Do đó để chẩn đoán nhiễm giun, sán cần định danh trứng giun, sán trong phân.• Trứng giun, sán thải ra phân có thể chứa ấu trùng hay chưa tuỳ loại giun, sán.. KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM PHÂN TÌM
Trang 1HÌNH THỂ TRỨNG MỘT
SỐ LOÀI GIUN SÁN
Trang 2Giun, sán ký sinh ở đường tiêu hoá sinh sản thải trứng qua phân Do đó để chẩn đoán nhiễm giun, sán cần định danh trứng giun, sán trong phân.
• Trứng giun, sán thải ra phân có thể chứa ấu trùng hay chưa tuỳ loại giun, sán Ví dụ: giun lươn, giun móc có thể đã có ấu trùng
• Để định danh trứng giun, sán khi quan sát cần
mô tả các đặc điểm cấu tạo sau: Hình dạng,
Trang 3+ Vỏ: Lớp vỏ albumin ngoài sần sùi nhuộm màu vàng của muối mật
Có thể tróc ra để lộ lớp vỏ trong màu xám đậm, dày.
+ Nhân: thường có một tế bào
+ Khoảng trống giữa nhân và vỏ mờ.
Trang 51.2 Trứng giun móc (Ancylostome duodenale)
Giun mỏ ( Necator americanus)
Trang 6Trứng giun đũa Trứng giun móc
Trang 71.3 Trứng giun tóc (Trichuris trichiura)
- Hình dạng: quả cau, hai đầu có nút là nơi ấu trùng đẩy vỏ chui ra.
- Kích thước: 22-24 x 50-55 m
- Tính chất:
+ Vỏ 2 lớp dày bắt màu vàng đậm.
+ Nhân: 1 tế bào
Trang 81.4 Trứng giun kim (Enterobius vermicularis)
- Hình dạng: hình bầu dục méo một bên.
- Kích thước: 20-32 x 50-60 m.
- Tính chất:
+ Vỏ: 2 lớp mỏng màu xám nhạt.
+ Bên trong thường chứa ấu trùng
+ Trứng giun kim rất chiết quang.
Trang 9Hình thể trứng sán
Sán lá gan bé: (Clonorchis sinensis)
- Hình quả đu đủ, có nắp ở đầu Phía dưới có 1 gai nhỏ.
- Kích thước: 12-19 x 27-35 m.
- Tính chất:
+ Vỏ: một lớp dày đều màu vàng nhạt.
+ Nhân: thường đã có ấu trùng lông màu nâu sẫm.
Trang 10Trứng sán lá gan lớn (Fasciola hepatica)
Trứng sán lá ruột (Fasciolopsis buski)
- Hình thuẫn rất lớn (lớn nhất trong các loại trứng giun sán ký sinh).
Trang 11Trứng sán dây
Sán dây lợn (Toenia solium)
Sán đây bò (Toenia saginata)
Trang 12KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM PHÂN
TÌM KÝ SINH TRÙNG ĐƯỜNG TIÊU HOÁ
Trang 13Giun sán và đơn bào ký sinh ở hệ tiêu hóa sinh sản thải mầm bệnh trong phân (trứng, đốt sán, ấu trùng; kén đơn bào và thể hoạt động)
Vì vậy xét nghiệm phân là phương pháp cơ bản để chẩn đoán nhiễm giun sán và đơn bào đường tiêu hóa.
Trang 14Chuẩn bị dụng cụ:
- Lọ đựng phđn: sạch khô, không thấm nước, có miệng
rộng, nắp vặn chặt, thường dùng lọ penicillin, bao nylon,
ghi tín tuổi, số giường, địa chỉ
- Dụng cụ lấy phđn: que cấy, tăm tre, que nhựa;
Số lượng phđn:
- Lượng phđn từ: 3-5g (khoảng bằng hạt ngô) không lẫn
nước tiểu, tạp chất lamelle
lame
chai hoặc túi nilon đựng phân
Trang 15Cách lấy bệnh phẩm
- Đối tượng lấy phân: bn cần chẩn đoán nhiễm KSTĐR, điều tra
cộng đồng.
- Nếu phân có khuôn: lấy ở nhiều vị trí trong và ngoài.
- Nếu phân nhầy: lấy ở nơi có nhầy.
- Nếu phân lỏng: lấy bất kỳ vị trí nào.
Bảo quản bệnh phẩm
- Thời gian từ lúc lấy phân đến lúc làm xét nghiệm: đối với giun
sán không quá 24 giờ; đơn bào không quá 1 giờ để bảo đảm
trứng giun không nở ra ấu trùng, đơn bào hoạt động không
chết
- Trong trường hợp sau khi lấy phân mà chưa xét nghiệm được
ngay nên bảo quản phân bằng 1 trong các dung dịch sau:
+ Formaline 5%
+ Formaline 10%
+ F2AM ( Phenol-Formol-Alcol-Methylene blue)
+ Dung dịch MIF ( Merthiolate Iodine Fomaline)
Nước muối bảo hòa
NaCl 0,9% Lugol
Trang 16- Cũng làm như vậy đối với giọt lugol 2%.
