khảo sát sự kháng thuốc kháng sinh của mầm vi khuẩn trên cá lóc (channa striata, block 1793)

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN NGUYỄN VĂN ÚT KHẢO SÁT SỰ KHÁNG THUỐC KHÁNG SINH CỦA MẦM VI KHUẨN TRÊN CÁ LÓC (Channa striata, Block 1793) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN 2013 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN NGUYỄN VĂN ÚT KHẢO SÁT SỰ KHÁNG THUỐC KHÁNG SINH CỦA MẦM VI KHUẨN TRÊN CÁ LÓC (Channa striata, Block 1793) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Ts. TỪ THANH DUNG 2013 LỜI CẢM TẠ Để hoàn thành tốt luận văn tác giả xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc chân thành gửi đến: Cô Từ Thanh Dung - Khoa Thủy Sản, Trường Đại học Cần Thơ tận tình hướng dẫn suốt trình triển khai, đóng góp ý kiến quý báu suốt thời gian thực đề tài hoàn thành tốt luận văn. Các Cô cán Khoa Thủy sản, Trường Đại học Cần Thơ tạo điều kiện thuận lợi cho hoàn thành luận văn này. Các bạn lớp Bệnh học Thủy sản - Khóa 36. Anh Nguyễn Bảo Trung (Bệnh học Thủy sản - Khóa 34), anh Nguyễn Khương Duy (Bệnh học Thủy sản - K33), chị Trần Thị Ngọc Hân (Cao học Nuôi trồng Thủy sản - Khóa 18), bạn Trần Thanh Sang, Đặng Phạm Hoà Hiệp,… (Bệnh học Thủy sản - Khóa 36) giúp nhiều trình thực đề tài này. Cuối cùng, xin chân thành cám ơn tất anh chị em người thân quan tâm động viên suốt thời gian qua. Xin chân thành cám ơn. Nguyễn Văn Út i TÓM TẮT Nghiên cứu thực nhằm khảo sát kháng thuốc kháng sinh mầm bệnh vi khuẩn cá lóc định danh số chủng đặc trưng. Đề tài phân lập 97 mẫu cá bệnh xuất huyết gan, thận mủ từ 20 ao nuôi cá lóc thâm canh, phân lập vi khuẩn TSA thu 33 chủng vi khuẩn từ 18 ao nuôi. Tất chủng vi khuẩn phân lập kiểm tra số tiêu tiêu sinh hóa kit API 20E. Kết định danh vi khuẩn thu Aermonas hydrophila Pseudomonas aeruginosa. Với chủng vi khuẩn nghiên cứu này, đề tài tiến hành chọn 10 chủng vi khuẩn (đó chủng vi khuẩn phân lập từ cá bị bệnh xuất huyết) từ 33 chủng vi khuẩn phân lập nghiên cứu để tiến hành làm kháng sinh đồ kiểm tra tính kháng, nhạy nhạy trung bình. Kết kiểm kháng sinh đồ 10 chủng vi khuẩn cho thấy chủng vi khuẩn có nhạy với loại kháng sinh. Nhạy hoàn toàn với suphamethoxazole-trimethoprim, có tỉ lệ nhạy cao với amoxicillin-clavulanic acid (90%), doxycycline (80%), florfenicol (70%), flumequine (60%) rifampicin (60%). Đối với loại ampicillin novobiocin có tỉ lệ kháng tương đối cao 60% 80%. Bên cạnh đó, số chủng vi khuẩn nghiên cứu thể đa kháng thuốc kháng sinh. ii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam kết luận văn hoàn thành dựa kết nghiên cứu kết nghiên cứu chưa dùng cho luận văn cấp khác. Cần Thơ, ngày tháng Ký tên iii năm MỤC LỤC LỜI CẢM TẠ i TÓM TẮT ii DANH SÁCH BẢNG vi DANH SÁCH HÌNH vii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT viii CHƯƠNG I ĐẶT VẤN ĐỀ 1.1 Giới thiệu .1 1.2 Mục tiêu đề tài 1.3 Nội dung đề tài .2 CHƯƠNG II . LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU . 2.1 Tổng quan tình hình nghiên cứu cá lóc .3 2.1.1 Vài nét chung cá lóc 2.1.2 Những nghiên cứu bệnh cá lóc . 2.1.3 Một số bệnh thường gặp cá lóc . 2.2 Sự kháng thuốc vi khuẩn .6 2.2.1 Hiện tượng kháng thuốc kháng sinh vi khuẩn . 2.2.2 Cơ chế tác động thuốc kháng sinh 2.3 Các nghiên cứu kháng thuốc vi khuẩn thủy sản .8 CHƯƠNG III . 11 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊM CỨU . 11 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu .11 3.2 Vật liệu nghiên cứu . 