De gôp phàn vào viêc tim hiëu và nâng cao giâ tri sir dung cüa duoc lieu rung rüc la to, chüng tôi thuc hiên dê tài: “Nghiên curu dâc diëm thuc vât, thành phàn hoâ hoc và mot so tac dung
Trang 1MUC LUC
Trang
DAT VAN DE 1
Phàn 1 TONG QUAN 2
1.1 Dâc diëm thuc vât 2
1.2 Thành phàn hôa hoc 4
1.3 Tac dung và công dung 4
Phân 2 NGUYÊN LIEU VÀ PHÜONG PHAP NGHIÊN CLfU 6
2.1 Nguyên lieu 6
2.2 Phuong phâp nghiên cûu 6
Phàn 3 THlTC NGHIÊM VÀ KET QUÀ NGHIÊN CÛU 10
3.1 Két quâ nghiên ciru vè thuc vât 10
3.1.1 Dâc diëm thuc vât 10
3.1.2 Dâc diëm vi phâu và bot diroc lieu 10
3.2 Két quâ nghiên cuu thành phàn hoâ hoc 12
3.2.1 Dinh tmh câc nhôm chât bâng phàn ung hoâ hoc 12
3.2.2 Két quâ nghiên cuu saponin 19
3.2.3 Két quâ nghiên ciru flavonoid 22
3.3 Két quâ nghiên cuu tâc dung sinh hoc 28
3.3.1 Thu' dôc tmh cap 28
3.3.2 Tâc dung chong oxy hoâ 29
Phân 4 KÉT LUÂN VÀ DE NGHI 34
4.1 Két luân 34
4.2 Dê nghi 35
TÀI LIEU THAM KHÂO 36
Trang 2CAC CHÜ VIÉT TÂT VÀ KŸ HIÊU
Trang 3DAT VÂN DE
Viêt Nam à vùng khi hâu nhiêt dôi giô mùa co nguôn tài nguyên thuc vât
râ't phong phü và da dang Nhân dân ta co nhiêu kinh nghiêm su dung cây cô làm thuoc tir lâu dôi Nhiêu cây thuoc dâ duac nghiên cüu, dua vào trong trên qui mô Ion, tao ra câc ché pham phuc vu công tac phong và chûa bênh cho nhân dân Tuy nhiên côn râ't nhiêu cây thuoc chua duoc nghiên cüu hoàc nghiên cüu chua dây dû; viêc sir dung côn dua theo kinh nghiêm cüa nhân dân
à tùng dia phuong.
Cây rung rue la to (Berchemia giraldiana, ho Tao ta - Rhamnaceae) phân
bô nhiêu noi à Viêt Nam nhu Quâng Ninh, Cao Bang Nhân dân ta dùng làm
thuoc chûa tê thâp, dau lung moi gôi, sot rét và îa chây
De gôp phàn vào viêc tim hiëu và nâng cao giâ tri sir dung cüa duoc lieu rung rüc la to, chüng tôi thuc hiên dê tài: “Nghiên curu dâc diëm thuc vât, thành phàn hoâ hoc và mot so tac dung sinh hoc cüa cây rung rue lâ to
Berchemia giraldiana Schneid.” Vôi câc nôi dung sau:
- Dinh tmh câc nhôm chât chmh trong duoc lieu;
- Dinh luong mot sô thành phân chmh trong duoc lieu;
- Chiêt xuât và phân lâp thành phân chmh trong duoc lieu;
- So bô nhân dang chât phân lâp duoc
+ Ve tâc dung sinh hoc:
- Thir dôc tmh câp;
Trang 4PHÂN 1 TONGQUAN
1.1 DÂC DIÉM THlfC VÂT
1.1.1 Vi tri phân loai chi Berchemia [4], [15]
Théo hê thong phân loai Takhtajan 1987, chi Berchemia thuôc:
Ho Tâo ta: Rhamnaceae
Bô Tâo ta: Rhamnales Phân lôp Hoa hông: Rosidae Lôp Ngoc lan: Magnoliopsida Ngành Ngoc lan: Magnollophyta 1.1.2 Phân bô ho Tâo ta - Rhamnaceae [16]
Ho Tâo ta trên thé giôi co khoâng 60 chi và hon 900 loài, phân bô trên
toàn trâi dâ't nhung tâp trung à câc vùng nhiêt dôi và Â nhiêt dôi, môt phân à
ôn dôi (Takhtajan 1966)
Ô Viêt Nam, ho Tâo ta co 12 chi, 43 loài
1.1.3 Dâc diëm thyc vât ho Tâo ta - Rhamnaceae [17], [3]
Cây bui hay gô nhô, cô khi dây leo Cành co long hay gai Lâ don moc
so le, nguyên hay khia rang, thuong cô 3-5 gân goc noi rô Lâ kèm nhô dë rung hay hînh gai Cum hoa: xim, chuÿ, hoa nhô, dêu, luông tmh 4-5 lâ dài
