Tiểu luận môn học Phương pháp phân tích sắc ký. Đề Tài: Cơ sở lý thuyết của phương pháp sắc ký bản mỏng và ứng dụng của sắc ký bản mỏng.

Tiểu luận môn học Phương pháp phân tích sắc ký. Đề Tài: Cơ sở lý thuyết của phương pháp sắc ký bản mỏng và ứng dụng của sắc ký bản mỏng. Tiểu luận môn học Phương pháp phân tích sắc ký. Đề Tài: Cơ sở lý thuyết của phương pháp sắc ký bản mỏng và ứng dụng của sắc ký bản mỏng. Tiểu luận môn học Phương pháp phân tích sắc ký. Đề Tài: Cơ sở lý thuyết của phương pháp sắc ký bản mỏng và ứng dụng của sắc ký bản mỏng. Tiểu luận môn học Phương pháp phân tích sắc ký. Đề Tài: Cơ sở lý thuyết của phương pháp sắc ký bản mỏng và ứng dụng của sắc ký bản mỏng.

Trường Đại Học Công Nghiệp T.p Hồ Chí Minh

Khoa Công Nghệ Hóa Học

Tiểu luận môn học Phương pháp phân tích sắc ký

Đề Tài: Cơ sở lý thuyết của phương pháp sắc ký bản mỏng và ứng dụng của sắc ký bản mỏng.

SV Thực Hiện: VÕ CÔNG MINH10059071

GV Giảng Dạy: TRẦN NGUYỄN AN SA

1 Cơ sở lý thuyết của phương pháp sắc ký

bản mỏng

Bản

Pha tĩnh Pha động

Hệ Sắc

ký bản mỏng

Hệ sắc ký bản mỏng

Hệ sắc ký bản mỏng

Bản

• Dùng để trải lớp chất hấp phụ

• Được làm bằng thủy tinh, lá nhôm hoặc lớp màng polyester

• Dùng kính (mờ) làm bản là tốt nhất vì dễ rữa sạch, bền với nhiều thuốc thử nhuộm màu

Pha tĩnh

• Các chất dùng làm pha tĩnh: silicagel,

alumina, xenlulose, tinh bột, sephadex,

nhựa trao đổi ion, polyamide…

• Chất hấp phụ được trải dưới dạng

nhão, có chất kết dính hoặc dạng bột

mịn

• Từng pha tĩnh riêng biệt mà có các cơ

chế tách hoàn toàn khác nhau

Hệ sắc ký bản mỏng

• Các hỗn hợp dung môi có từ 2-3 dung môi trộn theo tỉ lệ để làm pha động: (xiclohexan: axetat etyl)=95:5, (benzen:etyl axetat)=95:5, (clorofom:axeton)=9:1, (benzen:metanol)=95:5…

1 Cơ sở lý thuyết của pp sắc ký bản mỏng

Đặc trưng của phương pháp sắc ký bản mỏng

• Sự khuếch tán trong lớp mỏng theo cả chiều dọc

=> Rf phụ thuộc vào chất lượng và tính hoạt

động của chất hấp phụ, bản chất dung môi…

• Quá trình tách hỗn hợp các chất xãy ra khi cho

pha động di chuyển qua pha tĩnh

• Sự hình thành sắc đồ được hình thành trên bản

phẳng

 

1 Cơ sở lý thuyết của phương pháp sắc ký bản mỏng

• Pha tĩnh ở trạng thái rắn được trải thành

lớp mỏng trên các bản  nhỏ vài giọt dung

dịch phân tích lên rìa bản cách 2-3 cm 

dưới tác dụng của lực mao quản dung môi

sẽ chuyển động dọc theo lớp chất hấp phụ

kéo theo sự chuyển động của các cấu tử

trong mẫu với vận tốc khác nhau  tách cấu

tử ra khỏi nhau

• Mỗi chất đều có hằng số phân bố vùng Rf

đặt trưng

Cơ chế sắc ký bản mỏng

1 Cơ sở lý thuyết của pp sắc ký bản mỏng

Chuẩn bị bản Chuẩn bị pha tĩnh Đưa pha tĩnh rắn lên bản Đưa mẩu lên bản

Triển khai sắc đồ

Kỹ thuật tiến hành

sắc ký bản mỏng

Kỹ thuật tiến hành

sắc ký bản mỏng

Hiện sắc đồ

Kỹ thuật tiến hành sắc ký bản mỏng

Chuẩn bị bản

Nếu bản là thủy tinh cần làm sạch trước

khi trải pha tĩnh lên: ngâm bằng nước cất, rữa

Kỹ thuật tiến hành sắc ký bản mỏng

Đưa pha tĩnh rắn lên bản

Dựa vào từng loại pha tĩnh mà có các cách đưa pha tĩnh lên bản

• Với pha tĩnh không dính: trải pha tĩnh lên mặt kính rồi dùng trục lăn cán

pha tĩnh lên mặt kính

• Với pha tĩnh dính: dùng phương pháp quét vữa, tưới vữa, nhúng bản vào

vữa hoặc phun vữa loãng lên bản

Kỹ thuật tiến hành sắc ký bản mỏng

Đưa mẫu lên bản

• Dùng pipet hoặc ống nhỏ giọt đưa mẫu lên

bản

• Lượng mẫu đưa lên bản phải được khống chế.