11 3.3 Phương pháp nghiên cứu .12 3.3.1 Thu mẫu, bảo quản vận chuyển . 12 3.3.2 Kiểm tra tổng quan mẫu cá bệnh vi khuẩn . 12 3.3.3 Phương pháp định danh vi khuẩn kít API 20E . 13 3.3.4 Phương pháp kháng sinh đồ . 14 3.3.5 Phương pháp xử lý số liệu . 15 CHƯƠNG IV . 16 iv KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN……………………………………………… 16 4.1 Kết thu mẫu phân lập vi khuẩn .16 4.2 Kết định danh vi khuẩn .18 4.2.1 Kết xác định đặc điểm hình thái số tiêu sinh lý, sinh hoá 18 4.2.2 Kết định danh 18 4.3 Kết kháng sinh đồ . 21 CHƯƠNG V 25 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT . 25 5.1 Kết luận 25 5.2 Đề xuất .25 TÀI LIỆU THAM KHẢO 26 PHỤ LỤC A . 30 PHỤ LỤC B . 35 PHỤ LỤC C . 36 PHỤ LỤC E . 38 PHỤ LỤC F . 40 PHỤ LỤC G . 41 PHỤ LỤC H . 42 PHỤ LỤC I 43 PHỤ LỤC J 44 v DANH SÁCH BẢNG Trang Bảng 4.1: Địa điểm thu mẫu số lượng chủng vi khuẩn 16 Bảng 4.2: Một số tiêu chủng vi khuẩn 19 Bảng 4.3: Tỉ lệ (%) nhạy, nhạy trung bình kháng chủng vi khuẩn .22 vi DANH SÁCH HÌNH Trang Hình 2.1: Cá lóc (Channa striata) Hình 3.1: Bản đồ địa điểm thu mẫu (vùng khoanh tròn) .11 (A) Huyện Trà Cú, tỉnh Trà Vinh .11 (B) Huyện Vĩnh Thạnh, Tp Cần Thơ 11 Hình 4.1: (A) Dịch màu đỏ bầm xoang bụng……………………… .…17 (B), (C) (C) Vây, thân não bị xuất huyết………………… …17 Hình 4.2: (A) Cá lờ đờ, tấp mé ao……………………………………… ……17 (B) Gan sẫm màu, tùy tạng sưng to………………………… …….17 (C) Gan, thận tùy tạng có đốm trắng nhỏ……………… .…… .17 Hình 4.3: Tỉ lệ vi khuẩn phân lập mẫu bệnh khác nhau…… .18 Hình 4.4: (A) Hình dạng khuẩn lạc, (B) Kết nhuộm Gram…………… 19 Hình 4.5: (A) Kết O/F, (B) Kết Oxidase Catalase………………….20 Hình 4.6: Kết kiểm tra tiêu kít API 20E (CCT1311 P. aeruginosa CCT1310 A. hydrophila)…………………………………… 21 vii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT A. hydrophila Aeromonas hydrophila AMC Amoxicillin-clavulanic acid AMP Ampicillin BHI-B Brain heart infusion borth CFU Colony forming unit CTX Cefotaxime ĐBSCL Đồng sông Cửu Long DO Doxycycline ENR Enrofloxacine EUS The Epizootic Ulcerative Syndrome of fish FFC Florfenicol GSP Pseudomonas Aeromonas Selective Agar Base KST Ký sinh trùng MHA Muneller-Hinton Agar NV Novobiocin RD Rifampicin SXT Suphamethoxazole-trimethoprim TSA Tryptone Soya Agar UB Flumequine viii Sarter, S., N.H Kha, L.T. Hung, J. Lazard and D. Montet, 2007. Antibiotic resitance in Gram-negative bacteria isolated from farmed catfish. Food Control. 18: 1391-1396. Tenover F.C. 2006. Mechanism of antimicrobial resistanc in bacteria. The Amarican Journal of Medicine. 119, S3-10. Treves-Brown, K.M., 2000. Applied fish pharmacology. Kluwer Academic publishers. 309 pp. Từ Thanh Dung, 2005. Bài giảng bệnh học thủy sản, 65 trang. Khoa Thủy sản. Trường Đại học Cần Thơ. Từ Thanh Dung, Đặng Thị Hoàng Oanh, Trần Thị Tuyết Hoa. 2005. Bài giảng Bệnh vi khuẩn động vật thuỷ sản, 124 trang Tuan, X.L., Y. Munekage and S. Kato, 2005. Antibiotic resistance in bacteria from shrimp farming in mangrove areas. Science of the Total Environment. 