dmh lai vôi nhau à gôc, phàn trên tâch rôi nhau và nhô 4-5 cânh hoa roi nhau,
rat nhô, dôi khi không cô, 4-5 nhi Dïa tuyén mât dày, 2-5 lâ noân, bàu 2-5 ô, môi ô môt noân, bâu thuong hay an sâu trong dïa tuyén mât, dung trong dé hoa hïnh chén, tién tôi bàu trung hay bàu ha Quâ hach hay cô cânh Hat cô nôi nhü
So dô hoa: * K4.5 C4.5 A4.5 Gq_5)
1.1.4 Dâc diëm thuc vât chi Berchemia [20]
Cây nhô, dây leo Lâ moc câch, gân lâ thàng, song song Cum hoa gôm nhiêu hoa tâp hop thành bông, hoa luông tmh; cum hoa moc ô nâch lâ hoâc
Trang 5ngon cành Dài cô 5 cânh, dang ong Dîa mât trùm lên ong dài,mép nguyên Bàu 2 ô; voi nhuy kiëu chê dôi Quà hach, phia dirai duoc bao phü bôi ong dài;
Vô quà trong cüng co 2 ngân, mang 2 hat, nhiêu phân hoa - Phân bô: Vùng nhiêt dôi châu A, châu Phi và châu Mÿ
1.1.5 Dâc diëm thirc vât cüa mot sô loài thuôc chi Berchemia, ho Tâo ta -
Rhamnaceae [12], [15]
1.1.5.1 Berchemia lineata (L.) DC [15]
Tên Viêt Nam: Rung rue, rut de, dông bîa
Mô tà: Cây nhô dang bui leo cao 1-4 m, cành non mânh co màu xanh nhat, không long La moc so le; phién nhô, xoan, bâu duc, dài 1,5-2,5 cm, rông 0,7-1,2 cm, tù hai dâu, gân phu 5-6 cap noi rô, gàn song song; cuông 5-7
mm Hoa moc thành chùm à dâu cành hay nâch la; hoa nhô màu tràng, mâu 5,
cânh hoa dài hon dài, thuôn, cô mông nhô ô phia duôi; dîa mât dày, mép chia thuÿ, bàu an trong dîa mât, 2 ô Quà hach dài 5-6 mm, hïnh trüng, màu den; hat 2
1.1.5.2 Berchemia giraldiana Schneid.( B poilanei Tard.) [12], [15]
Tên Viêt Nam: Rung rue lâ lôn, rung rue Poilane
Mô tâ: Dây leo cao 20 m, cành non cô màu vàng lue, không long Lâ cô phiên bàu duc dài 3,5-7 cm, rông 3 cm, gôc trôn hoi lôm không long, mông;
gân phu 10-11 cap; gân bâc 3 nhiêu, hïnh thang, cuông lâ 1,5 cm Chuÿ hoa à
nâch lâ dài 6-20 cm; hoa màu tràng cô dôm nâu Quà hach, màu nâu tfa den dài 11 mm.
1.1.5.3 Berchemia floribunda (Wall ) Brongn.[15]
Tên Viêt Nam: Rung rue nhiêu hoa
Mô tà: Cây nhô moc thành bui cao 6 m, cành non cô màu vàng lue Lâ cô phién xoan rông, dài 4-7 cm, rông 2,5-3,5 cm, dâu tù cô müi, gôc trôn hay càt
ngang, gân phu 7-10 cap, cuông dài 2 cm Chùy hoa à ngon nhânh, cao 5-6
Trang 6cm Nhânh dài 2-3 cm; lâ dài 5, cânh hoa 5, nhô hon lâ dài, nhi dmh truôc cânh hoa; dïa mât to Quâ hanh xoan dài 0,8-1 cm.
1.1.5.4 Berchemia loureiriana Lee [12]
Tên Viêt Nam: Rut ré, rung rut, râo râo
Mô ta: Tiéu môc leo cao 4 m; cành non mânh, không long Lâ co phién nhô, xoan, bàu duc, kich thuôc 1,5-2,5 x 0,7-1,2 cm, tù hai dàu, gân phu 5-6
cap; cuông dày 5-7 mm Chùm à nâch lâ; hoa nhô, tràng; 5 cm; cânh hoa dài 3
mm; dîa mât dày; noân sào 2 ô Quâ nhân cung dài 5-6 mm, màu den, hat 2
1.1.5.5 Berchemia franchetiana (Lesvl.) Johs [12]
Tên Viêt Nam: Biêt sâm Franchet
Mô tâ: Tiëu môc leo Lâ cô phién bàu duc kfch thuôc 9-10 x 5-5,5 cm, dàu tù, dây trôn hoi hïnh tim, gân phu 15-18 câp, gân bâc 3 nhiêu, hïnh thang ; cuông dài 1,5 cm Chùm-tu tân cao 20 cm, nhânh dài Quâ cô nhân cung hïnh thoi cao 8 mm.
