Nghiên cứu tổng hợp n acetylcystein

BÔYTÉ TRÜÔNG BAI HOC DÜOC HÀ NÔI NGUYÊN THIMINH HÀ NGHIÊN CÜU TÔNG HOP N-ACETYLCYSTEIN (KHO LUÂN TÔT NGHIÊP DlTOC Si KHO 2002-2007) Ngucfi huông dân: Nai thirc hiên: TS. Nguyên Dinh Luyên Bô mon Công Nghiêp Diroc, trirôïig Dai hoc Diroc Hà Nôi Thôi gian thiic hiên: 3 - 5/2007 ___ HÀ NÔI, THÂNG 5 - 2007 LOI càM ON Dâu tiên, tôi xin duçfc bày tô su kinh trong cùng long biét on sâu sâc tôi thây Nguyên Dînh Luyên, ngudi truc tiê'p huông dan tôi thuc hiên khoâ luân tôt nghiêp. Vôi su giûp dd hét süc tân tinh cüa thây, tôi dâ hoàn thành dé tài tôt nghiêp vâi mue dich và nôi dung de ra trong thdi gian quy dinh. Tôi xin chân thành câm an câc thây cô giâo trong Bô mon Công nghiêp Duçfc, anh Phan Tien Thành và câc ban dong mon dâ giûp dâ tôi tân tïnh suô't thdi gian thuc hiên khoâ luân. Xin kinh chûc câc thây cô luôn luôn manh khoé và ngày càng thu duçfc nhiêu thành tich trong công tâc nghiên cûu cûng nhu trong gidng day. Hà Nôi, ngày 22 thâng 05.nam 2007. Sinh viên Nguyên Thi Minh H à MUC LUC DAT VAN D E ...........................................................................................1 PHANI: TÔNG QUAN..........................................................................3 1.1. Tong quan vê acid amin.................................................................3 1.1.1. Acid amin................................................................................ 3 1.1.2. Phân loai acid amin................................................................3 1.1.3. Tinh chat cüa câc acid amin...................................................4 1.2. Tong quan vè N-acetylcystein....................................................... 5 1.2.1.Câ'u trûc hoâ hoc cüa N-acetylcystein...................................... 1.2.2. Tinh chat............................................................................7 1.2.3. Dinh tinh, dinh luçfng, xâc dinh eau trûc................................ 1.2.4. Mot so dang bào chécüa N-acetylcystein trên thi truùng 1.2.5. Tâc dung dtiûc ly...................................................................... 10 1.3. Phiromg phâp tong hop................................................................... 12 1.3.1. Ccf chéacyl hoâ......................................................................13 1.3.2. Ccf chékhü hoâ........................................................................13 1.3.3. Câc phuctng phâp tong hçtp.....................................................14 6 8 ....1 0 PHAN II: THITC NGHIÊM VÀ KÊT QUÂ.......................................17 2.1. Nguyên vât lieu và phirong phâp nghiên cüti...............................17 2.1.1. Nguyên vât lieu..................................................................... 17 2.1.2. Phuangphâp nghiên cüu.......................................................18 2.2. Thuc nghiêm - ket quâ - nhân xét................................................19 2.2.1. Dieu chéL-cystin................................................................... 19 2.2.2. Tong hop N-acetylcystein...................................................... 22 2.2.3. Südung câc phuangphâp vât ly, hoâ hoc, hoâ ly âétâch và tinh ché N-acetylcystein....................................................28 2.2.4. Xâc dinh eau trûc hoâ hoc và dô tinh khiét cüa sân pham âtiçtc tong hop.................................................. 32 2.3. Bàn luân........................................................................................... 36 PHAN III: KÉT LUÂN VÀ DÊ XUAT...............................................39 TÀI LIEU THAM KHÂO PHU LUC DÂT VAN DE Dâ tir lâu, N-acetylcystein (NAC) dugc biét dén vôi tac dung chu yéu là mot loai thuôc tiêu dàm, giâi dôc khi ngô dôc paracetamol và dieu tri bênh khô mât [ ]. Gàn dây, no dâ duac phât hiên thêm mot vài tac dung moi dâng liai y và co tmh thcri su nhu: làm thuôc hô trg dieu tri HIV-AIDS, cai nghiên, diêu tri nâm, chông lâo hoâ và chông ung thu...[13]. Vi vây N-acetylcystein (NAC) luôn giü môt vai trô quan trong trong diêu tri bênh, bâo vê sïrc khoè con nguôi. N-acetylcystein là dân xuât N-acetyl cüa L-cystein cô tên khoa hoc là: acid L-a-acetamido-{}-mecaptopropionic [19]. N-acetylcystein dugc tong hop tir L-cystin, môt acid amin thuôc nhôm co chira liru huÿnh và dugc câu tao tir hai phân tir cystein liên kêt vôi nhau qua câu nô'i disulfid. L-cystin chiêm tÿ lê cao trong thành phân cüa toc, long, mông, sùng (12-14%) [10]. Van dê tong hop N-acetylcystein tir nguôn nguyên lieu ban dàu là toc, mông, sùng rât dirçfc câc nhà sân xuât quan tâm, do nhu câu sur dung cao mà trong nirofc lai chua truc tiêp sân xuât duac. Ô nirac ta, N-acetylcystein làm thuôc dêu phài nhâp tùr nuôc ngoài vôi giâ rât cao, trong khi dô nguôn nguyên lieu phuc vu cho sân xuât lai rât dôi dào và giâ lai ré. Néu câc nhà sân xuât co thé tân dung duçfc nguôn nguyên lieu sân cô trong nirôrc thi së tiét kiêm duac chi phi sân xuât, giâm giâ thành sân phâm, dem lai nhiêu lai ich han cho ngirdi tiêu dùng. Ké hoach nghiên cün sân xuât hoâ duac tür 2003-2010 cüa Bô Công Nghiêp dâ dàt ra cho ngành Duac Viêt Nam môt mue tiêu quan trong là tâng cudng tu sân xuât thuôc tùf nguyên lieu tu nhiên. De gôp phân nghiên ciru, tân dung tiêm nâng tu sân xuât duac phâm trong nuôc, chüng tôi tiên hành thuc hiên dê tài: "Nghiên cûu tong hop N-acetylcystein " 6 1 Vôi nhüng mue tiêu sau: 1. Tong hop N-acetylcystein dat tiêu chuân tùr L-cystin tir diêu ché dugc. 2. Xâc dinh câc diêu kiên toi uu cho quâ trînh tong hgp Nacetylcystein tùr L-cystin. 3. Nghiên crïu câc phuong phâp tâch và tinh ché N-acetylcystein. 4. Chûng minh câu truc cûa N-acetylcystein tong hgp dugc. 2 PHAN I: TÔNG QUAN 1.1. Tong quan vê acid amin 1.1.1. Acid amin: Acid amin là sân phâm thuÿ phân cuôi cùng cüa câc peptid và protein, là don vi câu tao co bân xây dung nên câc phân tir peptid và protein [7]. Trong tu nhiên co khoâng 300 acid amin nhiïng chî co 20 acid amin dugc tîm thây trong câc phân tü protein. Nguôi ta goi do là nhüng acid amin chuân và chüng dêu thuôc loai a-aminoacid (là câc acid hûu co cô môt hay hai nguyên tü hydro trên carbon a dugc thay thé bàng nhôm amin) [4]. Câc a-aminoacid cô công thuc câu tao chung nhu sau: COOH COO~ H — C — NH H— C — NH 2 3 R R Dang không Dang ion ion hoâ ludng eue Tât câ câc a-aminoacid thiên nhiên (trùf glycin R=H) dêu cô Ca là carbon bât dôi làm quay mât phang ânh sang phân eue [3]. Ô nuôc ta hiên nay, da sô câc ché phâm acid amin phâi nhâp tuf nuôc ngoài trong khi nhu câu sü dung câc ché phâm này làm thuôc lai rât lôn. Do vây, viêc nghiên cüu vê acid amin dông mot vai trô quan trong và cô nhiêu ÿ nghïa trong thuc té. 1.1.2. Phân loai acid amin: 3 • Do eau truc phân tü trong do vi tri cüa nhôm amin (-NH2) so vôi nhôm cacboxyl (-COOH) cô thé khâc nhau, nguôi ta phân loai acid amin thành câc nhôm: a, P, y, 5, co [3]. Vf du: a-aminoacid a p-aminoacid R — CHU— CH — COOH I nh2 P R —CH— CH2— COOH I nh • Théo câu tao hoâ hoc cüa nhôm R, nguôi ta phân L-a-acid amin thành 7 nhôm [4]: - Nhôm acid amin mach thang: Glycin, Alanin, Valin, Leucin, Isoleucin. - Nhôm acid amin chüa gôc hydroxyl (OH): Serin, Threonin, Tyrosin. - Nhôm acid amin chüa luu huÿnh: Cystein, Methionin. - Nhôm acid amin acid (chüa cacbonyl hay amid): Acid aspartic, Asparagin, acid glutamic, Glutamin. - Nhôm acid amin kiêm (chüa nhôm base): Arginin, Lysin, Histidin. - Nhôm acid amin chüa nhân thüm: Histidin, Phenylalanin, Tyrosin, Tryptophan. - Nhôm imino acid: Prolin. 