349: 95-105. Yanong, R.P.E., 2003. Fungal diseases of fish. Vet Clin Exot Anim. 6: 377-400. Trang wed http://tepbac.com/technical/full_2_26_81/Phong-va-tri-mot-so-benh-thuong-gap-o-caloc.htm (Cập nhât: 19h, 01/08/2013). http://vibo.com.vn/NewsDetail.aspx?newsId=63 (Cập nhật: 20h, 01/08/2013). http://uv-vietnam.com.vn/NewsDetail.aspx?newsId=1231 (Cập nhật: 8h, 02/08/2013). http://www.agroviet.gov.vn/pages/news_detail.aspx?NewsId=12745 (Cập nhật: 21h, 15/08/2013). http://www.thuysanvietnam.com.vn/tong-san-luong-thuy-san-nam-2012-uoc-dat-5-8trieu-tan-article-3612.tsvn (Cập nhật: 20h, 12/08/2013). http://www.vasep.com.vn/Bao-cao-xuat-khau-thuy-san/253_22648/Xuat-khau-thuy-sannam-2012-se-dat-62-ty-USD.htm (Cập nhật: 22h, 13/08/2013). http://uv-vietnam.com.vn (Cập nhật: 10/08/2013) 29 PHỤ LỤC A 1. Phương pháp xác định đặc điểm hình thái vi khuẩn 1.1 Nhuộm Gram Cho giọt nước muối sinh lý nước cất lên lame. Tiệt trùng que cấy, lấy vi khuần trải lên giọt nước. Để khô tự nhiên, hơ lướt lame lửa đèn cồn để cố định vi khuẩn. Các bước nhuộm Gram: Nhỏ dung dịch Crystal violet (dung dịch I) lên lame, để yên phút. Sau rửa lại nước cất cho hết màu tím vẩy cho nước. Lưu ý: không xịt nước vào vết phết vi khuẩn. Nhỏ dung dịch Iodine (dung dịch II) lên lame, để yên phút. Nghiêng lame kính cho chảy hết phần dung dịch lame Dùng dung dịch cồn: aceton (dung dịch III) để tẩy màu cách để nghiêng lame kính nhỏ từ từ dung dịch III giọt nước cuối lame không màu tím. Rửa nước cất vẩy cho nước. Lưu ý: không nhỏ dung dịch III liên tục lên lame kính làm rửa trôi phẩm nhuộm dung dịch I dẫn đến sai kết quả. Nhỏ dung dịch Safranin (dung dịch IV) lên lame, để phút. Sau rửa lại nước cất vẩy cho khô nước. Để lame mẫu khô nhiệt độ phòng. Đọc kết Quan sát tiêu nhuộm vật kính 100X có giọt dầu soi kính. Vi khuẩn Gram dương (+): màu xanh/tím, vi khuẩn Gram âm (-): màu hồng/đỏ. 1.2 Tính di động Cách 1: Cho giọt nước cất nước muối sinh lý (0.85%) tiệt trùng lên lame, dùng que cấy vô trùng lấy vi khuẩn trãi lên giọt nước. Đậy lamelle lại quan sát mẫu vật kính 100X có giọt dầu. Cách 2:Cho Vaseline lên góc lamelle đặt ngửa lamelle lên bàn. Dùng pipet tiệt trùng nhỏ giọt nước muối sinh lý lên lamelle. Tiệt trùng que cấy, lấy khuẩn lạc hòa tan vào giọt nước muối lamelle. Dùng lame đặt nhẹ nhàng lên lamelle cho lame không chạm vào giọt nước muối sinh lý chứa vi khuẩn. Cẩn thận lật thật nhanh lame 30 để giọt nước treo ngược lamelle. Đặt lame lên kính hiển vi, quan sát tính di động vi khuẩn. 2. Phương pháp xác định đặc điểm sinh lý, sinh hóa vi khuẩn (sử dụng kit API 20E) 2.1 Phản ứng Oxidase Chạm nhẹ que thử Oxidase vào khuẩn lạc đĩa agar dùng que cấy nhặt khuẩn lạc cho tiếp xúc que thử Oxidase. Quan sát que thử 30 giây quan sát thay đổi màu sắc. Đọc kết quả: Que thử chuyển màu xanh đậm cho phản ứng oxidase dương tính (+) không chuyển màu âm tính (-). 2.2 Phản ứng Catalase Nhỏ giọt dung dịch H2O2 3% lên lame. Dùng que cấy tiệt trùng lấy vi khuẩn cho vào dung dịch H2O2 3%. Đọc kết quả: Phản ứng Catalase dương tính (+) có tượng sủi bọt, Catalase âm tính (-) không sủi bọt. 2.3 Khả lên men oxy hóa đường glucose (O-F test) Chuẩn bị ống nghiệm chứa môi trường O/F tiệt trùng. Dùng que cấy tiệt trùng lấy vi khuẩn đĩa agar cấy thẳng vào ống nghiệm chứa môi trường O/F, sau phủ 0,51 ml dầu paraffin tiệt trùng vào ống nghiệm tạo điều kiện yếm khí ống nghiệm (F), ống lại kiểm tra tính hiếu khí vi khuẩn (O). Để ống nghiệm vào tủ ấm 28-30 oC. Đọc kết sau 1-7 ngày:  Lên men (F) ống có phủ paraffin chuyển sang màu vàng.  Oxy hóa (O): ống phủ paraffin chuyển sang màu vàng.  