1.2 THÀNH PHAN HOA HOC
Trong hâu hêt câc tài lieu thu thâp duoc vê câc loài thuôc chi Berchemia,
chua thây cô nghiên ctfu vê thành phân hoâ hoc Riêng tài lieu “Nhûng cây thuôc và vi thuôc Viêt Nam” cüa Dô Tât Loi cô ghi cây rung rue lâ nhô (Berchemia lineata) cô saponin, côn câc thành phàn khâc chua rô [8]
1.3 TÂC DUNG VÀ CÔNG DUNG
1.3.1 Cây rung rue lâ nhô (Berchemia lineata DC.) [15]
+ Tâc dung: KhU U, chî khâi, khir dàm, giâm dau
+ Công dung Thuông duoc dùng de tri:
- Khâi huyêt trong lao phôi, viêm phé quàn câp
- Chây mâu da dày và ruôt, chây mâu cam, nôi thuong xuât huyêt
- Bênh tinh thân phân lâp
- Viêm gan, viêm tinh hoàn
- Don ngâ, ton thuong dau nhü'c khôp xuong do phong thâp
Trang 7- Dùng ngoài dé tri viêm mù da, rân dôc cân Dân gian cèn dùng tri sot rét
ia chày
1.3.2 Cây rung rue lâ Ion (Berchemia giraldiana Schneid.) [15]
+ Tâc dung: Thanh nhiêt trù thâp, hoat huyét thông lac chî khâi hoâ dàm, kiên tÿ ich khi
+ Công dung:
- Viêt Nam: Chûa tê thâ'p, dau limg moi goi, sot rét và îa chày
- Trung Quoc: Tri phong thâp, dau nhuc khop, dau lu'ng, dau bung kinh, lao phoi, bênh tràng nhac, trê em cam tich, viêm gan, giun vào ông mât, rân dôc cân, don ngâ ton thuong
1.3.3 Cây rung rue nhièu hoa (Berchemia floribunda Brongn.) [15]
- Tâc dung: Khu phong loi thâp, hoat huyét chî thong, tân ü' tiêu thüng
Trang 8PHAN 2 NGUYÊN LIEU VÀ PHÜONG PHÂP NGHIÊN CÜU2.1 NGUYÊN LIEU
Cây và lâ tu'aî cüa cây rung rue lâ to duoc thu hâi tai tînh Cao Bâng vào thâng 7 den thâng 9 nâm 2002 Dem phai và sây khô de làm thuc nghiêm.2.2 PHITONG PHÂP NGHIÊN CÜU
2.2.1 Vê mât thyc vât
+ Mô tâ dâc diëm hïnh thâi toàn cây theo phuang phâp ghi trong tài lieu
“Thuc vât hoc” [4], “Hinh thâi thuc vât” [13]
+ Làm vi phâu và nhuôm kép theo phuong phâp ghi trong tài lieu “Bài giàng duoc lieu” [1], “Thuc tâp duoc lieu” [2] và “Hïnh thâi thuc vât” [13]
- Vi phâu sau khi nhuôm kép duoc quan sât du'ôi kmh hiën vi và chup ânh
- Cành và lâ duoc nghiên thành bot min, dem quan sât duai kînh hiën vi
và chup ânh
2.2.2 Ve mât hoa hoc
+ Dinh tînh theo phuong phâp hoâ hoc ghi trong tài lieu “Bài giàng duoc lieu” [1], “Thuc tâp duoc lieu” [2] và “Phuong phâp nghiên cüu hoâ hoc cây thuôc” [11]
+ Dinh tmh flavonoid bang SKLM vefi bân mông silica gel GF254 (MERCK) dâ trâng sân theo tài lieu “Phuong phâp nghiên ciru hoâ hoc cây thuôc” [11].
+ Xâc dinh chï s ô bot theo tài lieu “Bài giàng duoc lieu, tâp 1” [1], “Thuc tâp duoc lieu” [2]
+ Dinh lu'çmg flavonoid toàn phân, saponin toàn phân bâng phuong phâp cân theo tài lieu “Bài giàng duoc lieu, tâp 1” [1], “Hoâ hoc saponin” [10].
+ Phân lâp flavonoid bàng sâc kÿ côt theo tài lieu “ Phuong phâp nghiên cûu hoâ hoc cây thuôc” [11]
Trang 9+ Do dô am trên mây Sartorius tai bô mon Duoc liêu-Truông dai hoc Duoc Hà Nôi.
+ Do pho tü ngoai (UV) trên mây UV-VIS Spectrophotometer cary IE- varian (Australia) tai Phong thi nghiêm trung tâm, Tru'ông dai hoc Duoc Hà Nôi
+ Do pho hông ngoai (IR) trên mây FI-IR Spectrophotometer 1650-Perkin Elmer tai phong thi nghiêm trung tâm, Triràng dai hoc Du'oc Hà Nôi
+ Do pho khôi (MS) trên mây 5989-B-MS tai Phong câu trüc-Viên hoâ hoc -Trung tâm khoa hoc tu nhiên và công nghê quôc gia
2.2.3 Thu tâc dung sinh hoc
2.2.3.I Tâc dung chong oxy hoâ:
+ Thü tâc dung chông oxy hoâ bào vê té bào gan và nâo chuôt
Viêc dânh giâ tâc dung chông peroxi hoâ lipid màng té bào duoc thuc hiên qua viêc xâc dinh hàm luong malonyl dialdehyd (MDA), mot sân phâm trung gian cüa quâ trïnh này dua theo phuong phâp dâ duoc miêu tâ bôi Jadwiga Robak (Ba Lan, 1987) và Mitsno Tanaka (Nhât Bân, 1994) vôi mot sô thay doi nhô
Nguyên lÿ cüa phuong phâp là MDA, mot sàn phàm duoc tao ra trong quâ trinh peroxi hoâ lipid, cô thé phàn üng vôi acid thiobarbituric dé tao phrïc
trimethin cô màu hông và cô dînh hâp thu eue dai à 530-532 nm.
