Phân lập, tuyển chọn vi khuẩn ACETOBATER XYLINUM cho màng mỏng

Khoá luận tốt nghiệp Chuyên ngành Vi sinh vật học TRNG I HC S PHM H NI KHOA SINH KTNN -*** - TRN TH THOA PHN LP, TUYN CHN VI KHUN ACETOBACTER XYLINUM CHO MNG MNG KHểA LUN TT NGHIP I HC Chuyờn ngnh: Vi sinh vt hc H NI - 2007 Trần Thị Thoa Lớp 29a Khoa Sinh - KTNN Khoá luận tốt nghiệp Chuyên ngành Vi sinh vật học Lời cảm ơn hon thnh ti nghiờn cu ny em ó nhn c s hng dn, ch bo tn tỡnh ca TS inh Th Kim Nhung, cỏc thy cụ ging dy b mụn Vi sinh ng thi em cng xin chõn thnh cm n cỏc thy cụ giỏo Khoa Sinh - KTNN ó to iu kin thun li cho em hon thnh tt ti nghiờn cu ny Em xin chõn thnh cm n s giỳp quý bỏu ú H Ni, ngy 10 thỏng nm 2007 Sinh viờn thc hin Trn Th Thoa Lp 29A Khoa Sinh KTNN Trần Thị Thoa Lớp 29a Khoa Sinh - KTNN Khoá luận tốt nghiệp Chuyên ngành Vi sinh vật học LI CAM OAN Tụi xin khng nh õy l kt qu nghiờn cu ca riờng cỏ nhõn tụi, ti nghiờn cu ny khụng trựng vi cụng trỡnh nghiờn cu ca cỏc tỏc gi khỏc Tỏc gi Trn Th Thoa Trần Thị Thoa Lớp 29a Khoa Sinh - KTNN Khoá luận tốt nghiệp Chuyên ngành Vi sinh vật học MC LC Trang Li cm n Bn cam oan Mc lc Danh mc bng v hỡnh t Ni dung Chng Tng quan ti liu 1.1 Lc s nghiờn cu v phõn loi vi khun Acetobacter 1.2 c im chung ca vi khun Acetobacter 10 1.3 Mt s c im ca cỏc nhúm vi khun Acetobacter 14 Chng i tng v phng phỏp nghiờn cu 18 2.1 i tng nghiờn cu 18 2.2 Trang thit b v húa cht 18 2.3 Mụi trng 19 2.4 Phng phỏp nghiờn cu 19 24 Chng Kt qu nghiờn cu v tho lun 3.1 Phõn lp vi khun axetic t mt s ngun nguyờn liu 24 3.2 Tuyn chn chng vi khun Acetobacter xylinum 29 cho mng mng 3.3 Quan sỏt hỡnh thỏi t bo vi khun Acetobacter xylinum 34 Chng Kt lun v kin ngh 37 4.1 Kt lun 37 4.2 Kin ngh 37 Ti liu tham kho Trần Thị Thoa 38 Lớp 29a Khoa Sinh - KTNN Khoá luận tốt nghiệp Chuyên ngành Vi sinh vật học DANH MC BNG V HèNH Trang Bng: Bng 1.1 Nhng c im phõn bit Acetobacter v 12 Gluconobacter so sỏnh vi Pseudomonas Bng 3.1 Kho sỏt kh nng to mng ca cỏc mu 29 vi khun axetic Bng 3.2 Kho sỏt kh nng to mng ca mt s 33 chng vi khun Acetobacter xylinum Hỡnh : Hỡnh Mu dch lờn men gim 24 Hỡnh Mu lờn men dch hoa qu 25 Hỡnh Khun lc phõn lp t gim 27 Hỡnh Khun lc phõn lp t dch hoa qu 28 Hỡnh nh vi khun Acetobacter xylinum trờn 35 kớnh hin vi quang hc vi phúng i 1000 ln Hỡnh Vi khun Acetobacter xylinum G11 trờn mụi trng 36 thch Trần Thị Thoa nghiờng Lớp 29a Khoa Sinh - KTNN Khoá luận tốt nghiệp Chuyên ngành Vi sinh vật học T VN Ngy cựng vi s phỏt trin ca khoa hc k thut v cụng ngh, cụng ngh sinh hc (CNSH) ó tr thnh mt ngnh kinh t ch o ca nhiu quc gia trờn th gii L mt b phn ca ngnh CNSH, cụng ngh vi sinh vt hc ó v ang phỏt trin mnh m vi nhng ng dng thit thc vo nhiu lnh vc ca cuc sng nh: cụng nghip, nụng nghip, y hc Bng vic ng dng cỏc quỏ trỡnh lờn men vi sinh vt vo sn xut cỏc ch phm chỳng ta ó tn dng v tit kim c chi phớ vic gii quyt rt nhiu vớ d nh nụng nghip, cụng nghip, bo v mụi trng Mt nhng chng vi khun c ng dng rng rói cụng ngh lờn men vi sinh vt hc l vi khun Acetobacter (cũn gi l vi khun gim) Khi nuụi cy loi vi khun Acetobacter trờn b mt mụi trng lng nú to thnh mt lp mng cú bn cht l hemixenluloza trờn b mt thoỏng ca dung dch Mng ny c dựng lm nhng si t khe v cú n hi cao mụi trng nc núng Mng ny c xem nh mt nguyờn liu mi cú tim nng ng dng sn xut micro cú chớnh xỏc cao, sn xut thch da, sn xut giy cht lng cao, cụng nghip sn xut n kiờng v n ming [13] Trong cụng nghip, nụng nghip vi khun ny c dựng