Không đổi (N): ống có màu xanh màu xanh lơ. 31 2.4 Phản ứng Citrate Dùng que cấy tiệt trùng lấy vi khuẩn đĩa agar cấy thẳng vào ống nghiệm chứa môi trường Citrate. Sau dùng que cấy khác cấy vi khuẩn lên môi trường thạch nghiêng. Ủ vòng 24 giờ. Đọc kết quả: Dương tính (+), môi trường có màu xanh dương ngược lại. 2.5 Phản ứng O/129 Dùng que cấy tiệt trùng lấy vi khuẩn cho vào ống nghiệm chứa nước muối sinh lý tiệt trùng lắc nhẹ. Dùng pipet tiệt trùng hút vi khuẩn ống nghiệm cho giọt lên đĩa MHA. Tiệt trùng que trãi thủy tinh cồn 95o trãi vi khuẩn đĩa agar. Đậy nắp để khoảng phút. Dán đĩa giấy tẩm 0/129 nồng độ 10 µg 150 µg lên đĩa agar. Ủ tủ ấm 28 – 30oC đọc kết quả. Đọc kết quả: Vi khuẩn mẫn cảm với 0/129 tạo nên vòng tròn vô trùng 15 mm. 2.6 Khả sinh indole Dùng pipet tiệt trùng cho – giọt dung dịch vi khuẩn vào ống nghiệm. Ủ tủ ấm 28-30oC. Sau 24-48 nhỏ vài giọt thuốc thử Kovac,s vào ống nghiệm. Đọc kết quả: Vi khuẩn sinh indole cho phản ứng (+) với vòng màu hồng đến đỏ sậm bề mặt môi trường ngược lại. 2.7 Phản ứng tạo nitrite từ nitrate Dùng pipet tiệt trùng cho – giọt dung dịch vi khuẩn vào ống nghiệm có sẵn môi trường. Ủ tủ ấm 28-30oC. Sau 1-5 ngày nhỏ ml thuốc thử A ml thuốc thử B vào ống nghiệm. Đọc kết quả: Phản ứng (+) màu đỏ xuất khoảng – phút ngược lại. 2.8 Phản ứng voges – proskauer (VP) Dùng pipet tiệt trùng cho – giọt dung dịch vi khuẩn vào ống nghiệm. Ủ tủ ấm 28 – 300C. Sau – ngày nhỏ 0,6 ml thuốc thử A 0,2 ml thuốc thử B vào ống nghiệm. Lắc để nghiêng ống nghiệm 15 phút đến giờ. Đọc kết quả: Sau 10 – 15 phút phản ứng dương tính (+) môi trường có màu hồng ngược lại. 32 2.9 Định danh vi khuẩn (Sử dụng kit API 20E) Chuẩn bị Cho nước cất vào khuôn nhựa kít để giữ ẩm suốt trình ủ tủ ấm. Đặt kit API 20E vào khuôn nhựa. Pha dung dịch vi khuẩn Dùng que cấy tiệt trùng lấy khuẩn lạc cho vào 5ml nước cất nước muối sinh lý tiệt trùng, lắc đều. Thực Dùng pipet tiệt trùng hút dung dịch vi khuẩn cho vào đầy ô CIT, VP GEL. Tương tự cho vi khuẩn vào đầy ô (1/2 ô – dưới) ADH, LDC, ODC, H2S, URE, cho dầu paraffin tiệt trùng vào đầy (1/2 ô – trên) ô này. Hút dung dịch vi khuẩn cho vào ô (1/2 ô – dưới) lại. Đậy nắp khuôn nhựa ủ tủ ấm 26 – 280C. Kết (a) Cho giọt thuốc thử TDA vào ô TDA. (b) Lần lượt cho giọt thuốc thử VP1 giọt thuốc thử VP2 vào ô VP. (c) Cho giọt thuốc thử IND vào ô IND. 33 Kết kiểm tra kít API 20E Chỉ tiêu Chất Âm tính Dương tính ONPG Ortho-nitrophenyl galactosidase Không màu Vàng ADH Arginine Vàng Đỏ/cam LDC Lysine Vàng Cam ODC Ornithine Vàng Đỏ CIT Sodium Citrate Vàng Xanh/xanh H2 S Sodium Thiosulphate Không màu Đen URE Urea Vàng Đỏ/cam TDA Tryptophane Vàng Nâu sậm IND Tryptophane Vàng Đỏ (2 phút) Sodium Pyruvate Không màu Hồng/Đỏ (10 giây) Gelatin Kết tủa đen Màu đen hòa tan GLU Glucose Xanh/Xanh Vàng MAN Mannitol Xanh/ Xanh Vàng INO Inositol Xanh/Xanh Vàng SOR Sorbitol Xanh/Xanh Vàng RHA Rhamnose Xanh/Xanh Vàng SAC Sucrose Xanh/Xanh Vàng MEL Melibiose Xanh/Xanh Vàng AMY Amygdalin Xanh/Xanh Vàng ARA Arabinose Xanh/Xanh Vàng VP GEL 34 PHỤ LỤC B Các loại kháng sinh tiêu chuẩn tính kết đường kính vô khuẩn TT Tên kháng sinh Hàm (µg) Chuẩn đường kính vô trùng lượng (mm) Kháng Trung bình Nhạy Nhóm β- Lactam 01 Amoxicillin 10 ≤13 14-16 ≥17 02 Ampicillin 10 ≤13 14-17 ≥18 03 Cefotaxime 30 ≤22 23-25 ≥26 ≤12 13-17 ≥18 30 ≤16 17-19 ≥20 Nhóm fenicol 04 Chloramfenicol 05 Florfenicol Nhóm quinolone 06 Ciprofloxacin ≤15 16-20 ≥21 07 Enrofloxacin ≤16 17-22 ≥23 08 Norfloxacin ≤12 13-16 ≥17 Nhóm tetracycline 09 Doxycyline 30 ≤12 13-15 ≥16 10 Tetracycline 30 ≤14 15-18 ≥19 Nhóm aminoglycoside 11 Gentamicin 10 ≤12 13-14 ≥15 12 Streptomycin 10 ≤11 12-14 ≥15 13 Neomycin 30 ≤12 13-16 ≥17 Nhóm khác 14 Trimethorime+sulfamethoxazol 1.25/23.75 ≤10 11-15 ≥16 15 Trimethoprim ≤10 11-15 ≥16 Nguồn: Clinical and Laboratory Standards Institute (2006) 35 PHỤ LỤC C PHIẾU ĐIỀU TRA THÔNG TIN XUẤT HIỆN BỆNH TRÊN CÁ  Thông tin hộ nuôi: Họ tên hộ nuôi: .