Phân uïig cüa MDA vôi acid thiobarbituric :
^ hV V < U c h-(U r - V *
Cu'ong dô màu cüa dung dich tÿ le thuân vôi nong dô MDA Hàm lu'çfng
Trang 10E x 3,2 x 3MDA = - = 30,8 x E
0,156x2Trong do:
E : Dô hâp thu quang
3 : Thé tich mâu khi do quang
3,2 : The tich toàn phàn cüa mâu phân tich
2 : The tich dich trong de xâc dinh MDA
0,156 : Dô hâp thu cüa dung dich MDA ImM/g duoc do bàngCuvet cô dô dày 1 cm, do tai buôc sông 532 nm theo câc diêu kiên thinghiêm cüa Jadwiga Robax
Hoat tmh chông oxy hoâ (AOA) duoc tmh theo công thü'c:
AOA (%) = 100 - -MDA| x 100
MDA0Ghi chu:
MDA,: Luong MDA tao thành cüa dung dich chtfa chât thü
MDA0: Luong MDA tao thành cüa dung dich không chtra chât thü
+ Xâc dinh hoat tmh don gôc tu do anion superoxide cüa flavonoid toàn phàn
Hoat tmh cüa gôc tu do anion superoxide duoc xâc dinh theo phuong phâp cüa Imanari và công su [19] bàng câch xâc dinh phtrc tao thành giua anionsuperoxide O trong hê xanthin/ xanthin oxydase và nitro blue tétrazolium
2Hôn hop phân üug gôm:
Trang 11Hôn hop duoc trôn kÿ trong 10 phüt à nhiêt dô phong Sau do thêm
50 |xl dd xanthin oxydase 0,14 mg Prot/ml, lâc kÿ và giu à nhiêt dô phong
Ngùng phân lîng bàng câch cho thêm 50 |il dd CuCl26mM Dung dich së cô màu xanh tîm do phân üng giCra nitro blue tétrazolium và anion superoxide
0 2”‘ Do quang à buôc song 570 nm Tac dung don gôc tu do (theo phân
tràm) duoc tmh bâng câch so sânh dô hâp thu quang hoc cüa dung dich thir so vôi dô hâp thu quang hoc cüa dung dich không chiïa mâu thü
Thî nghiêm duoc tien hành tai Phong dông y thuc nghiêm - Viên Y hoc
co truyèn Viêt Nam
2.2.32 Dôc tînh cap
Thir dôc tmh cap tai phong Duoc lÿ, viên Duoc lieu theo:
- Hu'ông dân vê khào sât dôc tmh cap cüa thuôc co truyên [5]
- Hu’ông dân vê nghiên cüu duoc lÿ thuôc co truyên [6]
- Phuong phâp xâc dinh dôc tînh cap cüa thuôc [9]
- Qui ché dânh giâ tmh an toàn và hiêu lue thuôc co truyên ban hành kèm theo Quyêt dinh sô 371/BYT-QD ngày 12/3/1996 cüa Bô Y té [7],
- Principles and Methods of Toxicology-A.Wallace Hayes, 1994 [18]
Trang 12Phàn 3 THUC NGHIÊM VÀ KET QUÂ
3.1 KÉT QUÂ NGHIÊN CÜtl VE THUC VÂT
3.1.1 Dâc diëm thuc vât cây rung rue lâ to
Quan sât mâu cây rung rue lâ to (hïnh 3.1 phàn phu lue) thu duoc tai tinh Cao Bâng chüng tôi thây co câc dâc diëm nhu sau:
Cây moc thành bui, song nhiêu nam, cành non co màu vàng lue, không
cô long, khi già thân chuyën sang màu xanh xâm
Lâ don nguyên, moc so le Phiên lâ hïnh bàu duc, thon, dây hai lôm, mât trên màu xanh dâm, mât duôi màu xanh nhat, dài tir 3,5-7 cm, rông 1,8-3
cm Gân lâ hïnh thang, cô 10-11 câp gân phu; gân bâc 3 nhiêu Cuông lâ ngân
0,2-0,3 cm; gôc trôn hoi lôm, không long
Quâ hach, màu tïm den dài 11mm
Chüng tôi dâ giri mâu cây nghiên ciru tôi giâo su Vü Vàn Chuyên và giâo
su dâ dinh tên khoa hoc mâu chüng tôi nghiên cüu là: Berchemia giraldiana SchneidRhamnaceae = Berchemia poilanei Tar d.,Rhamnaceae.
