PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH STAPHYLOCOCCUS AUREUSPHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH STAPHYLOCOCCUS AUREUSPHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH STAPHYLOCOCCUS AUREUSPHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH STAPHYLOCOCCUS AUREUSPHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH STAPHYLOCOCCUS AUREUSPHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH STAPHYLOCOCCUS AUREUSPHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH STAPHYLOCOCCUS AUREUSPHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH STAPHYLOCOCCUS AUREUSPHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH STAPHYLOCOCCUS AUREUSPHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH STAPHYLOCOCCUS AUREUSPHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH STAPHYLOCOCCUS AUREUSPHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH STAPHYLOCOCCUS AUREUSPHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH STAPHYLOCOCCUS AUREUSPHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH STAPHYLOCOCCUS AUREUSPHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH STAPHYLOCOCCUS AUREUS
L/O/G/O PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH STAPHYLOCOCCUS AUREUS Danh sách nhóm: 1. Bùi Minh Trung 2. Hà Thế Trung 3. Lê Thị Hồng Trang 4. Trương Ngân Đào 5. Phan Thị Thanh Thảo 6. Lê Thị Hoàng Dung 7. Vũ Thị Chi NỘI DUNG Tổng quan về S.aureus 1 Quy trình phân tích S.aureus 2 Ví dụ PP phân tích S.aureus 3 Staphylococcus aureus TỔNG QUAN S.AUREUS Thuộc họ Staphylococcaceae Còn gọi là Tụ cầu vàng Sống hiếu khí tùy nghi Khóa phân loài của S. aureus Giới (Kingdom): Bacteria Nghành (Phylum): Firmicutes Lớp (Class): Bacilli Bộ (Order): Bacillales Họ (Family): Staphylococcaceae Giống (Genus): Staphylococcus Loài (Species): S. aureus PƯ catalase, coagulase dương tính PƯ oxidase âm tính Hầu hết có khả năng tan huyết (95%) Lên men tạo acid từ mannitol Phát triển được trên môi trường chứa 15% NaCl Trên môi trường không chọn lọc tạo sắc tố vàng Tạo độc tố Enterotoxin bền nhiệt Dấu hiệu nhiễm và các bệnh do S. aureus Khả năng gây ngộ độc thực phẩm • Sinh 5 độc tố ruột: enterotoxin A, B, C, D, E bền nhiệt – Viêm dạ dày ruột: ăn thức ăn bị nhiễm độc tố – Viêm ruột non – đại tràng: ăn thức ăn bị nhiễm tụ cầu với số lượng lớn (>105 vi khẩn/1g thức ăn) • Sinh độc tố gây hội chứng sốc nhiễm độc [...]...2 Quy trình phân tích S .aureus 1 Phương pháp định lượng truyền thống • Phương pháp đếm khuẩn lạc • Phương pháp MPN 2 Phương pháp hiện đại • Phương pháp ELISA • Phương pháp PCR 1 PHƯƠNG PHÁP ĐẾM KHUẨN LẠC Nguyên tắc Sử dụng môi trường chọn lọc để bắt những khuẩn lạc đặc trưng của S aureus • Môi trường Baird Parker Agar (BPA) • Khuẩn lạc đặc trưng:... (BPA) Môi trường Trypticase Soy Agar (TSA) Huyết tương thỏ Hóa chất Cồn 90o và 70o HCl 10% NaOH 10% QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG S AUREUS BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN Định lượng mẫu, đồng nhất mẫu (10g mẫu trong 90ml môi trường SPW) Pha loãng mẫu theo nồng độ pha loãng thập phân QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG S AUREUS BẰNG PP MPN MSB Cấy 1 ml vào ống nghiệm chứa 10ml MSB 1ml (-) (+) Ủ ở 37 ± 0,5oC trong 24 - 48 giờ 1.1 1.2 1.3 1.4... Coagulase Tra bảng MPN 1 ống (+) Phát hiện Tất cả (-) Không Phát hiện 10-1 10-1 10-2 10-2 1 10-3 10-3 Đọc kết quả thử nghiệm coagulase 1 0 Kết quả MPN 4 MPN/g VÍ DỤ QUY TRÌNH PHÂN TÍCH S .AUREUS THỰC TẾ Định tính Staphylococcus aureus trong mẫu chả lụa ở chợ Đồng Xoài - Bình phước Quy trình thực hiện: Chuẩn bị mẫu Chuẩn bị dung dịch mẫu thử Cấy