- Dùng lamelle chạm nhẹ vào bờ giọt tạo góc 450 rồi thả nhẹ nhàng xuống để tránh không khí lọt vào
- Sau đó soi kính hiển vi:
+ Sử dụng vật kính x10 đối với trứng giun sán, khi có hình ảnh nghi ngờ đơn bào thì chuyển sang vật kính x40 để khảo sát hình thể chi tiết
+ Soi toàn bộ lame theo hình ziczac (chữ chi) để không bỏ sót vi trường nào..
Trang 17Tiêu chuẩn kỹ thuật
- Tiêu bản không dày hoặc mỏng quá (đọc được chữ bên dưới tiêu bản phân)
- Phân tan đều, không có bọt, lượng nước vừa đủ (khi nghiêng tiêu bản nước không
bị chảy ra ngoài, lá kính không bị trôi nổi)
Ý nghĩa
- Kỹ thuật trực tiếp có thể phát hiện được tất cả đơn bào và trứng giun sán cho kết quả nhanh, đơn giản, nhưng có thể bỏ sót vì lượng phân ít
Trang 18Kỹ thuật phong phú Willis
Nguyên tắc:
- Làm nổi trứng giun sán bằng dung dịch nước
muối bão hoà,(có tỉ trọng lớn d=1,15 -1,20)
- Trứng giun sán có khuynh hướng bám vào mặt
thuỷ tinh.
Cách làm:
- Cho 5g phân vào lọ penicillin
- Đổ NaCl bão hoà vào lọ khoảng 1/3 chai rồi
đánh cho tan.
- Đổ nước muối cho đầy (vớt rác bẩn).
- Thêm vài giọt nước muối bão hòa sao cho mặt
cong lồi lên miệng lọ
- Lấy lame úp lên miệng,sau15 phút cho trứng
Ý nghĩa:
Xác định trứng giun tốt hơn
Trang 19Kỹ thuật Kato (do Kato và Miura đưa ra năm 1954).
Nguyên tắc:
Là phương pháp tìm trứng giun sán với số lượng phân lớn
Dụng cụ, hóa chất:
- Kính hiển vi, lame, nút cao su, que tre để lấy phân
- Giấy Kato có sẵn trên thị trường hoặc có thể tự làm trong phòng xét nghiệm
Cách làm giấy cellophane ưa nước được cắt thành từng mảnh, kích thước
26 x 28mm, dày 40µm.ngâm 24 giờ trong dung dịch:
- Đậy mảnh giấy Kato lên trên
- Dùng nút cao su ấn cho phân dàn đều đến rìa của giấy Kato, ủ tiêu bản ở 37oC/ 30 phút
- Soi dưới kính hiển vi vật kính x10
* Chú ý:
- Nếu để tiêu bản khô quá trứng giun móc có thể biến dạng khó nhận biết, ngược lại để tiêu bản ướt chưa đủ độ trong cần thiết cũng khó soi Tiêu bản đạt yêu cầu khi đặt lên tờ báo có thể đọc được chữ bên dưới
Ý nghĩa: số lượng phân nhiều hơn nên kết quả chính xác hơn kỹ thuật xét nghiệm phân trực tiếp
Vì vậy kỹ thuật này thuận tiện trong chẩn đoán, điều tra và nghiên cứu cộng đồng
Trang 204 KỸ THUẬT KATO:
• Cách tiến hành.
B1: Dùng que tre lấy
khoảng 60-70mg phđn
(bằng hạt đậu đen) cho
lín phiến kính.
B2: Đậy mảnh cellophane đê được ngđm trong dung dịch
có malachite lín trín.
B3: Dùng nút cao su ấn cho phđn dăn đều đến rìa của mênh cellophane,
để tiíu bản khô.
Trang 214 KỸ THUẬT KATO:
• Yêu cầu kỹ thuật:
- Khô đủ độ cần thiết
Trang 22Kỹ thuật giấy bóng kính tìm trứng giun kim (kỹ thuật Graham):
- Dùng giấy bóng kính lớn bôi một lớp hồ ở một mặt (đánh dấu mặt bôi hồ) rồi
để khô tự nhiên (phơi nắng hồ sẽ bong ra) ở nơi im mát Sau đó cắt từng miếng nhỏ 2cm x 4cm Đánh dấu mặt có hồ bằng cách cắt một góc trái của mặt có hồ Bôi một lớp nước cho mềm lớp hồ Áp giấy vào hậu môn bệnh nhân rồi lấy ra dán lên lame và soi kính hiển vi vật kính x10.
- Hiện nay người ta sử dụng băng keo trong thay cho giấy bóng kính có bôi