3.1.2 Dâc diëm vi phâu và bôt duac lieu
3.I.2.I Vi phâu
+ Dâc diém vi phâu lâ (Hïnh 3.2 phân phu lue)
Càt, nhuôm kép, quan sât duôi kmh hiën vi và chup ânh thây câc dâc diëmsau:
- Phàn gân lâ: Gân lâ loi ït à phia trên, loi nhiêu hon à phia duôi Tir ngoài
vào trong quan sât thây câc dâc diëm sau: biëu bï (1) là mot lôp tê' bào nhô, dêu, xép xit nhau Biëu bï trên và duôi cô long che cha da bào Sât duôi biëu
bi là mô dày (2), câu tao bôi câc té bào trôn, dêu cô thành dày Mô mém (3)
là nhüng té bào hïnh trung, hïnh da giâc cô kîch thuôc không dêu nhau, màng mông Soi (4) là dâm té bào hoâ gô tâp trung thành hïnh vông cung nàm ngay bên ngoài bô libe-gô (5)
Trang 13- Phàn phién lâ : Té bào biëu bî trên to hon té bào biëu bî duôi Mô dâu(6) nàm sât lôp té bào biëu bï trên gôm mot hoâc hai hàng té bào hïnh chu nhât xép vuông gôc vôi biëu bï Mô mêm gôm nhüng té bào hïnh da giâc xép không xft nhau dë hô nhûng khoâng gian bào.
+ Dâc diêm viphâu thân (Hïnh 3.3 phân phu lue)
Cât ngang mot doan thân bânh té, nhuôm kép quan sât duôi kmh hiën vi
và chup ânh thây:
Mât cât cûa thân hïnh trôn Ngoài cùng là lôp ban (1) gôm nhiêu hàng té bào xép dêu dân Bên trong là câc té bào mô mêm vô (2) hïnh trôn cô màng mông Bô libe-gô: libe (3) tâp trung thành dâm ngay sât gô, gô (4) tao thành vông trôn huông ly tâm Mô mêm ruôt (5) là nhüng té bào lôn cô màng mông
à phàn giua thân.
3.I.2.2 Dâc diêm bôt duac lieu
+ Bôt lâ (Hïnh 3.4 phân phu lue)
Bôt lâ không mùi, cô màu xanh nhat Quan sât duôi kmh hiën vi và chup ành thây: Mânh biëu bï chira lô khi (1), lô khi cô kich thuôc nhô (2) Mânh mô mêm cô té bào lôn (3); mânh biëu bï chtfa mô dâu (4) Soi riêng lè hay tâp trung thành tùng dâm (5) Mânh mach xoân (6) Tinh thë calci oxalat hïnh khôi dêu nhau (7) Long che chô da bào (8)
+ Bôt thân (Hïnh 3.5 phân phu lue)
Bôt không mùi, cô màu vàng sâm Khi quan sât duôi kmh hiën vi và chup ành thây: Mânh bân (1); câc mânh mô mêm vô (2), mô mêm ruôt cô thành mông Soi to (3) Mânh mach diëm (4), mach xoân (5) Tinh thé calci oxalat hïnh khôi nhô (6) Té bào mô cütig (7) Hat tinh bôt nhô thây rô vân tâng truông (8).
Trang 143.2 KÉT QUÂ NGHIÊN CÜU THÀNH PHAN HOÀ HOC
3.2.1 Djnh tînh câc nhôm chat trong lâ và thân cây rung rûc la to bàng phân ü’ng hoâ hoc
3.2.1.1 Dinh tmh glycosid tim
Lây 10g duoc lieu cho vào bïnh non co dung tich 250 ml Thêm 100 ml
nu'ôc cât, ngâm à nhiêt dô phong 24 giô Gan dich vào côc cô mô, thêm vào dich gan 5 ml dung dich chi acetat 30 %, khuây dêu, de lâng, loc qua giày loc
Chuyën dich loc vào bînh gan 100 ml, lâc vôi cloroform 3 làn, môi làn 5 ml Gan lôp cloroform vào côc cô mô, dich gan phài trong suôt, néu côn nu'ôc phài loai nuôc bàng Na2S04 khan, chia dêu dich chiét cloroform vào 4 ong nghiêm nhô, cô trên nôi câch thuÿ den khô, cân côn lai tien hành làm câc phân ü'ng:
- Phân ung Liebermann: Cho vào ong nghiêm chü'a cân 1 ml anhydrid acetic, lâc dêu cho tan hêt cân, cho thêm dông luong acid sulfuric dàc theo thành ong nghiêm cho phân thành 2 lôp
Két qua: Không thây xuât hiên vông dô tim giCra 2 lôp phân câch (phân
ûng âm tînh dôi vâi câ thân và lâ).
- Phân ûng Baljet: Cho vào ong nghiêm chü'a cân 1 ml ethanol 90° thêm thuôc thü Baljet vùa môi pha (mot phân acid picric 1 %- chm phân NaOH 10%)
Két qua: Không thây xuât hiên màu vàng da cam {phân ûng âm tînh
dôi vôi câ thân và lâ).
- Phân ü'ng Légal: Cho vào ong nghiêm chûa cân 1ml ethanol 90°, lâc cho
tan hêt cân, thêm 1 giot thuôc thü Natri prussiat 0,5 % và 2 giot NaOH 10 %.