1.1.3. Tinh chat cüa câc acid amin: • Tinh tan: câc acid amin dê tan trong dung môi phân eue (nuôc, ethanol), không tan trong dung môi không phân eue (benzen, hexen, ether) [3]. 2 4 • Câc amino acid là nhüng chat két tinh, không bay hai, nông chây và phân huÿ à nhiêt dô tuong dôi cao. Diëm chây thuông cao (>200°C) do lue ion cüa mang két tinh. • Câc amino acid cô tmh luông tmh (vùa mang trnh base vira mang tinh acid). • Phân ûng hoâ hoc dâc trung cüa acid amin: Do trong câu truc cüa acid amin cô chüa nhôm -COOH và -NH nên cô câc phân üng dâc trung cho câc nhôm amin và cacboxyl nhu phân ûng acetyl hoâ, phân ûng formyl hoâ hay este hoâ. - Phân ûng vôi Ninhydrin: Nguyên tâc: Ninhydrin là chat oxy hoâ manh, khi dun nông cô khâ nàng khû nhôm amin và nhôm cacboxyl cüa a-aminoacid tao ninhydrin khü, C02, NH và aldehyd. Sau dô Ninhydrin và Ninhydrin khü lai phân ûng tiép vôi NH tu do tao thành phûc hop màu tim cô dô hâp thu eue dai à À,=570nm. Cuông dô màu phu thuôc vào nông dô cüa acid amin. - Phân ûng vôi Fluorescamin: Nguyên tâc: Tao sân phâm huÿnh quang vôi a-amin cüa acid amin, dây là phân ûng rât nhay, cho phép phât hiên acid amin tôi hàng ngàn nano gram. - Phân ûng Biure: Nguyên tâc: Trong môi truefng kiêm câc liên két peptid trong protein két hop vôi ion Cu++tao phûc hop màu tim à duôi dang anion. Phân ûng này tao phûc cô màu bên vüng và ôn dinh dugc dùng de djnh lugng protein. - Phân ûng Foin xâc dinh acid amin chüa luu huÿnh: Nguyên tâc: Acid amin chüa luu huÿnh (nhu L-cystin và L-cystein) khi dun nông trong môi truông kiêm së phân ûng vôi muôi chi tao sulfid chî (PbS) màu den xâm [3]. 2 3 3 5 1.2. Tong quan vê N-Acetylcystein: N-acetylcystein (NAC) là dân chat N-acetyl cüa L-cystein, mot acid amin tir nhiên [14]. NAC dâ dugc nghiên cüu vê câu truc, tmh châft, phuong phâp tong hgp, bân tong hop cüng nhu câc phuong phâp bào ché thành câc thành phâm sü dung trong dugc phâm. Dù dâ xuât hiên tù lâu trên thi trucmg nhung hiên nay NAC vân dành dugc nhiêu su quan tâm cüa câc nhà nghiên curu. 1.2.1. Câu trûc hoâ hoc cüa N-acetylcystein: Công thiîc câu tao: O O Công thûc phân tü: C H NS0 Phân tü lugng: 163,2 Thành phân: C: 36,80% H: 5,56% N: 8,58% O: 29,41% S : 19,65% Tên khoa hoc: Acid L-a-acetamido-P-mecaptopropionic [19]. N-acetylcystein là môt a-amino acid, cô nhôm thé gân vào C à vi tri a. Tât câ câc a-amino acid dêu cô dông phân quang hoc do cô carbon bât dôi (Ca), trùr glycin, tunng tu së cô câu truc cüa công thuc hînh chiéu nhu sau: COOH COOH CH3CONH — CI.— H H—I.C — NHCOCH, I I ch 2sh ch 2sh N-acetyl-L-cystein N-acetyl-D-cystein 5 9 3 6 1.2.2. Tinh chat: a) Tmh chat vât lÿ:[2] Két tinh tôt trong nuôc à dang bot màu trâng hoâc tinh thë không màu. Dê tan trong H20 và ethanol. Thuc té không tan trong dichloromethan. Dô tan trong H20 à 20°C là 200g/l. Dung dich 1% côpH = 1,5 - 2,5. [a]D= +21° - +27° (à nông dô 50g/l). Nhiêt dô nông chây: 109 - 110°C. b) Tinh chât hoâ hoc: Trong câu truc cüa N-acetylcystein cô câc nhôm carboxylic (-COOH), amin bâc 2 (-NH-), amid (-NHCO-), thiol (-SH) nên nô cüng mang tmh chât tucng ûng cüa câc nhôm chûc dô. • Vôi câu trûc cô chûa câ hai nhôm -COOH và nhôm -NH- nên N-acetylcystein cô nhüng tmh chât hoâ hoc co bân cüa mot amino acid. • Câc phân ûng cüa nhôm amid: Nhôm amid cô thë bi khü hoâ bôi LiAlH4, tham gia phân ûng thoâi phân duôi tâc dung cüa hypohalogenid (NaOX). • Tmh chât cüa nhôm thiol: [3,14] > Do S và O thuôc cùng mot nhôm trong bâng tuân hoàn câc nguyên tô (nhôm VI) nên chûng cô mot sô thuôc tmh liên két hoâ hoc tuong tu nhau. Vî thé câc tmh chât hoâ hoc cüa câc hop chât chûa nhôm thiol là tuong tu nhu cüa alcol: câc thiol tao ra câc thioete, thioacetal, thiocetal, thioeste. Vî du: Tao thioete khi tâc dung vôi alcol: R- SH + R'OH -> R- S - R + H20 7 Tao thioeste khi tâc dung vôi acid: R -S H + R'COOH-► R - S - C - R ' + H.O h o Tâc dung vôi aldehyd và ceton tao thành thioacetal và thiocetal: H+ SR -----► R -C H ^ + H,0 R -S H + R— CH SR (Thioacetal) R’ u+ R’ SR 2R -SH + ^ C = 0 —^ + H20 R '' R ' ^SR (Thiocetal) > Dê bi oxy hoâ: Khi oxy hoâ nhe nhàng thiol bai oxy cüa không khi thî tao thành dialkyl disulfid: 2R-SH + 1/2 0 -----► R-S -S -R + H20 ( dialkyl disulfid) Khi oxy hoâ manh thiol vôi acid nitric tao ra alkyl sulfonic: 2 2 = 0 2 [O] R—SH --------► R —S 3H ( alkyl sulfonic ) > Phân u”ng vôi dung dich chï acetat cho két tûa chî mecaptid cô màu vàng dâc trung de nhân biét. > Nguyên tü luu huÿnh trong nhôm thiol cô dô âm diên nhô han, nguyên tu oxy trong alcol nhung lai thë hiên tmh acid yéu. 0 1.2.3. Dinh tinh, dinh litçfng, xâc dinh câu trûc: • Dinh tmh: [2] 8 - Do nâng suât quay eue: dô quay eue riêng tù +21°- +27° (trong môi truong dung dich dêm phosphat vôi pH= , ), dung dich NAC cô nông dô 50mg/ml. - Nhiêt dô nong chây: 104-110°C. - Do phô hêng ngoai: so sânh vôi chât chuân. - Bang sâc kÿ long hiêu nâng cao (HPLQ: so sânh thôi gian luu vôi chât chuân. - Thêm 0,05ml dung dich Natri nitroprussiat (50mg/ml) và 0,05ml amoniac dâc vào 0,5ml dung dich ché phâm 5%, së tao phûc không ben cô màu tim sim [7]. • Dinh luong: > Dinh luong N-acetylcystein bâng phuong phâp sâc kÿ long hiêu nâng cao (HPLC) [20]. > Dinh luong N-acetylcystein theo Duoc diën Anh 2005 [ ]: Hàm luong N-acetylcystein phâi dat tù 98,0 - 102,0% tmh theo khôi luong ché phâm dâ làm khan. - Câch tién hành: Hoà tan chlnh xâc 1,40 g NAC trong 60ml nuôc trong bïnh non, thêm dung dich acid HC1 và làm lanh bînh trong nuôc dâ, thêm 10ml dung dich Kl vào binh. Sau dô, dem chuân dô bàng dung dich iod 0,05M vôi 1ml chî thi hé tinh bôt, dinh luong dén khi màu chuyën sang màu xanh thâm thi ngùng chuân dô. Ghi thë tfch dung dich iod 0,05M dâ dùng ( V ml ). - Công thûc tmh két quâ dinh luong: %NAC = V x 10 x 16,32/ m ( m: khôi luong cân NAC ) ( ml dung dich iod 0,05 M tuong duong vôi 16,32 mg C H NS03). • Xâc dinh câu trûc: 7 0 1 1 '3 1 5 9 9 Hiên nay viêc xâc dinh câu truc co thë sur dung phuong phâp do pho: pho hông ngoai, tü ngoai, pho khôi, pho công huông tù. 1.2.4. Môt so dang bào ché cüa N-Acetylcystein trên thi tru&ng: Bdng 1 : Môt so ché phâm cüa N-acetylcystein trên thi truàng Hàm Biêt duoc Dang bào ché Nhà sân xuât lirçmg - Mekophar Acetylcystein mg Hôp lOvîxlOviên nang - Công ty CPDP Nam Hà N-acetyl-L-cystein 500mg Lo 60 viên Life (Dut) N-acetyl-L-cystein 600mg Lo 60 viên Longevita