Nghiên cứu khả năng chống tăng Lipid máu của một số hợp chất tự nhiên từ dịch chiết vỏ quả và chất nhầy vỏ hạt cam sành (Citrus nobilis.l.) trên mô hình chuột béo phì

Ngày nay, điều kiện sống của người dân được nâng cao, điều này cũng kéo theo một số loại bệnh có tác động tiêu cực đến chất lượng cuộc sống của con người, trong số đó có bệnh liên quan đ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI 2

NguyÔn duy th¾ng

Nghiªn cøu kh¶ n¨ng chèng t¨ng lipid m¸u cña mét sè hîp chÊt tù nhiªn tõ dÞch chiÕt vá qu¶ vµ chÊt

nhÇy vá h¹t cam sµnh (Citrus nobilis

LUẬN VĂN THẠC SĨ sinh häc

Hà Nội, 2009

mở đầu

1 Lý do chọn đề tài

Tổ chức Y tế thế giới (WHO) định nghĩa: Thừa cân và béo phì là tình trạng tích luỹ mỡ quá mức và không bình thường tại một vùng cơ thể hay toàn thân đến mức ảnh hưởng tới sức khoẻ Béo phì là tình trạng sức khoẻ có nguyên nhân dinh dưỡng rối loạn trao đổi Lipid và Glucid

Đái tháo đừơng và béo phì là các bệnh rối loạn chuyển hoá nội tiết thường gặp.Theo thống kê của WHO đái tháo đường type 2 chiếm khoảng 85-95% tổng số người mắc bệnh đái tháo đường Đái tháo đường và béo phì là 2 biểu hiện bệnh có mối quan hệ bệnh lý khá chặt chẽ với nhau Béo phì thường

co nguy cơ dẫn đến nhiều căn bệnh khác liên quan như : tăng huyết áp, nhiễm

mỡ máu… và tình trạng kháng Insuline[3],[13]

Hiện nay tình trạng thừa cân và béo phì đang tăng lên với tốc độ báo

động không những ở các quốc gia phát triển mà cả ở các quốc gia đang phát triển Đây thực sự là mối đe doạ tiềm ẩn trong tương lai đối với nhiều bệnh rối loạn trao đổi chất (đái tháo đường) và tim mạch (đột quỵ, nhồi máu cơ tim) Việt Nam là một nước khí hậu nhiệt đới với nguồn tài nguyên thiên nhiên nói chung và thực vật nói riêng rất đa dạng phong phú Nước ta lại có nền y học cổ truyền dân tộc từ lâu đời Từ xa xưa, nhân dân ta đã biết sử dụng những cây cỏ có sẵn xung quanh như là một nguồn dược liệu để chữa bệnh và nâng cao sức khoẻ Ngày nay, điều kiện sống của người dân được nâng cao, điều này cũng kéo theo một số loại bệnh có tác động tiêu cực đến chất lượng cuộc sống của con người, trong số đó có bệnh liên quan đến trao đổi lipid – glucid

và bệnh béo phì Y học hiện đại ngày nay có nhiều loại thuốc chống béo phì

và rối loạn trao đổi lipid – glucid như : Metformin, Fluoxiten … Tuy nhiên chúng thường có tác dụng phụ không mong muốn Vấn đề đặt ra cho y học là

nghiên cứu phát triển các loại thuốc có nguồn gốc từ thảo dược, đặc biệt là ở các nước đang phát triển và nguyên liệu sẵn có, rẻ tiền và ít tác dụng phụ Chính vì vậy tôi lựa chọn đề tài:

“Nghiên cứu khả năng chống tăng lipid máu của một số hợp chất tự nhiên

từ dịch chiết vỏ quả và chất nhầy vỏ hạt cam sành( Citrus nobilis L.) trên

mô hình chuột béo phì”

2 Mục đích nghiên cứu

Nghiên cứu tác dụng chống tăng lipid máu trên mô hình chuột béo phì thực nghiệm của một số hợp chất tự nhiên từ dịch chiết vỏ quả và chất nhầy vỏ hạt cam

3 Nhiệm vụ nghiên cứu

Những vấn đề chính cần tập trung nghiên cứu giải quyết

- Thăm dò khả năng tách các hợp chất phenol bằng một số dung môi

- Định tính và định lượng các hợp chất phenol bằng các phương pháp hoá học đặc trưng, bằng kỹ thuật sắc kí lớp mỏng, kỹ thuật định lượng với hoá chất Folin Ciocalteau

- Tạo mô hình chuột bị bệnh béo phì và rối loạn trao đổi chất lipid( làm tăng các chỉ số mỡ), rối loạn trao đổ glucid( đái tháo đường type 2)

- Xác định các chỉ số mỡ máu ở chuột béo phì như: cholesterol tổng số, triglycerid, LDL(lipid tỉ trọng thấp), HDL(lipid tỉ trọng cao), glucose

- Nghiên cứu khả năng chống tăng lipid máu của một số phân đoạn dịch chiết trên mô hình chuột béo phì được điều trị bằng đường uống lặp lại 2 tuần(14 ngày)

- Xác định các chỉ tiêu mỡ máu và đường huyết sau điều trị bằng dịch chiết vỏ quả và chất nhầy vỏ hạt cam sành

4 Đối tượng nghiên cứu

- Mẫu vỏ quả cam sành( Citrus nobilis.L.) họ Rutaceae và chất nhầy bao

quanh hạt cam

- Động vật thí nghiệm : chuột nhắt chủng Swiss(Mus musculus) 4 tuần

tuổi, khối lượng trung bình 14g được nuôi tiếp và phân thành các lô (6con/1lô) cho ăn theo hai chế độ khác nhau: ăn thức ăn chuẩn(thức ăn của Viện vệ sinh Dịch tễ TW) và ăn chế độ giàu chất béo (cholesterol và lipid) được phối chế theo tiêu chuẩn của Viện Dinh dưỡng Quốc gia và tham khảo theo tài liệu [19],[21]

5 Phương pháp nghiên cứu

- Phương pháp tách chiết các phân đoạn dịch chiết vỏ quả và chất nhầy hạt Cam sành Vỏ được nghiền thành bột, hạt tươi ngâm trong nước nóng 600tách lấy chất nhớt ngâm riêng trong etanol 90% thu được dịch chiết Cô cạn dịch chiết thô thu được 2 loại cao phân đoạn EtOH Cao phân đoạn EtOH sau khi hoà tan lại trong nước cất được chiết qua các loại dung môi có độ phân cực tăng dần: n-hexan; CHCl3; EtOAc Cất loại dung môi thu được sau khi chiết thu lấy cao của các phân đoạn

- Định tính một số nhóm hợp chất tự nhiên trong dịch chiết vỏ quả và chất nhầy vỏ hạt cam sành bằng phương pháp hoá học: định tính flavonoid,

định tính tanin, định tính các poliphenol khác, định tính glycoside bằng các thuốc thử đặc hiệu