sn xut EM (Effective Micoorganisms) cú tỏc dng a hiu trờn nhiu lnh vc c bit lnh vc x lý rỏc thi: EM giỳp kh mựi hụi v gim chi phớ 10 ln so vi t rỏc Trong cụng nghip sn xut giy cht lng cao ngi ta ó s dng nguyờn liu l mng hemixenluloza to thnh quỏ trỡnh nuụi cy vi khun gim Trong cụng nghip thc phm, vi khun Acetobacter (chng Acetobacter xylinum) c s dng sn xut thch da - mt mún n giu dinh dng v khỏ ph bin hin Trần Thị Thoa Lớp 29a Khoa Sinh - KTNN Khoá luận tốt nghiệp Chuyên ngành Vi sinh vật học Hin nay, nghiờn cu v nhng tớnh nng c bit ca mng hemixenluloza cho thy nú cũn cú th thay th da tm thi Cụng ngh y hc hin i ó cụng nhn nghiờn cu ng dng mng hemixenluloza lm da nhõn to l mt hng nghiờn cu trin vng v cú giỏ tr Nú cú th thay th da tm thi cho nhng bnh nhõn bng t cp n cp Cỏc bỏc s phu thut to hỡnh, cha bng cho cỏc bnh nhõn bng cp ; ; ghộp da b nhim trựng ó s dng da nhõn to ny v thy cú kt qu tt nh: mng bỏm chc lờn b mt nc bc hi, nú khụng cho nc lng thm qua nhng li cho hi nc v khớ di chuyn qua, mng cú giỳp d dng quan sỏt s bin chuyn ca vt thng õy l nhng c im quan trng ng dng y hc [13] Cú th núi vi khun gim ó v ang c ng dng nhiu hn cuc sng Vi mong mun c tỡm hiu thờm v chng vi khun Acetobacter v nhng ng dng hu ớch ca nú c bit l ng dng lm da nhõn to iu tr bng, tụi tin hnh nghiờn cu ti: Phõn lp, tuyn chn vi khun Acetobacter xylinum cho mng mng Trần Thị Thoa Lớp 29a Khoa Sinh - KTNN Khoá luận tốt nghiệp Chuyên ngành Vi sinh vật học NI DUNG Chng TNG QUAN TI LIU 1.1 Lc s nghiờn cu v phõn loi vi khun gim T rt lõu lch s ngi ó bit cỏch lm gim song cha h nm c c s khoa hc, cng khụng th gii thớch c bng cỏch no ru loóng li cú th bin thnh gim n Cho n u th k XIX, khoa hc k thut phỏt trin, c bit vi s i ca kớnh hin vi, th gii vi sinh vt c khỏm phỏ, ngi mi bit c gim l sn phm ca quỏ trỡnh lờn men nh mt nhúm vi sinh vt m ngy ngi ta gi chỳng l vi khun Acetobacter hay vi khun axetic [4,5] Nm 1822, Person ó tin hnh nhng nghiờn cu u tiờn v vi khun Acetobacter t lp mng thu c trờn b mt cỏc bỡnh sn xut gim ễng khng nh ú l mt loi vi sinh vt v gi l Mycoderma aceti [7] Nm 18, Kỹtzing sau loi b ht vi sinh vt chum lm gim v thy rng gim khụng c to thnh na ễng ó a nhn xột: quỏ trỡnh lờn men gim nht thit phi cú mt vi sinh vt nu khụng s khụng din s chuyn húa ru thnh gim Cng nm 18, Hansen (ngi an Mch) ó tỏch c t mng gim hai loi vi khun thun khit l Mycoderma aceti v Mycoderma pasteurianum T nm 1862 n nm 1868, Pasteur nh s tr giỳp c lc ca kớnh hin vi ó chng minh s ỳng n nhn xột ca Kỹtzing v Hansen v khng nh bn cht ca quỏ trỡnh lờn men gim ễng nghiờn cu lp mng nhy xut hin trờn b mt bia, ru vang v i n kt lun: mng ú c to thnh mt loi trc khun, v ụng cng gi trc khun ú l Mycoderma aceti Trần Thị Thoa Lớp 29a Khoa Sinh - KTNN Khoá luận tốt nghiệp Chuyên ngành Vi sinh vật học Cựng vi nhng nghiờn cu trờn v vi khun Acetobacter, cỏc nghiờn cu khỏc cng nh nhng nghiờn cu sau ny u nhm tỡm hiu rừ thờm v tỡm cỏch ci thin quỏ trỡnh lờn men gim Hin nay, ngi ta ang i vo nghiờn cu nhng ng dng mi ca vi khun Acetobacter bng cỏch phõn lp cỏc chng vi khun thun khit, nghiờn cu cỏc c im cu to, sinh lý, sinh húa ca chỳng nhm tỡm nhng chng tt nht cho tng ng dng trờn c s i chiu vi cỏc tiờu chun phõn loi ó c a 1.1.1 Cỏc tiờu chun phõn loi vi khun Acetobacter + a im ni phõn lp: l ni c trỳ cú liờn quan n iu kin mụi trng sng + c im hỡnh thỏi: ú l hỡnh dng t bo, cỏch sp xp t bo, kh nng di ng, mu sc, s hỡnh thnh tiờm mao, v nhy, mu