Két quâ: Không xuât hiên màu dô (phân ü'ng âm tinli dôi vôi câ thân và
- Phân ung Keller- Kiliani: Cho vào ong nghiêm chûa cân 1 ml FeCl3 5 % trong acid acetic, nghiêng ong nghiêm, cho tù tù acid sulfuric dâc theo thành ong nghiêm
Két quâ: Không thây vông dô giüa 2 lôp phân câch {phân ûng âm tinh
dôi vôi câ thân và lâ).
Két luân: Không cô glycosid tim trong thân và lâ cây rung rûc.
Trang 153.2.I.2 Dinh tinh flavonoid
Lây khoàng 2 g bôt duac lieu cho vào côc thuÿ tinh nhô, thêm 20ml côn 90° Dun soi câch thuÿ trong 5 phüt, loc nông, dich loc duoc tien hành làm câc phân üng sau:
+ Phân üng Cyanidin: Cho vào ong nghiêm nhô 1ml dich chiét Thêm vào môt iï bôt Mg kim loai Nhô tîmg giot acid HC1 dâm dâc (3-5 giot) Dun câch thûy mot vài phüt
Két quâ: Ô thân dung dich chuyën tù màu vàng sang màu dô (phân ûng
diio’ng tinh)', à lâ màu cûa dung dich không thay doi (phàn ûng âm tînh).
+ Phân ûng vôi kiêm:
- Nhô 1 giot dich chiét lên giây loc Ho khô roi dë lên miêng lo
amoniac dâm dâc dâ mô nâp thây màu vàng dich chiét tâng lên ô thân (phân
ûng ditong tmh)-, à lâ thây màu sâc không thay doi (pliàn ûng âm tînh).
- Cho vào ong nghiêm 1ml dich chiét Thêm vài giot NaOH 10% thây xuât hiên tüa màu vàng ô dich chiét cüa thân và lâ Thêm 1 ml nuôc cât, tùa tan ra và màu vàng cüa dung dich tâng thêm ô dich chiét thân, màu sâc không thaydoi ô dich chiét lâ
Kêt luân: Trong lâ cây rung rue lâ to không cô flavonoid, trong thân cô
flavonoid.
3.2.I.3 Dinh tinh alcaloid
Trong binh non cô nüt mài dung tich 100 ml, cho khoâng 5 g bôt duoc lieu, thâm am bâng dung dich NH4OH 6N, sau 10 phüt cho 40 ml cloroform, dây km, ngâm 24 giô Cho dich chiét cloroform vào binh gan, chiét bàng dung dich H2S04 1 M Chia dich chiét acid vào 3 ong nghiêm nhô (môi ong khoâng 1 ml) làm câc phân üng:
- Ong 1 : thêm 2-3 giot thuôc thu Dragendorff Không thây xuât hiên tùa
da cam ô câ dich chiét thân và lâ (phân ûng âm tinh).
Trang 16- Ong 2: thêm 2-3 giot thuoc thü' Mayer Không thây xuât hiên tûa màu
trâng à câ dich chiêt thân và lâ (phân üng âm tinh).
- Ong 3: thêm 2-3 giot thuoc thü Bouchardat Không thây xuât hiên tüa
màu nâu à câ dich chiêt thân và lâ (phân üng âm tinh).
Két luân: Cd thân và lâ cây rung rûc lâ to không cô alcaloid.
3.2.1.4 Dinh tinh saponin
- Tao bot: Trong ông nghiêm to chua sân 10 ml nu'ôc cât, thêm 2 ml
dich chiêt côn Lâc manh doc theo thành ông nghiêm 1 phüt Quan sât thây
côt bot tao thành cao trên 2cm và bên sau 15 phüt à câ 2 loai dich chiêt thân
và lâ
- Phân üng phân biêt saponin steroid và saponin triterpenoid: Cho vào 2
ông nghiêm nhô 1 ml dich chiêt côn, ông 1 thêm 1 ml NaOH 0,1 N ( pH= 13)
và ông 2 thêm 1 ml HC1 0,1 N (pH=l) Lâc manh doc theo chiêu thành ông
nghiêm trong 2 phüt Quan sât thây côt bot tao thành à 2 ông nghiêm cao
tuong duong nhau ô câ dich chiêt lâ và thân
Két luân: Trong thân và lâ cây rung rûc lâ to cô saponin triterpenoid.
3.2.1.5 Dinh tinh coumarin
Lây khoâng 5 g bôt duoc lieu cho vào côc co mô dung tich 100 ml, thêm
50 ml ethannol 90°, dun soi câch thuÿ trong 2 phüt, loc qua giây loc, lây dich
chiêt côn de thü câc phàn üng dinh tmh sau:
- Phàn üng diazo hoâ: Trong ông nghiêm nhô cho 1 ml dich chiêt côn,
thêm 2 ml Na2C 03 2 % Dun câch thûy dén soi De nguôi thêm 2 giot thuôc
thü diazo Quan sât thây xuât hiên màu dô à câ dich chiêt thân và lâ.
- Phân üng mô dông vông lacton: Cho dich chiêt côn vào hai ông
nghiêm nhô, môi ông 1 ml:
Ông 1: Thêm 0,5 ml NaOH 10%.