- Phân tích thành phần các hợp chất tự nhiên bằng sắc ký lớp mỏng

- Định lượng poliphenol tổng số theo phương pháp Folin – Ciocalteau

- Tạo mô hình chuột béo phì thực nghiệm

- Nghiên cứu tác dụng của một số phân đoạn dịch chiết vỏ quả Cam sành lên trọng lượng và một số chỉ số hoá sinh trên mô hình chuột nuôi béo phì thực nghiệm Theo dõi sự biến động của:

- Trọng lượng cơ thể

- Các chỉ số hoá sinh máu: glucose, cholesterol, triglycerit, lipase

6 Giả thiết khoa học: (dự kiến kết quả)

- Đưa ra quy trình tách chiết một số hợp chất tự nhiên từ vỏ cam bằng các dung môi khác nhau

- Phân lập định tính các hợp chất tự nhiên bằng sắc ký lớp mỏng và các phản ứng hoá học đặc trưng

- Tạo mô hình chuột béo phì thực nghiệm

- Đánh giá khả năng sử dụng dịch chiết vỏ cam làm giảm mỡ máu và chống rối loạn trao đổi chất glucid và lipid bằng phân tích các chỉ số mỡ máu,

đường huyết, xác định khối lượng cơ thể chuột

Chương 1 tổng quan tài liệu 1.1 Cây cam sành - [2], [5], [9 ]

Cây cam sành có tên khoa học là Citrus nobilis.L, là một loài cây ăn quả thuộc

họ Cam (Rutaceae)

1.1.1 Đặc điểm sinh học, phân bố của cây cam sành. [2], [5], [9 ]

Cây cam sành có nguồn gốc từ khu vực nhiệt đới và cận nhiệt đới ở đông nam châu á Cam sành là cây bụi lớn, cao 2-3m, phân cành thấp Lá xanh đậm, mọc so le dài 5-10 cm, mép lá răng thưa, cuống lá hơi có cánh Chùm hoa ngắn có lách lá, đơn

độc hay nhóm 2-6 hoa; đài hoa hình chén không lông; cánh hoa trắng dài 1,5-2cm, nhị 20-30 dính nhau thành 4-5 bó Quả cam sành rất dễ nhận ra nhờ lớp vỏ dầy, sần sùi và thường có màu lục nhạt khi chín có sắc cam Quả là loại quả có múi, dạng quả mọng hình cầu, bên trong quả khi bóc lớp vỏ sẽ thấy lớp vỏ mỏng bao quanh các múi bên trong chứa nhiều tép mọng nước, có màu cam , có vị ngọt và chua Hạt có chất nhầy bao quanh Cây ra hoa quả quanh năm quả thường thu hoạch vào tháng 10,11,12,1

Hình 1 1 Cây cam sành

Việt Nam cam sành được trồng ở nhiều nơi, ở miền Bắc có cam sành Bố Hạ, huyện Yên Thế, tỉnh Bắc Giang Cam sành Bố Hạ phù hợp với đất phù sa cổ, khí hậu mát mẻ Cam sành Hà Giang-Tuyên Quang- Yên Bái là vùng cam chủ yếu của các tỉnh phía Bắc, năng suất cao, quả được thu hoạch vào dịp tết

Tại miền Nam Việt Nam, cam sành được trồng ở Tam Bình, Trà Ôn(Vĩnh Long); Cái Bè, Châu Thành, Chợ Gạo(Tiền Giang); Mỹ Khánh, Ô Môn(Cần Thơ)

Hình 1 2 Quả cam sành

1.1.2 Một số công dụng và tác dụng dược lý của cam sành[5],[9]

- Cam sành là một trong những loại trái cây có chứa tinh dầu mang mùi thơm và chứa nhiều vitamin C, A, canxi và chất xơ…rất bổ dưỡng cho cơ thể

- Tính vị và tác dụng: có vị chua, tính mát có tác dụng giải khát, sinh tâm dịch, mát phổi, tiêu đờm thanh nhiệt, lợi tiểu Vỏ cam có vị cay, tính ấm, có tác dụng tiêu

đờm thông khí trệ, giúp tiêu hoá Vỏ cây cam có vị ngọt hơi the, tính mát, có tác dụng hạ khí đầy, điều hoà tì vị

- Công dụng: làm thuốc giải nhiệt trị sốt, điều trị chứng xuất tiết và giúp ăn ngon miệng Vỏ quả làm thuốc kích thích tiêu hoá, chữa đau bụng, ợ chua; vỏ tươi sát vào mặt chữa trứng cá; làm thuốc chữa phù sau khi đẻ Lá chữa bệnh tai chảy máu mủ, nước vàng

- Đơn thuốc: sau đẻ bị phù lấy 20g vỏ sắc uống; tai chảy mủ lấy 7 lá giã với nước vắt nước nhỏ vào tai sau lấy bông lau sạch làm vài lần là khỏi

- Nước cam chưa nhiều canxi và vitamin hơn cả các sản phẩm từ sữa Kết quả nghiên cứu của các nhà khoa học tại Trường Đại học Texas A&M(Mỹ) cho thấy thường xuyên uống nước cam và nước bưởi có thể giúp ngăn ngừa loãng xương và các chứng bệnh khác

- Vỏ cam còn có tác dụnh chữa ho có đờm và giã rượu rất có hiệu quả

đặc trưng của các lòai đó Nhiều chất thuộc nhóm này, ở mức độ đáng kể, quyết định phẩm chất thực phẩm và mùi vị các sản phẩm khác nhau chế biến

từ thực vật Nhiều chất được dùng trong công nghiệp và y học

Các hợp chất thực vật thứ sinh được chia làm 3 nhóm chính là:

1.2.1 Các hợp chất phenolic từ thực vật:[17],[18]

1.2.1.1 Cấu tạo hoá học và phân loại

Hợp chất phenolic là nhóm các chất khác nhau rất phổ biến trong thực vật Đặc

điểm chung của chúng là trong phân tử có vòng thơm (benzene) mang một, hai hay

ba nhóm hyđroxyl (OH) gắn trực tiếp vào vòng Benzen Dựa vào thành phần và cấu

trúc, người ta phân chia hợp chất phenolic thành 3 nhóm: hợp chất phenolic đơn giản, hợp chất phenolic phức tạp và nhóm hợp chất phenolic đa vòng (polyphenol)

+ Nhóm hợp chất phenolic đơn giản: trong phân tử chỉ có một vòng benzen và một vài nhóm hyđrôxyl Tùy thuộc vào số lượng nhóm OH mà chúng được gọi là các monophenol (phenol), diphenol(pyrocatechin, hydroquinone…), triphenol (pyrogolol, oxyhydroquinol…)

+ Nhóm hợp chất phenolic phức tạp: trong thành phần cấu trúc phân tử của chúng ngoài vòng thơm benzen(C6) chúng còn có dị vòng, mạch nhánh ( axit cyamic, axit ceramic)

