Kỹ thuật phân tích vi sinh SHIGELLA

Kỹ thuật phân tích vi sinh SHIGELLA

GVHD: Văn Hồng Thiện Nhóm 5 Lớp DHPT7 Kỹ thuật phân tích Vi sinh: SHIGELLA Kỹ thuật phân tích Vi sinh: SHIGELLA TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP TP. HỒ CHÍ MINH KHOA CÔNG NGHỆ HÓA BỘ MÔN HÓA PHÂN TÍCH Nội dung http://cse.duytan.edu.vn 5. Báo cáo kết quả 4. Quy trình xác định 3. Môi trường và hóa chất 2. Nguyên tắc xác định Shigella 1. Tổng quan về Shigella 1. Tổng quan về Shigella − Bệnh lỵ trực khuẩn đã có từ rất lâu. − Nhưng phải tới năm 1896 trong một vụ dịch lỵ trực khuẩn ở Nhật, tác giả Shiga đã phát hiện mầm bệnh là Shigella shiga. − Năm 1900 Flexneri và Strong đã tìm ra Shigella flexneri. − Sau này Boyd, Lentz và nhiều tác giả khác đã tìm ra các chủng lỵ khác gây bệnh ở người. 1.1 Lịch sử hình thành 1.1 Định nghĩa về Shigella + Là Trực khuẩn Gram âm + Hiếu khí và kị khí tùy ý + Lên men glucose không sinh hơi + Hầu hết các loài không lên men và tạo axit từ lactose, dulcitol + Không sinh H 2 S + Không có enzym lysine decarboxylase 1.3 Phân loại Shigella − Shigella có kháng nguyên thân O, không có kháng nguyên H. Dựa vào kháng nguyên O và tính chất sinh hoá, Shigella được chia thành 4 nhóm với nhiều typ huyết thanh: + Nhóm A: S.dysenteriae: có 15 typ huyết thanh, đáng chú ý là S.dysenteriae typ 1 (Sh.shiga). + Nhóm B: S.flexneri (có 8 typ huyết thanh). + Nhóm C: S.boydii (có 19 typ huyết thanh). + Nhóm D: S.sonnei (có 1 typ huyết thanh). Nhóm A: Shigella dysenteriae − Không lên men được Mannitol. − Trong các chủng Shigella cần chú ý đến Sh. dysenteriae typ 1 (Shigella Shiga). Shigella shiga khác với những Shigella khác về 3 điểm quan trọng: + Thường gây nên những vụ dịch lớn và kéo dài. + Kháng kháng sinh xảy ra phổ biến hơn các chủng khác. + Thường gây bệnh lỵ nặng hơn, kéo dài hơn và gây tử vong nhiều hơn chủng khác. Nhóm C: Shigella boydii Nhóm D: Shigella sonnei − Có khả năng lên men Mannitol và sinh axit 1.4 Nguồn ô nhiễm Shigella vào thực phẩm − Nguồn nước − Nguồn nguyên liệu − Công nhân chế biến Các thực phẩm dễ nhiễm Shigella: 1.5 con đường lấy nhiễm http://cse.duytan.edu.vn 2. Nguyên tắc xác định Shigella [...]... Oxydase Cấy 0,1 mL dịch tăng sinh sang 10mL môi trường GN, ủ Cấy 0,1 mL dịch tăng sinh sang 10mL môi trường GN, ủ o 37 C, 16 - 20h o 37 C, 16 - 20h Thử nghiệm sinh hóa khẳng định Thử nghiệm sinh hóa khẳng định Phân lập khuẩn lạc đơn trên ít nhất 2 môi trường chọn lọc Phân lập khuẩn lạc đơn trên ít nhất 2 môi trường chọn lọc o phân biệt (T7A, MAC, XLD,HE, DC,…), ủ 37 C, 16 - 20h o phân biệt (T7A, MAC, XLD,HE,... 20h Kết luận: Shigella dương tính/âm tính trong 25g mẫu Kết luận: Shigella dương tính/âm tính trong 25g mẫu Chọn khuẩn lạc đặc trưng cho Shigella, cấy sang BHI hay Chọn khuẩn lạc đặc trưng cho Shigella, cấy sang BHI hay o TSA, ủ qua đêm ở 37 C o TSA, ủ qua đêm ở 37 C Thử nghiệm sinh hóa chuyên biệt và thực hiện ngưng kết Thử nghiệm sinh hóa chuyên biệt và thực hiện ngưng kết huyết thanh để phân loại huyết... thanh để phân loại - - 4.1 Tăng sinh −Có thể pha loãng mẫu trong bình tam giác, sau khi chỉnh pH, ủ các bình này ở điều kiện kỵ khí ở nhiệt độ và thời gian như trên 25g mẫu −Sau đó chuyển sang tăng sinh chọn lọc: o Chuyển 0.1mL canh tăng sinh GN, ủ ở 37 C trong 16-20h 225mL canh Tryptone Đồng nhất mẫu, chỉnh pH về 7 o Buộc miệng túi Ủ ở 37 C, 1620h http://cse.duytan.edu.vn 4.2 Phân lập Khuẩn lạc Shigella. .. Thử nghiệm sinh hóa và huyết thanh  Thử nghiệm khẳng định: Thử nghiệm hóa sinh Kết quả Thử nghiệm hóa sinh Kết quả Simmon citrate - Salicine - Arginine decarboxylase - Xylose - Lisine decarboxylase - Cellobiose - Urease - Adonitol - Malonate - Dulcitol - MR + Inositol - VP - http://cse.duytan.edu.vn 4.3 Thử nghiệm sinh hóa và huyết thanh  Thực hiện phản ứng sinh hóa đặc trưng: Đặc trưng sinh hóa S.dysenteriae... hơi vàng sau đó chuyển màu xanh nhat • MAC: có màu đỏ, trong suốt 4.2 Phân lập Khuẩn lạc Shigella trong các môi trường • XLD: có màu đỏ, trong suốt 4.2 Phân lập Khuẩn lạc Shigella trong các môi trường • Deoxycholate Citrat Agar: môi trường có màu đỏ cam hơi đục sau đó chuyển sang màu đỏ nhạt • HE: có màu xanh nhạt 4.3 Thử nghiệm sinh hóa và huyết thanh  Từ khuẩn lạc nghi ngờ, lấy ít nhất 5 khuẩn lạc... Lưu ý: một số Shigella tạo thành kháng nguyên bề mặt (K) che đi kháng nguyên O làm phản ứng ngưng kết không diễn ra, vì thế cần đun sôi dịch vi khuẩn trong khoảng 30 phút để loại bỏ kháng nguyên bề mặt Sau đó tiến hành thử nghiệm ngưng kết http://cse.duytan.edu.vn Khuẩn lạc Shigella http://cse.duytan.edu.vn 5 Báo cáo kết quả Kết quả được báo cáo dưới dạng phát hiện hay không phát hiện Shigella trong... kháng huyết thanh đa giá polyvalent A, B, C, D http://cse.duytan.edu.vn 4 Quy trình phát hiện và định danh Shigella trong thực phẩm o Đồng nhất 25g mẫu trong 225 mL TSB, pH=7,2, ủ 37 C, 16 o Đồng nhất 25g mẫu trong 225 mL TSB, pH=7,2, ủ 37 C, 16 - 20h - 20h Thử nghiệm sinh hóa cho kết quả: Thử nghiệm sinh hóa cho kết quả: KIA hoặc TSI: KIA hoặc TSI: đỏ/vàng/H2S(-)/gas(-) đỏ/vàng/H2S(-)/gas(-) Di động trong... quả được báo cáo dưới dạng phát hiện hay không phát hiện Shigella trong 25 g mẫu Chú ý Shigella là nhóm chứa dòng gây Tuân thủ triệt để các biện pháp an bệnh nguy hiểm có thể gây triệu toàn chứng ở mật độ xâm nhiễm rất Salmonella đối chứng (+) và phân lập thấp Hấp khử trùng môi trường và mẫu vật khi trước khi rửa làm vi c với chủng Tài liệu tham khảo  Bải giảng lỵ trực khuẩn (shigellosis) http:// www.dieutri.vn/bgtruyennhiem/2-11-2012/S2971/Bai-giang-ly-tr... S.sonnei Sinh khí từ glucose - - - - β-galactose +/- - +/- + Ornithin decarboxylate - - - + Indol +/- +/- - - Acid từ dulcitol - - - - Lactose - - - + Mannitol - + + + Raffinose - +/- - + Saccharose - - - + Xylose - - - - http://cse.duytan.edu.vn 4.4 Khẳng định bằng thử nghiệm kháng huyết thanh − Các huyết thanh đa giá được nuôi từ môi trường không chọn lọc, tiến hành các đối chứng (-) với nước muối sinh . Thiện Nhóm 5 Lớp DHPT7 Kỹ thuật phân tích Vi sinh: SHIGELLA Kỹ thuật phân tích Vi sinh: SHIGELLA TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP TP. HỒ CHÍ MINH KHOA CÔNG NGHỆ HÓA BỘ MÔN HÓA PHÂN TÍCH Nội dung http://cse.duytan.edu.vn 5 để phân loại Kết luận: Shigella dương tính/âm tính trong 25g mẫu Kết luận: Shigella dương tính/âm tính trong 25g mẫu Thử nghiệm sinh hóa khẳng định Thử nghiệm sinh hóa khẳng định Thử nghiệm sinh. thanh). Nhóm A: Shigella dysenteriae − Không lên men được Mannitol. − Trong các chủng Shigella cần chú ý đến Sh. dysenteriae typ 1 (Shigella Shiga). Shigella shiga khác với những Shigella khác