KỸ THUẬT XÁC ĐỊNH SALMONELLA TRÊN ĐĨA THẠCH, ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNGwww.hsph.edu.vn KỸ THUẬT XÁC ĐỊNH SALMONELLA TRÊN ĐĨA THẠCH... MỤC TIÊU • Trình bày được phạm vi áp dụng qui trình xác định Salmonella trên đĩa thạch.. • N

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG

www.hsph.edu.vn

KỸ THUẬT XÁC ĐỊNH SALMONELLA

TRÊN ĐĨA THẠCH

MỤC TIÊU

• Trình bày được phạm vi áp dụng qui trình xác định

Salmonella trên đĩa thạch.

• Nêu và thực hiện được các bước của qui trình xác định Salmonella trên đĩa thạch.

• Nhận định được kết quả của qui trình xác định

Salmonella trên đĩa thạch.

Phạm vi áp dụng

• Các sản phẩm dùng cho con người và thức ăn chăn nuôi

• Các mẫu môi trường khu vực sản xuất và xử lý thực

phẩm

Nguyên lý

• Phát hiện Salmonella trong mẫu thử bằng cách phân lập

và xác định các khuẩn lạc điển hình hoặc ít điển hình

trên môi trường chọn lọc kết hợp với các phản ứng sinh hoá đặc trưng trong phép thử khẳng định.

(-) (+) (+) (-)

Môi trường TSI

MT Hektoen enteric

• Đặc điểm sinh hóa:

 Lên men glucose và manitol

 Không lên men saccharose và lactose

 Không sinh indole

 Không phân giải ure

 Không có khả năng tách nhóm amine

từ tryptophan

 Hầu hết các chủng đều sinh hydro

sulfur (H 2 S).

TIẾN HÀNH

Chủng chuẩn

• Chứng dương: Salmonella typhimurium ATCC 14028

• Chứng âm: Escherichia coli ATCC 25922

Các chủng phải ở trạng thái hoạt hoá

Thuốc thử

• Thuốc thử cho các phản ứng thử sinh hóa:

- Thuốc thử Kovacs: Phản ứng sinh idol

- Thuốc thử Barritt: Phản ứng VP

Dung dịch A: 5% α-napthol trong cồn tuyệt đối (để tủ lạnh trước khi dùng)

Dung dịch B: 40% NaOH/KOH

Bước 1: Tiền tăng sinh trong

môi trường lỏng không chọn

Bước 3: Cấy chuyển lên môi

trường thạch chọn lọc

• Lấy một vòng que cấy dịch nuôi cấy từ môi

trường RV cấy chuyển lên hai đĩa môi trường:

thạch đỏ phenol lục sáng và Hektoen enteric

• Lấy một vòng que cấy dịch nuôi cấy từ môi

trường canh thang Tetrathionate, cấy chuyển lên hai đĩa môi trường: thạch đỏ phenol lục sáng và Hektoen Enteric

• Ủ ở 37oC / 21-27h.

Bước 4: Nhận dạng khuẩn lạc

Salmonella

• Trên thạch đỏ phenol lục sáng: khuẩn lạc đục,

làm thay đổi màu môi trường từ hồng sang đỏ.

• Trên thạch Hektoen Enteric: khuẩn lạc

Salmonella điển hình thường màu xanh, có tâm đen hoặc không.

• Lưu ý: Nếu Salmonella mọc yếu hoặc không có khuẩn

lạc điển hình thì phải ủ tiếp ở 35 – 37 o C trong 24 giờ

nữa và kiểm tra lại.

• Chọn tối thiểu 5 khuẩn lạc nghi ngờ cấy chuyển vào môi trường BHI hoặc TSA để thử phản ứng sinh hoá

www.hsph.edu.vn

Bước 5: Kiểm tra tính chất sinh

vật hóa học của Salmonella

• Lên men đường glucose (+), saccarose (-), lactose (-)

• Khả năng sinh H 2 S (+/-)

• Khả năng phân giải Ure (-)

• Khả năng sinh Indol (-)

• Lysin decarboxyl (+)

• Phản ứng VP (-)

Hình ảnh trên môi trường TSI

Kết quả phản ứng sinh Idol

Salmonella không sinh Indol

Câu hỏi thu hoạch

• Hãy sơ đồ hóa quy trình phân lập và xác định Salmonella trong thịt lợn?