+ Nhóm hợp chất phenolic đa vòng: là nhóm đa dạng nhất trong các hợp chất phenol, có cấu trúc phức tạp do sự liên kết hoặc trùng hợp của các đơn phân Ngoài gốc phenol còn có các nhóm phụ dị vòng mạch nhánh hoặc đa vòng Nhóm này có flavonoid, tamin và coumarin

Hợp chất phenol được hình thành một cách dễ dàng trong tất cả các cơ quan thực vật từ những sản phẩm đường phân và chu trình Pentonse qua acid Sikimic hay theo con đường Acetate Manolate qua Acetyl – S CoA Cả hai con

đường này đều tham gia vào quá trình hình thành flavonoid Nhiều chất phenol hoà tan trong nước được tổng hợp trong lục lạp

Trong số các chất polyphenol tự nhiên, flavonoid là nhóm chất quan trọng nhất vì chúng phổ biến ở hầu hết các loài thực vật và có nhiều hoạt tính sinh – dược có giá trị.[15]

1.2.2.3 Vai trò của hợp chất phenolic trong thực vật

Các polyphenol có thể hình thành liên kết hydro với các protein và enzyme làm thay đổi hoạt động của các enzyme này tương tự như hiệu ứng

Phenol được coi là hợp chất chống oxy hóa tiềm tàng do chúng có khả năng dọn dẹp các gốc tự do trong cơ thể, ức chế sự oxy hoá của -tocopherol trong cholesterol xấu, tái chế -tocopherol đã bị oxy hoá và loại bỏ các ion kim loại

1.2.1.4 Flavonoid thực vật[6],[15],[18]

Trong số các chất polyphenol tự nhiên, flavonoid là nhóm chất quan trọng nhất vì chúng phổ biến ở hầu hết các loài thực vật và có nhiều hoạt tính sinh – dược có giá trị.[15]

*Cấu tạo hoá học và phân loại

Flavonoid có cấu trúc chung là C6-C3-C6, gồm hai vòng thơm benzen A, B

và dị vòng-pyran C, trong đó vòng A kết hợp với vòng C tạo thành khung chroman

Hình 1.3 Khung cacbon của flavonoid Tuỳ theo mức độ oxy hoá của vòng pyran, sự có mặt hay không có mặt của nối đôi giữa C2 và C3 và nhóm cacbonyl ở C4 mà có thể phân biệt flavonoid thành các nhóm phụ sau: flavon, flavonol, flavonon, chalcon, auron Flavonoid tồn tại ở hai dạng: dạng tự do gọi là aglycon và dạng liên kết với đường gọi là glycoside Các glycoside bị thuỷ phân bằng enzyme hoặc acid sẽ giải phóng ra đường và aglycon tương ứng Trong tự nhiên trừ catechin

và leucoantocyanidin, phần lớn flavonoid đều tồn tại dưới dạng glycoside Có hai dạng glycoside là O- glycoside và C- glycoside Đối với O- glycoside phân tử đường liên kết với Flavonoid thông qua nhóm hydroxyl như rutin, đối với C- glycoside liên kết với đường thông qua nguyên tử cacbon như shaponin Dựa vào vị trí liên kết của vòng thơm với khung chroman, nhóm hợp chất này có thể được chia thành ba lớp: flavonoid (2-phenylbenzopyran), izoflavonoid (3-benzopyran) và neoflavonoid (4-benzopyran)

A B C Hình 1.4.Cấu trúc chung của flavonoid (A), izoflavonoid (B)

Có khoảng 4000 hợp chất flavonoid đã được biết đến Tuỳ theo mức độ oxy hoá của mạch 3 cacbon, sự có mặt hay không có mặt của nối đôi giữa C2

và C3, nhóm cacbonyl ở C4 mà có thể phân flavonoid thành các nhóm phụ sau

- Flavan: không có nối đôi ở C2 = C3, không có nhóm cacbonyl ở C4, không

có nhóm hydroxyl ở C3

Hình 1.5 Cấu trúc của Flavan(2phenylchroman)

- Flavon: có nối đôi C2 = C3, có nhóm cacbonyl ở C4, không có nhóm hydroxyl ở C3 (ví dụ như luteolin) Trong phân tử flavon có liên kết đôi

và nhóm cacbonyl tạo thành hệ thống nối đôi liên hợp Đặc điểm này là nguyên nhân gây nên màuvàng chanh của flavon

Hình 1.6 Cấu trúc của flavon

Các flavon có quang phổ hấp thụ cực đại ở vùng 320-350nm

- Flavonol: có nối đôi ở C2 = C3, có nhóm cacbonyl ở C4, có nhóm hydroxyl

ở C3 (ví dụ: quecetin, myricetin)

Quang phổ hấp thu cực đại của flavonol nằm ở vung 340-380nm

- Flavanon: không có nối đôi giữa C2 = C3, có nhóm cacbonyl ở C4, không

có nhóm hydroxyl ở C3 (ví dụ: naringenin) Các flavanon có quang phổ hấp thu tia tử ngoại mạnh ở vùng 290-320nm

Hình 1.7 Cấu trúc của Flavanon

- Flavanol (hay còn gọi catechin): không có nối đôi ở C2 = C3, không có nhóm cacbonyl ở C4, có nhóm hydroxyl ở C3 (ví dụ: epicatechin, gallocatechin)

Catechin có nhiều trong quả và lá chè Catechin là leucoantoxyanidin có phổ tử ngoại giống nhau, hấp thu cực đại ở vùng 270-280nm

Hình 1.8 Cấu trúc của catechin

- Leucoantoxyanidin (flavan-3,4-diol): Leucoantoxyanidin có 3 cacbon bất

đối, vì vậy chúng tồn tại ở các dạng đồng phân quang học khác nhau

Hình 1.9.Cấu trúc của Leucoantoxyanidin

*Tính chất vật lý [15]

ở dạng tinh khiết flavonoid là chất kết tinh hay vô định hình và có nhiệt

độ nóng chảy nhất định Chúng có màu vàng như flavon, flavonol, chalcon hoặc không màu như isoflavonoid, catechin Các aglycol của flavonoid hoà tan tốt trong dung môi hữu cơ như: ether, ethanol, acetone và hầu như không tan trong nước, khi ở dạng liên kết thì chúng hoà tan được trong nước nhưng không hoà tan được trong ether hay chloroform

Flavonoid có khả năng hấp thụ tử ngoại do hệ thống nối đôi liên hợp

được tạo ra do 2 vòng benzen A và B và vòng pyran Phổ hấp thụ tử ngoại giúp ích cho việc xác định cấu trúc của flavonoid Flavonoid có hai dải hấp phụ cực

đại, dải 1 ở bước sóng 290 nm ứng với vòng A và dải 2 ở bước sóng 220 –

280 nm ứng với vòng B

* Tính chất hoá học [17],[18]

- Flavonoid có các nhóm hydroxyl phenonlic, nhóm cacbonyl, vòng thơm benzen nên chúng có khả năng phản ứng rất lớn với dung dịch kiềm (dung dịch ammoniac) tạo các muối tan màu vàng, da cam, đỏ, xanh hoặc tím