điện thoại: địa chỉ: . Tổng diện tích nuôi .số ao nuôi: .diện tích mổi ao: Kinh nghiệm nuôi cá chủ hộ (bao nhiêu năm) .số vụ nuôi/năm: . Thông tin cao trình nuôi: Hình dạng ao: nguồn nước cấp: độ sâu: Hệ thống cấp thoát nước (riêng/chung số lượng bao nhiêu): . Ao lắng (có/không, diện tích): .  Thông tin kỹ thuật nuôi: Cải tạo ao (trước hay sau vụ nuôi): Hóa chất liều lượng sử dụng trình cải tạo: Mùa vụ thả giống: kích cở giống: Nguồn giống (tự nhiên/nhân tạo, đâu): .mật độ thả: Xử ký giống trước thả (có/không): cách xử lý . Thức ăn (loại thức ăn, hàm lượng đạm): cách cho ăn: .số lần cho ăn . Chế độ thay nước (%): .số lần thay nước: Xử lý nước nuôi loại sử dụng: . Hút bùn trước nuôi (có/không): giai đoạn cá: .  Thông tin tình hình xuất bệnh cá: . Bệnh xuất vụ nuôi trước (có hay không) .giai đoạn: . Mùa vụ bệnh thường xuất bệnh: mức độ thiệt hại (%): Biểu (triệu chứng) bệnh: . Thuốc (hóa chất) liều lượng dùng để điều trị bệnh: . Cách dùng thuốc (hóa chất) để điều trị: hiệu điều trị: . Các yếu tố khác có liên quan: Chủ hộ Người thu mẫu cá bệnh 36 PHỤ LỤC D Bảng thông tin điều tra hộ nuôi STT Tỉnh/Tp Quận/huyện Tên chủ hộ Số ao (vèo) nuôi Số chủng vi khuẩn Cần thơ Vĩnh Thạnh Chú Vũ (vèo) Vĩnh Thạnh Cô Em (vèo) Vĩnh Thạnh Chú Long (ao) Vĩnh Thạnh Anh Cường (vèo) Vĩnh Thạnh Anh Quốc (vèo) ĐTTT Vĩnh Thạnh Chú Minh (vèo) ĐTTT Trà Cú Chú Ánl (ao) Trà Cú Anh Chánh (ao) Trà Cú Anh Long (ao) 10 Trà Cú Cô Xuân (ao) 11 Trà Cú Cô (ao) 12 Trà Cú Anh Đoàn (ao) 13 Trà Cú Chú Phương (ao) Trà Vinh Ghi chú: ĐTTT: hộ điều tra thông tin (không thu mẫu). 37 Ghi ĐTTT ĐTTT PHỤ LỤC E Các tiêu hình thái, sinh lý sinh hoá 33 chủng vi khuẩn STT Code Mã cá CCT1301 A1F3 Cơ quan Thận CCT1302 A1F4 Thận CCT1307 LTCIII1 Gan CCT1308 L1TC3 Thận CCT1309 LTCII2 Thận CTV1303 A1F1 Gan CTV1304 A1F2 Gan CTV1305 A2F1 Thận CTV1306 A2F3 Thận 10 CTV1310 A4F1 Gan 11 CTV1311 A4F2 Gan 12 CCT1312 CTA1 Thận 13 CCT1313 CTA2 Thận 14 CCT1314 CTA6 15 CCT1315 CTA8 Tuỳ tạng Não 16 CTV1316 TCI1 17 CTV1317 TCI2 Tuỳ tạng Thận 18 CTV1318 TCI3 Thận 19 CTV1319 TCII2 Thận 20 CTV1320 TCII3 Gan Gram Hình Khuẩn Oxidase Catalase O/F dạng lạc Que Vàng + + +/+ ngắn đục Que Vàng + + +/+ ngắn đục Cầu Trắng + +/+ + Cầu Trắng + -/trong Que Trắng + -/ngắn Que Vàng +/+ ngắn đục Que Vàng +/+ ngắn đục Que Trắng -/ngắn + Cầu Trắng -/trong Que Vàng + -/ngắn đục Que Trắng + + -/ngắn đục Que Hơi + + -/ngắn vàng Que Trắng + + -/ngắn đục Que Trắng + + +/ngắn đục Que Trắng + + +/+ ngắn đục Que Hơi + + +/+ ngắn vàng Que Trắng + +/+ ngắn Que Trắng + + +/+ ngắn đục Que Trắng + + +/+ ngắn đục Que Trắng + + +/+ ngắn đục 38 21 CTV1321 TCII5 - TCII6 Tuỳ tạng Gan CTV1323 TCIII1 Gan - 24 CTV1324 TCIII2 Thận - 25 CTV1325 TCIII3 Thận - 26 CTV1326 TCV1 Thận - 27 CTV1327 TCV2 Thận - 28 CTV1328 TCV6 Thận - 29 CTV1329 TCV7 Thận - Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que ngắn Cầu 22 CTV1322 23 30 CTV1330 DH1 - Cầu 31 CTV1331 DH2 - Cầu 32 CTV1332 DH4 Tuỳ tạng Tuỳ tạng Gan - Cầu 33 CTV1333 DH5 Thận - Que ngắn - Trắng đục Trắng Trắng Trắng Trắng Trắng Trắng Trắng Trắng Trắng Trắng Trắng đục Trắng đục + + +/+ - - +/+ + + -/- - + +/+ - + +/+ - + +/+ - + +/+ - + +/+ + + +/+ + + +/+ + - +/+ + + -/- + + +/+ -Chủng bệnh xuất huyết: CTV1303, CTV1304, CTV1305, CCT1306, CCT1308, CCT1309, CTV1310, CTV1311, CCT1312, CCT1313, CCT1314, CCT1315, CTV1316, CTV1322, CTV1323, CTV1327, CTV1328, CTV1329. -Chủng bệnh gan, thận mủ: CCT1301, CCT1302, CCT1307, CTV1317, CTV1318, CTV1319, CTV1320, CTV1321, CTV1324, CTV1325, CTV1326, CTV1330, CTV1331, CTV1332, CTV1333. 