khảo sát mầm bệnh vibrio trong mô hình luân canh tôm lúa

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THUỶ SẢN LÊ TẤN HIẾU KHẢO SÁT MẦM BỆNH VIBRIO TRONG MÔ HÌNH LUÂN CANH TÔM - LÚA LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN 2014 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THUỶ SẢN LÊ TẤN HIẾU KHẢO SÁT MẦM BỆNH VIBRIO TRONG MÔ HÌNH LUÂN CANH TÔM - LÚA LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN TS.TRẦN THỊ TUYẾT HOA 2014 KHẢO SÁT MẦM BỆNH VIBRIO TRONG MÔ HÌNH LUÂN CANH TÔM LÚA Lê Tấn Hiếu Trần Thị Tuyết Hoa Bộ môn Bệnh học Thủy sản, Khoa Thủy sản, Trường Đại học Cần Thơ Email: hieu108225@student.ctu.edu.vn ABSTRACT In order to understand the positive impact of rice seed B-TE1 in limiting the growth of Vibrio in rice shrimp rotation system, the study was carried out in rice shrimp ponds in Bac Lieu, Ca Mau and Kien Giang provinces. The results recorded that (i) Vibrio densities in samples of pond water and mud samples in control ponds tend to increase towards the end of the crop. In contrast, Vibrio reduced density in the experimental ponds (grown rice seed B-TE1) and lower than control pond; (ii) the study did not detect Vibrio harveyi in shrimp samples collected in rice shrimp ponds in Bac Lieu, Ca Mau and Kien Giang provinces. Thereby, the results showed a positive impact of rice seed B-TE1 in limiting total Vibrio density in the rice- shrimp rotation system. Key words: rice shrimp rotation system, rice seed B-TE1, Vibrio harveyi, Vibrio TÓM TẮT Nhằm tìm hiểu tác động tích cực giống lúa B-TE1 việc hạn chế phát triển vi khuẩn Vibrio mô hình tôm lúa luân canh, nghiên cứu thực ao nuôi tôm lúa luân canh thuộc tỉnh Bạc Liêu, Cà Mau, Kiên Giang. Kết nghiên cứu ghi nhận: (i) mật độ vi khuẩn Vibrio mẫu nước mẫu bùn ao đối chứng có xu hướng tăng cao cuối vụ nuôi tôm. Ngược lại, ao thí nghiệm (trồng lúa B-TE1) mật độ vi khuẩn Vibrio giảm thấp ao đối chứng; (ii) nghiên cứu không phát Vibrio harveyi mẫu tôm thu ao tôm lúa tỉnh Bạc Liêu, Cà Mau, Kiên Giang. Qua đó, kết ghi nhận có tác động tích cực giống lúa B-TE1 việc hạn chế mật độ Vibrio tổng số mô hình tôm lúa luân canh. Từ khóa: mô hình tôm lúa luân canh, giống lúa B-TE1, Vibrio harveyi, Vibrio GIỚI THIỆU Tôm sú (Penaeus monodon) đối tượng thủy sản có giá trị thương phẩm cao đối tượng nuôi quan trọng nhiều quốc gia Trung Quốc, Ấn Độ, Thái Lan, Philippine, Việt Nam Ecuador. Trước đây, tôm sú nuôi vùng nước lợ mặn, mô hình nuôi luân canh tôm lúa áp dụng nhiều tỉnh Đồng Sông Cửu long. Mô hình tôm lúa luân canh không góp phần làm tăng kim ngạch xuất phát triển kinh tế xã hội mà tác động tích cực đến môi trường ao nuôi tôm. Thuận lợi mô hình luân canh tôm lúa mang lại cho trình nuôi tôm bao gồm: (i) trồng lúa đất nuôi tôm giúp cải tạo tốt môi trường ruộng nuôi; làm cân hệ sinh thái ruộng nuôi có phân bố hài hòa động thực vật, gốc rạ lúa phân hủy giúp cho hệ phiêu sinh vật phát triển, tạo thức