- Phản ứng của vòng thơm (phản ứng diazo hoá) cho màu đỏ, da cam

Phản ứng Shinoda: đây là phản ứng khử có sự tham gia của kim loại như

Zn, Fe, Mg và HCL cho sản phẩm màu da cam, hồng hay đỏ

Phản ứng tạo phức với kim loại

* Hoạt tính sinh học của flavonoid

Các hợp chất flavonoid thờng gặp trong tự nhiên, phân bố phổ biến trong thực vật Vai trò của chúng trong tế bào thực vật đã được nghiên cứu khá đầy

đủ và chứng minh rằng chúng có quan hệ hầu hết với các quá trình hoạt động sống của thực vật Việc nghiên cứu hoạt tính sinh học của flavonoid được quan tâm đặc biệt vì giá trị của nó đối với đời sống con người và dưới đây là một số hoạt tính sinh học của flavonoid

- Tác dụng chống oxy hoá:Flavonoid có khả năng kìm hãm các quá trình oxy hoá dây chuyền sinh ra bởi gốc tự do hoạt động Những flavonoid có các nhóm hydroxyl sắp xếp ở vị trí octho dễ dàng bị oxy hoá dưới tác dụng của enzym polyphenoloxydaza và peroxydaza có trong tế bào động vật, thực vật, phản ứng sau:

Polyphenoloxydase

O2 + Flavonoid (dạng khử) Flavonoid (dạng oxy hóa)

(dạng Hydroquinol) (Semiquinon hoặc Quinon)

Peroxydase

H2O2 + Flavonoid (dạng khử) Flavonoid (dạng oxy hóa) + H2O (dạng Hydroquinol) (Semiquinon hoặc Quinon)

Semiquinon hoặc quinon là những gốc tự do bền vững, chúng có thể nhận điện

tử và hydro từ các chất cho khác nhau để trở lại dạng hydroquinol Các chất này có khả năng phản ứng với các gốc tự do hoạt động sinh ra trong quá trình sinh lý và bệnh

lý để tiêu diệt chúng

- Flavonoid có hoạt tính của vitamin P, làm tăng tính bền và đàn hồi của thành mạch, giảm sức thẩm thấu của mao mạch

- Flavonoid có khả năng điều hoà hoạt động enzyme do khả năng liên kết với nhóm amin trong phân tử protein, làm thay đổi cấu hình không gian của enzyme do đó tạo hiệu ứng điều hoà dị lập thể

- Flavonoid có tính kháng khuẩn, kháng virut, tăng khả năng đề kháng của cơ thể do kích thích lympho bào, tăng sản xuất interferon, ức chế hiện tượng thoát bọng (digramilation)

- Flavonoid có tác dụng chống ung thư do kìm hãm các enzyme oxy hoá khử, quá trình đường phân và hô hấp, kìm hãm phân bào, phá vỡ cân bằng trong các quá trình trao đổi chất của tế bào ung thư

- Flavonoid có hoạt tính chống đái tháo đường

1.2.1.5 Tannin [9 ], [15],[17],[18]

* Cấu tạo hóa học và phân loại

Tannin là hợp chất phenol có trọng lượng phân tử cao, có chứa các nhóm chức hydroxyl và các nhóm chức khác (như cacboxyl), có khả năng tạo phức với protein và các phân tử lớn khác trong điều kiện môi trường đặc biệt

Tannin được cấu tạo dựa trên gallic acid và tanic acid Tannin có 2 nhóm chính: tannin thuỷ phân và tannin ngưng tụ

- Tannin thuỷ phân: Gồm có các tannin mà thành phần chính để tạo polyme

thường là este của gallic acid với gốc đường, các este không mang đường của phenolcacbonic acid và este của ellagovic acid với đường

- Tannin ngưng tụ: là các oligome hay polyme của các đơn vị flavonoid (flavan

3-ol) nối với các dây nối C - C không bị cắt khi thuỷ phân như catechin, epicatechin hoặc các chất tương tự Tannin ngưng tụ có thể có từ 2 tới 50 hay hơn các đơn vị flavonoid Tannin ngưng tụ được xếp vào nhóm flavonoid theo nghĩa rộng vì có nguồn gốc giống như của flavonoid

*Tính chất vật lý

Tannin thường là hợp chất vô định hình hoặc tinh thể, không màu, có tính quang học, vị chát Tannin tan trong nước tạo dung dịch keo và độ hoà tan thay đổi tuỳ thuộc vào mức độ polyme hoá Chúng tan tốt trong ethanol, acetone

- Tannin có thể tạo phức với protein, tinh bột, cellulose, muối khoáng

- Tannin dễ bị thuỷ phân trong môi trường acid nhẹ, kiềm nhẹ, nước nóng hay enzyme (tannase) tạo thành carbonhydrat và phenolic acid

- Tannin ngưng tụ khó bị thuỷ phân trong môi trường acid, kiềm nhẹ, nước nóng hay enzyme Tannin pyrocatechic cho tủa màu xanh đậm với muối Fe3+ và tủa bông

với nước brom

* Tác dụng sinh học

- Tannin là chất cầm rửa do có tác dụng giảm sự bài tiết trong ống tiêu hóa, kết tủa protein tạo thành một màng che niêm mạc

- Tannin còn chữa ngộ độc kim loại nặng và alkaloid do tạo tủa với chúng

- Tannin có tác dụng chống ung thư do có khả năng kết hợp với các chất gây ung thư

- Tannin ở nồng độ cao ức chế hoạt động của các enzyme nhưng ở nồng độ thấp chúng thường kích hoạt enzyme

- Tannin có tác dụng ức chế và diệt khuẩn, tác dụng cầm máu do làm se hệ mao mạch hay tác dụng làm giảm đau tại chỗ do làm giảm tác dụng ở đầu dây thần kinh trung ương

1.2.2 Alkaloid thực vật [17], [18]

1.2.2.1 Cấu tạo hóa học

Alkaloid là một nhóm các hợp chất tự nhiên có cấu trúc phức tạp bao gồm nhiều nhóm có cấu trúc hóa học và tính chất lý hóa học rất khác nhau, nhưng đều có một

đặc điểm chung là trong phân tử có nitơ Alkaloid được hình thành trong cơ thể như là sản phẩm của quá trình trao đổi protein và các chất khác Hầu hết các alkaloid là những hợp chất có hoạt tính sinh học cao, có nhiều ảnh hưởng đến cơ thể, đặc biệt là

ảnh hưởng đến hệ thần kinh của người và động vật Alkaloid là nhóm các hợp chất tự nhiên có nhiều ứng dụng trong đời sống, có tác dụng dược - lý rõ rệt nên được sử dụng rộng rãi trong chế biến thuốc chữa bệnh

Alkaloid là các hợp chất hữu cơ có chứa nitơ, đa số có nhân nhị vòng, có đặc tính kiềm (alka - có tính kiềm), thường gặp ở thực vật, đôi khi cả ở động vật, thường

có hoạt tính sinh học mạnh và cho phản ứng hóa học với một số thuốc thử, gọi là thuốc thử chung của alkaloid