39 PHỤ LỤC F Kết kháng sinh đồ 10 chủng vi khuẩn STT Vi khuẩn Địa AMC AMP CTX DO ENR FFC NV RD SXT UB điểm CTV1303 TV I I R S I I R I I I CTV1304 TV I I R S I I R I I I CTV1305 TV I I I I I I I I I S CCT1309 CT S S I I I R I I R I CTV1310 TV I R R I S I R I I I CTV1311 TV I R I I S I R R R I CCT1313 CT I R I I S R R R R S CCT1315 CT I R I I S R R I R I CTV1316 TV I R S I R I R R R R 10 CTV1323 TV I R I I R I R R R R Ghi chú: TV: Trà Vinh – CT: Cần Thơ R - Kháng; S - Nhạy Trung Bình; I - Nhạy 40 PHỤ LỤC G Kết kiểm tra tiêu sinh hóa chủng vi khuẩn Vi khuẩn Chỉ tiêu CTV1304 CTV1310 CTV1311 CCT1313 ONPG + + - - ADH + + + LDC + - ODC - |CIT| CCT1315 CTV1316 CTV1323 - - - + + + + - - - - - - - - - - - + + + - - - - H2S - - - - - - - URE + - - - - - - TDA - - - - - - - IND - - + - - - - |VP| + + - - - - - |GEL| + + + + + + + GLU + + + + + + + MAN + + - - - - + INO - - - - - - - SOR - - - - - - - RHA - - - - - - - SAC + + - - - - + MEL - - - - - - - AMY + + - - - - + ARA - - - - - - - Ghi chú: (+) phản ứng dương tính; (-) phản ứng âm tính Chủng phân lập Cần Thơ: CCT1309, CCT1313, CCT1315 Chủng phân lập Trà Vinh: CTV1303, CTV1304, CTV1305, CTV1310, CTV1311, CTV1316, CTV1323 41 PHỤ LỤC H DANH MỤC HOÁ CHẤT, KHÁNG SINH CẤM SỬ DỤNG TRONG SẢN XUẤT, KINH DOANH THỦY SẢN ( Ban hành kèm theo Thông tư số 15/2009/TT-BNN ngày 17 tháng năm 2009 Bộ trưởng Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn) Tên hoá chất, kháng sinh Đối tượng áp dụng TT Aristolochia spp chế phẩm từ chúng Chloramphenicol Chloroform Chlorpromazine Colchicine Dapsone Dimetridazole Metronidazole Nitrofuran (bao gồm Furazolidone) 10 Ronidazole 11 Green Malachite (Xanh Malachite) 12 Ipronidazole 13 Các Nitroimidazole khác 14 Clenbuterol 15 Diethylstilbestrol (DES) 16 Glycopeptides 17 Trichlorfon (Dipterex) 18 Gentian Violet (Crystal violet) 19 Nhóm Fluoroquinolones (cấm sử dụng sản xuất, kinh doanh thuỷ sản xuất vào thị trường Mỹ Bắc Mỹ) 42 Thức ăn, thuốc thú y, hoá chất, chất xử lý môi trường, chất tẩy rửa khử trùng, chất bảo quản, kem bôi da tay tất khâu sản xuất giống, nuôi trồng động thực vật nước lưỡng cư, dịch vụ nghề cá bảo quản, chế biến. PHỤ LỤC I DANH MỤC HOÁ CHẤT, KHÁNG SINH HẠN CHẾ SỬ DỤNG TRONG SẢN XUẤT KINH DOANH THỦY SẢN (Ban hành kèm theo Thông tư số 15/2009/TT-BNN ngày 17 tháng năm 2009 Bộ trưởng Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn) TT Tên hoá chất, kháng sinh Dư lượng tối đa (MRL)(ppb) 50 50 50 300 300 300 100 150 50 10 1000 500 100 200 50 100 1000 100 500 500 300 100 100 100 100 50 50 15-330 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 Amoxicillin Ampicillin Benzylpenicillin Cloxacillin Dicloxacillin Oxacillin Oxolinic Acid Colistin Cypermethrim Deltamethrin Diflubenzuron Teflubenzuron Emamectin Erythromycine Tilmicosin Tylosin Florfenicol Lincomycine Neomycine Paromomycin Spectinomycin Chlortetracycline Oxytetracycline Tetracycline Sulfonamide (các loại) Trimethoprim Ormetoprim Tricainemethanesulfonate 29 Danofloxacin 100 30 Difloxacin 300 31 32 Enrofloxacin + Ciprofloxacin Sarafloxacin 100 30 43 PHỤ LỤC J BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG THÔN Số: 03 /2012/TT-BNNPTNT CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc Hà Nội, ngày 16 tháng 01 