ăn tự nhiên cho tôm, làm tăng độ phì nhiêu cho đất; (ii) góp phần cách ly, hạn chế phát triển loại virus, vi khuẩn làm suy giảm lưu chuyển mầm bệnh gây chết tôm (Nguồn: Công ty Bayer Việt Nam). Từ tháng 05 đến 11/2011 thông qua khảo sát 170 hộ nhằm phân tích trạng kỹ thuật kinh tế-xã hội mô hình tômlúa huyện giáp biển ba tỉnh Bạc Liêu, Cà Mau Kiên Giang, kết điều tra cho thấy bệnh đốm trắng, bệnh đầu vàng, bệnh đỏ thân, bện đen mang/đóng rong bệnh gan tụy mà người nuôi tôm nhận biết có tỷ lệ 40% số hộ nuôi tôm-lúa, tôm bệnh đốm trắng bệnh đầu vàng hai bệnh xuất với tỷ lệ cao, nguyên nhân gây bệnh tôm sú mô hình luân canh tôm-lúa nhiều yếu tố chất lượng giống, nguồn nước thời thiết (Nguyễn Công Thành & ctv, 2012). Theo Đặng Thị Hoàng Oanh Nguyễn Thanh Phương (2012) bệnh tôm dễ lây qua môi trường nước bị nhiễm bệnh từ giống. Một giống lúa khuyến cáo sử dụng cho mô hình nuôi luân canh tôm lúa giống lúa B-TE1 (công ty Bayer). Do vậy, để tìm hiểu ưu điểm giống lúa B-TE1 việc hạn chế mầm bệnh vi khuẩn trình nuôi tôm nghiên cứu “Khảo sát mầm bệnh Vibrio mô hình luân canh tôm lúa” thực hiện. VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghiên cứu Mẫu thu ao luân canh tôm lúa thuộc huyện Hồng Dân tỉnh Bạc Liêu; huyện Thới Bình tỉnh Cà Mau; huyện An Minh tỉnh Kiên Giang. Ở tỉnh, mẫu tôm mẫu bùn, nước thu từ ao đối chứng (trồng giống lúa địa phương: Bạc Liêu giống lúa OM 2395; Cà Mau giống lúa OM 2517; Kiên Giang giống lúa ST5) ao thí nghiệm (trồng giống lúa B-TE1). Ở ao thí nghiệm, mẫu bùn mẫu nước thu thời điểm (trước sạ lúa, thu hoạch lúa, thời điểm trước thả tôm giống, tháng sau thả tôm, tháng sau thả tôm, thu hoạch tôm) trữ lạnh phân tích vòng 24 giờ. Mẫu tôm (10 con/đợt) thu thời điểm (thời điểm thả tôm giống, tháng sau thả tôm, tháng sau thả tôm, thu hoạch tôm) trữ cồn 100% phân tích PCR. Lưu ý: Cà Mau trồng giống lúa B-TE1. 2.2 Phƣơng pháp thu mẫu Mẫu bùn thu vị trí trảng mương bao ống PVC tiệt trùng dung dịch cồn 70%. Mẫu nước thu vị trí kênh cấp (tầng đáy, tầng giữa, tầng mặt) tầng đáy (cách mặt nước ruộng nuôi khoảng 20-30cm). 2.3 Phƣơng pháp xác định mật độ Vibrio tổng số Mật độ Vibrio tổng số xác định phương pháp pha loãng đếm đĩa thạch TCBS (Thiosulfat Citrate Bile Salt Surcose). Cụ thể, mẫu nước/mẫu bùn ban đầu (nồng độ 100) pha loãng với nước muối 0,85% nồng độ khác nhau: 10-1, 10-2, 10-3. Sau hút 100µl từ nồng độ pha loãng mẫu nước/mẫu bùn cho vào đĩa môi trường TCBS, dùng que thủy tinh trãi đều, nồng độ lặp lại lần. Ủ đĩa môi trường 280C 24 xác định kết với công thức. Công thức xác định mật độ Vibrio tổng số Mật độ vi khuẩn (CFU/m1)= Số khuẩn lạc x độ pha loãng x 10 2.4 Phƣơng pháp PCR phát Vibrio harveyi tôm sú (Sun et al., 2009) Chiết tách ADN từ mẫu tôm bột/mang tôm dung dịch lysis buffer. Thực qui trình PCR với thành phần phản ứng (20µl): 1X PCR buffer; 1,5mM MgCl2; 200 µM dNTPs; 10pmol mồi F6 (5’- TGGATGTAAATGAGTTTGG-3’); 10pmol mồi R4 (5’CGTTACGATTATTTGATAG -3’); 1U Taq ADN polymerase 1µl mẫu ADN chiết tách. Chu kỳ nhiệt phản ứng 940C phút, 940C 40 giây, 520C phút, 720C 30 giây, chu kỳ lặp lại 30 lần, cuối 720C phút. Căn vào thang ADN 1kb plus (Invitrogen) để xác định trọng lượng phân tử mẫu phân tích. Kết ghi nhận: (i) mẫu đối chứng âm vạch, (ii) đối chứng dương vạch vị trí 159bp mẫu nhiễm vi khuẩn phát sáng Vibrio harveyi. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Mật độ vi khuẩn Vibrio mẫu nƣớc Do bố trí thí nghiệm ao kế cận nên nguồn nước cấp cho ao giống nhau. Kết ghi nhận điểm thí nghiệm thuộc tỉnh Bạc Liêu cho thấy mật độ vi khuẩn Vibrio tổng số diện mẫu nước vị trí kênh cấp tầng đáy thấp đợt trung bình 0,1- 0,3x102 CFU/ml (giai đoạn trồng lúa). Ở giai đoạn nuôi tôm, lúc thả giống mật số Vibrio tổng số ghi nhận kênh cấp 2,3x102 CFU/ml, ao đối chứng 1,55x102 CFU/ml, ao thí nghiệm 2,1x102 CFU/ml. Tuy nhiên, mật số Vibrio tổng số đợt ao thí nghiệm giảm xuống rõ rệt ( 0,15 x102 CFU/ml ao đối chứng 0,25 x102 CFU/ml ao thí nghiệm) thấp so với kênh cấp nước bên ao thí nghiệm (0,45 x102 CFU/ml) (Hình 1). Kết ghi nhận tương tự cho đợt thu mẫu với mật số Vibrio ao tôm lúa thấp so với kênh cấp nước. Như vậy, kết cho thấy mật số Vibrio ao nuôi tôm lúa (lúa địa phương lúa B- TE1) thấp so với mật số Vibrio kênh cấp nước thời điểm thu mẫu. Qua đó, cho thấy tác động tích cực mô hình tôm lúa việc giảm mật số vi khuẩn Vibrio gây hại cho tôm. Mật độ vi khuẩn (CFU/ml) 300 250 Kênh cấp 200 Ao ĐC 150 Ao TN 100 50 Đợt Đợt Đợt Đợt Đợt Đợt Hình 1. Mật độ vi khuẩn Vibrio mẫu nƣớc vị trí kênh cấp tầng đáy ruộng lúa tỉnh Bạc Liêu Kết ghi nhận điểm thí nghiệm thuộc tỉnh Cà Mau trình bày Hình 2. Mật độ vi khuẩn Vibrio tổng số diện mẫu nước vị trí kênh cấp tầng đáy có xu hướng tăng dần từ đợt đến đợt 4, thấp vào đầu vụ (đợt 1) trung bình 0,050,15x102 CFU/ml (Hình 2). Mật độ vi khuẩn Vibrio tăng cao đợt (1 tháng sau thả tôm) với mật số Vibrio tổng số ghi nhận vị trí kênh cấp 6,75x102 CFU/ml, ao đối chứng 4,75x102 CFU/ml, ao thí nghiệm 5,75x102 CFU/ml giảm xuống đợt 5. Tuy nhiên đợt thu mẫu cuối mật số Vibrio hai ao tăng cao đạt mật độ cao 12,75x102 Mật độ vi khuẩn (CFU/ml) 1400 1200 Kênh cấp 1000 Ao ĐC 800 Ao TN 600 400 200 Đợt Đợt Đợt Đợt Đợt Đợt Hình 2. Mật độ vi khuẩn Vibrio mẫu nƣớc vị trí kênh cấp tầng đáy ruộng lúa tỉnh Cà Mau CFU/ml. Như trường hợp không ghi nhận tác động tích cực giống lúa B-TE1 mô hình tôm lúa luân canh việc giảm mật số vi khuẩn gây hại tôm. 1400 Mật độ vi khuẩn (CFU/ml) 1200 1000 Kênh cấp Ao ĐC 800 Ao TN 600 400 200 Đợt Đợt Đợt Đợt Đợt Đợt Hình 3. Mật độ vi khuẩn Vibrio mẫu nƣớc vị trí kênh cấp tầng đáy ruộng lúa tỉnh Kiên Giang Kết ghi nhận điểm thí nghiệm thuộc tỉnh Kiên Giang trình bày Hình 3. Mật độ vi khuẩn Vibrio tổng số diện mẫu nước vị trí kênh cấp tầng đáy tăng dần theo thời gian nuôi tôm (đợt – đợt 6) nhiên mật số Vibrio ao thí nghiệm (trồng lúa B- TE1) thấp ao đối chứng (trồng lúa địa phương) (Hình 3). Ngoài ra, mật độ vi khuẩn Vibrio tăng cao cuối vụ ao đối chứng 8,65x102 CFU/ml cao ao thí nghiệm 3,2x102 CFU/ml. Ở điểm thí nghiệm Kiên Giang suốt vụ nuôi mật độ Vibrio ao thí nghiệm (trồng lúa B-TE1) thấp so ao đối chứng mật số ghi nhận cao thí nghiệm 3,2x102 CFU/ml. Theo tiêu chuẩn ngành mật số Vibrio [...]