Science Mucomyst mg Hôp 30 gôi Bristol-Myers Acetylcystein mg Hôp 20 gôi Traphaco Parvolex mg/ml Lo 10ml (IV) Glaxo Smith Kline 2 0 0 2 0 0 2 0 0 2 0 0 1.2.5. Tâc dung duac ly: N-acetylcystein giû môt vai trô quan trong trong diêu tri bênh và bâo vê suc khoè con nguôi. Nô duoc xép vào danh mue thuôc thiét yéu cüa Viêt Nam (04-1999) [ ], Tâc dung cüa N-acetylcystein: • Acetylcystein duoc dùng làm thuôc tiêu chât nhây trong bênh nhây nhôt (xo nang tuyên tuy), bênh lÿ hô hâp cô dôm nhây quânh (viêm phé quan câp, man tinh). Thuôc làm giâm dô quânh cüa dôm ô phoi cô mü hoâc không bâng câch tâch dôi câu nôi disulfur (-S-S-) trong mucoprotein, vî vây tao thuân 6 loi de tong dôm ra ngoài bàng phân xa ho, dân liïu tu thé hoâc bàng phuong phâp co hoc [ ]. • Tâc dung làm thuôc giâi dôc: dùng dé bào vê và chông dôc cho gan khi quâ liéu paracetamol, bàng câch duy tri hoâc khôi phuc nông dô glutathion cüa gan. Glutathion là chât càn thiêt de làm bât hoat chât chuyën hoâ trung gian cüa paracetamol (trong dô cô N-acetylbenzoquinon imin - môt chât rât dôc vôi gan). Glutathion giûp chuyën hoâ tiép N-acetylbenzoquinon imin thành chât không dôc và dào thâi ra ngoài. Khi quâ lieu paracetamol (6-10g/ngày vôi nguôi bînh thuông và 3-4g/ngày vôi nguôi cô bênh vê gan), môt luong lôn chât chuyën hoâ này duoc tao ra vï duông chuyën hoâ chûih (liên hop glucuronid và sulfat) trô thành bâo hoà. Acetylcystein chuyën hoâ thành cystein, kfch thfch gan tong hop glutathion và do dô no cô thë bâo vê dugc gan nêu bât dâu diêu tri trong vông giô sau khi quâ liêu paracetamol [ , ]. • Thuôc này cüng dugc su dung tai chô dë diêu tri bênh không cô nuôc mât (do thiêu màng mông nuôc mât) hay côn goi là hôi chûng khô mât [ ]. • N-acetylcystein dugc su dung két hgp vôi Gliotoxin giûp diêu tri nam Candida sp. [17]. • N-acetylcystein dugc coi nhu môt chât bâo vê dë chông lai gôc tu do rât hiêu quâ, nhu dôi vôi môt sô chât nguy hiëm sau: acrolein (tïm thây trong thit dông vât quay hoâc nuông, trong thuôc lâ, trong khi thâi tù dông co), bromobenzen, paraquat (chât dôc trong thuôc diêt cô)... N-acetylcystein cô thë cô tâc dung chông lâo hoâ bàng viêc tâng nông dô glutathion trong gan, phoi, thân, tuÿ xuong [13]. • N-acetylcystein dùng phôi hgp vôi 1 sô thuôc khâc cô tâc dung hô trg trong diêu tri bênh nhân nhiêm HIV/AIDS và cô thë giüp cai nghiên cocain [13]. 6 1 2 6 8 6 11 Acid Glutamid ! Cystein OH Glutathion Gliotoxin 1.3. Phirong phâp tong hop: N-acetylcystein cô thë duac diêu ché tù L-cystein bàng câch acetyl hoâ truc tiép nhôm -NH cüa L-cystein [2]. H H \ .,„NHCOCH \ ,"'NH C HS C + CH COOH H,0 HS COOH COOH Vî L-cystein dë bi oxy hoâ chuyën thành dang L-cystin [14]. Do dô, tong hop N-acetylcystein thuông di tù L-cystin và phâi qua hai giai doan: - Acetyl hoâ nhôm -NH cüa L-cystin. - Khü hoâ dë cât dût lien két disulfid (-S-S-). 1.3.1. Ccf chéacyl hoâ: Acyl hoâ là quâ trïnh thay thé nguyên tü hydro trong môt hop chât hùu co bàng nhôm acyl (RCO-). N-acyl hoâ là quâ trinh acyl hoâ amoniac hoâc amin hüu ca (bâc nhât, bâc hai), sân phâm cüa phân ûng là câc amid. R- NH + R'COX -----►RNHCOR' + HX 2 3 2 3 2 2 12 Tâc nhân acyl hoâ cô công thûc chung nhu sau: Q° R“ c - x Trong dô X cô thé là -OH, -OR, -NH2, -OCOR, -X. Tâc nhân acyl hoâ [10]: Acid cacboxylic (acid acetic). Este (methyl acetat) nhung ît dùng. Câc amid (carbamid). Anhydrid acid (anhydrid acetic). Halogenid acid (acetyl chlorid) và xeten. Co ché acyl hoâ N-acetylcystein: xây ra theo ca ché ai diên tù. © RC O X ^ ---- - RCO © + X R.NH, ------ ► R C O N R i + HX Nhôm acyl thuông dë bi phân eue do dôi diên tù lêch vê phia nguyên tù oxy cô dô âm diên lôn han. Néu X lai cô tâc dung hüt diên tù manh thî tâc nhân acyl dë bi phân ly tao thành câc cation acyli (RCO+). Nguyên tù C cüa nhôm acyl là tâc nhân âi diên tù do mang diên tich duong [ ]. 1 1.3.2. Ca ché khü hoâ: Khâi niêm khü hoâ duoc hiêu là quâ trînh nhân thêm diên tù cüa môt nguyên tü hoâc môt ion nào dô. Trong hoâ hoc hüu ccf, nguôi ta côn goi khü hoâ là quâ trînh làm giâm dô oxy hoâ cüa chât dem khü. Trong dô hop chât hüu co lây thêm nguyên tù hydro, loai khôi nô câc di tô (thuông là oxy) hoâc nhân thêm diên tù. Phân üng khü hoâ không cô môt co ché chung mà môi loai tâc nhân khü hoâ cô ca ché phân ûng riêng [ ]. Khü hoâ liên két disulfid -S -S - vôi tâc nhân là kim loai ( Fe, Zn, Sn ) trong môi truông acid xây ra theo ca ché sau: 1 13 Trong môi tnrông acid, lien két disulfid -S -S - lây hai diên tü cüa kêm, dông thôi lây thêm hai proton làm dut liên két -S -S - tao thành hai nhôm thiol. / +" " N © + H + R— S — S — Ri + H ------ ► R— SH + Ri— SH Cv e "'5 e^ Zn - 2e ----- Zn2+ 0 1.3.3. Câc phuong phâp tong hop: a) Phuctng phâp cüa H. A. Smith và G. Gorin -1961: [18] Phuong trînh phân üng: COOH 0 COOH l II OH c h - n h + 2(CH C00)20 C H -N H -C -C H + 2CH3COOH ch - s CH - S 1 2 COOH O COOH O I II II .+ 55°c I + + Zn + 2H CH -N H -C-C H , 2C H -N H -C —CH, + Zn I I ch - s ch - s - h 1 2 3 3 1 1 2 2 — — — — 2 2 2 2 COOH O il 2 C H - N H - C - C H 3 + Pb(CH 3COO )2 COOH O I II c h - n h - c - ch , Pbj+ CH3COOH I ch - s - 1 2 ch - s - h 2 2 COOH O COOH O I II C H -N H -C -C H , Pb +H S — ►2 CH-NH - C—CH + PbS {I ch - s - h W s2 1 11 2 14 3 Hoà tan 20g L-cystin trong dung dich cüa 12g NaOH vào 200ml nuôc. Làm lanh khôi phân üng bàng nuôc dâ. Sau dô vùa khuây vira nhô tù tù 40ml dung dich anhydrid acetic vào dung dich trên trong 30 phüt sao cho nhiêt dô không quâ 5°C. Giû khôi phân üng ô nhiêt dô phông trong 1 giô. Sau dô nâng nhiêt dô dén 55°C và cho thêm bôt këm vào khôi phân üng, khuây tiép trong 15 phüt, làm nguôi, loc loai bô këm thùa. Thêm dung dich chi acetat 1M vào dich loc dë tao tüa chi mecaptid. Két tüa chi mecaptid dugc loc, rüa và phân huÿ bôi khi hydrosulfid (H S). Loc bô chi sulfid (PbS), dich loc dem bôc hoi, thu dugc sân phâm thô vôi khôi lugng 13g (hiêu suât 48%). Sân phâm thô dugc tinh ché bàng câch hoà tan trong isopropanol nông, cho thêm ether khan, loc loai bô két tüa tràng roi bôc hoi dich loc dén khô. Sau 3 lân tinh ché së thu dugc sân phâm tinh khiét cô nhiêt dô nông chây tù 107-107,5°C. Hoà tan két tüa tràng à trên trong ether và dem do UV së cho két quâ tuong tu cüa thiazolin. b) Phuong phâp cüa N. W. Pirie và T. Sh. Hele -1933: [16] Làm lanh hôn hgp gôm 20g L-cystin vôi 130ml dung dich NaOH 0,6N. Sü dung keten (theo phuong phâp cüa Ott - 1931) làm tâc nhân acyl hoâ. Khôi phân üng dugc giû lanh trong 30 phüt, sau dô thêm vào 30ml dung dich NaOH 2,5N. Giû khôi phân ûng ô nhiêt dô phông trong 1 giô, thu dugc dung dich acid yéu. Thêm vào dung dich này 20ml acid acetic bàng và môt ît bôt këm dông thôi nâng nhiêt dô dung dich lên 50-60°C. Sau dô làm lanh tù tù, khuây liên tue khôi phân ûng, roi lçc thu lây dich loc. Thë tfch dich lgc thu dugc khoâng 400ml. Thêm tù tù dung dich chï acetat vào dich loc cho dén khi không xuât hiên thêm két tüa. Loc rüa tüa bàng dung dich chi