năm 2012 THÔNG TƯ Sửa đổi, bổ sung Thông tư số 15/2009/TT-BNN ngày 17/3/2009 Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn ban hành Danh mục thuốc, hoá chất, kháng sinh cấm sử dụng, hạn chế sử dụng Căn Nghị định số 01/2008/NĐ-CP ngày 03 tháng 01 năm 2008 Chính phủ quy định chức năng, nhiệm vụ, quyền hạn cấu tổ chức Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn; Căn Nghị định 75/2009/NĐ-CP ngày 10/9/2009 Chính phủ sửa đổi Điều Nghị định 01/2008/NĐ-CP ngày 03/01/2008 quy định chức nhiệm vụ, quyền hạn cấu tổ chức Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn; Căn Pháp lệnh Thú y 2004; Căn Nghị định 33/2005/NĐ-CP ngày 15/3/2005 Chính phủ qui định chi tiết thi hành số Điều Pháp lệnh Thú y; Căn Nghị định 119/2008/NĐ-CP ngày 28/11/2008 Chính phủ sửa đổi, bổ sung số Điều Nghị định 33/2005/NĐ-CP ngày 15/3/2005 Chính phủ quy định chi tiết thi hành số Điều Pháp lệnh Thú y; Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn sửa đổi, bổ sung Thông tư số 15/2009/TT-BNN ngày 17/3/2009 Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn ban hành Danh mục thuốc, hoá chất, kháng sinh cấm sử dụng, hạn chế sử dụng sau: Điều 1. Đưa chất Cypermethrim, Deltamethrin Enrofloxacin khỏi Danh mục hoá chất, kháng sinh hạn chế sử dụng sản xuất, kinh doanh thuỷ sản Phụ lục ban hành kèm theo Thông tư số 15/2009/TT-BNN ngày 17/3/2009 Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn. Điều 2. Bổ sung chất Cypermethrin, Deltamethrin Enrofloxacin vào Danh mục hoá chất, kháng sinh cấm sử dụng sản xuất, kinh doanh thuỷ sản Phụ lục ban hành kèm theo Thông tư số 15/2009/TT-BNN ngày 17/3/2009 Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn. Điều 3. Thông tư có hiệu lực thi hành sau 45 ngày kể từ ngày ký. Điều 4. Chánh Văn phòng, Tổng cục trưởng Tổng cục Thuỷ sản, Cục trưởng Cục Thú y, Thủ trưởng đơn vị có liên quan thuộc Bộ; Giám đốc Sở Nông nghiệp PTNT; tổ chức, cá nhân nước, nước có hoạt động liên quan đến sản xuất, kinh doanh thuỷ sản chịu trách nhiệm thi hành Thông tư này. Nơi nhận: KT, BỘ TRƯỞNG - Như Điều 4; THỨ TRƯỞNG - Văn phòng Chính phủ (Phòng công báo, Website CP); - Cục Kiểm tra văn Bộ Tư pháp; - Vụ Pháp chế - Bộ NN&PTNT; (Đã ký) Vũ Văn Tám 44 [...]... Mục tiêu của đề tài Đánh giá sự kháng thuốc kháng sinh của một số mầm vi khuẩn, gây bệnh trên cá lóc (Channa striata) nuôi thâm canh đã được phân lập ở tỉnh Trà Vinh và Cần Thơ Nhằm tìm ra loại thuốc kháng sinh có hiệu quả cao trong điều trị 1.3 Nội dung của đề tài  Thu mẫu và định danh vi khuẩn gây bệnh trên cá lóc ở tỉnh Trà Vinh và Cần Thơ  Kiểm tra khả năng kháng thuốc kháng sinh của vi khuẩn gây... sinh đồ, đề tài còn xác định được sự đa kháng thuốc kháng sinh (vi khuẩn kháng cùng lúc nhiều loại kháng sinh, ít nhất là 3 loại kháng sinh) , với 10 loại thuốc kháng thì vi khuẩn A hydrophila có kiểu hình đa kháng 3-6 loại thuốc kháng sinh (phụ lục F) Kết quả cho thấy, sự đa kháng thuốc của các chủng vi khuẩn (kháng trên 3 loại kháng sinh) có tỉ lệ tương đối thấp Tỷ lệ đa kháng này tương đồng so với những... trong nguyên sinh chất của tế bào vi khuẩn Do được quy định bởi gen nên vi khuẩn kháng thuốc có thể truyền cho thế hệ sau khả năng kháng thuốc của nó (Prescott et al., 2000) Sự đề kháng thuốc kháng sinh của vi khuẩn có 2 dạng: Kháng thuốc tự nhiên: Đề kháng tự nhiên đối với một loại kháng sinh nào đó là do bản chất nội tại hay có sẵn của vi khuẩn, tức là tình trạng giống hoặc một loài vi khuẩn nào đó... những năm 50 của thế kỉ 20 các nhà khoa học Nhật Bản đã nghiên cứu sự lan truyền rộng rãi của các loài vi khuẩn kháng cùng lúc nhiều loại thuốc kháng sinh thông dụng 6 Kháng thuốc của vi khuẩn là hiện tượng một chủng vi khuẩn nào đó có khả năng chống lại tác dụng ức chế, kìm hãm, tiêu diệt của một số loại kháng sinh đối với vi khuẩn đó Khả năng kháng thuốc này được qui định bởi gen kháng thuốc gọi là... giảm hấp thu kháng sinh vào tế bào vi khuẩn (Tenover, 2006) Khi dùng kháng sinh ở nồng độ thấp kéo dài sẽ tạo các chủng vi khuẩn kháng thuốc Ngoài ra, khi dùng ở nồng độ thấp hơn nồng độ ức chế tối thiểu của kháng sinh đó thì có thể kích thích vi khuẩn gây bệnh phát triển 2.2.2 Cơ chế tác động của thuốc kháng sinh Hiện nay có nhiều giả thuyết khác nhau về cơ chế tác động của kháng sinh lên vi khuẩn nhưng... vệ sinh đúng cách Chính vi c sử dụng quá nhiều loại thuốc kháng sinh trong phòng và trị bệnh thủy sản nên vấn đề kháng thuốc kháng sinh ở các loài vi khuẩn trong thực tế là không thể tránh khỏi (Cabello, 2006) Từ lâu, các nhà khoa học đã quan tâm đến vấn đề kháng thuốc kháng sinh của vi khuẩn nói chung và vi khuẩn bệnh trong thủy sản nói riêng Hawke (1979) là nhà khoa học đầu tiên đã làm kháng sinh. .. hiện những vết loét trên bề mặt cơ thể là những triệu chứng phổ biến nhất Những vết loét dần mở rộng và phát triển làm tổn thương và hoại tử thường thấy ở khu vực hậu môn, mắt bị ảnh hưởng với tần số cao (Robinson and Meyer, 1966) 2.2 Sự kháng thuốc của vi khuẩn 2.2.1 Hiện tượng kháng thuốc kháng sinh của vi khuẩn Sự kháng thuốc của vi khuẩn nói chung và của vi khuẩn gây bệnh trên trên động vật thủy... tụ dư lượng kháng sinh trong sản phẩm thuỷ sản ảnh hưởng đến chất lượng sản phẩm xuất khẩu, nhất là không tốt cho sức khoẻ người tiêu dùng Xuất phát từ nhu cầu phòng và trị bệnh của người nuôi, đề tài Khảo sát sự kháng thuốc kháng sinh mầm vi khuẩn gây bệnh trên cá lóc (Channa striata)” được thực hiện nhằm cung cấp những thông tin mới nhất về sự kháng thuốc của vi khuẩn, góp phần cho vi c điều trị... tối thiểu của 41 chủng vi khuẩn E.ictalluri đối với 71 loại thuốc kháng sinh (trích dẫn bởi Tu Thanh Dung et al., 2008) 8 Ngoài ra, sự kháng thuốc của vi khuẩn trong thủy sản còn gặp ngay cả hệ vi khuẩn trong hệ tiêu hóa của cá tra khỏe gồm 3 dòng vi khuẩn Gram âm chiếm ưu thế: Enterobacteriaceae (41,9%), Pseudomonas (35,2%) và Vibrionaceae (15,7%) đã xuất hiện hiện tượng đa kháng kháng sinh (Sarter... cảm với kháng sinh Điều này có thể do vi khuẩn thiếu cấu trúc đích cho tác động của kháng sinh Chẳng hạn, vi khuẩn không có thành tế bào như Mycoplasma thì đề kháng tự nhiên với kháng sinh nhóm β-lactam Ngoài ra, đề kháng tự nhiên còn có thể do thành tế bào không cho kháng sinh thấm qua Vi khuẩn G- đề kháng tự nhiên với glycopeptide vì phân tử thuốc quá lớn, không qua màng vi khuẩn (http://uvvietnam.com.vn) . sinh trùng (KST) xuất hiện nhiều nhất (85 ,9%), kế đến là bệnh xuất huyết (55,9%) và một số bệnh khác như tuột nhớt (11 ,8% ), trắng mang (8, 5%), gan thận (7 ,8% ), Trong đó, giống như nghề nuôi cá. khuẩn 16 4.2 Kết quả định danh vi khuẩn 18 4.2.1 Kết quả xác định đặc điểm hình thái và một số chỉ tiêu sinh lý, sinh hoá 18 4.2.2 Kết quả định danh 18 4.3 Kết quả kháng sinh đồ 21 CHƯƠNG. nuôi trồng cả nước. Theo Tổng cục Thủy sản, tổng sản lượng thủy sản năm 2012 ước đạt 5 ,8 triệu tấn, tăng 8, 5% so với năm 2011. Trong đó, sản lượng khai thác đạt 2,6 triệu tấn, sản lượng nuôi