sc nhum Gram + c im nuụi cy: da vo trng thỏi vt mc, c im vt mc, c tớnh vt mc (trn, xự xỡ), tớnh cht vt mc (c, trong), mu sc vt mc trờn mụi trng thch Trờn mụi trng lng cn lu ý tỡnh trng mụi trng sau thi gian nuụi cy (c hay trong, cú mựi hay khụng cú mựi) + c im sinh lý: mi quan h vi cỏc yu t nhit , pH ca mụi trng, kh nng hỡnh thnh sc t, quan h vi oxy (thuc loi hiu khớ hay k khớ), kh nng lờn men axetic, kh nng s dng cỏc hp cht vụ c v hu c 1.1.2 Phõn loi vi khun Acetobacter Vic tin hnh phõn loi vi khun Acetobacter c thc hin t th k XIX T nm 1898 Rothenback ó tin hnh phõn loi, tip theo l Hoyer (1899) Cng nm 1899, Beijerink ó phõn loi vi khun Acetobacter da vo hai du hiu [6]: Trần Thị Thoa Lớp 29a Khoa Sinh - KTNN Khoá luận tốt nghiệp Chuyên ngành Vi sinh vật học - Mt l: Kh nng s dng m amoni thc hin quỏ trỡnh sinh trng v phỏt trin ca vi khun Acetobacter - Hai l: Cú hay khụng cú giai on di ng quỏ trỡnh phỏt trin Cũn Heneberg (1926) li chia cỏc vi khun axetic thnh nhúm da vo ni sng c trng ca chỳng: - Nhúm 1: vi khun khụng phỏt trin trờn bia vỡ hoa Hublon c vi chỳng - Nhúm 2: vi khun phỏt trin trờn bia - Nhúm 3: vi khun phỏt trin dung dch ru vang - Nhúm 4: vi khun dựng sn xut gim theo phng phỏp nhanh Nm 1934, theo nghiờn cu ca cỏc nh vi khun hc ngi Hoa K, vi khun axetic cú kh nng s dng cỏc hp cht tng i n gin ca cacbon v nit nờn ó kt hp chỳng vo h Nitrobacteriaceae T ú vi khun axetic c gi l Acetobacter Nm 1936, Kenyver v Wanniel cựng Staniel ó xut ý kin ghộp vi khun Acetobacter vo h Pseudomonas chỳng cú hin tng ghộp cc xon phn di ng Nm 1948, Vaught ó cụng b nhng kt qu thu c quan sỏt s di ng ca nhiu loi vi khun: Acetobacter aceti, Acetobacter oxydans, Acetobacter zancens, Acetobacter melanognum, Acetobacter pasteurianum ễng kt lun nhng loi trờn cựng thuc mt loi cú n mao cc v ó xỏc nhn v trớ ca vi khun Acetobacter h Pseudomonas Ngy nay, theo khúa phõn loi ca Bergeys (1914) v nhiu tỏc gi khỏc vi khun Acetobacter v Gluconobacter cỏc vi khun acetic - c xp vo mt h riờng l Acetobacteriaceae Trong khúa phõn loi ca Bergeys, ỏng chỳ ý nht l khúa phõn loi cỏc loi thuc ging Acetobacter, ụng ó phõn ging Acetobacter thnh hai loi: Trần Thị Thoa Lớp 29a Khoa Sinh - KTNN Khoá luận tốt nghiệp Chuyên ngành Vi sinh vật học Hỡnh Mu lờn men dch hoa qu loóng Mụi trng phõn lp vi khun Acetobacter l mụi trng (thnh phn mụi trng ó trỡnh by mc 2.3) Mụi trng (mụi trng thch a) c kh trựng bng ni hp cao ỏp Autoclave ỏp sut 0,5 atm, nhit 110oC, hp ln ngy liờn tip Nguyờn tc ca phng phỏp kh trựng bng ni cao ỏp: l s kt hp gia tỏc ng ca ỏp lc v nhit cao tiờu dit vi sinh vt (k c cỏc ni bo t chu nhit ca vi khun).Trong ni hp cao ỏp, mụi trng b lm núng bng hi nc bóo hũa, ỏp sut ni c to bi ỏp sut ca hi nc Khi ỏp sut ng h ỏp k ch khong 0,2 atm, dựng van x ht hi ni cho n kim ỏp sut ch v s ( loi ht khụng khớ cũn sút li ni) úng van li v a ỏp sut n mc cn thit, gi theo thi gian yờu cu ln hp cui cựng b sung ru etylic v axit axetic Sau trựng cn vo t m 24h 28h kim tra vụ trựng ca mụi trng Trần Thị Thoa Lớp 29a Khoa Sinh - KTNN Khoá luận tốt nghiệp Chuyên ngành Vi sinh vật học phõn lp c chng vi khun Acetobacter ta dựng que cy hoc a thy tinh sch ly mt lng mng nht nh cho vo nc vụ trựng Dựng que cy hoc a thy tinh ỏnh tan u hay ly dch lờn men bng pipet vụ trựng, tip theo tin hnh pha loóng (theo phng phỏp pha loóng ca Pasteur) cỏc pha loóng khỏc nhau: 10 -1; 10 -2; 10 -3; ; 10 -9; 10 -10 Sau ú nh mt git dung dch pha loóng cỏc nng t 10 -7 n 10 -10 lờn mụi trng thch a (mụi trng s hp petri) Dựng bn trang thy tinh vụ trựng dn u git dch khp b mt thch tỏch riờng r cỏc t bo vi sinh vt Cho cỏc hp petri trờn vo t m, nuụi nhit 30oC Sau ngy, trờn b mt thch a xut hin nhng khun lc to nh khỏc nhau, cú ng kớnh 0,8 2,5 mm (ụi xut hin nhng khun lc ln cú ng kớnh ti mm) b mt trn búng, phn gia li lờn dy hn v mu sm hn xung quanh, cng cú dng b mt xự xỡ, khụ, mộp khun lc nhn nheo Sau ó cú cỏc khun lc trờn mụi trng thch a, da vo c im ca khun lc vi khun Acetobacter trờn mụi trng thch a (ó nờu trờn) chỳng tụi chn nhng khun lc riờng r, kớch thc ln, trũn, b mt trn búng dựng que cy u trũn ó c kh trựng trờn ngn la ốn cn gt ly tng khun lc, mi khun lc c cy trờn mt ng thch nghiờng, mi ng l mt mu vi khun c mó húa bng cỏc kớ hiu khỏc T dch lờn men gim, sau mt thi gian phõn lp, chỳng tụi thu c 30 mu khun lc Cỏc mu ny cú ng kớnh 0,8 mm, b mt trn búng, phn gia li v cú mu sm hn (Hỡnh 3) T 30 mu khun lc ny cy 30 ng thch nghiờng cú kớ hiu t G1 n G30 Trần Thị Thoa Lớp 29a Khoa Sinh - KTNN Khoá luận tốt nghiệp Chuyên ngành Vi sinh vật học Hỡnh Khun lc phõn lp t gim T dch lờn men dch hoa qu loóng chỳng tụi thu c 27 mu khun lc trờn mụi trng thch a Tụi nhn thy cỏc khun lc phõn lp c t dch hoa qu ngoi nhng khun lc cú b mt trn búng, phn gia li cú mu sm hn ln, cũn xut hin nhng khun lc khụng cú mu, mng nh nhng ht sng nh, b mt trn búng, d dng dựng que cy gt mụi trng (Hỡnh 4) T 27 mu khun lc trờn em cy 27 ng thch nghiờng c kớ hiu t D1 n D27 Trần Thị Thoa Lớp 29a Khoa Sinh - KTNN Khoá luận tốt nghiệp Chuyên ngành Vi sinh vật học Hỡnh Khun lc phõn lp t dch hoa qu Kt qu: ó phõn lp v thu c 57 mu vi khun axetic t hai ngun nguyờn liu l gim v dch hoa qu loóng Nhng mu vi khun phõn lp c trờn c gi ng thch nghiờng, cy chuyn t ng thch nghiờng ny sang ng thch nghiờng khỏc vi chu kỡ thỏng mt ln trỏnh thoỏi húa ging T nhng mu vi khun axetic thu c trờn chỳng tụi tin hnh tuyn chn nhng mu vi khun Acetobacter thun khit v cú kh nng to mng dai trờn mụi trng nuụi cy dch th 3.2 Tuyn chn mu vi khun Acetobacter xylinum cho mng mng, dai trờn mụi trng nc da Khi ó cú cỏc mu vi khun axetic phõn lp c t hai ngun nguyờn liu trờn cn tin hnh th kh nng lờn mng ca cỏc mu mụi trng dch th l nc da tuyn chn nhng mu cú kh nng to mng dai Trần Thị Thoa Lớp 29a Khoa Sinh - KTNN Khoá luận tốt nghiệp Chuyên ngành Vi sinh vật học Tin hnh nuụi cy 57 mu vi khun thu c trờn trờn mụi trng nc da theo dừi, quan sỏt kh nng to mng, mu ca dch nuụi cy Kt qu thu c sau 15 18 ngy nuụi cy c dn bng sau: Bng 3.1 Kho sỏt kh nng to mng ca cỏc mu vi khun axetic Kh nng to mng STT Kớ hiu mu Mng tan Mụi trng nuụi cy Mng dai c Trong Axetic G1 + _ + _ Axetic G2 + _ + _ Axetic G3 _ + _ + Axetic G4 _ + + _ Axetic G5 _ + _ + Axetic G6 + _ + _ Axetic G7 + _ + _ Axetic G8 + _ + _ Axetic G9 + _ + _ 10 Axetic G10 _ + _ + 11 Axetic G11 _ + + _ 12 Axetic G12 + _ + _ 13 Axetic G13 + _ _ + 14 Axetic G14 + _ _ + 15 Axetic G15 + _ _ + 16 Axetic G16 + _ + _ 17 Axetic G17 _ + + _ 18 Axetic G18 + _ + _ 19 Axetic G19 + _ + _ 20 Axetic G20 + _ + _ Trần Thị Thoa Lớp 29a Khoa Sinh - KTNN Khoá luận tốt nghiệp Chuyên ngành Vi sinh vật học 21 Axetic G21 + _ + _ 22 Axetic G22 + _ _ + 23 Axetic G23 + _ _ + 24 Axetic G24 _ + _ + 25 Axetic G25 _ + + _ 26 Axetic G26 _ + + _ 27 Axetic G27 + _ _ + 28 Axetic G28 + _ _ + 29 Axetic G29 + _ _ + 30 Axetic G30 + _ + _ 31 Axetic D1 + _ _ + 32 Axetic D2 + _ _ + 33 Axetic D3 + _ + _ 34 Axetic D4 + _ + _ 35 Axetic D5 _ + _ + 36 Axetic D6 + _ _ + Axetic D7 + _ _ + 38 Axetic D8 + _ _ + 39 Axetic D9 + _ + _ 40 Axetic D10 _ + + _ 41 Axetic D11 _ + + _ 42 Axetic D12 + _ + _ 43 Axetic D13 + _ + _ 44 Axetic D14 + _ _ + 45 Axetic D15 + _ + _ 46 Axetic D16 + _ _ + Trần Thị Thoa Lớp 29a Khoa Sinh - KTNN Khoá luận tốt nghiệp Chuyên ngành Vi sinh vật học 47 Axetic D17 + _ _ + 48 Axetic D18 _ + + _ 49 Axetic D19 _ + _ + 50 Axetic D20 _ + _ + 51 Axetic D21 + _ + _ 52 Axetic D22 + _ _ + 53 Axetic D23 + _ + _ 54 Axetic D24 + _ + _ 55 Axetic D25 + _ _ + 56 Axetic D26 + _ _ + 57 Axetic D27 _ + + _ Ghi chỳ: (+) : cú (-) : khụng Qua kt qu c dn bng trờn ta thy cú 41 mu vi khun axetic to mng tan, 16 mu vi khun axetic cho mng dai vi dy mng khỏc Chỳng chia thnh loi: + Loi th nht: cỏc mu vi khun axetic cho mng dai, dch nuụi cy + Loi th hai: cỏc mu cho mng dai, dch nuụi cy c + Loi th ba: cho mng tan, dch nuụi cy + Loi th t: cho mng tan, dch nuụi cy c Chỳng tụi gi li 16 chng vi khun axetic cho mng dai tip tc tin hnh cỏc thớ nghim nhm tuyn chn nhng chng vi khun Acetobacter thun khit Trần Thị Thoa Lớp 29a Khoa Sinh - KTNN Khoá luận tốt nghiệp Chuyên ngành Vi sinh vật học xỏc nh xem 16 mu vi khun axetic cho mng dai trờn l Acetobacter hay Gluconobacter, tụi th cỏc mu trờn trờn mụi trng A Kt qu thu c: C 16 mu u to vũng sỏng xung quanh khun lc v cú mt lp cn c vin khun lc hng v phớa vũng sỏng Da vo kt qu thớ nghim chỳng tụi khng nh 16 mu vi khun ny l vi khun Acetobacter ch khụng phi Gluconobacter Nh vy ch cú vi khun Acetobacter mi cú kh nng to mng dai cũn Gluconobacter thỡ khụng cú kh nng ny ng thi tụi cng khng nh 16 mu ny l vi khun Acetobacter xylinum vỡ nuụi cy vi khun Acetobacter xylinum mụi trng lng chỳng to thnh mng trờn b mt thoỏng ca dung dch Mng ny l sn phm ca quỏ trỡnh trao i cht ca vi khun quỏ trỡnh sinh trng v phỏt trin Mng xenluloza gm nhng bú vi si xenluloza c y ngoi nh nh thng l nm trờn mng t bo ca t bo vi khun Acetobacter xylinum Nhng di xenluloza ny bn vo to thnh mng Cht kin to c bn ca quỏ trỡnh tng hp xenluloza l glucoza l thnh phn chớnh ca mụi trng nuụi cy Acetobacter xylinum Nh vy khụng phi tt c cỏc vi khun Acetobacter ó chn u cho mng dai m ch cú vi khun Acetobacter xylinum mi cú kh nng to mng dai trờn mụi trng nc da T 16 mu vi khun Acetobacter ny tụi tin hnh lm thớ nghim tip nhm tỡm mu vi khun Acetobacter xylinum cho mng mng nht Chỳng tụi tin hnh tuyn chn mu vi khun Acetobacter xylinum cho mng mng theo cỏc tiờu sau: + Mng to mng, dai + B mt mng trn + Thi gian to mng ngn Trần Thị Thoa Lớp 29a Khoa Sinh - KTNN Khoá luận tốt nghiệp Chuyên ngành Vi sinh vật học Chỳng tụi dựng 16 mu vi khun Acetobacter xylinum tuyn chn c cy sang mụi trng lng (mụi trng s 3, thay nc mỏy bng nc da) Mụi trng c kh trựng ni hp Autoclave ỏp sut 0,5 atm thi gian 30 phỳt, ngy liờn tip ngui, b sung thờm ru etylic, axit axetic 2%, cy ging Theo dừi kh nng to mng, dy mng, c im mụi trng nuụi cy Khi theo dừi quỏ trỡnh hỡnh thnh mng ca vi khun trờn mụi trng s 3, chỳng tụi thy rng a s mu mng bt u hỡnh thnh ngy th 7, th Khong bn ngy tip theo k t mng xut hin, mng dy lờn rt nhanh, nhng ngy sau ú mng phỏt trin chm dn Mng cú th mng hoc dy, trn hoc nhn, khỏ dai, mụi trng nuụi cy hoc c Kt qu thu c sau 15 ngy nuụi cy nh sau: Bng 3.2 Kho sỏt kh nng to mng ca mt s mu vi khun Acetobacter xylinum Kh nng to mng STT Kớ hiu mu Mụi trng nuụi cy Mng Dy c Trong Acetobacter xylinum G3 _ + _ + Acetobacter xylinum G4 + _ + _ Acetobacter xylinum G5 _ ++ _ + Acetobacter xylinum G10 _ + _ + Acetobacter xylinum G11 + _ _ + Acetobacter xylinum G17 _ ++ + _ Acetobacter xylinum G24 _ ++ _ + Acetobacter xylinum G25 _ + + _ Acetobacter xylinum G26 _ ++ + _ _ + _ + 10 Acetobacter xylinum D5 Trần Thị Thoa Lớp 29a Khoa Sinh - KTNN Khoá luận tốt nghiệp Chuyên ngành Vi sinh vật học 11 Acetobacter xylinum D10 _ + + _ 12 Acetobacter xylinum D11 + _ + _ 13 Acetobacter xylinum D18 _ + + _ 14 Acetobacter xylinum D19 _ + _ + 15 Acetobacter xylinum D20 _ + _ + 16 Acetobacter xylinum D27 _ + + _ Ghi chỳ: Du (+) : cú Du (-) : khụng Du (+ +) : mng dy tng dn Qua theo dừi, quan sỏt quỏ trỡnh hỡnh thnh mng v cn c vo dy ca mng dai sau 15 ngy nuụi cy, tụi nhn thy 16 chng vi khun Acetobacter xylinum trờn u cú phỏt trin mng, chỳng ph bin loi: Loi th nht: Cho mng mng ( 1cm), dch nuụi cy Loi th hai: Cho mng mng, dch nuụi cy c Loi th ba: Cho mng dy ( cm) dch nuụi cy Loi th t: Cho mng dy, dch nuụi cy c Vi khun Acetobacter xylinum l vi khun hiu khớ nờn trờn mụi trng nuụi cy lng, tnh chỳng to thnh mt lp mng xenluloza v t bo vi khun nm mc ú Mng ny cú th dy, mng khỏc v mang nhng c im tựy tớnh cht ca tng loi 3.3 Quan sỏt hỡnh thỏi t bo vi khun Acetobacter xylinum quan sỏt hỡnh thỏi t bo cỏc vi khun Acetobacter xylinum chỳng tụi tin hnh lm tiờu bn v nhum Gram 16 mu vi khun trờn Ly mu vỏng hoc dch nuụi cy hoc vi khun cy ng thch nghiờng lm tiờu bn v nhum Gram a lờn kớnh hin vi quan sỏt thy rng vi khun Acetobacter xylinum l nhng trc khun hỡnh que, ng riờng r hoc xp thnh chui, khụng di ng, l vi khun Gram õm (Gr -) bt mu hng ca Fucshin Trần Thị Thoa Lớp 29a Khoa Sinh - KTNN Khoá luận tốt nghiệp Chuyên ngành Vi sinh vật học Khi quan sỏt trờn kớnh hin vi quang hc vi phúng i 1000 ln thy rừ cỏc t bo vi khun di cú kớch thc khong àm c bao bc bi mt cht nhy to thnh vỏng dy bt mu hng (khi nhum bng thuc nhum iụt v H2SO4 vỏng ny bt mu xanh phn ng ca hemixenluloza) Trờn kớnh cũn cú th quan sỏt thy s bt mu m nht khỏc ca cỏc phn khỏc bờn t bo vi khun (Hỡnh 5) Hỡnh nh vi khun Acetobacter xylinum trờn kớnh hin vi quang hc vi phúng i 1000 ln T kt qu so sỏnh v quỏ trỡnh hỡnh thnh mng, dy mng, hỡnh thỏi t bo trờn kớnh hin vi ca cỏc mu, tụi ó chn c mt mu vi khun Acetobacter xylinum cho mng mng nht ( dy mng l 0.5 cm) cú kớ hiu G11 Chng vi khun Acetobacter xylinum G11 cú c tớnh cho mng mng hn c, mng dai, cú mu trng rt thich hp ng dng lm da nhõn to Trần Thị Thoa Lớp 29a Khoa Sinh - KTNN Khoá luận tốt nghiệp Chuyên ngành Vi sinh vật học Hỡnh Vi khun Acetobacter xylinum G11 nuụi cy trờn mụi trng thch nghiờng Trần Thị Thoa Lớp 29a Khoa Sinh - KTNN Khoá luận tốt nghiệp Chuyên ngành Vi sinh vật học Chng KT LUN V KIN NGH 4.1 Kt lun T mu dch lờn men ca hai ngun nguyờn liu l gim v dch hoa qu loóng, chỳng tụi ó phõn lp c 57 mu khun lc vi khun axetic ú cú 16 mu l vi khun Acetobacter xylinum Khi tin hnh th kh nng lờn mng ca 16 mu vi khun Acetobacter xylinum trờn, kt hp vi quan sỏt hỡnh thỏi t bo vi khun Acetobacter xylinum trờn kớnh hin vi quang hc cú phúng i 1000 ln tụi ó chn c mt mu vi khun Acetobacter xylinum cho mng dai, mng nht 4.2 Kin ngh Trờn õy l nhng kt qu nghiờn cu bc u ca em v chng vi khun Acetobacter xylinum G11 cho mng mng Do thi gian nghiờn cu cú hn v s hn ch ca nng lc bn thõn nờn em khụng th i nghiờn cu sõu hn c v chng vi khun Acetobacter xylinum G11 ny Em mong s tip tc cú nhng nghiờn cu tip theo v nh hng ca nhng nhõn t nh: (NH4)2SO4, MgSO4.7H2O, glucoza, pH, t ú tỡm mụi trng dinh dng thớch hp nht cho s to mng ca chng vi khun Acetobacter xylinum G11 cho mng mng Em rt mong nh trng, khoa to iu kin cho chỳng em cú th nghiờn cu sõu hn v vi khun Acetobacter xylinum cho mng mng õy l hng nghiờn cu mi rt cú trin vng hin Trần Thị Thoa Lớp 29a Khoa Sinh - KTNN Khoá luận tốt nghiệp Chuyên ngành Vi sinh vật học TI LIU THAM KHO Nguyn Lõn Dng v cng s (1972), Mt s phng phỏp nghiờn cu vi sinh vt hc, Tp 1, Nxb Khoa hc v k thut, H Ni Nguyn Lõn Dng v cng s (1976), Mt s phng phỏp nghiờn cu vi sinh vt hc, Tp 2, Nxb Khoa hc v k thut, H Ni Nguyn Lõn Dng v cng s (1978), Mt s phng phỏp nghiờn cu vi sinh vt hc, Tp 3, Nxb Khoa hc v k thut, H Ni Nguyn Lõn Dng, Nguyn ỡnh Quyn, Phm Vn Ty (2002), Vi sinh vt hc, Nxb Giỏo dc, H Ni Nguyn Lõn Dng (1983), Thc vi sinh vt hc (sỏch dch), Nxb Mir Moskwa, Nxb i hc v Trung hc chuyờn nghip, H Ni Nguyn Thnh t, Nguyn Duy Tho (1986), Vi sinh vt hc, Nxb Giỏo dc, H Ni Nguyn Thnh t, Nguyn Duy Tho, Vng Trng Ho (1990), Thc hnh vi sinh vt hc, Nxb Giỏo dc, H Ni inh Th Kim Nhung (1997), Phõn lp v tuyn chn mt s chng vi khun Acetobacter ng dng lm thch da, Thụng bỏo khoa hc Trng i hc S phm H Ni 2, s 1, trang 181 186, H Ni inh Th Kim Nhung (2000), Phõn lp vi khun Acetobacter t mt s ngun nguyờn liu Vit Nam, Bỏo cỏo tng kt ti cp b, H Ni 10 Nguyn Th Tuyn (2006), Nghiờn cu nh hng ca mt s yu t ti kh nng to mng ca vi khun Acetobacter xylinum N13, Khúa lun tt nghip, H Ni 11 Fontana J.D, de Soura A.M, Fontana C.K, Torriani I.L, Moreschi J.C, Gallotti et al (1990), Appl Biochem Biotechnol, 24/25 253 264 Trần Thị Thoa Lớp 29a Khoa Sinh - KTNN Khoá luận tốt nghiệp Chuyên ngành Vi sinh vật học 12 Haim W, Shai S, Dorit A, Yehudit S, Gail V, Patriccia O, Moshe B (1997), Cdi binding protein, a new factor regulating cellulose synthesis in Acetobacter xylinum, FEBS letter 416, 207 201 13 Hong J.S, Moon S.H, Young G.K and Sang J.L (2001), Otimization of fermentation condition for the production of bacterial cellulose by a newly isolated Acetobacter A9 in shacking cultures Biotechnol Appl Biochem, 331 (printed in Great Britain) Trần Thị Thoa Lớp 29a Khoa Sinh - KTNN [...]... chớnh ca mụi trng nuụi cy Acetobacter xylinum Nh vy khụng phi tt c cỏc vi khun Acetobacter ó chn u cho mng dai m ch cú vi khun Acetobacter xylinum mi cú kh nng to mng dai trờn mụi trng nc da T 16 mu vi khun Acetobacter ny tụi tin hnh lm thớ nghim tip nhm tỡm ra mu vi khun Acetobacter xylinum cho mng mng nht Chỳng tụi tin hnh tuyn chn mu vi khun Acetobacter xylinum cho mng mng theo cỏc tiờu chớ sau: +... mng ca mt s mu vi khun Acetobacter xylinum Kh nng to mng STT Kớ hiu mu Mụi trng nuụi cy Mng Dy c Trong 1 Acetobacter xylinum G3 _ + _ + 2 Acetobacter xylinum G4 + _ + _ 3 Acetobacter xylinum G5 _ ++ _ + 4 Acetobacter xylinum G10 _ + _ + 5 Acetobacter xylinum G11 + _ _ + 6 Acetobacter xylinum G17 _ ++ + _ 7 Acetobacter xylinum G24 _ ++ _ + 8 Acetobacter xylinum G25 _ + + _ 9 Acetobacter xylinum G26 _... nhn thy 16 chng vi khun Acetobacter xylinum trờn u cú phỏt trin mng, chỳng ph bin 4 loi: Loi th nht: Cho mng mng ( 1cm), dch nuụi cy trong Loi th hai: Cho mng mng, dch nuụi cy c Loi th ba: Cho mng dy ( 2 cm) dch nuụi cy trong Loi th t: Cho mng dy, dch nuụi cy c Vi khun Acetobacter xylinum l vi khun hiu khớ nờn trờn mụi trng nuụi cy lng, tnh chỳng to thnh mt lp mng xenluloza v t bo vi khun nm mc trong... sỏt hỡnh