mẫu Đọc kết quả Khẳng định Bước 1: Chuẩn bị mẫu Mẫu chả... rộng Thử nghiệm sinh hóa để khẳng định • S aureus có phản ứng coagulase dương tính – làm vón cục huyết tương Môi trường, hóa chất Môi trường Dung dịch Saline Peptone Water (SPW) Môi trường thạch Braid Parker Agar (BPA) Môi trường Trypticase Soy Agar (TSA) Huyết tương thỏ Hóa chất Cồn 90o và 70o HCl 10% NaOH 10% QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG S AUREUS BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐẾM KHUẨN LẠC Bước 1: Định lượng mẫu, đồng... a Ra ) nVf KL không đặc KL không đặc trưng trưng Thử nghiệm coagulase Âm tính Dương tính Mức độ đông tụ huyết tương 2 PHƯƠNG PHÁP MPN Nguyên tắc Tăng sinh trong môi trường chọn lọc • Môi trường MSB • Ống dương tính sẽ chuyển từ màu đỏ sang vàng Mẫu có biểu hiện dương tính được phân lập trên môi trường chọn lọc • Môi trường BPA • KL đen nhánh, sáng, tròn, lồi, đường kính 0,5 – 1 mm, có vầng sáng... tủ ấm ở 350C trong 2448h Bước 4: Đọc kết quả -Sau 24 khuẩn lạc S aureus có đường kính 0,5 1mm, lồi, đen bóng có vòng sáng rộng khỏang 1 – 2 mm bao quanh -Đánh dấu trên mặt đáy của đĩa các khuẩn lạc có đặc điểm như trên và tiếp tục ủ đến 48 giờ Hình ảnh khuẩn lạc S aureus trên môi trường BPA Bước 4: Đọc kết quả -Sau 48 giờ khuẩn lạc S aureus có đường kính khoảng 1 – 1,5 mm, màu đen bóng, lồi, có vòng... ống dịch nuôi cấy BHB có thử nghiệm coagulase dương tính được khẳng định là có S .aureus KẾT QUẢ +Ống nghiệm chứa khuẩn lạc đặc trưng: 3 ống (+), 2 ống (-) +Ống nghiệm chứa khuẩn lạc không đặc trưng: 0 ống (+), 5 ống (-) Ống nghiệm dương tính với thử nghiệm coagulase nên trong mẫu chả lụa kiểm tra có chứa staphylococcus aureus L/O/G/O Thank You! www.themegallery.com ... aureus có đường kính khoảng 1 – 1,5 mm, màu đen bóng, lồi, có vòng trắng đục hẹp và có vòng sáng rộng khoảng 2 4mm bao quanh -Đếm và đánh dấu hai dạng khuẩn lạc Độ pha loãng Khuẩn lạc S Khuẩn lạc S aureus đặc aureus trưng không đặc trưng 10-1 10-2 92 38 45 19 10-3 11 5 Bước 5: Khẳng định - Chọn 5 khuẩn lạc của mỗi dạng khuẩn lạc đã chọn đếm ở bước 4 và tiến hành thử nghiệm coagulase như sau: + Dùng đầu... HCl 10% NaOH 10% QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG S AUREUS BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐẾM KHUẨN LẠC Bước 1: Định lượng mẫu, đồng nhất mẫu (10g mẫu trong 90ml môi trường SPW) Bước 2: Pha loãng mẫu theo nồng độ pha loãng thập phân Bước 3: Cấy 0,1 ml dung dịch mẫu ở các nồng độ pha Bước 3: Cấy 0,1 ml dung dịch mẫu ở các nồng độ pha loãng lên bề mặt các đĩa mt Baird Parker agar (BPA) có loãng lên bề mặt các đĩa mt Baird Parker... khuẩn lạc đặc trưng (Nt và số khuẩn lạc không đặc trưng (Naa) số khuẩn lạc không đặc trưng (N ) Bước 4: Chuyển 5 kl đặc trưng và 5 kl không đặc trưng sang mt TSA Ủ ở 37 ± 0,5oC qua đêm KL đặc trưng của S aureus trên mt BPA KL đặc trưng KL đặc trưng Bước 5: Cấy chuyền vào ống Bước 5: Cấy chuyền vào ống chứa 0,3ml huyết tương chứa 0,3ml huyết tương Ủ ở 37 ± 0,5oC và theo dõi sau 2, 4, 6, 8 giờ Nếu không . Dung 7. Vũ Thị Chi NỘI DUNG Tổng quan về S .aureus 1 Quy trình phân tích S .aureus 2 Ví dụ PP phân tích S .aureus 3 Staphylococcus aureus TỔNG QUAN S .AUREUS Thuộc họ Staphylococcaceae Còn gọi. 5 kl đặc trưng và 5 kl không đặc trưng sang mt TSA Ủ ở 37 ± 0 ,5 o C qua đêm KL đặc trưng của S. aureus trên mt BPA Bước 5: Cấy chuyền vào ống chứa 0,3ml huyết tương Bước 5: Cấy chuyền vào. L/O/G/O PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH STAPHYLOCOCCUS AUREUS Danh sách nhóm: 1. Bùi Minh Trung 2. Hà Thế Trung 3. Lê Thị Hồng Trang 4. Trương Ngân Đào 5. Phan Thị Thanh Thảo 6. Lê Thị Hoàng