... thể xác định chính xác tỉ lệ nhiễm vi khuẩn phát sáng Vibrio harveyi gây bệnh trên tôm Triển khai nghiên cứu thêm nhiều địa bàn khác nhau hoặc các huyện trong 3 tỉnh Bạc Liêu, Cà Mau, Kiên Giang để có thể đánh giá chính xác và cụ thể sự tác động tích cực của giống lúa B-TE1 trong việc hạn chế mật độ Vibrio tổng số trong ruộng nuôi TÀI LIỆU THAM KHẢO Baticados, M.C.L., C.R Lavilla-Pitogo, E.R Cruz-Lacierda,... Zhang, F.F Bai, L Sun 2009 Identification of vhhP2, a novel genetic marker of Vibrio harveyi, and its application in the quick detection of V.harveyi from animal specimens and environmental Applied Microbiology 107, 1251-1257 Trương Hồng Liên, 2013 Khảo sát một số chỉ tiêu vi sinh có hại cho tôm sú nuôi trong mô hình tôm- lúa Luận văn tốt nghiệp đại học Weston, D.P 1996 Environmental considerations... shrimp Word Aquaculture Society, Baton Rouge, Lousiiana, USA Moriarty, D.J.W 1998 Control of luminous Vibrio species in Penaeid aquaculture ponds Aquaculture 164 : 351-358 Nguyễn Công Thành, Nguyễn Văn Hảo, Lê Xuân Sinh và Đặng Thị Phượng, 2012 Phân tích những rủi ro và hạn chế của mô hình luân canh tôm lúa đang áp dụng trên vùng bán đảo Cà Mau Kỷ yếu hội nghị toàn quốc Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí... chemical control of luminous bacteria Vibrio harveyi and V splendidus isolated from diseased Penaeus monodon larvae and rearing water Diseases of Aquatic Organisms 9:133- 139 Đặng Thị Hoàng Oanh, Đoàn Nhật Phương, Nguyễn Thị Thu Hằng, Nguyễn Thanh Phương, 2006 Xác định vị trí phân loại và khả năng kháng thuốc kháng sinh của vi khuẩn Vibrio phân lập từ hậu ấu trùng tôm sú (Penaeus monodon) Tạp chí nghiên... kháng sinh của vi khuẩn Vibrio phân lập từ hậu ấu trùng tôm sú (Penaeus monodon) Tạp chí nghiên cứu khoa học - Đại học Cần Thơ trang 42-52 Đặng Thị Hoàng Oanh và Nguyễn Thanh Phương, 2012 Các bệnh nguy hiểm trên tôm nuôi ở đồng bằng Sông Cửu Long Tạp chí nghiên cứu khoa học - Đại học Cần Thơ, trang 106-118 Gomez-Gil, B., a Roque and J Turnbull 2000 The use and selection of probiotic bacteria for use . Ao ĐC Bạc Liêu - - - - - - - - Cà Mau - - - - - - Kiên Giang - - - - - - - - Ghi chú: - kết quả âm tính Hình 4. Kết quả phát hiện vi khuẩn Vibrio harveyi bằng. hiểu về ưu điểm của giống lúa B-TE1 trong việc hạn chế mầm bệnh vi khuẩn trong quá trình nuôi tôm thì nghiên cứu Khảo sát mầm bệnh Vibrio trong mô hình luân canh tôm lúa được thực hiện. 2. việc hạn chế mật độ Vibrio tổng số trong mô hình tôm lúa luân canh. Từ khóa: mô hình tôm lúa luân canh, giống lúa B-TE1, Vibrio harveyi, Vibrio 1 GIỚI THIỆU Tôm sú (Penaeus monodon) là đối tượng