan rất hữu hiệu đã được chứng minh một con rầy chích hút trong 3 ngày trên quýt Ponkan, có 3/10 cây biểu hiện triệu chứng (Đỗ Thành Lâm và Hà Minh Trung, 1993)[11]

Phòng trừ RCC bằng biện pháp sinh học, các nghiên cứu bước đầu ghi nhận tại các tỉnh trồng nhiều cam quýt ở ĐBSCL cho thấy có 14 loài ong ký sinh (ký sinh bậc 1 và ký sinh bậc 2) có liên hệ với RCC, trong đó có 2 loài ký sinh chính là Diaphorencyrtus aligarhensis Shaff và Tamarixia radiata (Waterson) với tỷ lệ ký sinh của 2 loài có thể lên đến 59,3% - 63,9% và tỷ lệ này thường cao trong các tháng mùa hè (Huỳnh Trí Đức và CTV, 1999)[7]

CHƯƠNG 2 ĐỊA ĐIỂM, THỜI GIAN, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP

NGHIÊN CỨU 2.1 Địa điểm và thời gian

- Phòng thí nghiệm bệnh cây phân tử - Viện Bảo vệ thực vật – Đông Ngạc -

Từ Liêm – Hà Nội

- Hệ thống nhà lưới chống côn trùng 3 cấp - Viện Bảo vệ thực vật

- Các vùng trồng cam Canh – Hà Nội

- Thời gian: Năm 2006 - 2007

2.2 Vật liệu nghiên cứu

Cây cam Canh làm vật liệu khởi đầu được tuyển chọn tại 2 gia đình ông Lạc và ông Chuyên, cây cho năng suất cao, ổn định, chất lượng quả ngon

Nguồn cây số 1: Gia đình ông Lạc – thôn Vân Trì – xã Minh Khai - huyện Từ Liêm Cây được trồng từ năm 1980

Nguồn cây số 2: Gia đình ông Chuyên - thôn Vân Trì – xã Minh Khai - huyện Từ Liêm Cây được trồng từ năm 1988

Vật liệu dùng cho vi ghép đỉnh sinh trưởng:

Gốc ghép cam 3 lá (Poncirus trifoliata)

Gốc ghép chanh Volkameriana

Môi trường vi ghép là môi trường MS cải tiến

Thành phần môi trường nuôi cây gốc ghép lần 1 gồm: