Phương pháp sinh học không truyền thống

Chương PHƯƠNG PHÁP KHÔNG TRUYỀN THỐNG Phát vi sinh vật phương pháp nuôi cấy xây dựng phát triển thời gian dài, nhiều nước công nhận chúng trở thành phương pháp tiêu chuẩn Tuy nhược điểm lớn phương pháp nuôi cấy tốn nhiều thời gian, cho kết chậm, nhiều công sức, cồng kềnh ngày tỏ không đáp ứng yêu cầu phân tích phục vụ nhu cầu thực tế Để khắc phục nhược điểm phương pháp nuôi cấy, nhiều phương pháp nhanh tự động hình thành phát triển dựa nhiều nguyên tắc sinh học vi sinh vật học khác Các phương pháp nhằm mục đích rút ngắn thời gian phân tích, giảm thiểu phức tạp thao tác, dễ dàng thực có độ nhạy độ xác cao Các phương pháp nhanh tự động hoá phân tích vi sinh vật thực phẩm dựa nguyên tắc vi sinh học, sinh hoá học, hoá lý, miễn dòch học, sinh học phân tử học để phát đònh lượng vi sinh vật mục tiêu hay sản phẩm độc hại chúng thực phẩm, môi trường Tất yêu cầu kỹ thuật liên quan đến việc thu chuẩn bò mẫu, phân tích … nghiên cứu cải tiến theo hướng tự động hoá, đơn giản hoá cho kết nhanh xác Phương pháp phát quang sinh học ATP Phân tử Adenosine triphosphate (ATP) có mặt tất tế bào sống, nên phát ATP dấu hiệu để nhận biết vật chất sống tồn ATP phát đònh lượng thông qua cường độ ánh sáng phát kết hợp với enzyme Luciferase Kó thuật phát 1pg ATP, tương ứng với khoảng 1000 tế bào vi khuẩn (10 -15g ATP/ tế bào) Quá trình phân tích diễn vài phút phương pháp xem nhanh thuận lợi so với phương pháp đếm khuẩn lạc Việc dùng phương pháp đo hàm lượng ATP để xác đònh rõ số vi sinh vật diện biết đến vào năm 1960 Tuy nhiên, phương pháp đòi hỏi nhiều cải tiến việc thiết kế thiết bò đo cường độ ánh sáng phát hóa chất để ổn đònh phát sáng Ngày phương pháp ứng dụng lónh vực: giám sát vệ sinh, kiểm tra loại chất lỏng nước rửa làm hệ thống, đánh giá chất lượng vi sinh thực phẩm Để đánh giá chất lượng vi sinh thực phẩm lượng ATP vi sinh vật phải đo điều đòi hỏi quy trình tách chiết ATP khỏi tế bào vi sinh vật Phản ứng phát sáng sinh học trải qua hai giai đoạn : E + LH2 + ATP E – LH2 AMP +O2 Mg2+ E – LH2 AMP + PPi (1) Oxyluciferin + AMP + CO2 + hv (2) Phản ứng phát sáng sinh học đom đóm viết lại sau: E + LH2 + ATP +O2 Mg2+ Oxyluciferin + AMP + CO2 + hv +PPi E : luciferase LH2 :luciferin nh sáng phát có bước sóng 562nm, có màu vàng 39 Mẫu lấy cách quét vi sinh vật bề mặt dụng cụ thiết bò, sau đo lượng ATP thông qua loạt trình ly trích Những thiết bò chế tạo đòi hỏi người thực quét mẫu vò trí (thường 10cm 2), sau nhúng hoàn toàn que quét mẫu vào dung dòch chứa tác nhân làm phóng thích ATP, trộn với dung dòch luciferase – luciferin đặt vào cuvette để đọc trò số ánh sáng Sơ đồ bước đònh lượng nhanh vi sinh vật diện bề mặt phản ứng phát sáng PHƯƠNG PHÁP ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) Những tiến khoa học năm gần thúc đẩy phát triển kỹ thuật chẩn đoán huyết Các phương pháp tỏ hiệu việc chẩn đoán nhanh xác vi sinh vật gây bệnh Ngày phương pháp phát triển để xác đònh chất độc hại môi trường độc tố, dư lượng kháng sinh… Nguyên tắc phương pháp ELISA dựa phản ứng kết hợp kháng nguyên với kháng thể đặc hiệu Phản ứng miễn dòch xãy phát cách sử dụng kháng thể đánh dấu (bằng chất nhuộm phát huỳnh quang, đồng vò phóng xạ, hay enzyme) Phương pháp ELISA phương pháp hấp phụ miễn dòch liên kết enzyme (enzyme-linked immunosorbent assay) Nguyên tắc kỹ thuật ELISA sử dụng kháng thể đơn dòng (kháng thể sơ cấy) phủ bên giếng (well) nhỏ nhằm mục đích thu giữ kháng nguyên mục tiêu Những kháng nguyên thu giữ phát cách sử dụng kháng thể thứ hai có gắn với enzyme phát tính hiệu (thường horseradish peroxidase hay alkaline phosphatase) Khi cho vào hỗn hợp phản ứng chất đặc hiệu enzyme, phản ứng xảy tạo sản phẩm làm đổi màu phản ứng Như vậy, phát diện kháng nguyên Kháng thể thu kháng nguyên Kháng nguyên Cơ chất Kháng thể mang enzyme đánh dấu 40 “Sandwich” Phát quang Nguyên tắc phản ứng ELISA - S: chất, E: ensyme, P: phát quang Qui trình thực phân tích ELISA có sau: đặc mẫu vào giếng có chứa kháng thể sơ cấp, cho kháng thể thứ cấp có liên kết với enzym tạo màu vào để tạo sandwich, rửa để loạo bỏ kháng thể mang enzym không tham gia phản ứng, cho chất tạo màu với emzym liên kết hỗm hợp, đo cường độ màu tạo thành để xác đònh lượng kháng nguyên mẫu Hiện ELISA sử dụng rộng rãi để phân tích Salmonella, E coli gây bệnh, Listeria, độc tố Staphylococus, thuốc trừ sâu, dư lượng khám sinh… vi sinh vật, phương pháp ELISA sử dụng phát đònh lượng vi sinh thực phẩm sau vài tăng sinh nhằm tăng độ nhạy phương pháp PHƯƠNG PHÁP MẪU DÒ (Gene probes) Vào năm 1980, có nhiều nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật sinh học vào lónh vực thực phẩm, đặc biệt chẩn đoán vi sinh Phương pháp sử dụng mẫu dò (probe) việc phát vi sinh vật thực phẩm thông qua phát trình tự DNA đặc trưng Các mẫu dò thường sử dụng RNA ribosome (rRNA) làm mục tiêu, thể số lượng rRNA lớn, đủ để làm tăng độ nhạy phương pháp phân tích Nguyên tắc phương pháp mẫu dò lai phân tử, bắt cặp hai trình tự DNA tương đồng Một hai trình tự (thường trình tự đích, tức trình tự DNA tế bào vi sinh vật) cố đònh giá thể rắn tế bào hay mô Sự lai phân tử xảy trình tự bổ sung gặp chuyển động nhiệt nhiệt độ môi trường thấp T m vài độ Sự lai phân tử xảy DNA RNA Quá trình lai phân tử chòu ảnh hưởng nhiều yếu tố: nồng độ DNA môi trường, nhiệt độ thời gian phản ứng, kích thước trình tự lai lực ion môi trường Một ví dụ hệ thống phát mẫu dò thống Gentrak (Framingham, USA) Phương pháp phân tích sử mẫu dò để phát Listeria mẫu bơ sữa mẫu môi trường Mẫu dò đoạn oligomer DNA đánh dấu hoá chất phát quang Quy trình phân tích chia thành bước: Phá vỡ tế bào thu nhận rRNA, mẫu dò DNA thu giữ có đuôi deoxyadenylic nucleotide (dA) mẫu dò phát (reporter probe) chứa fluorescein isothiocyanate (F) đầu 5’ 3’ phân tử, Que thử bao bọc polydeoxythymidine (dT) đạt vào với mục đích gắn mẫu dò với với que thử, que thử đạt vào ống chứa enzyme liên kết với mẫu dò phát hiện, Sau rửa loại phần enzyme thừa, que thử đặt vào ống chứa chất tạo màu, Sau ủ để màu, màu phát bước sóng 450 nm 41 RNA mục tiêu Mẫu dò thu giữ Mẫu dò phát Que thử Cơ chất phát quang Sơ đồ quy trình phát Listeria với mẫu dò phát quang PHƯƠNG PHÁP PCR (Polymerase Chain Reaction) Tất DNA polymerase cần mồi chuyên biệt để tổng hợp mạch DNA từ mạch khuôn Mạch khuôn thường những trình tự DNA gen quy đặc trưng cho loài vi sinh vật mục tiêu gen quy đònh việc tổng hợp loại độc tố chuyên biệt Mồi đoạn DNA ngắn, có khả bắt cặp bổ sung với đầu mạch khuôn nhờ hoạt động DNA polymerase đoạn mồi nối dài để hình thành mạch Khi cung cấp hai mồi chuyên biệt bắt cặp bổ sung với hai đầu trình tự DNA, với điều kiện DNA polymerase hoạt động phản ứng PCR, đoạn DNA nằm hai mồi tạo nên Như vậy, để khuếch đại trình tự DNA xác đònh, ta phải có thông tin tối thiểu trình tự đủ để tạo mồi bổ sung chuyên biệt Các mồi gồm mồi xuôi (sens primer) mồi ngược (antisens primer) so với chiều phiên mã gen Phản ứng PCR chuỗi nhiều chu kỳ nối tiếp Mỗi chu kỳ gồm ba bước: biến tính (denaturation), lai (anealation), tổng hợp (elongation) Phân tích sản phẩm khuyếch đại điện di gel agarose Đặc trưng phản ứng khuếch đại vi sinh vật mục tiêu thông qua kích thước sản phẩm khuếch đại 42 Sơ đồ phản ứng PCR Sơ đồ phản ứng PCR Ưu điểm phương pháp PCR: - Thời gian cho kết nhanh - Có thể nhận diện vi sinh vật khó nuôi cấy Việc nuôi cấy tăng sinh đơn giản có không cần thiết - Hóa chất cần cho phản ứng PCR sẵn có dễ tồn trữ so với trường hợp huyết học Không cần dụng cụ môi trường chẩn đoán phức tạp, thực trường - Ít tốn mặt nhân Có thể tự động hóa để làm giảm chi phí phát vi sinh vật gây bệnh thực phẩm Mặc dù phương pháp PCR số khuyết điểm cần khắc phục: - Sự ức chế hoạt tính Taq DNA polymerase thành phần mẫu vật Mẫu thực phẩm thường có thành phần phức tạp Việc chiết tách tinh chế DNA từ 43 thực phẩm hay môi trường trước thực phương pháp PCR cho phép loại bỏ hợp chất ức chế Tuy nhiên, vài quy trình phát vi sinh vật gây bệnh thực phẩm PCR không cần tách chiết, tinh chế DNA - Mật độ vi sinh vật gây bệnh diện mẫu thực phẩm thường thấp, nên đa số trường hợp cần có bước nuôi cấy làm giàu để có mật độ đủ để phát PCR - Phương pháp không phân biệt tế bào sống với tế bào chết Do dẫn đến trường hợp dương tính giả DNA từ tế bào chết Ngược lại phương pháp cho phép phát bào tử, dạng tiềm sinh, hay tế bào chết vi sinh vật gây bệnh gây ngộ độc MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP THỬ NHANH KHÁC 5.1 Kỹ thuật phân tách tăng mật độ Trong trình đồng mẫu, mẫu thường pha loãng bậc 10 tạo thể tích lớn nguyên liệu ban đầu (250ml) Nhưng dùng vài mililite cho bước quy trình phát Như dùng bước tăng mật độ vi sinh vật mục tiêu mẫu để rút ngắn thời gian tăng hiệu phát Một kỹ thuật phân tách sử dụng rộng rãi miễn dòch phân tách (Immunomagnetic separation - IMS) Với phương pháp này, giai đoạn phân lập rút ngắn cách thay môi trường tăng sinh chọn lọc quy trình tương tự không cần nuôi cấy IMS sử dụng hạt siêu thuận từ bao bọc bên kháng thể vi sinh vật mục tiêu Các hạt có chức phân tách chọn lọc vi sinh vật mục tiêu khỏi hỗn hợp quần thể Các vi sinh vật mục tiêu phát quy trình vi sinh truyền thống Tính siêu thuận từ hạt thể chòu tác động lực từ tính bên tác động Dynabeads® (Dynal A/S, Oslo, Norway) sản phẩm dựa kỹ thuật IMS Quy trình sử dụng hạt polystyren siêu thuật từ có đường kính 2,8µm (Dynabeads® M-280) 4.5µm (Dynabeads® M-450) Cả hai loại M-280 M-450 bao bên lớp kháng thể người dùng lựa chọn Một ví dụ chất hấp thụ từ tính khác lựa chọn BioMag (Metachem Diagnostics Ltd, Northampton) Các hạt từ tính oxide sắt (đường kính 0.5 - 1.5µm) bao phủ bên nhóm amino-, carboxy- thiol- Ngoài số hệ thống khác có khả tạo từ tính cho tế bào vi sinh vật cách cho chúng hấp thu trực tiếp hạt siêu hiển vi oxide sắt mang từ tính lên bề mặt tế bào (Safarík cộng sự, 1995) 5.2 Kỹ thuật màng lọc phát huỳnh quang trực tiếp (Direct Epifluorscent Technique – DEFT) màng lọc lưới kỵ nước (Hydrophobic Grid Membrane) Cơ sở việc sử dụng phương pháp màng lọc thu nhận tế bào từ lượng lớn thể tích lọc Sau kiểm tra kính hiển vi cách đếm khuẩn lạc Phương pháp thích hợp mẫu có mật độ tế bào thấp Màng lọc làm nitrocellulose, cellulose acetate ester, nylon, polyvinyl chloride polyester (Sharpe, 1994) Kích thước lổ sử dụng 0,45µm (hoặc 0,22µm) đường kính 13mm đến 150mm Tạo lực đẩy qua lọc hút chân không lực ép.Màng lọc sử dụng biến thể kỹ thuật truyền thống với nhiều mục đích: tăng mật độ vi sinh vật 44 mục tiêu thể tích lớn nhằm tận dụng giới hạn phát hiện; loại bỏ tác nhân ức chế tăng trưởng Độ nhạy kỹ thuật phát huỳnh quang trực tiếp (DEFT) phụ thuộc vào mật độ tế bào trườc nhuộm lọc màng lọc Có thể phân biệt tế bào sống tế bào chết cách nhuộm nhân với fluorochrome acridine orange Màu sắc phát quang tế bào thay đổi suốt trình tăng trưởng Thuốc nhuộm phát màu đỏ với RNA màu xanh với DNA Thông thường tế bào sống cho màu đỏ da cam tế bào chết cho màu cho màu xanh lục Năm 1991, phương pháp ISO-GRID ® ứng dụng đối tượng Salmonella dược AOAC công nhận áp dụng cho loại thực phẩm (Method 991.12) B A Hình 8: Hệ thống ISO-GRID® 5.3 Kỹ thuật màng petri (Petrifilm) Môi trường dinh dưỡng dạng đông khô cố đònh vào màng mỏng gọi Petrifilm Khi sử dụng, lớp màng bảo vệ bên nâng lên nhỏ vào 1ml dòch mẫu đậy lại Một đóa petri nhựa đặt lên màng bào vệ để tạo khuôn tròn Môi trường dinh dưỡng hỗ trợ cho phát triển vi sinh vật thời gian ủ Có thể đếm trực tiếp số khuẩn lạc Petrifilm Petrifilm dùng để kiểm tra tổng số vi sinh vật hiếu khí, số coliform, coliform phân, nấm mốc, nấm men Ưu điểm kỹ thuật Petrifilm dễ thao tác, tiết kiệm không gian ủ bảo quản Thời hạn sử dụng lâu dùng môi trường đông khô không cần xủ lý nhiệt phương pháp thông thướng Có thể dùng nước cất vô trùng để làm ướt lại môi trường đông khô Sau môi trường đông lại, dùng trực tiếp Petrifilm để đếm tạp khuẩn bề mặt Đặt mẫu lên màng Petrifilm Dàn mẫu màng Ủ Petrifilm, đếm trực45 tiếp phân lập Cách sử dụng hệ thống Petrifilm 3M Microbiology 5.4 Kỹ thuật Redigel Kỹ thuật sử dụng chất dinh dưỡng pectin gel chứa ống nghiệm Có thể sử dụng ống nghiệm lúc mà không cần phải đun chảy thạch Trước tiên nhỏ 1ml mẫu vào ống nghiệm, trộn Sau đổ tất vào đóa petri đặc biệt tráng sẵn lớp calci Khi chất lỏng tiếp xúc với calci, gel Ca-pectate hình thành phức chất trương lên môi trường thạch thông thường Sau ủ chế độ thích hợp đếm khuẩn lạc giống phương pháp đếm đóa thông thường Hình 10: Thao tác sử dụng hệ thống Redigen 3M 5.3 Kỹ thuật trở kháng vi sinh vật (conductance / impedance) Vi sinh trở kháng dùng để phát trực tiếp vi sinh vật thông qua tính ion sản phẩm trình trao đổi chất trực tiếp từ giải phóng CO (carbon dioxide) Những mô tả chi tiết kỹ thuật công bố báo cáo Kell & Davey (1990) Silley & Forsythe (1996) Người ta sử dụng môi trường nuôi cấy chọn lọc làm dung dòch điện phân Sự trao đổi chất vi sinh vật tạo sản phẩm mang tính ion môi trường nuôi cấy (acid hữu ion amonium) làm tăng tính dẫn điện môi trường Sự thay đổi điện dẫn ghi nhận thiết bò đo phản ánh diện vi sinh vật môi trường nuôi cấy Phương pháp áp dụng cho môi trường có lực ion cao, môi trường chọn lọc Listeria lỏng, môi trường này, từ ban đầu, giá trò điện dẫn nằm giới hạn đo thiết bò Kỹ thuật giám sát trực tiếp độ dẫn phức tạp liên quan đến cầu KOH (potassium hydroxide) KOH cố đònh môi trường (agar) tạo thành cầu nối dẫn điện hai đầu điện cực Cầu nối mẫu phân tích ngăn cách với khoảng không gian đònh Khi trình phát triển, vi sinh vật sinh CO khí làm phân rã cầu nối KOH Kết tượng làm giảm tính dẫn điện thay đổi quan sát thiết bò giám sát Thời gian tính dẫn thay đổi gọi thời gian phát Thông thường thiết bò giám sát trở kháng có chương trình tự động xác đònh diện vi sinh vật độ dẫn vượt qua giá trò quy ước Giới hạn phát phương pháp tế bào sống Bởi theo lý thuyết, từ tế bào sinh 46 nhiều tế bào khác phát làm thay đổi độ dẫn Hiện có nhiều thiết bò giám sát thay đổi điện dẫn thò trường Bactometer 123 (Bactomatic Ltd.), Malthus 2000 (Malthus Instruments Ltd) kỹ thuật RABIT (Rapid Automated Bacterial Impedance Technique, Don Whitley Scientific Ltd) Những phương pháp trở kháng vi sinh vật ứng dụng sớm công nghiệp thực phẩm công nghiệp sữa Phương pháp áp dụng nhiều trường hợp tương quan với phương pháp đếm khuẩn lạc (ở nhiều loại sản phẩm); giảm gánh nặng thời gian phát Tuy nhiên yêu cần điều kiện môi trường chuẩn, ổn đònh; thiết bò môi trường đặc biệt 5.4 Kỹ thuật đònh lượng đo vi lượng calorie (Microcalorimetry) Phương pháp sử dụng thiết bò nhạy để đo nhiệt lượng nhỏ sinh trình trao đổi chất vi sinh vật Qua đònh lượng cá thể mẫu cách đo lượng nhiệt tạo xác đònh thời gian lượng nhiệt sinh đến ngưỡng đo Phương pháp dùng để đònh danh vi sinh vật cách đo nhiệt lượng tạo vi sinh vật chất khác 5.5 Kỹ thuật đònh lượng vi sinh vật đo mức phóng xạ (Radiometry) Người ta sử dụng chất có carbon 14 đánh dấu đồng vò phóng xạ (C 14 labelled) môi trường nuôi cấy vi sinh vật Trong trình trao đổi chất, vi sinh vật giải phóng CO có chứa C14 Người ta đònh lượng vi sinh vât dựa vào lượng C 14 giải phóng dựa thời gian cần thiết để lượng C14 đạt đến ngưỡng phát Hệ thống phát đồng vò phóng xạ nhạy tính độc hại nên không ưa dùng công nghiệp thực phẩm 47 PHỤ LỤC Bảng Một số kit sinh hoá hệ thống tự động nhận dạng vi khuẩn gây bệnh thực phẩm bán thò trường Hệ thống phân tích APIb Đặc điểm phân tích Sinh hoá Nhà sản xuất bioMerieux Đối tượng vi sinh vật Enterobacteriaceae, Listeria, Staphylococcus, Campylobacter, không lên lên, kỵ khí Enterobacteriaceae Cobas IDA Sinh hoá Hoffmann LaRoche b Enterobacteriaceae, Listeria Micro-ID Sinh hoá REMEL Enterobacteriaceae EnterotubeII Sinh hoá Roche Enterobacteriaceae Spectrum 10 Sinh hoá Austin Biological Enterobacteriaceae RapID Sinh hoá Innovative Diag Enterobacteriaceae, BBL Crystal Sinh hoá Becton Dickinson Vibrionaceae, không lên men, kỵ khí Enterobacteriaceae Minitek Sinh hoá Becton Dickinson Microbact Sinh hoá Microgen Enterobacteriaceae, Gram âm, không lên men, Listeria Vitekb Sinh hoáa bioMerieux Enterobacteriaceae, Gram âm, Gram dương a Microlog Oxy hóa C Biolog Enterobacteriaceae, Gram âm, Gram dương b a Enterobacteriaceae, Listeria, MIS Acid béo Microbial-ID Bacillus, Staphylococcus, Campylobacter a Enterobacteriaceae, Listeria, Sinh hoá MicroScan Bacillus, Staphylococcus, Campylobacter Enterobacteriaceae, Listeria, Replianalyzer Sinh hoáa Oxoid Bacillus, Staphylococcus, Campylobacter a Salmonella, Staphylococcus, Riboprinter Acid nucleic Qualicon Listeria, Escherichia coli Cobas Micro-ID Sinh hoáa Becton Dickinson Enterobacteriaceae, Gram âm, không lên men b a Salmonella, Listeria, Malthus Độ dẫn Malthus Campylobacter, E coli, Pseudomonas, coliforms Salmonella Bactometer Trở khánga bioMerieux * Feng, P., App.I., FDA Bacteriological Analytical Manual, 8A ed a Hệ thống tự động b Hệ thống AOAC thức chấp nhận 48 Bảng Một số kit thương mại dựa kỹ thuật phân tích nucleic acid dùng phát vi khuẩn gây bệnh thực phẩm Đối tượng vi sinh vật Tên thương mại Phương pháp Nhà sản xuất phân tích Clostridium botulinum Probelia PCR BioControl Campylobacter AccuProbe probe GEN-PROBE GENE-TRAK probe GENE-TRAK Escherichia coli GENE-TRAK probe GENE-TRAK a E coli O157:H7 BAX PCR Qualicon Probelia PCR BioControl c Listeria GENE-TRAK probe GENE-TRAK AccuProbe probe GEN-PROBE BAX PCR Qualicon Probelia PCR BioControl c Salmonella GENE-TRAK probe GENE-TRAK BAX PCR Qualicon b BIND phage BioControl Probelia PCR BioControl Staphylococcus aureus AccuProbe probe GEN-PROBE GENE-TRAK probe GENE-TRAK Yersinia enterocolitica GENE-TRAK probe GENE-TRAK * Nguồn trích dẫn: Feng, P., App.I, FDA Bacteriological Analytical Manual, 8A ed a Polymerase chain reaction b Bacterial Ice Nucleation Diagnostics c Hệ thống AOAC thức chấp nhận 49 Bảng Một số kit thương mại dựa kỹ thuật phân tích kháng thể dùng phát tác nhân gây bệnh độc tố thực phẩm Vi sinh vật/ Độc tố Bacillus cereus diarrhoeal toxin Campylobacter Clostridium botulinum toxin C perfringens enterotoxin Escherichia coli EHEC**c O157:H7 Shiga toxin (Stx) Tên thương mại TECRA BCET Campyslide Meritec-campy MicroScreen VIDAS EiaFOSS TECRA ELCA Kiểu phân tícha ELISA RPLA LA LA LA ELFAb ELISAb ELISA ELISA Nhà sản xuất TECRA Unipath Becton Dickinson Meridian Mercia bioMerieux Foss TECRA Elcatech PET RPLA Unipath RIM E coli O157 Prolex Ecolex O157 Wellcolex O157 E coli O157 O157&H7 PetrifilmHEC EZ COLI Dynabeads EHEC-TEK Assurancee HECO157 TECRA E coli O157 Premier O157 E coli O157:H7 E coli Rapitest Transia card E coli O157 VIPe Reveal Quix Rapid O157 LA LA LA LA LA LA sera Ab-blot Tube-EIA Ab-beads ELISA ELISA ELISA ELISA ELISA ELISA ELISA ELISA ELISA EIA/capture Ab-ppt Ab-ppt Ab-ppt ImmunoCardSTAT VIDAS EiaFOSS VEROTEST Premier EHEC Verotox-F Ab-ppt ELFAb ELISAb ELISA ELISA RPLA REMEL Unipath PRO-LAB Orion Diagnostica Murex TechLab Difco 3M Difco Dynal Organon-Teknika BioControl 3M Canada TECRA LMD Lab Meridian Binax Microgen Transia TECRA BioControl Neogen Universal HealthWatch Meridian bioMerieux Foss MicroCarb Meridian Denka Seiken 50 ETEC c Labile toxin (LT) Stabile toxin (ST) Listeria Salmonella Shigella Staphylococcus aureus VET-RPLA E coli ST Microscreen Listeria Latex Listeria-TEKe TECRAe Assurancee Transia Listeria Pathalert Listertest Dynabeads VIPe Clearview RAPIDTEST VIDASe EiaFOSS UNIQUE Bactigen Spectate Microscreen Wellcolex RPLA ELISA LA LA ELISA ELISA ELISA ELISA ELISA Ab-beads Ab-beads Ab-ppt Ab-ppt Ab-ppt ELFAb ELISAb Capture-EIA LA LA LA LA Serobact RAPIDTEST Dynabeads Screen CHECKPOINT 1-2 Teste SalmonellaTEKe TECRAe EQUATE BacTrace LOCATE Assurancee Salmonella Transia Bioline VIDASe OPUS PATH-STIK Reveal Clearview UNIQUEe Bactigen Wellcolex LA LA Ab-beads Ab-beads Ab-blot diffusion ELISA ELISA ELISA ELISA ELISA ELISA ELISA ELISA ELISA ELFAb ELISAb Ab-ppt Ab-ppt Ab-ppt Capture-EIA LA Staphyloslide LA 51 Oxoid Oxoid Microgen Microgen Organon Teknika TECRA BioControl Transia Merck VICAM Dynal BioControl Unipath Unipath bioMerieux Foss TECRA Wampole Labs Rhone-Poulenc Mercia Laboratoire Wellcome REMEL Unipath Dynal VICAM KPL BioControl Organon Teknika TECRA Binax KPL Rhone-Poulenc BioControl GEM Biomedical Transia Bioline bioMerieux TECRA LUMAC Neogen Unipath TECRA Wampole Labs Laboratoire Wellcome Becton Dickinson AureusTeste LA Trisum Staph Latex LA Difco S aureus VIA ELISA TECRA enterotoxin SET-EIA ELISA Toxin Technology SET-RPLA RPLA Unipath e TECRA ELISA TECRA Transia SE ELISA Transia RIDASCREEN ELISA R-Biopharm VIDAS ELFAb bioMerieux b OPUS ELISA TECRA Vibrio cholera choleraSMART Ab-ppt New Horizon bengalSMART Ab-ppt New Horizon choleraScreen Agglutination New Horizon bengalScreen Agglutination New Horizon d enterotoxin VET-RPLA RPLA Unipath * Nguồn trích dẫn: Feng, P., App.I, FDA Bacteriological Analytical Manual, 8A ed a Chữ viết tắt: ELISA, enzyme linked immunosorbent assay; ELFA, enzyme linked fluorescent assay; RPLA, reverse passive latex agglutination; LA, latex agglutination; Abppt, immunoprecipitation b ELISA tự động c EHEC - Enterohemorrhagic E coli; ETEC - enterotoxigenic E coli d Cũng phát độc tố đường ruột LT E coli (E coli LT enterotoxin) e Hệ thống AOAC thức chấp nhận ** Chú ý: Một số sản phẩm đặc hiệu phát chủng O157 không hoàn toàn thuộc serotype H7 (những chủng O157 H7 thường không tạo độc tố, Shiga toxin, nên thường không gây bệnh cho người) Một số kháng thể O157 phản ứng chéo với Citrobater, E hermanii vi sinh vật đường ruột khác 52 [...]... E coli (E coli LT enterotoxin) e Hệ thống được AOAC chính thức chấp nhận ** Chú ý: Một số sản phẩm trên chỉ đặc hiệu phát hiện chủng O157 nhưng không hoàn toàn thuộc serotype H7 (những chủng O157 không phải H7 thường không tạo độc tố, Shiga toxin, nên thường không gây bệnh cho người) Một số kháng thể O157 có thể phản ứng chéo với Citrobater, E hermanii và những vi sinh vật đường ruột khác 52 ...Bảng 2 Một số bộ kit thương mại dựa trên kỹ thuật phân tích nucleic acid dùng trong phát hiện vi khuẩn gây bệnh trong thực phẩm Đối tượng vi sinh vật Tên thương mại Phương pháp Nhà sản xuất phân tích Clostridium botulinum Probelia PCR BioControl Campylobacter AccuProbe probe GEN-PROBE GENE-TRAK probe GENE-TRAK Escherichia coli GENE-TRAK probe GENE-TRAK a... Bacteriological Analytical Manual, 8A ed a Polymerase chain reaction b Bacterial Ice Nucleation Diagnostics c Hệ thống được AOAC chính thức chấp nhận 49 Bảng 3 Một số bộ kit thương mại dựa trên kỹ thuật phân tích kháng thể dùng trong phát hiện tác nhân gây bệnh và độc tố trong thực phẩm Vi sinh vật/ Độc tố Bacillus cereus diarrhoeal toxin Campylobacter Clostridium botulinum toxin C perfringens enterotoxin ... thuốc trừ sâu, dư lượng khám sinh vi sinh vật, phương pháp ELISA sử dụng phát đònh lượng vi sinh thực phẩm sau vài tăng sinh nhằm tăng độ nhạy phương pháp PHƯƠNG PHÁP MẪU DÒ (Gene probes) Vào... Whitley Scientific Ltd) Những phương pháp trở kháng vi sinh vật ứng dụng sớm công nghiệp thực phẩm công nghiệp sữa Phương pháp áp dụng nhiều trường hợp tương quan với phương pháp đếm khuẩn lạc (ở nhiều... nhanh vi sinh vật diện bề mặt phản ứng phát sáng PHƯƠNG PHÁP ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) Những tiến khoa học năm gần thúc đẩy phát triển kỹ thuật chẩn đoán huyết Các phương pháp tỏ