thỏi t bo vi khun Acetobacter xylinum quan sỏt hỡnh thỏi t bo cỏc vi khun Acetobacter xylinum chỳng tụi tin hnh lm tiờu bn v nhum Gram 16 mu vi khun trờn Ly mu vỏng hoc dch nuụi cy hoc vi khun cy trong ng thch nghiờng lm tiờu bn v nhum Gram a lờn kớnh hin vi quan sỏt thy rng vi khun Acetobacter xylinum l nhng trc khun hỡnh que, ng riờng r hoc xp thnh chui, khụng di ng, l vi khun Gram õm (Gr... nghiệp Chuyên ngành Vi sinh vật học Mc ớch ca phng phỏp nhum Gram l phõn bit vi khun gram õm (Gr -) vi vi khun Gram dng (Gr +) Nu sau khi nhum kộp m t bo bt mu hng thỡ ú l vi khun Gr - Ngc li, nu bt mu tớm thỡ ú l vi khun Gr + Kh nng bt mu ca vi khun Gr v Gr + khỏc nhau l do cht nguyờn sinh ca t bo vi khun Gr + c cu to t mt loi protein c bit cha mui Nucleatmagie cú kh nng to vi tớm Gentian v Lugol... cỏc mu vi khun axetic cho mng dai, dch nuụi cy trong + Loi th hai: cỏc mu cho mng dai, dch nuụi cy c + Loi th ba: cho mng tan, dch nuụi cy trong + Loi th t: cho mng tan, dch nuụi cy c Chỳng tụi gi li 16 chng vi khun axetic cho mng dai tip tc tin hnh cỏc thớ nghim nhm tuyn chn ra nhng chng vi khun Acetobacter thun khit Trần Thị Thoa Lớp 29a Khoa Sinh - KTNN Khoá luận tốt nghiệp Chuyên ngành Vi sinh... khun (Hỡnh 5) Hỡnh 5 nh vi khun Acetobacter xylinum trờn kớnh hin vi quang hc vi phúng i 1000 ln T kt qu so sỏnh v quỏ trỡnh hỡnh thnh mng, dy mng, hỡnh thỏi t bo trờn kớnh hin vi ca cỏc mu, tụi ó chn c mt mu vi khun Acetobacter xylinum cho mng mng nht ( dy mng l 0.5 cm) cú kớ hiu G11 Chng vi khun Acetobacter xylinum G11 cú c tớnh cho mng mng hn c, mng dai, cú mu trng rt thich hp ng dng lm da nhõn... Acetobacter xylinum G26 _ ++ + _ _ + _ + 10 Acetobacter xylinum D5 Trần Thị Thoa Lớp 29a Khoa Sinh - KTNN Khoá luận tốt nghiệp Chuyên ngành Vi sinh vật học 11 Acetobacter xylinum D10 _ + + _ 12 Acetobacter xylinum D11 + _ + _ 13 Acetobacter xylinum D18 _ + + _ 14 Acetobacter xylinum D19 _ + _ + 15 Acetobacter xylinum D20 _ + _ + 16 Acetobacter xylinum D27 _ + + _ Ghi chỳ: Du (+) : cú Du (-) : khụng... thi tụi cng khng nh 16 mu ny l vi khun Acetobacter xylinum vỡ khi nuụi cy vi khun Acetobacter xylinum trong mụi trng lng chỳng to thnh mng trờn b mt thoỏng ca dung dch Mng ny l sn phm ca quỏ trỡnh trao i cht ca vi khun trong quỏ trỡnh sinh trng v phỏt trin Mng xenluloza gm nhng bú vi si xenluloza c y ra ngoi nh nh thng l nm trờn mng t bo ca t bo vi khun Acetobacter xylinum Nhng di xenluloza ny bn... sỏt trờn tiờu bn thy t bo ca vi khun Gr + bt mu tớm Gentian Trong khi ú nhng vi khun Gr khụng cú kh nng to phc cht bn vi thuc nhum Gentian v Lugol nờn d b ra trụi bi cn Do ú, khi nh Fucshin lờn t bo vi khun Gr - bt mu hng mu ca Fucshin 2.4.5 Phng phỏp tuyn chn cỏc chng vi khun Acetobacter cho mng mng Mc ớch khi tin hnh nghiờn cu ny l chn ra nhng chng vi khun Acetobacter cho mng mng, vỡ vy chỳng tụi ... khun lc vi khun axetic ú cú 16 mu l vi khun Acetobacter xylinum Khi tin hnh th kh nng lờn mng ca 16 mu vi khun Acetobacter xylinum trờn, kt hp vi quan sỏt hỡnh thỏi t bo vi khun Acetobacter xylinum. .. thớch hp nht cho s to mng ca chng vi khun Acetobacter xylinum G11 cho mng mng Em rt mong nh trng, khoa to iu kin cho chỳng em cú th nghiờn cu sõu hn v vi khun Acetobacter xylinum cho mng mng õy... 41 mu vi khun axetic to mng tan, 16 mu vi khun axetic cho mng dai vi dy mng khỏc Chỳng chia thnh loi: + Loi th nht: cỏc mu vi khun axetic cho mng dai, dch nuụi cy + Loi th hai: cỏc mu cho mng