acetat 1%. Hoà két tüa thu duoc vào nuôc tao hôn dich roi tién hành 2 15 phân huÿ bàng khi H S. Loc bô chï sulfid, bôc hai dich loc, thu duac sân phâm vôi khôi luong 21,5g và nhiêt dô nông chây 1°C. Sân phâm diêu ché theo câch này sach và tinh khiét han theo phuang^iâp cü. c) Phuong phâp cüa T. A. Martin và C. W. W aller-1965: [15] Trong dung dich dêm chüa lmol anhydrid acid thi cystein và muôi amoni (-NH4+) hay muôi kim loai kiêm cüa nô dêu bi N-monoacyl hoâ. Sân phâm thu duoc së duoc nguôi ta sü dung dë diêu tri câc bênh thuôc duông hô hâp. Khuây hôn dich gôm 35,2g L-cystein hydrochlorid monohydrat trong 87ml tetrahydrofuran 91%, sau dô thêm 54,4g Natri acetat trihydrat (Na0Ac.3H 0) vào khôi phân ûng. Sau dô 20 phüt, khôi phân ûng duoc làm lanh dén 3-6°C roi duoc thêm vào 20ml anhydrid acetic. Dua khôi phân ûng vê nhiêt dô phông và khuây trong giô dâu, dë yên trong 15 giô tiép theo, rôi lai tiép tue khuây thêm 4 giô. Sau dô thêm vào khôi phân ûng g acid HC1, dua vê nhiêt dô 5-10°C, loc lây sân phâm. Sân phâm cuôi cùng cô hàm luong N-acetylcystein là 80,4% và cô nhiêt dô nông chây: 109-110°C. 2 1 1 2 6 8 16 PHAN n: THUC NGHIÊM VÀ KÊT QU 2.1. Nguyên vât liêu và phuong phâp nghiên curu: 2.1.1. Nguyên vât lieu: • Nguyên liêu: Nguyên liêu dë tong hop N-acetylcystein là L-cystin, duoc diêu ché tir toc theo phuong phâp thuÿ phân. Phân ûng thuÿ phân toc duoc chung tôi tiên hành theo tài liêu tham khâo [91. Toc duoc thu mua tai câc hiêu cât toc, rüa sach, cât nhô roi dem thuÿ phân. • Hoâ chât và thuôc thu: - Acid clohydric, acid sulfuric, anhydrid acetic (Trung Quôc). - Natri acetat, NaOH, chi acetat (Trung Quôc). - Bôt këm (Trung Quôc). - Na S: diêu ché tù NaOH và luu huÿnh. - Ethylacetat, isopropanol, dimethylether (Trung Quôc). - Côn tuyêt dôi, nuôc cât (Viêt Nam). - Than hoat (Viêt Nam). • Thiét bi và mây môc: - Sinh hàn hoi luu. - Bïnh câu 1000ml, 200ml, 50ml. - Binh câu 3 c 500ml. - Nhiêt ké thuÿ ngân (Trung Quôc). - Phêu loc Buchner. - Mây khuây tù IKA (Dûc). - Mây cât quay Buchi B480 (Thuy Sÿ). 2 6 17 - Cân phân tich Mettler Toledo AB204S (Thuy Sÿ). Cân kÿ thuât Sartorius BP2001S (Duc). Mây do nhiêt dô nông chây Gallenkamp (Anh). Tü sây Memmert (Dûc). Mây do pho hông ngoai Perkin Elmer (tai Phông thi nghiêm trung tâm Truông Dai hoc Duoc Hà Nôi) - Mây do pho khôi HP-5989-MS (tai Viên Khoa hoc và Công nghê Viêt Nam). - Mây do công huông tù Brucker 500MHz (tai Viên Khoa hoc và Công nghê Viêt Nam). - Phân eue ké A-KRUSS P1000 (Dire). 2.1.2. Phuong phâp nghiên cûu: y Thuÿ phân toc, diêu ché L-cystin. Cô nhiêu câch dë diêu ché L-cystin nhung phuong phâp thuÿ phân L-cystin tù protein vân don giân và cô ÿ nghïa thuc té hon câ. Qua nghiên cùu cho thây Lcystin cô tî le cao trong keratin, vî thé phuong phâp mà chung tôi lua chon dë diêu ché L-cystin là thuÿ phân toc trong môi truông acid [9]. Quâ trinh diêu ché L-cystin tù protein nhin chung dua theo so dô nguyên lÿ sau: „Keratin------------------. H+,OH",enzym, t° acid amin. —-------pH=5 >TL - ^Cystm. -li ----------> > Tong hop N-acetylcystein. Trong môt sô phuong phâp diêu ché N-acetylcystein, chung tôi lua chon phuong phâp cüa Smith và Gorin [181 dë phù hop vôi diêu kiên và quy mô phông thi nghiêm cüa truông. 18 Tien hành khâo sât thay doi môt sô diêu kiên phân ûng dë quâ trînh dat hiêu suât cao nhât: - Khâo sât luong këm sur dung trong phân ûng khü hoâ. - Khâo sât thôi gian khü hoâ. - Khâo sât pH sau khi suc khi H2S giâi phông NAC tù hop chât mecaptid chi. > Sü dung câc phuong phâp hoâ hoc, vât lÿ, hoâ lÿ dë tâch và tinh ché Nacetylcystein. > Xâc dinh câu truc và dô tinh khiét cüa sân phâm: - Do nhiêt dô nông chây. - Do nâng suât quay eue [20] - Dinh luong bàng phuong phâp iod [11] - Do câc pho hông ngoai, phô khôi, pho công huông tù cüa sân phâm tong hop duoc so vôi mâu chuân. 2.2. Thuc nghiêm - két quâ - nhân xét: 2.2.1. Diêu ché L-cystin: Chüng tôi tong hop N-acetylcystein tù nguyên liêu L-cystin. Vï vây cân diêu ché L-cystin dâm bâo vê sô luong và chât luong bàng phuong phâp thuÿ phân tù tôc. Chüng tôi thuc hiên diêu ché L-cystin tù tôc theo phuong phâp sau [9,21]. Câch tiê'n hành: Cân 200,0g tôc cho vào bînh câu ba co, thêm vào 400,0ml acid chlorhydric 20%. Dun hoi luu ô nhiêt dô 120°C cho dén khi thu phân ûng Biure cô két quâ âm tinh (khoâng 23 giô). Tây màu bàng khoâng 12,0g than hoat, loc nông, cô dâc dich loc. Hoà tan dich cô trong 100,0ml nuôc cât, thêm tù tù dung dich Natri acetat 50% cho dén khi dung dich cô pH= 4-5. Dë hôn hop ô nhiêt dô phông trong ba ngày. Loc lây tüa, rüa tüa bàng 50,0ml nuôc cât ô 60°C. 19 Tinh ché sân phâm bàng câch hoà tan trong 300,0ml acid HQ M và tây màu bàng 5,0g than hoat. Néu dich loc vân co màu vàng nhat, tiép tue tây màu bàng 5,0g than hoat. Diêu chinh dich loc dén pH= 3- 4 bàng Natri acetat 50% (su dung hê't 110 ml dung dich tuofng duong vôi mNatri aCetat-55,0g ). Dë hôn hop ô nhiêt dô phông trong khoâng 5-6 giô cho két tüa hét. Loc lây tüa, rüa tüa bàng 20,0ml nuôc cât ô 60°C. Sây sân phâm ô nhiêt dô 65°C trong 2- 3h. Khi HQ thoât ra tù phân ûng thuÿ phân duoc rüa qua môt bînh rüa dung dung dich NaOH loâng. Két quâ: Thuc hiên nhiêu lân qui trînh diêu ché L-cystin này, chüng tôi thu duoc két quâ nhu sau: Bang 2: Két quâ dieu ché L-cystin Thi nghiêm Luong tôc (g) L-cystin (g) Hiêu suât (%) 8,05 4,025 8,3 4,15 3 8,25 4,125 4 4,1 1 1 2 0 0 2 2 0 0 2 0 0 2 0 0 8 ,2 Ta cô hiêu suât Irung bînh là 4,1%. Sân phâm thu duoc cô: t°nc=259-261°C. nâng suât quay eue [a]D20= - 220,5° Nhân xét: Bâng 2 cho thây, hiêu suât phân ûng khâ ôn dinh. Vôi nhüng diêu kiên phân ûng dâ xâc dinh së cho ta hiêu suât phân ûng khoâng 4,1%. Sân phâm L-cystin thu duoc cüng dat dô tinh khiét cân thiét cho quâ trînh tong hop tiép theo. Quâ trînh thuÿ phân tôc tao L-cystin cô thë duoc biëu diên theo so dô sau: 20 Hinh 1: Scf dô diêu chéL-Cystin 21 2.2.2. Tong hop N-acetylcystein: Phuong trînh phân ûng: COOH COOH . (CH C0) 0 /0 H I I CH— NH 2 CH—NHCOCH, . Zn/H+ * I I ch s — CH2— SH (NAC) (L - cystin) Quâ trînh tong hop: Gôm 3 giai doan Giai doan 1: acyl hoâ bàng anhydid acetic trong 30 phüt ô 8-10°C, sau giô giû ô nhiêt dô phong. Giai doan 2: khü hoâ bàng bôt këm ô 55 °C trong môi truông acid. Giai doan 3: quâ trînh tâch và phân lâp NAC bàng chî acetat, dùng khi H2S phân huÿ chi mecaptid dë thu lai duoc NAC. Dë xâc dinh diêu kiên tôi Uu à câc giai doan nhàm dat hiêu suât phân üng 1 3 2 2 2 2 1 cao nhât, chüng tôi tien hành khâo sât mot sô yéu tô sau: a) Khâo sât luorng këm cân sü dung trong phân ûng khü hoâ: Câch tien hành: Hoà tan 2,0g L-cystin ( 0,0083 mol) trong dung dich cüa 1,2g NaOH trong 20,0 ml nuôc. Làm lanh khôi phân üng dén - °C bàng nuôc dâ, dông thôi vùa khuây vùa nhô tù tù 4,0ml anhydrid acetic ( 0,032 mol) vào khôi phân üng trong 30 phüt. Sau dô giû dung dich phân üng ô nhiêt dô phông trong 1 giô. Nâng nhiêt dô phân üng lên 55°C, thêm dan bôt këm vào vôi câc luong khâc nhau theo tmh