• Xác định lượng mẫu thích hợp bằng cách tiến

Kỹ thuật tiến hành sắc ký bản mỏng

Triển khai sắc đồ:

Là quá trình tách cấu tử trên bản mỏng

Cách triển khai sắc đồ:

• Phương pháp sắc ký đi lên

• Phương pháp sắc ký đi xuống

• Phương pháp sắc ký nằm ngang

• Phương pháp sắc ký đa bậc

• Phương pháp sắc ký hai chiều

Phương pháp sắc ký đi lên

Triển khai sắc đồ

Triển khai sắc đồ

Phương pháp sắc ký đi xuống

Triển khai sắc đồ

Phương pháp sắc ký nằm ngang

Phương pháp sắc ký đa bậc

Triển khai sắc đồ

Triển khai sắc đồ

Phương pháp sắc ký hai chiều

Dung môi 1 Dung môi 2

Tiến hành sắc ký bản mỏng

Hiện sắc đồ.

• Đối với những sắc đồ rất nhạt, cần phải làm

hiện sắc đồ bằng phương pháp thích hợp như

hóa học, quang học, phóng xạ…

• Phun thuốc thử hiện màu lên toàn bản dưới

các dạng hạt sương

• Phân tích các hợp chất hữu cơ

• Phân tích các hợp chất vô cơ

Ứng dụng trong phân tích định tính

• Có độ tin cậy cao cần thực hiện trên

một bản, quá trình so sánh chất chuẩn

với mẫu ngay trên một bản sắc ký để

dảm bảo điều kiện tách giống nhau

Ứng dụng trong phân tích định lượng

Định lượng trực tiếp trên sắc đồ

 Điều kiện để thu được kết quả có độ tin cậy cao:

- Thể tích mẫu đưa lên bản phải đồng nhất

- Kích thước chấm mấu lên bản phải đồng nhất

- Quãng đường dung môi qua vếch chấm phải như nhau

- Chất chuẩn và mẫu phải được chuẩn bị trong các điều kiện giống hệt nhau, có cùng nồng độ và chấm vị trí cạnh nhau

Định lượng trực tiếp trên sắc đồ

• Đo bằng mắt

‐ Có độ chính xác cao nhất khi dd chuẩn và màu ở vùng mà diện tích cường

độ vết màu sau tách biến đổi mạnh nhất

‐ Phương pháp nhanh, đơn giản, dễ thực hiện

‐ Có sai số lớn do đánh giá chủ quan

Định lượng trực tiếp trên sắc đồ

‐ Quét các vết màu trên sắc đồ bằng một

chùm sáng truyền qua

‐ Hiệu số ánh sáng tới và ánh sáng truyền

qua hoặc phản xạ được đo bằng tín hiệu

điện và được thể hiện dưới dạng các peak

• Chiều cao của peak tỉ lệ với cường độ

màu ở tâm vệt

• Chiều rộng peak tỉ lệ với chiều dài vệt

theo hướng quét

• Diện tích peak tỉ lệ với lượng cấu tử

• Phương pháp densitomet

Ứng dụng trong phân tích định lượng

Tách chất khỏi sắc đồ

‐ Chuyển tất cả các chất trên bản mỏng ra khỏi bản rồi dùng các phương pháp

đo màu, đo quang, cực phổ, sắc ký khí… để xác định lượng chất

‐ Phương pháp tách ra khỏi bản mỏng: dùng dao cạo bột màu (cơ học) hoặc

rữa bằng dung môi

‐ Hòa tan chất bằng dung môi thích hợp và định lượng bằng phương pháp

phân tích khác

2 Ứng dụng của phương pháp sắc ký bản

mỏng

Phân tích các hợp chất hữu cơ:

• Tách và cô lập hợp chất: axit, phenol,

rượu, gluco, alcaloit, amin, aminoaxit,

protein, peptit, lipids, amino axit, các chất

khán sinh, các vitamin, thuốc nhuộm…

• Phân tích các dược phẩm, thực phẩm, y

học

• Các mẫu thuộc lĩnh vực hóa sinh: độc tố

nấm, thực vật, tách chiếc mẫu thực vật,

thuốc trừ sâu, sắc tố tự nhiên…

• Giám sát các phản ứng hữu cơ.

Ví dụ: màu và hằng số phân bố vùng của một số loại axit hữu cơ

Phân tích các hợp chất vô cơ:

• Tách các hệ cation, anion phức tạp.

• Phân tích các kim loại có tính chất giống nhau.

• Sau khi tách các ion thường được tiếng hành thêm các phương pháp phân

tích khác như đo quang, điện hóa…để làm tăng độ nhạy, độ chọn lọc để nhận biết chất

2 Ứng dụng của phương pháp sắc ký bản

mỏng

Tài liệu thàm khảo

[1] Nguyễn Thị Thu Vân, Phân Tích Định Lượng, NXB ĐHQG Tp HCM, 2010

[2] Hoàng Minh Châu, Cơ Sở Hóa Học Phân Tích, NXB KH & KT, 2002 [3] Jack Cazes, Encyclopedia of Chromatographic, New York, 2004