- Nhiệt độ nóng chảy, nhiệt độ sôi của các loại alkaloid khác nhau

- Có khả năng hấp thụ ánh sáng tử ngoại, sự hấp thụ này đặc trưng cho tất cả các loại alkaloid

- Khi tách ở dạng tinh khiết, đa số alkaloid có màu trắng, chỉ có một số chất có màu Ví dụ: Becberin có màu vàng, một số màu hồng, không tan trong nước, chỉ tan trong các dung môi hữu cơ như Ether, Ethylic, alcohol

ở nhiệt độ thường, đa số các alkaloid trong công thức cấu tạo có oxy thường ở thể rắn (ví dụ cafein), alkaloid không có oxy thường ở thể lỏng dễ bay hơi (ví dụ nicotin) Đa số các alkaloid không màu, không mùi, vị đắng Một số alkaloid có màu vàng như berberin, palmitin

Alkaloid ở dạng bazơ thường không tan trong nước mà tan trong dung môi hữu cơ ít phân cực như: ether, CHCl3, benzen, EtOH Trái lại, các alkaloid ở dạng muối thường dễ tan trong nước và hầu hết không tan trong các dung môi không phân cực

1.2.2.3 Tính chất hóa học

 Tính chất quan trọng nhất của các alkaloid là tính kiềm, tính chất này là do mạch cacbon chứa nitơ quyết định Người ta thấy các amin mạch thẳng hoặc vòng bão hoà có tính base mạnh, nhóm amin nằm trong nhân thơm có tính base yếu

 Alkaloid có tính kiềm yếu nên có thể giải phóng alkaloid ra khỏi muối của nó bằng kiềm mạnh hay trung bình như: NH4OH, MgOH, NaOH Khi tác dụng với acid, alkaloid tạo muối tương ứng

 Alkaloid kết hợp với kim loại nặng (Hg, Pb) tạo ra muối phức

 Alkaloid phản ứng với một số thuốc thử gọi là thuốc thử chung của alkaloid Những phản ứng chung này chia làm hai loại :

 Phản ứng tạo tủa với thuốc thử Vans-Mayer, thuốc thử Bouchardat, picric acid bão hoà…

 Phản ứng tạo màu với thuốc thử Dragendorff, H2SO4 đặc, HNO3 đặc…

1.2.2.4 Tác dụng sinh học

Alkaloid được hình thành từ các sản phẩm của quá trình trao đổi chất như trao

đổi protein ở trong cây, alkaloid được coi như là chất dự trữ cho tổng hợp protein, các chất bảo vệ cây, tham gia vào sự chuyển hoá hydro ở các mức độ khác nhau

Alkaloid được sử dụng nhiều trong công nghiệp Dược, có rất nhiều thuốc chữa bệnh được sử dụng trong Y học là các alkaloid tự nhiên hoặc nhân tạo, ví dụ như: atropin, morphin, cocain, codein, colchicine (một alkaloid từ cây nghệ, chữa goutte) Một số alkaloid được dùng để làm thuốc trừ sâu trong nông nghiệp, như các alkaloid được tách ra từ cây thuốc lá dùng làm thuốc trừ sâu và trừ kiến

Rất nhiều alkaloid có vai trò chống ung thư

1.2.3 Glycoside [6],[17], [18]

Glycoside là hợp chất hydratcarbon có nhiều ở lá, hạt và vỏ cây Chúng là chất kết tinh, đôi khi có vị đắng Glycoside có thể bị thủy phân bởi enzyme hay acid Glycoside bao gồm phần đường và phần không đường gọi là aglycon Phần aglycon

có kiểu là cardenolid, bufadienolid và steroid C23 có chuỗi bên vòng là , - lacton 5 cạnh không no và một nhóm C14 hydroxyl như strophanthidin, oleandrigenin Bufadienolid và steroid C24, chuỗi bên là vòng lacton 6 cạnh, 2 lần không no và nhóm hydroxyl 14, hướng  hoặc nhóm tương tự như bufalin, marinobufagin …

Các glycoside phân bố rộng rãi trong thực vật và tồn tại ở nhiều dạng như các glycosidephenolic (arbutin, salixin, phloridzin …), các sắc tố, các tinh dầu (sinigrin, glycosidesaponin … )

Về tác dụng kháng sinh, nhiều nghiên cứu cho thấy một số glycoside có kkhả năng ức chế sự sinh trưởng và phát triển của vi sinh vật Ngoài ra, một số glycoside còn được ứng dụng trong y học như thuốc trợ tim

1.3 Bệnh béo phì

1.3.1 Khái niệm và phân loại béo phì [3], [13], [21]

Theo Tổ chức Y tế thế giới (WHO) thì bệnh béo phì (obesity) được định nghĩa là tình trạng tích lũy mỡ quá mức và không bình thường tại một vùng cơ thể hay toàn thân đến mức ảnh hưởng tới sức khỏe và gây phát sinh nhiều bệnh: mỡ máu, tim mạch, huyết khối, đột tử, đái tháo đường Thông thường một người trưởng thành khỏe mạnh, dinh dưỡng hợp lý, cân nặng của họ dao động trong giới hạn nhất định

“Cân nặng nên có” của mỗi người thường ở vào độ tuổi 25 - 30

Hiện nay Tổ chức Y tế thế giới thường dùng chỉ số khối cơ thể (BMI - Body Mass Index) để nhận định về tình trạng gầy béo

Chỉ số khối cơ thể được tính theo công thức sau đây:

Trong đó: W là khối lượng của một người (tính bằng kg)

H là chiều cao của người đó (tính bằng m)

Chỉ số BMI đối với người Châu Âu và Châu Mỹ bình thường ở giới hạn  25, trên 25 là thừa cân, và trên 30 là béo phì Còn đối với người Châu á , BMI bình thường

 23

Một điều cần chú ý nữa là vùng mô mỡ tập trung Mỡ tập trung nhiều quanh vùng eo lưng tạo nên dáng người béo kiểu “trung tâm”, kiểu phần trên hay béo kiểu dáng đàn ông và mỡ tập trung ở phần háng tạo nên vóc người gọi là béo phần thấp hay kiểu dáng đàn bà Vì vậy bên cạnh theo dõi chỉ số BMI nên theo dõi thêm tỷ số vòng bụng/vòng mông, khi tỷ số này vượt quá 0,9 ở nam giới và 0,8 ở nữ giới thì các nguy cơ tăng huyết áp, bệnh tim mạch, bệnh đái đường đều tăng lên rõ rệt

Dựa vào nguyên nhân gây bệnh, người ta chia béo phì làm hai loại chính:

- Béo phì đơn thuần (simple obesity): nguyên nhân chủ yếu do lượng năng lượng hấp thụ vào cơ thể vượt quá mức cần thiết dẫn tới tích lũy mỡ

- Béo phì bệnh lý: nguyên nhân là do bệnh lý như một số bệnh nội tiết: Hội chứng Cushing (do lượng hormone cortisosteroid trong cơ thể quá cao), bệnh suy tuyến giáp trạng, bệnh trứng đa nang hoặc do có chứa gen béo phì di truyền … Ngoài ra, người ta còn chia béo phì thành các dạng: béo phì thể chất (constitutional obesity) có nguyên nhân di truyền và béo phì mắc phải (acquired obesity) do sinh hoạt, ăn uống gây nên Béo phì không tốt đối với sức khoẻ, người càng béo thì các nguy cơ biến chứng bệnh càng nhiều Người béo phì dễ mắc các bệnh tăng huyết áp, bệnh tim mạch do mạch vành, huyết khối (thrombosis), đái

đường hay bị các rối loạn dạ dày, ruột, sỏi mật

1.3.2 Thực trạng béo phì trên thế giới và trong nước [3], [7 ], [21],

Hiện nay tình hình thừa cân và béo phì đang tăng lên với tốc độ báo động không những ở các quốc gia phát triển mà ở cả các quốc gia đang phát triển Đây thật sự là mối đe dọa tiềm ẩn trong tương lai ảnh hưởng rất lớn đến sức khỏe của mỗi người Tại các quốc gia đang phát triển, béo phì tồn tại song song với thiếu dinh dưỡng, gặp nhiều ở thành phố hơn ở nông thôn

Theo Tổ chức Y tế thế giới, hiện nay số người bị béo phì trên thế giới đã lên tới hơn 1,5 tỉ người Còn theo Hiệp hội Béo phì Mỹ, hiện nay có khoảng 60 triệu người dân Mỹ bị béo phì, tăng gần gấp 3 lần so với năm 1991 (25 triệu người) ở châu Mỹ, Braxin cũng là nước có tỷ lện người dân béo phì cao (16%), trong đó tỷ lệ người trên

20 tuổi chiếm 40% dân số

Trong khi đó, ở châu á, theo báo cáo của Chính phủ Trung Quốc, tốc độ gia tăng tình trạng béo phì đã lên tới 97% trong năm qua Tổ chức dinh dưỡng chính thức đầu tiên của Trung Quốc và Cơ quan Khảo sát sức khỏe cho biết từ giữa năm 1992 đến năm 2002, đã có hơn 60 triệu người bị béo phì Đặc biệt ở những thành phố của Trung Quốc có 12% thanh thiếu niên và 8% trẻ em mắc bệnh béo phì

ở Việt Nam, tỷ lệ thừa cân và béo phì khoảng 4% ở Hà Nội (1995) và Thành phố Hồ Chí Minh (2003) Nghiên cứu do Viện Dinh dưỡng tiến hành tại các thành phố lớn cho thấy bệnh béo phì đã trở lên rất phổ biến và tăng dần theo tuổi tác Tỷ lệ béo phì là 10,7% ở lứa tuổi 15 - 49 và 21,9% ở lứa tuổi 40 - 49, ở nam giới tuổi ngoài

30 là 6 - 8 %, ở nữ giới trên 40 tuổi là 12%, Tỷ lệ béo phì ở trẻ học sinh tiểu học Hà Nội là 4,2% (1996) và 12,2% ở Thành phố Hồ Chí Minh (1997)

1.3.3 Nguyên nhân gây ra béo phì [3],[13]

Béo phì là tình trạng sức khỏe có nguyên nhân dinh dưỡng Cơ thể giữ được cân nặng ổn định là nhờ trạng thái cân bằng giữa năng lượng do thức ăn cung cấp và năng lượng tiêu hao cho lao động và các hoạt động khác của cơ thể Cân nặng cơ thể tăng lên có thể do chế độ ăn dư thừa vượt quá nhu cầu hoặc do nếp sống làm việc tĩnh tại ít tiêu hao năng lượng

Khi vào cơ thể, các chất protein, lipid, glucid đều có thể chuyển thành chất béo

dự trữ Vì vậy, không nên coi ăn nhiều thịt, nhiều mỡ mới gây béo mà ăn quá thừa chất bột, đường, đồ ngọt đều có thể gây béo Tóm lại có thể chia nguyên nhân và cơ chế sinh bệnh của béo phì như sau:

Khẩu phần ăn và thói quen ăn uống:

- Năng lượng (calorie) đưa vào cơ thể qua thức ăn thức uống được hấp thu và được oxy hóa để tạo thành nhiệt lượng Năng lượng ăn quá nhu cầu sẽ được dự trữ dưới dạng mỡ

- Chế độ ăn giàu chất béo (lipid) có liên quan chặt chẽ với sự gia tăng tỷ lệ béo phì Các thức ăn giàu chất béo thường ngon nên người ta ăn quá thừa mà không biết Vì vậy, khẩu phần ăn nhiều mỡ, dù số lượng nhỏ cũng có thể gây thừa calorie và tăng cân

- Không chỉ ăn nhiều mỡ, thịt mà ăn nhiều chất bột, đường, đồ ngọt đều có thể gây béo Việc thích ăn nhiều đường, ăn nhiều món sào, rán, những thức ăn nhanh nấu sẵn và miễn cưỡng ăn rau quả dễ đưa đến bệnh béo phì

- Thói quen ăn nhiều vào bữa tối cũng là một nguyên nhân dẫn đến béo phì

Hoạt động thể lực kém:

- Cùng với yếu tố ăn uống, sự gia tăng tỷ lệ béo phì đi song song với sự giảm hoạt động thể lực trong một lối sống tĩnh tại hơn, thời gian dành cho xem ti vi, đọc báo, làm việc bằng máy tính, nói chuyện qua điện thoại nhiều hơn

- Những người hoạt động thể lực nhiều thường ăn thức ăn giàu năng lượng, khi

họ thay đổi lối sống (về hưu, lúc già), ít hoạt động nhưng vẫn giữ thói quen ăn nhiều cho nên bị béo phì Điều này giải thích béo ở tuổi trung niên, hiện tượng béo phì ở các vận động viên sau khi giải nghệ và công nhân lao động chân tay có xu hướng béo phì khi về hưu

Yếu tố di truyền:

Đáp ứng sinh nhiệt kém có thể do yếu tố di truyền Yếu tố di truyền có vai trò nhất định đối với những người béo phì thường có cha mẹ béo phì, tuy vậy nhìn trên đa

số cộng đồng yếu tố này không lớn

Yếu tố kinh tế - xã hội:

- ở các nước đang phát triển, tỷ lệ người béo phì ở tầng lớp nghèo thường thấp (do thiếu ăn, lao động chân tay nặng, phương tiện đi lại khó khăn), do đó béo phì thường

được coi là một đặc điểm của người giàu có ở các nước đã phát triển, khi thiếu ăn không còn phổ biến nữa thì tỷ lệ béo phì lại thường cao ở tầng lớp nghèo, ít học so với các tầng lớp trên, do họ ăn uống không khoa học và ưa ăn đồ chế biến sẵn, nhiều chất béo và đường

- ở nước Mỹ, tỷ lệ người béo lên đến 20 - 30 % ở Châu Âu và nhiều nước khác,

tỷ lệ người béo phì lên đến 30 - 40 %, nhất là ở độ tuổi trung niên và chống béo phì trở thành một mục tiêu sức khỏa cộng đồng quan trọng ở Việt Nam, tỷ lệ người béo phì còn thấp nhưng có khuynh hướng tăng nhanh, nhất là ở các đô thị Đó là điều cần

được chú ý để có các biện pháp can thiệp kịp thời

1.3.4 Các tác hại và nguy cơ cụ thể của béo phì [3],[13]

Thừa cân và béo phì không tốt đối với sức khỏe và làm giảm vẻ đẹp của mọi người Người càng béo các nguy cơ càng nhiều Ngoài thân hình phì nộn, nặng nề, khó coi, người béo phì còn có nguy cơ mắc nhiều bệnh như rối loạn lipid máu, tăng huyết áp, gây huyết khối mạch máu não dẫn đến đột tử, bệnh tim mạch do mạch vành, đái tháo đường, giảm khả năng sinh sản, giảm chức năng hô hấp, tăng viêm xương khớp, ung thư hay bị các rối loạn đường tiêu hóa như bệnh dạ dày, ruột, sỏi mật

Đối với trẻ em, chứng béo phì cũng có tác hại rất lớn Những trẻ béo phì dễ bị béo phì khi trưởng thành và có nguy cơ mắc các bệnh tim mạch cao (bệnh mạch vành: gấp đôi, xơ vữa mạch máu: gấp 7 lần, tai biến mạch máu não: gấp 13 lần)

Béo phì có các tác hại và nguy cơ cụ thể là:

Mất thoải mái trong cuộc sống: Người béo phì thường có cảm giác khó chịu về

mùa hè do lớp mỡ dày như một hệ thống cách nhiệt Người béo phì cũng thường xuyên cảm thấy mệt mỏi toàn thân, hay nhức đầu, tê buốt ở hai chân làm cho cuộc sống thiếu thoải mái

Giảm hiệu suất lao động: Người béo phì làm việc chóng mệt, nhất là ở môi

trường nóng Mặt khác do khối lượng cơ thể quá nặng nề nên để hoàn thành một động tác, một công việc trong lao động, người béo phì mất nhiều thì giờ hơn và mất nhiều công sức hơn Hậu quả là hiệu suất lao động giảm rõ rệt hơn so với người thường

Kém lanh lợi : Người béo phì thường phản ứng chậm chạp hơn người bình

thường trong sinh hoạt cũng như trong lao động Hậu quả là rất dễ bị tai nạn xe cộ cũng như tai nạn lao động

Tỷ lệ bệnh tật cao: Béo phì là một trong các yếu tố nguy cơ chính của các bệnh

mạn tính không lây như bệnh mạch vành, đái đường không phụ thuộc insulin, sỏi mật ở phụ nữ mãn kinh bị béo phì, các nguy cơ ung thư túi mật, ung thư vú và tử cung tăng lên, còn ở nam giới béo phì, bệnh ung thư thận và tuyến tiền liệt hay gặp hơn Nguy cơ dẫn đến đái tháo đường type2 và đối kháng insunin [3],[13]

1.3.5 Một số chỉ số hóa sinh liên quan đến rối loạn trao đổi lipid máu và bệnh xơ vữa động mạch [3], [11], [13]

Lipid là thuật ngữ dùng để chỉ các chất hoặc hợp chất là este hoặc amid của aicd béo Về mặt chức năng chúng có chung một đặc tính là tan trong các dung môi hữu cơ và hầu như không tan trong nước Chúng có thể được chia thành glycerid (triglycerid … ), các steroid (cholesterol, các acid béo) hoặc các chất chứa các acid béo như các phospholipid và các eicosanoid, các vitamin tan trong dầu (A, D, E, K) và các sphingolipid

Rối loạn lipid máu là yếu tố nguy hại liên quan đến sự phát triển bệnh tim mạch (như xơ vữa động mạch, bệnh mạch vành và nhồi máu cơ tim)

Đã có những nghiên cứu chứng minh rằng những người mắc bệnh béo phì có nguy cơ mắc các bệnh về rối loạn lipid máu và xơ vữa động mạch rất cao, và tỷ lệ những người béo phì mắc các bệnh nói trên cũng cao hơn so với người bình thường

Để xác định tình trạng rối loạn lipid máu và xơ vữa động mạch, người ta thường dựa vào một số chỉ số như: Cholesterol máu, TG (triglycerid), LDL (Low density lipoprotein - lipoprotein tỷ trọng thấp), HDL (High density lipoprotein - lipoprotein tỷ trọng cao)

Cholesterol máu là thành phần cấu trúc của các màng và là tiền chất để tổng hợp acid mật và steroid, có vai trò rất quan trọng đối với sức khoẻ con người: giúp cho sự

hoạt động của màng tế bào thần kinh, là tiền chất tổng hợp nên các hormone steroid (các hormone thượng thận, hormone sinh dục ) Cholesterol được tạo ra từ hai nguồn là do cơ thể tự sản xuất ra (gan sản xuất ra 80%), và do thức ăn cung cấp ở người bình thường, hàm lượng cholesterol máu luôn hằng định, khi vì một lý do nào

đó mà nó tăng quá cao thì gây hiện tượng “tăng mỡ máu”

Cholesterol thực chất không hoà tan trong máu, nên khi lưu thông trong máu chúng được bao quanh bởi một lớp áo protein (còn gọi là lipoprotein) Có hai loại lipoprotein quan trọng là lipoprotein tỷ trọng thấp (LDL) và lipoprotein tỷ trọng cao (HDL) LDL có vai trò vận c0huyển và phân bố cholesterol cho các tế bào Khi lượng LDL trong máu cao, thành động mạch sẽ bị đóng mỡ gây xơ vữa thành mạch, do đó chúng được gọi là cholesterol “có hại” Ngược lại, HLD có vai trò lấy cholesterol ra khỏi máu và ngăn cho chúng không xâm nhập vào thành động mạch, do đó chúng

được gọi là cholesterol “có lợi”

TG là nguồn năng lượng dự trữ, được cung cấp từ thức ăn Sự sinh tổng hợp TG nội sinh diễn ra ở gan và mô mỡ Trong mô mỡ, chúng là nguồn dự trữ năng lượng chính của cơ thể ở những người béo phì, nồng độ acid béo tự do và TG thường tăng cao trong máu gây ra hiện tượng “nhiễm độc mỡ”, dẫn đến đái tháo đường type2 và

đối kháng insunin [3],[13]

1.3.6 Giải pháp phòng bệnh béo phì [3], [13] +

Nguyên tắc cần thiết để chống béo phì: Thực hiện một chế độ ăn uống hợp lý

và hoạt động thể lực đúng mức để duy trì cân nặng ổn định ở người trưởng thành Các biện pháp cụ thể để phòng tránh béo phì là:

+ Chế độ ăn năng lượng (calorie) thấp, cân đối, ít mỡ, ít đường, đủ đạm, vitamin, nhiều rau quả