toân cüa câc thi nghiêm cân khâo sât. Duy tri khôi phân ûng ô nhiêt dô 55°C và khuây liên tue trong 15 phüt. Loc loai bô këm thùa. Thêm vào dich loc dung dich chî acetat 1M (cho dén khi luong két tüa không dôi), khuây kï. Loc thu tüa 8 22 1 0 chî mecaptid trên phëu Buchner, rira tüa bàng 10,0ml dung dich chî acetat 1%. Hoà tüa thu duoc vào 50,0ml nuôc thành hôn dich, sau dô tien hành suc khi H2S qua hôn dich. Khôi phân üng sau khi suc khi duoc loc trên Buchner loai bô chî sulfid két tüa, thu dugc dung dich NAC. Dung dich NAC dugc xü lÿ bàng câc phuong phâp vât lÿ, hoâ lÿ dë thu dugc NAC tinh khiét, xâc dinh khôi lugng NAC tinh khiét và tinh hiêu suât phân üng. Két quâ: dugc trînh bày trong bàng và biëu dô sau dây. Bâng 3: Két qua khâo sât litçfng këm sü dung dén hiêu suât phân ûng Tÿ lê mol mNAC Hiêu suât STT ^këm ^L-cystin këm/L-cystin (%) (g) (g) (g) 0,60 , 0,87 32,0 0,95 0,70 1,3:1 34,9 1,5:1 1,05 38,6 3 0,81 1,7:1 1,05 38,6 4 0,92 1,06 5 1,08 38,9 1 2 2 2 1 1 :1 2 2 2 2 : 1 23 Nhân xét: Këm duoc su dung vôi vai trô là tac nhân cüa quâ trînh khü hoâ, càt dut lien két disulfid tao thành N-acetylcystein. Dung dich sau giai doan acyl hoâ là dung dich cô pH acid (pH=4,5). Lirong këm cân thiet cho phân ûng khü hoâ trong môi truông acid thucmg duoc dùng vôi tÿ lê nhu sau: - mol këm /I mol chât cân khû, luong acid thuông là 2,5 mol/1 mol këm [1]. Câc acid thucmg su dung cho quâ trînh khü hoâ là HC1, H S04, CH COOH. Vai trircmg hop này thî phân ûng khû hoâ xây ra vôi tâc nhân là këm trong môi truông acid acetic. Bâng 3 cho ta thây khi tâng dan luong këm phân ûng thî hiêu suât phân ûng cüng tâng dan. Tÿ lê mol këm tàng dan tù 1,1 dén 1,5 so vôi lmol nguyên lieu thî hiêu suât tàng tù 32% dên 38,6%; tù 1,5 dên 2mol këm so vôi lmol nguyên lieu thî hiêu suât cô tàng (38,9%) nhung không nhiêu. Vî thé, de vùa dam bâo thu duoc hiêu suât tôt, vùa tiét kiêm chi phi thî luong këm sû dung phù hop nhât là: l,5mol këm/1 mol nguyên lieu. 1 2 1 ,1 3 b) Khâo sot ânh huâng cüa thâi gian khühoâ dên hiêu suât tong hop: Câch tien hành: Hoà tan 2,0g L-cystin ( 0,0083 mol) trong dung dich cüa 1,2g NaOH trong 20,0 ml nuôc. Làm lanh khôi phân ûng dén 8-10°C bàng nirôc dâ, dông thôi vùa khuây vùa nhô tû tù 4,0ml anhydrid acetic ( 0,032 mol) vào khôi phân ûng trong 30 phüt. Sau dô giü dung dich phân ûng à nhiêt dô phong trong 1 giô. Nâng nhiêt dô khôi phân ûng lên 55°C roi thêm vào bot këm vôi luçmg toi uu dâ khâo sât à phân truôc ( 0,81g tuong duang 0,0125mol). Phân ûng khü hoâ duoc thuc hiên à câc thcri gian khâc nhau theo tmh toân cho môi thi nghiêm. Loc loai bô këm thùa. Thêm vào dich loc dung dich chî acetat 1M (cho dén khi luçfng két tua không doi), khuây kï. Loc thu tüa chi mecaptid trên phêu 24 Buchner, rira tua bàng 10,0ml dung dich chï acetat %. Hoà tüa thu duac vào 50,0ml niïôc thành hôn dich, sau do tien hành suc khi H2S qua hôn dich. Khôi phân ûng sau khi suc khi duac loc trên Buchner loai bô chï sulfid két tüa, thu duac dung dich NAC. Dung dich NAC duac xu lÿ bâng câc phuong phâp vât lÿ, hoâ lÿ dé thu duac NAC tinh khiét, xâc dinh khôi luang NAC tinh khiét và tmh hiêu suât phân ïrng cho tùng thi nghiêm. Két quâ: Chüng tôi thu duac két quâ nhu trong bâng và biëu do sau. Bdng 4: Khdo sât ânh huông cüa thài gian khühoâ dê'n hiêu suât Thoi gian Hiêu suât m NAC khur Thi nghiêm (g ) (%) (phût) 0,56 20,59 15 1,04 38,23 3 1,04 38,23 4 25 37,50 1 1 1 0 2 2 0 1 ,0 2 v-*-» s ^ 45 40 35 15 10 5 0 /3a 23 —------- -— -*37 .5 38.23 * 20.59 10 15 ^thdi gian (phût) ^ Hînh 3: Biéu do khdo sât ânh huông cüa thài gian khühoâ dê'n hiêu suât 25 Nhân xét: Qua két quâ ô bâng 4 và biéu dô hînh 3, cô thë thay su phu thuôc hiêu suât tong hop vào thôi gian khü hoâ. Thôi gian cüa phân üng khü hoâ tâng tù phüt lên 15 phüt, khôi luçmg NAC thu duoc tù 2,0g nguyên liêu Lcystin tâng dâng kë, tù 0,56g lên 1,04g (gan gâp dôi). Tù 15 phüt tôi 20 phüt khôi luong sân phâm thu duoc không thay dôi. Nhung tù 20 phüt dén 25 phüt trô ra thî luong NAC thu duoc cô giâm, ô mûc dô không nhiêu. NAC trong môi truông phân üng tai nhiêt dô 55°C cô thë dâ bi phân huÿ môt phân. Vî vây, thôi gian 15 phüt là vùa dü cho phân üng khü hoâ xây ra hoàn toàn, han ché sân phâm phu, thu duoc hiêu suât tôt 1 0 c) Khâo sât pH dung dich sau khi suc khi H2S giai phông NAC tù két tüa chi mecaptid: NAC hoà tan trong nuôc tao dung dich acid (vôi nông dô lOOg/1 cho pH =1,5-2,5), nên pH cüa giai doan phân lâp và tinh ché là môt yêu tô quan trong liên quan dén hiêu suât tong hop. Khi suc khi hydro sulfïd (H S) vào hôn dich chî mecaptid cüa NAC vôi nuôc së giâi phông ra NAC và tao két tüa chî sulfïd (PbS) màu den. Viêc xâc dinh luong H2S dü dë bâo dâm phân üng xây ra hoàn toàn tuong üng vôi pH cüa khôi phân ûng sau khi suc khf. Vî vây chüng tôi tién hành khâo sât pH dung dich sau khi suc khf H2S dë giâi phông NAC trong giai doan tinh ché. Câch tién hành: Hoà tan 5,0g ( 0,03 mol) L-cystin trong dung dich cüa 3,0g NaOH trong 50,0ml nuôc. Làm lanh khôi phân ûng dén 8-10°C trong 30 phüt, dông thôi vùa khuây vùa nhô tù tù 10ml anhydrid acetic vào. Sau dô giû dung dich phân ûng ô nhiêt dô phông trong 1 giô. Thêm vào 3,0g bôt këm ( 0,045 mol) sau khi khôi phân ûng dâ duoc nâng nhiêt dô lên 55°C, nhiêt dô này duoc duy trî và dung 2 26 dich durgc khuây lien tue trong 15 phüt dë phân üng xây ra hoàn toàn, lçc loai bô këm. Dung dich sau khü hoâ cô thë tfch 60,0ml, dugc chia thành 5 phân bàng nhau (12,0ml) dë tién hành 5 thi nghiêm. Tù tù nhô giot chî acetat 1M vào dung dich sau khü hoâ cho tôi khi không thây xuât hiên thêm két tüa. Loc thu lây tüa trên phêu Buchner, rüa tüa bàng 10,0ml dung dich chî acetat 1%. Tao huyên phù cüa tüa vùa thu dugc trong 50,0ml nuôc. Tién hành suc khi H2S cho tùng thi nghiêm trong cùng diêu kiên nhung vôi dô dài thôi gian khâc nhau. Do pH dung dich sau khi suc khi cüa tùng thi nghiêm, loc loai bô két tüa PbS roi xü lÿ dich loc dë tinh ché ra NAC. Tmh hiêu suât tong hgp NAC cüa tùng thi nghiêm. Két quâ: Chüng tôi thu dugc két quâ nhu trong bâng 5. Bâng 5: Két quâ khâo sât moi liên quan giiïa thâi gian suc khi, pH và hiêu suât Thôi gian Hiêu suât pH sau suc m NAC STT suc khi khi (g ) (%) (phut) 3,5-4 8,82 3-3,5 0,23 25 16,91 36,03 3 30 2,5 0,49 36,03 4 35 2,5 0,49 36,03 50 2,5 5 0,49 1 0 , 1 2 2 0 2 Nhân xét: Tù bâng 5 ta thây yéu tô thôi gian và pH dung dich sau suc khi cô ânh huông tôi hiêu suât N-acetylcystein thu dugc. Thôi gian suc khi tâng dan tù 20 dén 30 phüt, tucfng ûng vôi nô là su giâm pH tù 3,7 xuông 2,5 và hiêu suât tâng dân tù 8,82% dén 36,03%. Thôi gian tù 30 phüt dén 50 phüt, pH hoi giâm thî hiêu suât gân nhu không thay dôi. Nhu vây, vôi thôi gian suc khf lôn hon 30 phüt và pH khoâng 2,5 thî hiêu suât phân ûng không tâng. 27 Moi lien quan giüa thài gian và pH cüa quâ trînh suc khi thé hiên rô qua biëu do sau: 15 25 35 45 55 Thài gian (phût) Hinh 4: Biêu do khdo sât moi liên quan giüa thài gian và pH cüa quâ trînh suc khi Néu thuc hiên suc khi H2S vol ciràng dô manh han thî thôi gian sê rut ngàn lai. Tuy nhiên pH dung dich cüng chï giâm tôi giâ tri khoâng 2,5 và không bi giâm nhiêu hon nüa. Nhiï vây, chüng tôi co thé kêt luân râng viêc suc khi H2S de tao diïç/c dung dich sau suc khi co pH khoâng 2,5 së cho hiêu quâ tong hop N-acetylcystein tôt nhât và on dinh. 223. Sü dung câc phiüffng phâp vât ly, hoâ lÿ, hoâ hoc de tâch và tinh ché N-acetylcystein: Dich loc NAC thu duac (theo phirang phâp trên) dirac boc hai bâng phuang phâp cât quay dé thu duac sân phâm thô (N-acetylcystein thô). Sân phâm thô duac xü lÿ theo môt so câch sau: • Hoà tan trong isopropanol nong: Voti lg sân phâm thô, tuang ûng duac hoà tan trong 7ml isopropanol 28 nông, thêm diethyl ether khan vào (5ml/lg sân phâm), khuày déu, loai bô tua trâng thu duoc dich loc. Bôc hoi dich loc dên khô. Làm làp lai 3 lân së thu duoc sân phâm tinh khiét. Két quâ: lg sân phâm thô thu duoc 0,77g sân phâm tinh khiét vôi nhiêt dô nông chây là 108°C. • Chiét bàng ethylacetat: Vôi lg sân phâm thô thî dùng 3ml ethylacetat cho môi lân chiét. Khi chiét lâc kÿ và dun nong nhe de làm tàng dô tan cüa Nacetylcystein trong ethylacetat. Gan lây lôp ethylacetat à trên, dem câ't quay dén 1/3 thê’ tfch roi dë nguôi. Sân phâm két tinh trong ethylacetat, loc thu tinh thé. Két quâ: lg sân phâm thô thu duçfc 0,83g N-acetylcystein tinh khiét, nhiêt dô nông chây 108°C. • Hoà tan trong côn tuyêt dôi: Hoà tan lg sân phâm vào 10ml côn tuyêt dôi, khuây kï trong 15 phüt. Sau dô dem loc, thu dich loc côn roi bôc hoi dén côn 1/3 thé tfch. De nguôi thu duoc sân phâm két tinh trong côn. Loc lây tinh thé, sây khô. Két quâ: lg sân phâm thô së cho 0,75g sân phâm tinh khiét vôi nhiêt dô nông chây 104°C. • Két tinh trong nuôc: Hoà tan lg sân phâm vào 10ml côn tuyêt dôi, khuây kl trong 15 phüt. Sau dô dem loc, thu dich loc côn. Bôc hoi dich loc côn dén khô, roi hoà tan cân trong ml nuôc, së thu duoc sân phâm két tinh. Két quâ: thu duoc 0,8g sân phâm cuôi cùng, tinh thé cô kfch thuôc lôn, tinh khiét, nhiêt dô nông chây 107°C. 2 29 Nhân xét: Trong 4 phuong phâp dâ thuc hiên thi két tinh Nacetylcystein trong ethylacetat, côn và nuôc là dan giân và dê thuc hiên. Chüng tôi không sü dung phuong phâp dùng côn tuyêt dôi vi khôl luong sân phâm thu duac cuôi cùng cüng thâp hon câc phuong phâp côn lai. Ethylacetat là dung môi rât tôt dë két tinh N-acetylcystein, sân phâm dat yêu câu vê nhiêt dô nông chây (108°C), tuy nhiên ethylacetat lai gây kfch üng và tuong dôi dât. Do dô chüng tôi chon câch két tinh N-acetylcystein trong nuôc vï nô don giân, rê tiên, sân phâm thu duoc tinh khiét, cô nhiêt dô nông chây dat yêu câu, khôi luong sân phâm cüng không chênh lêch nhiêu so vôi dùng khi dùng ethylacetat (0,8g so vôi 0,83g). Quâ trînh tong hop N-acetylcystein cô thë duoc biëu diên tôm tât theo so dô sau: 30 Hïnh 2: Sa dô dieu chéN-acetylcystein 31 2.2.4. Xàc âinh cdu truc hoâ hoc và âô tinh khiét cûa sân pham duotc tong hop: ♦>Do nhiêt dô nong chây: sân pham sau khi duoc tinh ché dem sây khô trong tü sây à 55°C, trong 2h, roi do diëm chây bâng may Gallenkamp. Két quâ: t°nc=104,5°C - 108°C. Nhân xét: Két quâ này phù hop vôi nhiêt dô nong chây cûa NAC. ❖Do nâng suât quay eue: sü dung dêm phosphate vôi pH =7,0. Két quâ: dung dich sân pham vôi nong dô 50mg/ml trong dung dich dêm cô nâng suât quay eue riêng là +22,5 °. Nhân xét: gôc quay eue này phù hop vôi gôc quay eue cüa NAC chuân cùng nong dô (tùr +21.0° dén +27.0°). ♦> Dinh liïçmg bâng phuong phâp doiod theo Duoc diën Anh 2005: [11] Duoc diën Anh 2005 quy dinh hàm ltfông N-acetylcystein phâi dat tùf 98,0 - , % tinh theo khôl liïông ché pham dâ làm khan. Tién hành theo phuong phâp à mue [1.2.3], thu duoc két quâ nhir sau: V=85ml, m=l,41g % N-acetylcystein = 98,4% N-acetylcystein thu duoc dat tiêu chuân vê hàm lirong. 1 0 2 0 ♦ ♦ ♦Bien giâi pho hông ngoai IR: Sân pham diroc chüng tôi tong hop (mâu thir) và N-acetylcystein chuân cüa Merck dêu duoc phân tich pho hông ngoai (IR) duoc ghi trên mây Perkin Elmer do trong vùng buôc sông 4000-500 cm tai Phong thi nghiêm trung tâm Truông Dai hoc Duçfc Hà Nôi. '1 32 Két quâ biên giâi duçfc trînh bày à bâng , theo phu lue 1. Câc so liêu phù hop vôi câc tài liêu tham khâo [5]. Bàng 6: Câc dâi hâ'p thu dâc trUng trong pho IR Mâu thür NAC chuân Nhôm VmaxCcm'1) VmaxCcm-1) 3376,2 3376,0 -NH6 2550,3 2550,1 -SH 1717,3 1718,3 c=o>dd 1532,8 1534,4 C—Oamid Phân tfch pho dô cüa chât môi tong hop và chât chuân cho phép chüng tôi nhân biét câc dâi hâp thu dâc trung cüa câc nhôm chûc diën hînh cüa chât nghiên cûu. ❖ Phân tfch pho khôi (MS): Pho khôi duoc ghi trên mây HP-5989-MS tai phông phân tich câu trüc, viên Hoâ hoc (Viên Khoa hoc và Công nghê Viêt Nam). Chüng tôi tién hành do pho khôi cüa chât môi duoc tong hop và so vôi Nacetylcystein chuân cüa Merck. Pho dô duçfc ghi trong phu lue 3. Két quâ phân tfch pho khôi luong cüa chât thü và chât chuân dêu cô pic phân tü, cô sô khôi düng bâng sô khôi cüa chât du kiên. Ngoài ra, phân tfch pho dô cho phép nhân biét câc pic phân mânh cüa chât nghiên cûu và nô phù hop vôi so dô phân mânh. 33 Sa dô phân mânh: 0 -H -COOH -------- ► HS' CH -N H II -COCH3 [ h s — CH = CH2] NH m/z 75 m/z 130 h 3c 0 -CH2 +H Y 0 m/z 99 m/z 60 CH=C =0 I NH CH: I -CH> HC+/NH +H 3 c=o -C = 0 r [h 2n — c h = c = o 0 m/z 85 34 m/z 57 Bâng 7: Kët quâ pho khoi cüa chât dieu cheâuc/c m/z Công thurc câu tao Mânh 164 MH+ 130 M+- SH O 117 M+- CH2SH 99 M+-( CH2SH + OH ) H3C\ / NH 85 M+-( CH2SH + OH +CH3) II 0 57 M+-( CH2SH + OH + COCH ) ( M=163) 75 M+-( COOH + COCH3) 60 M+-( COOH + NHCOCH ) 3 3 ♦ ♦ ♦Phân tich pho công hirông tù: Tién hành phân tich thành phân chât tong hgp dugc bàng phuong phâp do pho công huông tù hat nhân: proton 'H và cacbon C. Sân phâm duoc do pho bàng mây Brucker 500MHz tai phông phân tich câu truc viên Khoa hoc và công nghê Viêt Nam. Sur dung dung môi DMSO. Két quâ thu duoc nhu sau: iO 13 35 Bdng 8: Két quâ pho 13C-NMR 13C-NMR chuân(*} 13C-NMR cüa chat Vi tri (8ppm) tong hop (8ppm) 25,592 27.301 54,355 57.20 d 3 169,405 5 178.60 s 171,712 7 179.40 s 22,367 23.75 q 9 2 (*):So lieu pho chuan C-NMR mây cho [12]. Két quâ pho ’H-NMR (ôppm) cüa chat tong hçfp: 1,88 (3H, s, C9H3) 2,41 (1H, t, Hj) 2,72 (1H, dd, H2a) 2,85 (1H, dd, H2b) 4,38 (1H, m, H3) 8,15 (1H, d, H4) Kët quâ pho công hucfng tù cüa chat chüng tôi tong hçfp duoc (phu lue 5 và 7) cho thây chat này cô câu tao nhu dâ trînh bày à trên và giông vôi NAC chuan. 