Ong 2: Dê nguyên
Trang 17Dun câ hai ong nghiêm déh soi, de nguôi Quan sât thây:
/v'
Ong 1: Co tüa duc màu vàng
Ong 2: Trong sudt
Thêm vào câ hai ong nghiêm, môi ong 2 ml nuôc cât Lâc dêu Quan sâtthây:
Ong 1 : Trong suôt
Ong 2: Co tua duc màu vàng
Acid hoâ ong 1 bâng vài giot HC1 dâc, ong 1 trô lai duc nhu ong 2
- Vi thâng hoa: Cho mot ît duoc lieu vào nàp nhôm, dàt lên bép diên cô luôi amiàng cho déh khi bay hét hoi nuôc Dàt phién kmh lên nàp nhôm Trên phién kmh de sàn mot miéng bông tâm nuôc lanh Sau 10 phüt, lây phién kmh
ra, dé nguôi Nhô mot giot dung dich Kl 10 % lên phién kmh Soi duôi kmh
hiën vi thây cô mot sô tinh thé màu nâu (câ thân và lâ)
Két luân: Cà thân và lâ cây rung rûc lâ to dêu chûa coumarin.
3.2.I.6 Dinh tmh tanin
Lây 5 g bôt duoc lieu, thêm 20 ml nuôc cât vào binh non, dun soi, loc nông qua giây loc Dich loc chia vào câc ong nghiêm làm câc phân üng sau:
- Phân üng vôi dung dich gelatin 1 %: Cho vào ong nghiêm nhô 2 ml
dich chiét, thêm 3 giot dung dich gelatin 1 % thây xuât hiên tüa bông tràng
{phân ûng difc/ng tinh vôi câ thân và lâ).
- Phân üng vôi dung dich FeCl3 5 %: Cho vào ong nghiêm nhô 2 ml dich chiét, thêm 3 giot dung dich FeCl3 5 % thây xuât hiên tüa màu xanh den
(phân ûng dticfng tinh vôi câ thân và lâ).
Két luân: Thân và lâ cây rung rûc lâ to cô tanin.
Trang 183.2.I.7 Dinh tinh âixàng khü tu do
Cho vào ong nghiêm khoâng 2 ml dich chiêt nu’ôc duoc lieu, thêm 0,5 ml thuoc thir Fehling A và 0,5 ml thuôc thir Fehling B Dun soi câch thuÿ vài
phüt Xuâ't hiên tua màu dô gach (phân ûng duong tînh vôi câ thân và lâ).
Két luân: Thân và lâ cây rung rûc lâ to chûa duông kh ü
3.2.1.8 Dinh tmh acid hüu co
Lây 2 g bôt duoc lieu, thêm 10 ml nuôc cât dun soi vài phüt, loc nông Lây 3 ml dich loc cho vào ong nghiêm nhô, thêm vài tinh thé Na2C 03 thây cô
bot khi noi lên (phân ûng duong tinh vôi câ thân và lâ).
Két luân: Thân và lâ cây rung rûc lâ to chûa acid hüu ccf.
3.2.1.9 Dinh tinh anthranoid
+ Phân ûng Bomtraeger: Lây 10 g bôt duoc lieu, cho vào bînh non 250
ml, thêm 100 ml acid sulfuric 10 % Dun câch thüy 15 phüt, loc, chuyén dich
loc vào bînh gan, lâc vôi 10ml ether ethylic de phân thành 2 lôp Gan lây dich
chiêt ether ethylic, cho vào dich chiêt ether ethylic 2ml NaOH 10 %, lâc dêu
Quan sât thây:
- Thi nghiêm vôi bôt thân duoc lieu: Lôp nuôc cô màu dô sâm (phân
ûng duong tinh).
- Thi nghiêm vôi bôt lâ duoc lieu: Lôp nuôc không xuât hiên màu dô
(phân ûng âm tinh).
+ Vi thâng hoa: Dât mot ft bôt duoc lieu trong mot nâp nhôm Ho nhe
trên dèn côn cho den khi bay hoi hêt nuôc trong duoc lieu Dât lên miêng nâp nhôm mot tâm kmh, trên tâm kmh cô dé mot miêng bông tam nuôc lanh Dë nâp nhôm truc tiê'p trên nguôn nhiêt Sau 5-10 phüt lây tâm kmh, dë nguôi quan sât trên kmh hiën vi:
- Thi nghiêm ô bôt thân duoc lieu: Tinh thë màu vàng nhat
- Thi nghiêm ô bôt lâ duoc lieu: Không cô tinh thë
Két luân: Cô anthranoid ô thân cây rung rûc lâ to.
Không cô anthranoid ô lâ cây rung rûc lâ to.
Trang 193.2.1.10 Dinh tinh steroid
Lây 10 g bôt duoc lieu, cho vào câc binh non dung tich 250 ml, thêm 40
ml côn 25° ngâm trong 24 giô, gan dich chiêt, loai tap bàng chi acetat 30 % dên du, loc bô tüa Lâc dich loc vôi cloroform 2 làn, môi làn 10 ml trong binh gan Gan lôp cloroform làm câc phàn ung:
- Phân ung Salkopski: Trong ông nghiêm nhô, lây 2 ml dich chiêt cloroform, thêm tù tù 1 ml H2S04 dâc (nghiêng ông 45°, cho chây nhe nhàng doc theo thành ông nghiêm) de cô phân lôp Quan sât không thây xuât hiên
vông dô thâm trên bê mât phân câch (Phân ûng âm tinh vâi cà thân và lâ).