+ Luyện tập ở môi trường thoáng

+ Xây dựng nếp sống năng động, tăng cường hoạt động thể lực

1.3.7 Một số thuốc tân dược điều trị bệnh béo phì hiện nay [3]

Nguyên tắc điều trị béo phì: Kết hợp chế độ ăn uống, chế độ luyện ập và cách dùng

thuốc

Thuốc điều trị béo phì như

- Metformin có tác dụng chủ yếu là ức chế sự sản xuất glucose từ gan nhưng cũng làm tăng tính nhạy của insulin ngoại vi, tác động hạ glucose trong máu khoảng

2 - 4 mmol/l và giảm HbA1c đến 2% vì không gây hạ glucose máu khi sử dụng đơn

độc Thuốc cũng có tác dụng duy trì hoặc làm giảm cân nặng vì vậy còn được dùng trong điều trị thừa cân, béo phì Tuy nhiên thuốc này lại có tác dụng phụ đối với

đường tiêu hóa Chống chỉ định của metformin là suy tim nặng, bệnh gan (kể cả nghiện rượu), bệnh thận, người có tiền sử nhiễm toan lactic

- Fenfluramin thường có tác dụng phụ gây tăng áp động mạch phổi, phì đại các van tim vì vậy ngày nay ít dùng

- Fluoxiten là thuốc chống bệnh trầm cảm gây chán ăn, giảm cân

- Ephedrin và cafein, phentermin có tác dụng gây chán ăn, giảm cân nhưng chỉ

được dùng 3 tháng trở lại vì tác dụng phụ lên hệ thần kinh TW

Vì vậy hiện nay đang có xu hướng nghiên cứu dùng các hợp chất tự nhiên từ thảo mộc ít gây tác dụng phụ và rẻ tiền hơn các thuốc tân dược tổng hợp bằng con

đường hoá học

Chương 2 đối tượng và phương pháp nghiên cứu

2.1 Đối tượng nghiên cứu

2.1.1 Nguyên liệu thực vật

2.1.1.1 Cây cam sành( Citrus nobilis L)[5]

Quả cam sành được thu ở chợ Yên Bái, được TS Trần Văn Ơn Đại học Dược

Hà Nội phân loại

Bộ phận sử dụng: vỏ quả và chất nhầy hạt cam sành

2.1.1.2 Xử lý mẫu:

Vỏ tươi quả cam sành được rửa sạch, để ráo nước, cắt nhỏ, sấy khô ở nhiệt độ

60°C - 65°C Sau đó đem tán nhỏ thành bột mịn và bảo quản trong túi bóng kín ở nhiệt

độ thường

Chất nhầy vỏ hạt cam sành: hạt cam sau khi tách khỏi quả ngâm trong

trong 3 tuần

2.1.2 Động vật thí nghiệm

50 con chuột bạch chủng Swiss 4 tuần tuổi, khối lượng trung bình của chuột khi mua là 14g/con và thức ăn chuẩn do Viện Vệ sinh Dịch tễ TW cung cấp

2.1.3 Dụng cụ và hóa chất thí nghiệm

2.1.3.1 Dụng cụ thí nghiệm:

Các thiết bị thông thường trong phòng thí nghiệm như: máy cô thu hồi dung môi, tủ hút, tủ ấm, tủ mát, máy quang phổ UV – VIS1000, máy xác định các chỉ số lipid và đường máu OLYMPUS (Nhật) và một số dụng cụ cần thiết khác

2.1.3.2 Hóa chất thí nghiệm:

Hóa chất tinh khiết dùng để phân tích được mua của các hãng có uy tín như: Prolabo, Sigma, Merck

2.2 Phương pháp nghiên cứu

2.2.1 Tách chiết các phân đoạn dịch chiết từ vỏ quả cam sành và chất nhầy vỏ hạt cam sành

Vỏ quả cam sành được sấy khô ở nhiệt độ 60-65C và nghiền thành bột

500 gam bột vỏ cam sành được ngâm kiệt 3 lần trong EtOH 90% ở nhiệt độ phòng trong thời gian 3 tuần Sau đó lọc bằng giấy lọc và cất loại dung môi với áp suất giảm thu được cao phân đoạn EtOH Cao phân đoạn EtOH sau khi hòa tan lại trong nước cất nóng được chiết qua hệ các dung môi có độ phân cực tăng dần: n-hexan - CHCl3 - EtOAc Cất loại dung môi từ các phân đoạn dịch chiết thu được sau khi chiết thu lấy cao của các phân đoạn

Chất nhầy vỏ hạt cam sành: hạt cam sau khi tách khỏi quả ngâm trong nước 600C tách lấy 1000g chất nhầy ngâm trong EtOH 90% ở nhiệt độ phòng trong 3 tuần Sau đó lọc bằng giấy lọc và cất loại dung môi với áp suất giảm thu được cao phân đoạn EtOH Cao phân đoạn EtOH sau khi hòa tan lại trong nước cất nóng được chiết qua hệ các dung môi có độ phân cực tăng dần: n-hexan - CHCl3 - EtOAc Cất loại dung môi từ các phân đoạn dịch chiết thu

được sau khi chiết thu lấy cao của các phân đoạn

2.2.2 Khảo sát sơ bộ thành phần hóa học vỏ quả cam sành và chất nhầy vỏ hạt cam sành [6],[8],[12]

2.2.2.1 Thử định tính Flavonoid

Pha mẫu thử trong EtOH 90% với một lượng thích hợp Sau đó cho vào vài giọt acid chloric đặc, chia dung dịch nhận được vào 2 ống:

+ Phản ứng Shinoda:

- ống 1: dùng để đối chứng

- ống 2: thêm vài mảnh Mg, đun sôi trên nồi cách thủy trong vài phút

Phản ứng cho kết quả dương tính khi trong ống nghiệm xuất hiện màu hồng, đỏ hay da cam

+ Phản ứng với dung dịch kiềm :

- ống 1 : dùng để đối chứng

- ống 2 : nhỏ thêm vài giọt dung dịch NaOH 10%

Phản ứng cho kết quả dương tính khi xuất hiện màu vàng, vàng cam

+ Phản ứng diazo hóa :

- ống 1 : dùng để đối chứng

- ống 2 : nhỏ thêm vài giọt thuốc thử diazo

Phản ứng cho màu da cam là dương tính

+ Phản ứng với acid sunfuric :

- ống 1 : dùng để đối chứng

- ống 2 : nhỏ thêm vài giọt acid sunfuric

Phản ứng có màu vàng đậm cho thấy sự có mặt của các flavon và flavonol, màu

đỏ hay nâu cho thấy sự có mặt của chalcon và auron

2.2.2.2 Thử định tính Tannin

+ Phản ứng với acetate chì :

Cho vài giọt dung dịch acetate chì 10% vào dung dịch mẫu

Phản ứng dương tính khi xuất hiện kết tủa

+ Phản ứng với FeCl3 1% trong nước :