13 2.3. Bàn luân: Diêu ché L-cystin bàng phân üng thuÿ phân keratin (eu thé là tù toc) là van dê dâ duoc nhiêu tac giâ thuc hiên và không côn moi. Chüng tôi thuc hiên diêu chë Lcystin voi mue dich chnih là tao nguon nguyên lieu cho tong hop N-acetylcystein. De dâm bâo phù hop vê mât thoi gian, kinh phi dông thôd vân dâm bâo duoc sô 36 lirong và chat lirong nguôn nguyên lieu, chung tôi tien hành thuc nghiêm trên co sà câc tài liêu và két quâ bâo câo truoc do [ , ]. Tong hçfp N-acetylcystein tù nguôn nguyên lieu trên là van dê duç/c câc nhà sân xuât duoc pham rat quan tâm và chu ÿ. Vi bên canh nhüng tâc dung chü yéu dâ diroc biét dén cüa N-acetylcystein, gân dây câc nhà nghiên cüu dâ phât hiên ra thêm mot vài tâc dung moi dâng luu ÿ cüa thuôc nhu hô tro trong dieu tri HIV-AIDS, cai nghiên, diêu tri nam, chô'ng gôc tu do... Chüng tôi tien hành dê tài thuc nghiêm này de gôp phân nghiên cüu sân xuât NAC trong nirôc, giüp tiét kiêm chi phi và dâm bâo chât luong. Qua quâ trînh thuc nghiêm, chüng tôi nhân thây ràng quâ trînh sân xuât Nacetylcystein tù nguôn nguyên lieu ban dàu là keratin theo phuong phâp trên cân phâi chü ÿ xü lÿ câc hoâ chât de trânh dôc hai cho con ngudi và môi trucmg xung quanh: > Diêu ché L-cystin dùng nhiêu acid Qorhydric vôi nông dô cao cho hiêu suât tôt nhung lai dôc hai, nên chon dung dich acid à nông dô % vi dung dich này tuong dôi ôn dinh mà lai ît nguy hiëm hon. Acid duoc giâi phông trong quâ trînh thuÿ phân duoc xü lÿ bâng câch trung hoà vol dung dich NaOH, trânh duoc ô nhiëm môi trudng. > Khi tong hop N-acetylcystein tù L-cystin co sü dung chï acetat và suc khi H S. Dây là hai chât dôc voi ngirài và môi truông, cô thë gây nguy hiëm dén tinh mang khi bi nhiêm dôc. Chmh vi vày, khi thuc hiên cân dâc biêt liru ÿ xü lÿ H2S thùa bâng NaOH và sü dung luong tôi thiëu co thë chï acetat. Chüng tôi dê nghi bo giai doan dùng chi acetat và suc khi H2S dë giâm câc nguy co dôc hai. Chüng tôi dâ thü tien hành tong hçfp không co giai doan này thî vân thu duoc N-acetylcystein tuy nhiên dô tinh khiét kém hon. 9 2 1 2 0 2 37 Trên dây là môt vài nhân xét cua chüng tôi thu duoc qua quâ trînh thuc nghiêm. Câc nhà sân xuât càn luu y cân nhâc giüa vain dê loi fch kinh té và nhüng tâc dông dén süc khoê con ngucti cüng nhu môi truông dê lua chon nhüng phuong phâp toi uu nhât, phù hop nhât. 38 PHÂN IH: KET LUÂN VÀ DE XUÂT Két luân: Tù nhüng thi nghiêm dâ thuc hiên trong khoâ luân, chüng tôi thu duçfc mot so két quâ nhu sau: 1. Dâ diêu ché duac L-cystin tù toc dat tiêu chuân là nguyên liêu cho tong hop N-acetylcystein. 2. Dâ tong hop dugc N-acetylcystein tù L-cystin vôi câc diêu kiên toi uu cho phân üng là: • Tÿ le këm cân thiét dë phân üng khü hoâ dat hiêu suât tôt là: l,5mol këm/lmol nguyên liêu. • Thôi gian thich hgp cho quâ trînh khü hoâ là 15 phüt. • Giai doan giâi phông NAC khôi phüc chi mecaptid, suc khi H2S cho dên khi dung dich dat pH khoâng 2,5 thi cho hiêu suât tôt nhât. 3. Dâ lua chon dugc phuong phâp tinh ché NAC két quâ tôt nhât. Tù két quâ nghiên cüu này, chüng tôi dê nghi môt qui trînh tong hgp Nacetylcystein tù tôc nhu sau: Thuÿ phân tôc diêu ché L-cystin theo phuong phâp cüa Vogel và [9]. Acetyl hoâ và khü hoâ L-cystin dugc thuc hiên nhu sau: Hoà tan 20,0g Lcystin trong dung dich cüa 12,0g NaOH vào 200,0ml nuôc. Làm lanh khôi phân üng bàng nuôc dâ. Sau dô vùa khuây vùa nhô tù tù 40,0ml dung dich anhydrid acetic vào dung dich trên trong 30 phüt sao cho nhiêt dô tù 8-10°C. Giü khôi phân üng à nhiêt dô phông trong 1 giô. Sau dô nâng nhiêt dô dén 55°C và cho thêm 8,1g bôt këm vào khôi phân üng, khuây tiép trong 15 phüt. Làm nguôi, loc loai bô këm thùa. Thêm tù tù dung dich chî acetat 1M vào dich loc dén khi không 39 xuâ't hiên thêm két tüa. Két tüa chi mecaptid này duoc loc, rira bàng dung dich chi acetat %, rôi tao hôn dich trong nuôc. Tién hành suc khi hydrosulfid (H S) cho dén khi dung dich dat pH khoâng 2,5. Loc bô chi sulfid (PbS) tao thành, dich loc dem bôc hoi, thu duoc sân phâm thô vôi khô'i krang 13,0g (hiêu suât 48%). Sân phâm thô duoc tinh ché bàng ethanol và két tinh lai trong nuôc. Sân phâm cuôi cùng thu duoc là N-acetylcystein tinh khiét vôi khôi luç/ng 11,0g (hiêu suât 39%), cô nhiêt dô nông chây tùr 107-107,5°C. 1 2 Dé xuât: • Tiép tue nghiên cuu thêm dé câi tién mot sô diêu kiên kÿ thuât và qui trînh thuc hiên cho phù hop qui mô sân xuât công nghiêp. • Nghiên cùu phuong phâp tinh ché de cô thé không cân qua giai doan tao dân chat Mecaptid chî mà vân dâm bâo chat luong. 40 TÀI LIÊU THAM KHÂO TIÊNG VIÊT 1. Bô mon Công nghiêp duac (2006), Ky thuât sân xuât duçfc pham I, Tnràng Dai hoc Duac Hà Nôi. 2. Bô môn Hoâ duac (2004), Hoâ Duac /, Truàng Dai hoc Duac Hà Nôi, tr. 150. 3. Bô môn Hoâ hûu ca (2005), Hoâ hoc hüu ca II, Truàng Dai hoc Duac Hà Nôi. 4. Bô môn Hoâ sinh (2001), Hoâ sinh /, Truàng Dai hoc Duac Hà Nôi, tr. 40, 63. 5. Bô Y té, Duac diën Viêt Nam III, tr.l 1, 147. . Bô Y té, Duac thu quôc gia Viêt Nam (2002), tr. 87-88. 7. Pham Thi Trân Châu, Trân Thi Âng (1998), Hoâ sinh hoc, NXB Giâo duc, tr. 13-17. . Nguyên Hûu Dire (01/07/2002), "Dê phông nhiëm dôc gan do dùng paracetamol", Sûc khoé và âùi sô'ng, tr.5. 9. Nghiêm Thanh Hoàng (2005), Khdo sât mot sophuang phâp diêu chê'Lcystin tù toc, sùng, Khoâ luân tôt nghiêp duac sÿ dai hoc. 10. Ky yê'u câc công trînh viên Duac liêu (1961-1971), NXB Y hoc và thë duc thë thao, tr.14. 6 8 TIÊNG ANH 11. BP (2005), p.49. 12. BreitmaierE. and Voelter W. (1986), "Carbon-13 NMR Spectroscopy", VCH,Weiheim, p. 414. 13. Exp Gerontol (2004), "N-acetylcystein Benefït", 39 (9),p. 32, 1323. 14. Jocelyn P. C. (1972), Biochemistry of the S-H group, London, p. 117, 130, 170, 243. 15. Martin T. A. and Waller C. W. (1933), "N-monoacylation of cystein", J. Org. Chem., 63, p. 260, 534. 16. Pirie N. W. and Hele T. S. (1965), "Studies in the sulphur metabolism of the dog", Biochem. J ., 27, p. 1716. 17. Shad, Larsen D. and Larsen B.(1991), "Clinical isolâtes of yeast produce a gliotoxin - like substance", Mycopathologia, 116, p. 203-208. 18. Smith H. A. and Gorin G. (1960), "2-Methyl-2-thiazoline-4-carboxylic acid: Formation from N-acetylcystein and Hydrolysis", /. Org. Chem., 26, p. 820. 19. The Merck Index 13th édition (2001). 20. USP (2006), p. 51-52. 21. Vogel's text book of practical organic chemistry 4th édition (1985), Longman, London and New York, p. 560. PHU LUC PHU LUC 1: Pho hông ngoai cüa NAC môi tong hop PHU LUC 2: Pho hông ngoai cüa NAC chuân PHU LUC 3: Pho khôi cüa NAC môi tong hop PHU LUC 4: Pho khôl cüa NAC chuân PHU LUC 5: Pho công huông tù 'H-NMR cüa NAC môi tong hop PHU LUC : Pho công huông tù ‘H-NMR cüa NAC chuân PHU LUC 7: Pho công huông tù C-NMR cüa NAC môi tong hop PHU LUC : Pho công huông tù C-NMR cüa NAC chuân 6 13 8 13 PER KIN EL MER PEKIN ELMErl 1000 07/03/26 14:39 Phong TNTT X: 1 scan, 4.0cm-l, fiat, smooth N-Acety1-Cyste inCh  61 53 50 70 99 iW 85 ;: 60 70 90 100 110 120 164 130 130 140 150 160 170 '1 File Operator Acquired Instrument Sample Name Mise Info Vial Number C :\HPCHEM\1\DATA\D-DIP054.D Phong Cau truc, Vien Hoa hoc 5 Apr 107 4:36 pm using AcqMethod DEFAULT 5989B MS N-ACETYL-CYSTEIN-MAU CHUAN CH30H 1 Scan 75 Abundance (4.460 min) : D--DIP054.D 60 180000 ■ 160000 140000 _ 1 2 0 0 0 0 -] 1 0 0 0 0 0 : 80000 -j 74 60000 j i i i 40000 20000 164 o i.. m / z - -> 99 j 61 122 70 111 117 53 50 60 70 90 100 110 120 146 130 130 140 150 160 170 C X 7 HA-N.Acetyl.L .Cystein-T-DMSO-lH en en 2 . 