- Phân ung Liebermann: Trong ông nghiêm nhô, lây 2 ml dich chiêt
cloroform, bôc hoi câch thuÿ dên khô Hoa tan càn bàng 1ml anhydrid acetic, lâc dêu Thêm tù tù 1ml H2S04 dâc, cho chây nhe nhàng doc theo thành ông nghiêm de cô phân lôp Quan sât không thây xuât hiên vông dô tim trên mât
phân câch (Phân ûng âm tinh vâi câ thân và lâ).
Két luân: Thân và lâ cây rung rûc lâ to không cô steroid.
3.2.1.11 Dinh tinh chât béo
Nhô dich chiêt cloroform lên tà giâ'y loc, ho khô Không dé lai vêt mô trên giây loc (phân ûng âm tinh vâi câ thân và lâ)
Két luân: Thân và lâ cây rung rûc lâ to không chûa chât béo.
3.2.1.12 Dinh tinh carotenoid
Lây 5ml dich chiêt CHC13 cho vào ông nghiêm nhô Bôc hoi dên càn, thêm 1-2 giot H2S04 dâc, quan sât thây xuât hiên màu xanh (Phân ûng duang
tinh vâi câ thân và lâ).
Két luân: Thân và lâ cây rung rûc lâ to chûa carotenoid.
* Két quâ dinh tmh câc nhém chât trong thân, lâ cây rung rue lâ to duoc tôm tât trong bâng 3.1
Trang 20Bâng 3.1 Két quâ dinh tmh câc nhôm chat hüu co.
S
00 Nhôm chat Phân ûng dinh tmh Két quâ Két luân
1 Flavonoid
- Phân üng Cyanidin
- Phân üng vôi hoi NH3
- Phân üng vôi kiêm
+++
++
4 Saponin - Hiên tuçmg tao bot
- Phân biêt 2 loai saponin
+
++
++
6 Tanin - Phân ûng vôi FeCl3 5%
- Phân üng vôi gelatin 1%
++
++
++
8 Acid hüu co Phân ûng vôi bôt Na2C 03 + + Cô Cô
9 Anthranoid - Phân ûng Bomtraeger
- Vi thâng hoa
++
10 Steroid - Phân ûng Liebermann
12 Carotenoid Phàn üng vôi H2S04 dâc + + Cô Cô
Trang 21Két luân:
Trong thân cây rung rue lâ to cô antranoid, flavonoid, saponin,
coumarin, tanin, âudng khü, acid hüu co, carotenoid.
Trong lâ cây rung rue lâ to cô saponin, coumarin, tanin, âudng khü,
acid hüu co, carotenoid.
3.2.2 Két quâ nghiên cuti vê saponin
3.2.2.I Dinh luong saponin toàn phân
Cân chînh xâc khoâng 10g bôt duoc lieu, xâc dinh dô am bàng mây do dô
âm Sartorius cüa Dûc tai Bô mon duoc lieu Cho duoc lieu vào tüi loc Dât tüi vào bînh Soxhlet roi chiét bàng cloroform cho toi khi dich chiét không màu Chiét bâ duoc lieu bàng methanol cho toi khi dich chiét trên bînh trong suôt và không cho phân üng vôi H2S04 dàc Loc, câ't thu hôi dung môi, dich chiét côn khoâng 20 ml, rot tù tù vào 100 ml aceton thây xuât hiên tüa Loc lây tùa trên
phêu loc nên dâ sây khô và cân bî Sây phêu loc à 80°C dén khôl luong không
doi Cân phêu roi tmh ra hàm luong theo công thüc:
v o \y 1 00Hàm luong saponin toàn phân % =
A(100% - x%)
Trong dô
a: Luçng cân khô saponin A: Khoi luong duoc lieu dem dinh luong x: Hàm dm cüa duoc lieu
Két quâ dinh luong saponin à thân và lâ duoc ghi à bâng 3.2 và 3.3:
Trang 22Bàng 3.2 : Két quâ dinh luong saponin toàn phân ô thân cây.
Mâu Khôi luong
duoc lieu (g)
Dô dm(%)
Khôi luong Saponin (g)
Hàm luong Saponin (%)
Két quâ dinh luong duoc tmh theo phuong phâp thong kê vôi mü'c y nghîa
a =0,05 cho hàm luong saponin trong thân cây là 2,176 %± 0,028.
Bàng 3.3 : Két quâ dinh luong saponin toàn phàn à lâ cây.
Mâu Khôi luong
duoc lieu (g)
Dô âm(%)
Khôi luong Saponin (g)
Hàm luong Saponin (%)
Két quâ dinh luong duoc tmh theo phuong phâp thong kê vôi mire y nghîa
a=0,05 cho hàm luong saponin trong lâ cây là 3,174 %± 0,215.