2 , 2 . 2 . 2 . 2 . 2 . en r - i— i LO o CM LO r i— i 00 LO o CM \— 1 T—1 %— i o 00 00 r LO LO LO LO r- lO 2 . 2 . 2 . CM 2 . en 4 . 4 . . 4 0 0 00 4 . (J\ en en en 2 . LO n ro H l D i n O O O Ol oo h M Û ^^ ^ ^j1 CM 00 LO VO LO 0 0 CM VÛ C\] en LT) x—I i— IO O CP> »—I 00 00 00 00 r- r- r- r- LO LO l O ^ CM CM CM CM CM CM CM CM CM CMCM CM CM Lf) ^ CM H o r- co en LO r^ Current Data Parameters NAME HA_NALC EXPN0 10 PR0CN0 1 CM F2 - Acquisition Parameters Date_ 20070405 Time 10.33 INSTRUM av500 PR0BHD 5 m m Multinucl PULPR0G zg30 TD 65536 S0LVENT DMS0 NS 16 DS 0 SWH 10000.000 Hz FIDRES 0.152588 Hz AQ 3.2769001 sec RG 90.5 DW 50.000 usée DE 6.00 usée TE 300.0 K Dl 1.00000000 sec MCREST 0.00000000 sec M CWRK 0.01500000 sec 11 ======== CHANNEL fl 1H NUC1 9.90 usée PI -3.00 dB PLI 500.1335009 MHz SF01 F2 - Processing parameters 32768 SI 500.1300020 MHz SF EM WDW 0 SSB 0.30 Hz LB 0 GB 1.00 PC ppm 8.2 O O O • \— 1 ppm 4.4 1 — 1 o• T -1 2.9 2.8 L O < X > O • i— 1 2.7 KO r- o• x— 1 2.6 2.5 2.4 00 rr-• o ppm HA-N.Acetyl.L .Cystein-C-DMSO-lH o ^ , O H U 3 ' D O H i D U » ( T i ^ r o c \ i œ o o ( r) o o ^ , H'X)rocn^)oj(X)'Xio^or) r ' r o H H L n r^mo'a^c^c^cncria^ L C\j lO^rooorooomrooorocNCNj 0 0 0 Current Data Parameters NAME HA NALC EXPNO 11 PROCNO 1 F2 - Acquisition Parameters Date_ 20070405 10.24 Time INSTRUM av500 PROBHD 5 mm Multinucl zgpg30 PULPROG TD 65536 SOLVENT DMSO NS 256 DS 2 SWH 32679.738 Hz FIDRES 0.498653 Hz 1.0027661 sec AQ RG 8192 DW 15.300 usée DE 6.00 usée TE 300.0 K D1 2.00000000 sec 0.03000000 sec dll DELTA 1.89999998 sec 0.00000000 sec MCREST MCWRK 0.01500000 sec = CHANNEL ri NUC1 PI PLI SFOl = 13C 8.40 usée -1.00 dB 125.7703643 MHz ========= CHANNEL f2 ==== CPDPRG2 waltzl6 1H NUC2 PCPD2 88.00 usée PL2 -3.00 dB PL12 15.98 dB 22.00 dB PL13 SF02 500.1320005 MHz 200 180 160 140 I wkmw** W* H** 120 100 80 60 ~r~ 40 F2 - Processing parameters 32768 SI 125.7578483 MHz SF EM WDW SSB 0 LB 1.00 Hz 0 GB PC 1.40 r~ 20 0 ppm HA-N.Acetyl.L .Cystein-C-DMSO-C13CPD o 00 oo X— 1 «—i LO CM oo LO 00 00 Ch Ch 00 r~ O Ch r~ 00 . • i—i Ch r - i—i rH • LO • • • • LO 00 KO Ch KO • • • Ch [...]... > Dinh luong N- acetylcystein theo Duoc di n Anh 2005 [ ]: Hm luong N- acetylcystein phõi dat tự 98,0 - 102,0% tmh theo khụi luong chộ phõm dõ lm khan - Cõch ti n hnh: Ho tan chlnh xõc 1,40 g NAC trong 60ml nuục trong bùnh non, thờm dung dich acid HC1 v lm lanh bợnh trong nuục dõ, thờm 10ml dung dich Kl vo binh Sau dụ, dem chu n dụ bng dung dich iod 0,05M vụi 1ml chợ thi hộ tinh bụt, dinh luong d n khi... Nacetylcystein trong ethylacetat, c n v nuục l dan gi n v dờ thuc hi n Chỹng tụi khụng sỹ dung phuong phõp dựng c n tuyờt dụi vi khụl luong s n phõm thu duac cuụi cựng cỹng thõp hon cõc phuong phõp c n lai Ethylacetat l dung mụi rõt tụt dở kột tinh N- acetylcystein, s n phõm dat yờu cõu vờ nhiờt dụ n ng chõy (108C), tuy nhi n ethylacetat lai gõy kfch ỹng v tuong dụi dõt Do dụ chỹng tụi chon cõch kột tinh N- acetylcystein. .. 5-10C, loc lõy s n phõm S n phõm cuụi cựng cụ hm luong N- acetylcystein l 80,4% v cụ nhiờt dụ n ng chõy: 109-110C 2 1 1 2 6 8 16 PHAN n: THUC NGHIấM V KấT QU 2.1 Nguy n võt liờu v phuong phõp nghi n curu: 2.1.1 Nguy n võt lieu: Nguy n liờu: Nguy n liờu dở tong hop N- acetylcystein l L-cystin, duoc diờu chộ tir toc theo phuong phõp thu ph n Ph n ỷng thu ph n toc duoc chung tụi ti n hnh theo ti liờu tham... chuy n hoõ trung gian cỹa paracetamol (trong dụ cụ N- acetylbenzoquinon imin - mụt chõt rõt dục vụi gan) Glutathion giỷp chuy n hoõ tiộp N- acetylbenzoquinon imin thnh chõt khụng dục v do thõi ra ngoi Khi quõ lieu paracetamol (6-10g/ngy vụi nguụi bợnh thuụng v 3-4g/ngy vụi nguụi cụ bờnh vờ gan), mụt luong l n chõt chuy n hoõ ny duoc tao ra vù duụng chuy n hoõ chỷih (li n hop glucuronid v sulfat) trụ thnh... dich NAC cụ n ng dụ 50mg/ml - Nhiờt dụ nong chõy: 104-110C - Do phụ hờng ngoai: so sõnh vụi chõt chu n - Bang sõc k long hiờu n ng cao (HPLQ: so sõnh thụi gian luu vụi chõt chu n - Thờm 0,05ml dung dich Natri nitroprussiat (50mg/ml) v 0,05ml amoniac dõc vo 0,5ml dung dich chộ phõm 5%, sở tao phỷc khụng ben cụ mu tim sim [7] Dinh luong: > Dinh luong N- acetylcystein bõng phuong phõp sõc k long hiờu n ng... R.NH, R C O N R i + HX Nhụm acyl thuụng dở bi ph n eue do dụi di n tự lờch vờ phia nguy n tự oxy cụ dụ õm di n l n han N u X lai cụ tõc dung hỹt di n tự manh thợ tõc nh n acyl dở bi ph n ly tao thnh cõc cation acyli (RCO+) Nguy n tự C cỹa nhụm acyl l tõc nh n õi di n tự do mang di n tich duong [ ] 1 1.3.2 Ca chộ khỹ hoõ: Khõi niờm khỹ hoõ duoc hiờu l quõ trợnh nh n thờm di n tự cỹa mụt nguy n. .. sulfonic ) > Ph n ung vụi dung dich chù acetat cho kột tỷa chợ mecaptid cụ mu vng dõc trung de nh n biột > Nguy n tỹ luu hunh trong nhụm thiol cụ dụ õm di n nhụ han, nguy n tu oxy trong alcol nhung lai thở hi n tmh acid yộu 0 1.2.3 Dinh tinh, dinh litỗfng, xõc dinh cõu trỷc: Dinh tmh: [2] 8 - Do n ng suõt quay eue: dụ quay eue riờng tự +21- +27 (trong mụi truong dung dich dờm phosphat vụi pH= , ), dung... - Do nhiờt dụ n ng chõy - Do n ng suõt quay eue [20] - Dinh luong bng phuong phõp iod [11] - Do cõc pho hụng ngoai, phụ khụi, pho cụng huụng tự cỹa s n phõm tong hop duoc so vụi mõu chu n 2.2 Thuc nghiờm - kột quõ - nh n xột: 2.2.1 Diờu chộ L-cystin: Chỹng tụi tong hop N- acetylcystein tự nguy n liờu L-cystin Vù võy c n diờu chộ L-cystin dõm bõo vờ sụ luong v chõt luong bng phuong phõp thu ph n tự tục... dựng khi H2S ph n hu chi mecaptid dở thu lai duoc NAC Dở xõc dinh diờu ki n tụi Uu cõc giai doan nhm dat hiờu suõt ph n ỹng 1 3 2 2 2 2 1 cao nhõt, chỹng tụi tien hnh khõo sõt mot sụ yộu tụ sau: a) Khõo sõt luorng kởm c n sỹ dung trong ph n ỷng khỹ hoõ: Cõch tien hnh: Ho tan 2,0g L-cystin ( 0,0083 mol) trong dung dich cỹa 1,2g NaOH trong 20,0 ml nuục Lm lanh khụi ph n ỹng d n - C bng nuục dõ, dụng... Smith Kline 2 0 0 2 0 0 2 0 0 2 0 0 1.2.5 Tõc dung duac ly: N- acetylcystein giỷ mụt vai trụ quan trong trong diờu tri bờnh v bõo vờ suc khoố con nguụi N duoc xộp vo danh mue thuục thiột yộu cỹa Viờt Nam (04-1999) [ ], Tõc dung cỹa N- acetylcystein: Acetylcystein duoc dựng lm thuục tiờu chõt nhõy trong bờnh nhõy nhụt (xo nang tuy n tuy), bờnh l hụ hõp cụ dụm nhõy quõnh (viờm phộ quan cõp, man tinh) Thuục ... dõc trung cho cõc nhụm amin v cacboxyl nhu ph n ỷng acetyl hoõ, ph n ỷng formyl hoõ hay este hoõ - Ph n ỷng vụi Ninhydrin: Nguy n tõc: Ninhydrin l chat oxy hoõ manh, dun n ng cụ khõ nng khỷ nhụm... v n dinh dugc dựng de djnh lugng protein - Ph n ỷng Foin xõc dinh acid amin chỹa luu hunh: Nguy n tõc: Acid amin chỹa luu hunh (nhu L-cystin v L-cystein) dun n ng mụi truụng kiờm sở ph n ỷng... t n tùnh suụ't thdi gian thuc hi n khoõ lu n Xin kinh chỷc cõc thõy cụ lu n lu n manh khoộ v ngy cng thu duỗfc nhiờu thnh tich cụng tõc nghi n cỷu cỷng nhu gidng day H N i, ngy 22 thõng 05.nam